本发明涉及医疗器械体外诊断试剂
技术领域：
，尤其是涉及一种化学发光清洗液及其制备方法和应用。
背景技术：
：化学发光免疫反应的步骤为：加样、温育、洗涤、判读。其中洗涤是决定试验结果的一个重要步骤。洗涤的主要目的是去除未结合的免疫反应物及游离的结合物，终止抗原抗体的继续结合，减少非特异性干扰物质对检测结果的影响。清洗液不仅为免疫反应提供适宜的酸碱环境及电解质，更重要的是除掉反应过程中未结合免疫反应物，终止抗原抗体继续结合，清洗液中的表面活性剂，可有效分离结合的免疫反应物及非特异性干扰物质，保证化学发光免疫检验能正常进行。其次，全自动化学发光免疫分析仪采用管路、加样针、废液针重复利用，易导致样品交叉污染，进而影响测定结果。因此有效的化学发光清洗液对全自动化学发光免疫分析仪管路、加样针和废液针的维护以及保证样本测试准确具有重要意义。化学发光按照反应类型可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类，在酶促化学发光中，碱性磷酸酶体系是较为常用的体系之一，其与发光底物反应速度快，在很短时间内可提供正确可靠的结果，且发射光为辉光，光强度在60min内相对稳定，易于测量且稳定性高，应用较为广泛。cn110862881a公开了一种全自动化学发光测定仪专用的清洗液或其稀释液及其制备方法，主要包含无机盐、磷酸盐缓冲体系、表面活性剂1(吐温-20、吐温80中的一种)、表面活性剂2(十二烷基硫酸钠、月硅酸钠中的一种)、防腐剂(proclin300和bronidox)及水构成。该清洗液采用较高浓度的磷酸盐，经验证其会抑制碱性磷酸酶的活性。这是由于碱性磷酸酶体系的化学发光试剂，发光原理为碱性磷酸酶催化底物金刚烷类似物amppd，释放磷酸根，形成不稳定的中间体amp-d，这个中间体随即自行分解，同时发射光子，如果检测试剂的体系中存在较高浓度的磷酸根，则会抑制碱性磷酸酶对底物的催化作用，影响检测反应。该洗液使用的表面活性剂2中的十二烷基硫酸钠即sds，由于其为粉末状，在称量时操作者容易吸入，对粘膜和上呼吸道有刺激作用，对眼和皮肤有刺激作用，对人体有害；sds在高浓度时会破坏蛋白结构，使用不当会造成免疫反应中抗原或抗体结构破坏，影响检测反应；sds溶液在低温时容易产生沉淀，影响洗液洗涤效果。cn107118865a公开了一种清洗液，包含磷酸缓冲体系、无机盐、表面活性剂a(tritonx-100或吐温-20)、表面活性剂b(胆酸钠)以及防腐剂(proclin300或proclin950)，同样该种清洗液采用了较高浓度的磷酸盐，不适用于碱性磷酸酶化学发光体系。该清洗液使用的表面活性剂胆酸钠，可溶解细胞膜，洗涤能力较强，检测过程中已发生特异性结合的抗原或抗体容易被清洗掉，造成检测结果不准确，并且胆酸钠分子结构中含有具有反应活性的氮氢键，在免疫检测时易发生非特异性反应。另外，该清洗液使用的防腐剂proclin300或proclin950，为同系列防腐剂，不能达到较好的防腐效果。cn108546602a公开了一种化学发光免疫分析用清洗液，包括表面活性剂、非蛋白类蛋白保护剂和缓冲剂，该清洗液成分复杂，使用成本较高。该清洗液使用的酰胺类非离子表面活性剂，在洗涤震荡过程中，容易产生气泡，使得仪器液面高度探测不准，造成跳值现象。该清洗液ph为5.32，偏酸性，对碱性磷酸酶体系不适用。另外，该清洗液使用的防腐剂proclin300，为单一防腐剂，不能达到较好的防腐效果。有鉴于此，特提出本发明。技术实现要素：本发明的第一个目的在于提供一种在碱性磷酸酶体系中应用的化学发光清洗液，以至少缓解了现有技术中存在的技术问题之一。本发明的第二个目的在于提供上述化学发光清洗液的制备方法。本发明提供了一种在碱性磷酸酶体系中应用的化学发光清洗液，所述化学发光清洗液包括：缓冲液、表面活性剂、金属离子、防腐剂和消泡剂；所述表面活性剂包括非离子表面活性剂和两性表面活性剂；所述防腐剂包括proclin-300、bnd或尼泊金丙酯中的至少两种；所述消泡剂包括硅油型和/或硅醚型消泡剂。进一步地，所述缓冲液的浓度为100-1000mm；所述表面活性剂的浓度为0.3％-1.9％w/v；所述金属离子的浓度为100-1000mm；所述防腐剂的浓度为0.3％-2.7％w/v；所述消泡剂浓度为0.05％-0.8％w/v。进一步地，所述化学发光清洗液内，缓冲液包括tris缓冲液；非离子表面活性剂包括tritonx-100；两性表面活性剂包括chaps；金属离子包括钠离子；所述防腐剂包括proclin-300、bnd和尼泊金丙酯；所述化学发光清洗液的ph为7.3。进一步地，所述化学发光清洗液中含有500mmtris缓冲液、500mm钠离子、0.5w/vchaps、0.5w/vtritonx-100、0.6％w/vproclin-300、0.1％w/vbnd、0.1％w/v尼泊金丙酯和0.1％w/v硅油型消泡剂。本发明还提供了上述的化学发光清洗液的制备方法，先将缓冲液、表面活性剂、金属离子、防腐剂混合均匀，再加入消泡剂，得到所述化学发光清洗液；其中，所述表面活性剂包括非离子表面活性剂和两性表面活性剂；所述防腐剂包括proclin-300、bnd或尼泊金丙酯中的至少两种；所述消泡剂包括硅油型和/或硅醚型消泡剂。进一步地，得到所述化学发光清洗液内，所述缓冲液的浓度为100-1000mm；所述表面活性剂的浓度为0.3％-1.9％w/v；所述金属离子的浓度为100-1000mm；所述防腐剂的浓度为0.3％-2.7％w/v；所述消泡剂浓度为0.05％-0.8％w/v。进一步地，得到所述化学发光清洗液内，缓冲液包括tris缓冲液；非离子表面活性剂包括tritonx-100；两性表面活性剂包括chaps；金属离子包括钠离子；所述防腐剂包括proclin-300、bnd、尼泊金丙酯；所述消泡剂包括硅油型消泡剂；所述化学发光清洗液的ph为7.3。进一步地，向缓冲液中依次加入金属离子、表面活性剂、防腐剂和消泡剂，然后通过溶剂定容，得到所述化学发光清洗液；所述溶剂包括水；所述化学发光清洗液中缓冲液终浓度为500mm、钠离子终浓度为500mm、chaps终浓度为0.5w/v、tritonx-100终浓度为0.5v/v、proclin-300终浓度为0.6％w/v、bnd终浓度为0.1％w/v、尼泊金丙酯终浓度为0.1％w/v、硅油型消泡剂终浓度为0.1％w/v。进一步地，使用固体酸调节剂调节缓冲液的ph为7.0-7.5后，再依次加入金属离子、表面活性剂、防腐剂，最后加入消泡剂。进一步地，所述固体酸调节剂包括氨基磺酸和/或硼酸，调节剂调节缓冲液的ph为7.3。本发明提供的化学发光清洗液，主要由缓冲液、表面活性剂、金属离子、防腐剂和消泡剂组成。其中，非离子表面活性剂与两性表面活性剂联合使用，使得清洗液稳定性好、准确度高；不同种类防腐剂联用，防腐效果好。加入消泡剂，防止在添加洗液或洗涤过程中产生气泡，从而防止跳值现象的发生，提高检测精确度和精密性。本发明提供的化学发光清洗液，通过特定组分的选择，解决了进口清洗液价格高昂、检测成本高的问题，成本低廉，并降低了国内对进口清洗液的依赖。同时，该化学发光清洗液适用于碱性磷酸酶体系的化学发光免疫反应，并且经过项目验证，该种化学发光清洗液可适用于碱性磷酸酶体系如pct、amh、dsdna、ccp等的多种化学发光检测项目中。具体实施方式下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。根据本发明的一个方面，提供了一种化学发光清洗液，所述化学发光清洗液包括：缓冲液、表面活性剂、金属离子、防腐剂和消泡剂；所述表面活性剂包括非离子表面活性剂和两性表面活性剂；所述防腐剂包括proclin-300、bnd或尼泊金丙酯中的至少两种；所述消泡剂包括硅油型和/或硅醚型消泡剂。本发明提供的化学发光清洗液中，非离子表面活性剂与两性表面活性剂联合使用，使得清洗液稳定性好，并且大大减少了非特异性干扰物质对检测结果的影响，提高了检测的准确度；不同种类防腐剂联用，防腐效果好。加入消泡剂，防止在添加洗液或洗涤过程中产生气泡，从而防止跳值现象的发生，提高检测精确度和精密性。本发明提供的化学发光清洗液，通过特定组分的选择，解决了进口清洗液价格高昂、检测成本高的问题，本发明提供的化学发光清洗液成本低廉，并降低了国内对进口清洗液的依赖。同时，该化学发光清洗液适用于碱性磷酸酶体系的化学发光免疫反应，并且经过项目验证，该种化学发光清洗液可适用于碱性磷酸酶体系的多种化学发光检测项目中，如pct、amh、dsdna、ccp等项目。在本发明中，表面活性剂可有效清除免疫反应过程中的非特异性吸附物质，通过大量实验验证，采用非离子型表面活性剂和两性表面活性剂联合使用，可达到最佳洗涤效果，彻底去除非特异性吸附物质，并能不破坏蛋白的特异性结合。金属离子无机盐可使清洗液具有一定的离子强度，从而保护特异性结合蛋白质。在本发明中，proclin系列防腐剂的主要成分是2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(mci)和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(cmci)。这两种成分抑制细胞的生长以及促使细胞凋亡的原理相同。能够迅速穿透细胞膜，抑制对细胞呼吸至关重要的特定酶，因此一接触微生物有机体就会立即抑制细胞活性，具有广谱抗菌性，作用速度快。bnd化学名称为5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷，通过氧化微生物必需酶中的巯基来达到抑菌效果，具有广谱的抑菌效果，能有效抑制细菌、酵母和真菌，具有良好的相容性和稳定性、低毒并可生物降解。尼泊金丙酯化学名称为对羟基苯甲酸丙酯，是一种无色晶体或白色晶体粉末，无臭、毒性极低，对霉菌、酵母菌有抗菌作用，在食品、化妆品、医药中用作防腐剂。其毒性极低，在人体内易被水解，抗菌作用可在ph1-8范围内使用，克服了一般防腐剂仅在酸性条件下使用的缺点。当优选三种防腐剂联用时，不同抗菌谱防腐剂互相补充，扩大抗菌范围，达到最佳抑菌效果。此外，泡沫是一种有大量汽泡分散在液体中的分散体系，其分散相为气体，连续相为液体。当体系中加有表面活性剂时，在气泡表面吸附着定向排列的一层表面活性剂分子，当其达到一定浓度时，气泡壁就形成了一层坚固的薄膜。表面活性剂吸附在气液界面上，造成液面表面张力下降，从而增加了气液接触面，这样气泡就不易合并。气泡的相对密度比水小得多，当上升的气泡透过液面时，把液面上的一层表面活性剂分子吸附上去。因此，暴露在空气中的吸附有表面活性剂的气泡膜同溶液里的气泡膜不一样，它包有两层表面活性剂分子，形成双分子膜，被吸附的表面活性剂对液膜具有保护作用。消泡剂就是要破坏和抑制此薄膜的形成，消泡剂进入泡沫的双分子定向膜，破坏定向膜的力学平衡而达到破泡。有机硅消泡或抑泡的能力，是由于它具有的很低的表面张力。有机硅化合物(硅油型)干扰气液界的表面张力，导致消泡效果。硅油型消泡剂不仅能有效地破除已经生成的泡沫，而且可以显著地抑制泡沫，防止在添加洗液或洗涤过程中产生气泡，从而防止跳值现象的发生，提高检测精确度和精密性使用量很少便能产生消泡效果，不但成本低，而且不污染被消泡的物质。在一些优选的实施方式中，所述缓冲液包括tris缓冲液，使用tris缓冲液作为化学发光清洗液的缓冲液，更能在检测项目的体系中有效区分含有待检物的样本与不含待检物的样本。在一些优选的实施方式中，所述非离子表面活性剂包括tritonx-100；所述两性表面活性剂包括chaps。本实施方式中提供的表面活性剂不包含sds，能有效避免操作时不慎吸入对身体造成伤害，同时也能够避免蛋白结构被破坏，保证反应的正常进行。同时也不包含胆酸钠，避免过分洗涤或发生非特异性反应造成的检测结果不准确。在一些优选的实施方式中，所述金属离子包括钠离子。金属离子的加入能够为免疫反应提供适宜的电解质，保证反应的正常进行。并且，钠离子来源广泛，使用钠离子能够进一步降低本发明提供的化学发光清洗液的成本。在一些优选的实施方式中，所述化学发光清洗液的ph为7.3，当本发明提供的化学发光清洗液ph为7.3时，更能够为碱性磷酸酶化学发光体系提供适宜的酸碱环境。在一些优选的实施方式中，所述缓冲液的浓度为100-1000mm，例如可以为，但不限于100mm、200mm、300mm、400mm、500mm、600mm、700mm、800mm、900mm或1000mm，当缓冲液的浓度在上述范围内时，均能够在起到缓冲作用的基础上，避免抑制碱性磷酸酶的活性，保证反应的正常进行。优选地，所述缓冲液的浓度为500mm，经实验验证，当缓冲液的浓度为500mm时，发光值cv验证最小，且信噪比高，说明清洗液清洗效果较好，可有效去除免疫反应中非特异性吸附的干扰物质。在一些优选的实施方式中，所述表面活性剂的浓度为0.3％-1.9％w/v。，例如可以为，但不限于0.3％w/v、0.4％w/v、0.5％w/v、0.8％w/v、1％w/v、1.2％w/v、1.5％w/v、1.7％w/v或1.9％w/v。需要说明的是，本实施方式中限定的表面活性剂的浓度为非离子表面活性剂和两性表面活性剂的总浓度。优选地，当表面活性剂的总浓度为1％w/v，经试验验证优选chaps和tritonx-100的浓度均为0.5％w/v时，cv均在10％以内，说明清洗液清洗效果较好，可有效去除免疫反应中非特异性吸附的干扰物质，每个测试中检测到的待测物含量一致，重复性好，且信噪比最高，信噪比是含有待测物的样本信号值与不含待测物(或者低浓度待测物)样本信号值的一个比值，该比值越大，说明该体系中含有待测物的样本与不含待测物(或者低浓度待测物)样本差距越大，越能有效区分，说明清洗液清洗效果越好，可有效去除免疫反应中非特异性吸附的干扰物质，能有效区分含待测物样本与不含待测物样本，更能真实反映样本中待测物的含量。优选地，所述金属离子的浓度为100-1000mm，例如可以为，但不限于100mm、200mm、300mm、400mm、500mm、600mm、700mm、800mm、900mm或1000mm，优选为500mm。当金属离子在上述浓度范围内时，能够为反应提供充分的电解质，同时避免浪费，有效节约成本。优选地，所述防腐剂的浓度为0.3％-2.7％w/v，例如可以为，但不限于0.3％w/v、0.5％w/v、0.8％w/v、1％w/v、1.2％w/v、1.5％w/v、1.8％w/v、2％w/v、2.2％w/v、2.5％w/v或2.7％w/v。当防腐剂在上述浓度范围内时，均能保证化学发光清洗液的长期保存。优选防腐剂的浓度为0.8％w/v，优选proclin-300的浓度为0.6％w/v、bnd的浓度为0.1％w/v、尼泊金丙酯的浓度为0.1％w/v。通过对防腐剂浓度的进一步筛选和限定，检测洗液空白来评价洗液抑菌效果。如果洗液抑菌效果差，出现染菌现象，则会导致洗液空白发光值上升，发光值上升越高说明染菌越严重，并且出现跳值现象，经实验验证，本发明清洗液放置37℃6个月，仍能保持洗液空白cv在5％以内，且较37℃6个月发光值变化最小，说明洗液抑菌效果最好。优选消泡剂的浓度为0.05％-0.8％w/v，优选为硅油型发泡剂的浓度为0.1％w/v。加入消泡剂的清洗液在ccp项目上，cv更小，信噪比更高。说明在清洗液中加入消泡剂后，可清除或抑制气泡的产生，有效减少检测过程中跳值现象的发生，提高试剂检测的精密性和准确性。本发明还提供了上述的化学发光清洗液的制备方法，将缓冲液、表面活性剂、金属离子和防腐剂混合均匀，得到所述化学发光清洗液；其中，所述表面活性剂包括非离子表面活性剂和两性表面活性剂；所述防腐剂包括proclin-300、bnd或尼泊金丙酯中的至少两种；所述消泡剂包括硅油型和/或硅醚型消泡剂。本发明提供的制备方法工艺简单，操作方便，通过对原料进行混合即可得到化学发光清洗液，适合实际生产和推广应用。在一些优选的实施方式中，向缓冲液中依次加入金属离子、表面活性剂和防腐剂，再加入消泡剂，然后通过溶剂定容，得到所述化学发光清洗液。通过向缓冲液中加入各组分，能够使各组分在温和的环境中分散。优选地，所述溶剂包括水。更具体地，化学发光清洗液中缓冲液终浓度为500mm、钠离子终浓度为500mm、chaps终浓度为0.5w/v、tritonx-100终浓度为0.5v/v、proclin-300终浓度为0.6％w/v、bnd终浓度为0.1％w/v、尼泊金丙酯终浓度为0.1％w/v、硅油型消泡剂终浓度为0.1％w/v。在本发明具体的实施方式中，对金属离子、表面活性剂、防腐剂得加入顺序不做具体限定，对同类物质的加入顺序不做具体限定，例如，chaps和tritonx-100均为表面活性剂，在实际操作时，可以以chaps、tritonx-100依次加入的顺序进行添加，也可以以tritonx-100、chaps依次加入的顺序进行添加，或者也可以将chaps和tritonx-100同时加入。进一步的，调节所述缓冲液的ph为7.0-7.5后，再依次加入金属离子、表面活性剂和防腐剂，优选调节所述缓冲液的ph为7.3；优选地，使用固体酸调节剂调节缓冲液的ph。使用固体酸调节ph，不含有sds等易吸入物质，配制方便，对操作人员无害。并且，考虑试剂在实际生产配置中，浓盐酸和浓硝酸具有挥发性，极易对生产配制人员及周围环境造成伤害。故综合考虑，固体酸最合适。通过与液体酸的对比实验发现，使用固体酸进行ph调节的化学发光清洗液在ccp项目上信噪比更大。优选地，所述固体酸调节剂包括氨基磺酸和/或硼酸，优选为氨基磺酸。本发明化学发光清洗液中加入硅油型消泡剂，防止在添加洗液或洗涤过程中产生气泡，从而防止跳值现象的发生，提高检测精确度和精密性。优选地，所述消泡剂包括硅油型消泡剂和硅醚型消泡剂中的一种或两种的组合，优选为硅油型。另外，本发明还提供了上述的化学发光清洗液在碱性磷酸酶体系的化学发光检测项目中的应用。下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。一、精确度、精密度、稳定性、成本验证实施例1本实施例提供了一种化学发光清洗液，包括：500mmtris缓冲液、0.5％w/v的chaps、0.5％w/v的tritonx-100、500mmnacl、0.6％w/v的proclin-300、0.1％w/v的bnd和0.1％w/v的尼泊金丙酯，0.1％w/v的硅油型消泡剂，ph为7.3，其中硅油型消泡剂为上海生工销售的货号a600465的有机硅消泡剂。对比例1如cn110862881a专利中所述，本对比例提供了一种化学发光清洗液，包括：氯化钠35g氯化钾185g十二水和磷酸氢二钠196.67g磷酸二氢钾0.46g吐温-802g十二烷基硫酸钠6gproclin30010gbronidox2g使用时稀释倍数20如上配制好的清洗液ph值为7.2-8.3。对比例2如cn107118865a专利中所述，本对比例提供了一种化学发光清洗液，包括：kh2po41.65gna2hpo4.12h2o67.84gkcl180gtween-2020ml胆酸钠10gproclin95010ml使用时稀释倍数20如上配制好的清洗液ph值为7.5-8.0。对比例3如cn108546602a专利中所述，本对比例提供了一种化学发光清洗液，包括：柠檬酸-柠檬酸钠缓冲剂50mmnacl150mm十二烷基磺酸钠0.001％十二烷基聚乙二醇醚(n2＝23)0.02％椰油酸二乙醇酰胺0.005％蔗糖0.5％(c11h22no6p)n1(c6h10o3)m1分子量3万(n1:m1＝6:4)0.3％proclin3000.09％如上配制好的清洗液ph值为5.32，清洗液使用方法：714ml清洗液+9.286ml水。性能测试1、准确度验证将实施例1的本发明清洗液和标准品清洗液按说明书所示比例进行稀释，然后采用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪分别对两种清洗液进行测定，每个项目测定10例样本，对各例样本测定项目选择夹心法的降钙素原(pct)、夹缪勒氏管激素(amh)，间接法的抗双链dna抗体(dsdna)和抗环瓜氨酸肽抗体(ccp)，实验结果如表1所示：表1实施例1清洗液和标准品清洗液准确度检验结果由表1可以看出，实施例1清洗液和标准品清洗液在夹心法的降钙素原(pct)、夹缪勒氏管激素(amh)，间接法的抗双链dna抗体(dsdna)和抗环瓜氨酸肽抗体(ccp)4个化学发光产品上测定值的偏差均在5％以内，说明本发明清洗液测试准确度良好，且本发明适用于afp、pct、il6、tb、amh、fsh、dsdna、ccp等项目。2、精密度验证将实施例1的本发明清洗液，对比例1、对比例2和对比例3的对比清洗液，按说明书所示比例进行稀释，然后采用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪分别对四种清洗液进行测定，每个项目测定1例样本重复检测10次，每次检测均测定项目选择夹心法的抗缪勒氏管激素(amh)，间接法的抗环瓜氨酸肽抗体(ccp)，均为碱性磷酸酶体系，实验结果如表2所示：表2实施例1清洗液和对比清洗液精密度检验结果本发明的清洗液精密度均在3％以内，其他对比例提供的清洗液的精密度均为7％以上，且检测值明显低于本发明提供的清洗液，本发明的清洗液对amh的精密度可达对比清洗液的2倍以上，本发明的清洗液对ccp的精密度可达对比清洗液的3倍以上，以上结果说明本发明清洗液检测的精密度及反应性良好，在碱性磷酸酶体系中，本发明清洗液明显优于对比清洗液。3、稳定性验证将实施例1的本发明清洗液和对比例1、对比例2和对比例3的对比清洗液，分别分装成6瓶，每瓶约1l，室温分别放置0天、6个月、12个月、18个月、21个月、24个月后进行检测，检测前按说明书所示比例进行稀释，然后采用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪分别对四种清洗液进行洗液空白测定及ccp项目测定，重复检测10次，各次实验结果如表3和表4所示：表3实施例1清洗液和对比清洗液长期稳定性洗液空白检验结果表4实施例1清洗液和对比清洗液长期稳定性ccp检验结果结果表明：室温下，对比例1、对比例2、对比例3提供的清洗液在第18个月时，洗液空白均出现跳值现象，洗液空白发光值超过500，是洗液长期存放染菌的现象，而本发明提供的清洗液的洗液空白值直至第24个月仍保持稳定，发光值在300以内，说明本发明提供的清洗液在24个月内仍可抑制细菌生长，保持稳定。室温下，对比例1、对比例2、对比例3提供的清洗液在第12个月时，在项目上的检测值cv已经超过10％，而本发明提供的清洗液在项目上的检测值直至第24个月仍保持稳定，检测值cv小于5％，说明本发明提供的清洗液在24个月内仍保持稳定，稳定性可达对照清洗液的2倍以上。二、缓冲液类型的选择实施例1的对比例2-1本对比例与实施例1的区别在于，缓冲液体系类型为pbs体系，其余特征均相同。实施例1的对比例2-2本对比例与实施例1的区别在于，缓冲液体系类型为hepes体系，其余特征均相同。性能测试按照表5配制不同缓冲液类型的化学发光清洗液，检测前预先10倍稀释，应用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪对清洗液进行测定，每个项目测定项目选择抗环瓜氨酸肽抗体(anti-ccp)3例样本重复检测10次，各次均测定抗环瓜氨酸肽抗体浓度分别为0u/ml和200u/ml的样本，计算cv，测定项目选择抗环瓜氨酸肽抗体(ccp)，各次均测定0u/ml和200u/mlccp。实验结果发光值(rlu)如表6所示：表5不同缓冲液类型的化学发光清洗液表6不同缓冲液类型时化学发光清洗液对ccp的反应性影响结果表明：从ccp项目上来看，tris缓冲液的发光值cv验证最小，均在10％以内；且信噪比最高为449.3，说明在该检测项目的体系中，能有效区分含有待检物的样本与不含待检物的样本，故化学发光清洗液中缓冲液为tris最合适。三、缓冲液浓度的选择实施例1-3-1本实施例与实施例1的区别在于，tris缓冲液浓度为100mm，其余特征均相同。实施例1-3-2本实施例与实施例1的区别在于，tris缓冲液浓度为1000mm，其余特征均相同。性能测试按照表7配制不同缓冲液浓度的化学发光清洗液，检测前预先10倍稀释，应用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪对清洗液进行测定，测定项目选择抗环瓜氨酸肽抗体(anti-ccp)重复检测10次，各次均测定抗环瓜氨酸肽抗体浓度分别为0u/ml和200u/ml的样本，计算发光值的cv及信噪比。实验结果如表8所示：表7不同缓冲液浓度的化学发光清洗液表8不同缓冲液浓度时化学发光清洗液对ccp的反应性影响结果表明：从ccp项目上来看，tris缓冲液浓度为500mm时的发光值cv验证最小，均在10％以内；且信噪比最高，为478.8。故化学发光清洗液中缓冲液浓度为500mm最合适。四、缓冲液中表面活性剂筛选实施例1的对比例4-1本实施例提供了一种化学发光清洗液，包括：缓冲液体系类型为缓冲液体系类型为浓度为500mm的tris缓冲液、表面活性剂为的tween-200.5％、500mmnacl、0.6％w/v的proclin-300、0.1％w/v的bnd、0.1％w/v的尼泊金丙酯和0.1％w/v的硅油型消泡剂，ph为7.3，其中硅油型消泡剂为上海生工销售的货号a600465的有机硅消泡剂。实施例1的对比例4-2本对比例与实施例1的区别在于，表面活性剂为tritonx-1000.5％，其余特征均相同。实施例1的对比例4-3本对比例与实施例1的区别在于，表面活性剂为brij0.5％w/v，其余特征均相同。实施例1的对比例4-4本对比例与实施例1的区别在于，表面活性剂为np-400.5％w/v，其余特征均相同。实施例1的对比例4-5本对比例与实施例1的区别在于，表面活性剂为chaps0.5％w/v，其余特征均相同。性能测试按照表9配制不同表面活性剂的化学发光清洗液，检测前预先10倍稀释，应用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪对清洗液进行测定，测定项目选择抗环瓜氨酸肽抗体(anti-ccp)重复检测10次，各次均测定抗环瓜氨酸肽抗体浓度分别为0u/ml和200u/ml的样本，计算发光值的cv及信噪比。实验结果如表10所示：表9不同表面活性剂的化学发光清洗液表10不同表面活性剂时化学发光清洗液对ccp的反应性影响结果表明：根据经验值配制不同浓度的表面活性剂，从ccp项目上验证的cv来看，表面活性剂tween-20、tritonx-100、brij、np40和chaps的cv均在10％以内，说明以上表面活性剂均为较为稳定的组分；而从信噪比来看，tritonx-100和chaps最高，分别为412.1和411.2。故化学发光清洗液中表面活性剂为tritonx-100和chaps最合适。五、缓冲液中表面活性剂叠加筛选实施例1的对比例5-1本对比例与实施例1的区别在于，表面活性剂为0.5％w/v的chaps，其余特征均相同。实施例1的对比例5-2本对比例与实施例1的区别在于，表面活性剂为tritonx-1000.5％w/v，其余特征均相同。性能测试按照表11配制不同表面活性剂的化学发光清洗液，检测前预先10倍稀释，应用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪对清洗液进行测定，测定项目选择抗环瓜氨酸肽抗体(anti-ccp)重复检测10次，各次均测定抗环瓜氨酸肽抗体浓度分别为0u/ml和200u/ml的样本，计算发光值的cv及信噪比。实验结果如表12所示：表11不同表面活性剂的化学发光清洗液表12不同表面活性剂时化学发光清洗液对ccp的反应性影响结果表明：从ccp项目上的发光值cv验证和信噪比验证可知，表面活性剂chaps和tritonx-100叠加使用时cv均在10％以内；信噪比最高，为458.7。故chaps和tritonx-100叠加使用效果最佳。六、表面活性剂浓度筛选实施例1-6-1本实施例与实施例1的区别在于，表面活性剂为tritonx-1000.2％w/v、0.5％w/v的chaps，其余特征均相同。实施例1-6-2本实施例与实施例1的区别在于，表面活性剂为tritonx-1000.9％w/v、0.5％w/v的chaps，其余特征均相同。实施例1-6-3本实施例与实施例1的区别在于，表面活性剂为tritonx-1000.5％w/v、0.1％w/v的chaps，其余特征均相同实施例1-6-4本实施例与实施例1的区别在于，表面活性剂为tritonx-1000.5％w/v、1.0％w/v的chaps，其余特征均相同。性能实验按照表13配制不同表面活性剂浓度的化学发光清洗液，检测前预先10倍稀释，应用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪对清洗液进行测定，测定项目选择抗环瓜氨酸肽抗体(anti-ccp)重复检测10次，各次均测定抗环瓜氨酸肽抗体浓度分别为0u/ml和200u/ml的样本，计算发光值的cv及信噪比。实验结果如表14所示：表13不同表面活性剂浓度的化学发光清洗液表14不同浓度表面活性剂时化学发光清洗液对ccp的反应性影响结果表明：从ccp项目上的发光值cv验证和信噪比验证可知，表面活性剂chaps浓度为0.5％w/v且tritonx-100浓度为0.5％w/v时，cv均在10％以内；信噪比最高，第2组信噪比为447.6。故chaps浓度为0.5％w/v且tritonx-100浓度为0.5％w/v，效果最佳。七、调节ph用酸的筛选实施例1的对比例7-1本对比例与实施例1的区别在于，使用硝酸进行ph值调节，其余特征均相同。实施例1的对比例7-2本对比例与实施例1的区别在于，使用盐酸进行ph值调节，其余特征均相同。性能测试按照表15配制用不同酸调节ph的化学发光清洗液，检测前预先10倍稀释，应用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪对清洗液进行测定，测定项目选择抗环瓜氨酸肽抗体(anti-ccp)重复检测10次，各次均测定抗环瓜氨酸肽抗体浓度分别为0u/ml和200u/ml的样本，计算发光值的cv及信噪比。实验结果如表16所示：表15不同酸调节ph的化学发光清洗液表16不同酸调节ph的化学发光清洗液对抗环瓜氨酸肽抗体的反应性影响结果表明：以上三种酸调节ph的清洗液发光值的cv均在10％以内，而固体酸配制的清洗液在ccp项目上信噪比更大。考虑试剂在实际生产配置中，浓盐酸和浓硝酸具有挥发性，极易对生产配制人员及周围环境造成伤害。故综合考虑，固体酸最合适。八、防腐剂种类的筛选实施例1的对比例8-1本对比例与实施例1的区别在于，防腐剂为proclin-3000.6％w/v，其余特征均相同。实施例1的对比例8-2本对比例与实施例1的区别在于，防腐剂为proclin9500.6％w/v，其余特征均相同。实施例1的对比例8-3本对比例与实施例1的区别在于，防腐剂为nan30.2％w/v，其余特征均相同。实施例1的对比例8-4本对比例与实施例1的区别在于，防腐剂为bnd0.1％w/v，其余特征均相同。实施例1的对比例8-5本对比例与实施例1的区别在于，防腐剂为尼泊金甲酯0.1％w/v，其余特征均相同。实施例1的对比例8-6本对比例与实施例1的区别在于，防腐剂为尼泊金丙酯0.1％，其余特征均相同。实施例1的对比例8-7本对比例与实施例1的区别在于，防腐剂为尼泊金丁酯0.1％，其余特征均相同。性能测试按照表17配制不同防腐剂的化学发光清洗液，分装成5瓶，每瓶约100ml，于37℃恒温孵育箱分别放置0天、7天、1个月、3个月、6个月后进行检测，检测前预先10倍稀释，应用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪对清洗液进行洗液空白测定，重复检测10次，记录均值和cv。实验结果如表18所示：表17不同防腐剂的化学发光清洗液表18不同防腐剂时化学发光清洗液对洗液空白值的影响结果表明：清洗液于37℃恒温孵育箱放置一段时间后，清洗液2、3、5、7的洗液空白值和cv增长较快，表明清洗液可能出现染菌情况，而清洗液1、4、6的洗液空白值和cv均较为稳定，说明防腐剂具有较好的抑菌效果，故防腐剂proclin300、bnd和尼泊金丙酯效果最佳。九、防腐剂的叠加筛选实施例1-9-1本实施例与实施例1的区别在于，防腐剂为0.6％w/v的proclin300、0.1％w/v的尼泊金丙酯，其余特征均相同。实施例1-9-2本实施例与实施例1的区别在于，防腐剂为0.6％w/v的proclin300和0.1％w/v的bnd，其余特征均相同。性能测试按照表19配制不同防腐剂的化学发光清洗液，分装成5瓶，每瓶约100ml，于37℃恒温孵育箱分别放置0天、7天、1个月、3个月、6个月后进行检测，检测前预先10倍稀释，应用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪对清洗液进行洗液空白测定，重复检测10次，记录发光均值和cv。实验结果如表20所示：表19不同防腐剂的化学发光清洗液表20不同防腐剂时清洗液的洗液空白值测定结果表明：防腐剂单独使用时，随清洗液放置时间增长，洗液空白增大和cv增长均较快，说明单独使用防腐剂没有叠加使用防腐剂的效果好，第3组即防腐剂proclin300、bnd和尼泊金丙酯叠加使用效果最佳。十、防腐剂浓度的筛选实施例1-10-1本实施例提供了一种化学发光清洗液，包括：500mmtris缓冲液、0.5％w/v的chaps、0.5％w/v的tritonx-100、500mmnacl、0.05％w/v的bnd、0.6％w/v的proclin300、0.1％w/v的尼泊金丙酯和0.1％w/v的硅油型消泡剂，ph为7.3，其中硅油型消泡剂为上海生工销售的货号a600465的有机硅消泡剂。实施例1-10-2本实施例与实施例1-10-1的区别在于，防腐剂为0.1％w/v的bnd、0.6％w/v的proclin300、0.1％w/v的尼泊金丙酯，其余特征均相同。实施例1-10-3本实施例与实施例1-10-1的区别在于，防腐剂为0.2％w/v的bnd、0.6％w/v的proclin300、0.1％w/v的尼泊金丙酯，其余特征均相同。实施例1-10-4本实施例与实施例1-10-1的区别在于，防腐剂为0.1％w/v的bnd、0.2％w/v的proclin300、0.1％w/v的尼泊金丙酯，其余特征均相同。实施例1-10-5本实施例与实施例1-10-1的区别在于，防腐剂为0.1％w/v的bnd、1.5％w/v的proclin300、0.05％w/v的尼泊金丙酯，其余特征均相同。实施例1-1010-6本实施例与实施例1-10-1的区别在于，防腐剂为0.1％w/v的bnd、0.6％w/v的proclin300、0.05％w/v的尼泊金丙酯，其余特征均相同。性能测试按照表21配制防腐剂不同浓度的化学发光清洗液，分装成5瓶，每瓶约100ml，于37℃恒温孵育箱分别放置0天、7天、1个月、3个月、6个月后进行检测，检测前预先10倍稀释，应用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪对清洗液进行洗液空白测定，重复检测10次，记录发光均值和cv。实验结果如表22所示：表21不同浓度防腐剂的化学发光清洗液表22不同浓度防腐剂时清洗液的洗液空白值测定结果表明：防腐剂联用时，均体现良好的抑菌效果，第2组即proclin300浓度0.6％、bnd浓度0.1％且尼泊金丙酯浓度0.1％时，放置37℃6个月，仍能保持洗液空白cv在5％以内，且较37℃6个月发光值变化最小，说明洗液抑菌效果最好，故proclin300浓度0.6％、bnd浓度0.1％且尼泊金丙酯浓度0.1％，效果最佳。十一、消泡剂的筛选实施例1的对比例11-1本对比例对实施例1的区别在于，不含消泡剂，其余特征均相同。实施例1-11-1本实施例对实施例1的区别在于，消泡剂为0.1％w/v的硅醚型消泡剂，其余特征均相同。实施例1-11-2本实施例对实施例1的区别在于，消泡剂为0.05％w/v的硅油型消泡剂，其余特征均相同。实施例1-11-3本实施例对实施例1的区别在于，消泡剂为0.8％w/v的硅油型消泡剂，其余特征均相同。性能测试按照表23配制用不同消泡剂的化学发光清洗液，检测前预先10倍稀释，应用lumipulseg1200型全自动化学发光免疫分析仪对清洗液进行测定，测定项目选择抗环瓜氨酸肽抗体(anti-ccp)重复检测10次，各次均测定抗环瓜氨酸肽抗体浓度分别为0u/ml和200u/ml的样本，计算发光值的cv及信噪比。实验结果如表24所示：表23不同消泡剂的化学发光清洗液表24不同消泡剂的化学发光清洗液对抗环瓜氨酸肽抗体的反应性影响结果表明：加入消泡剂的清洗液在ccp项目上，cv更小，信噪比更高。说明在清洗液中加入消泡剂后，可清除或抑制气泡的产生，有效减少检测过程中跳值现象的发生，提高试剂检测的精密性和准确性。其中加入0.1％w/v硅油型消泡剂的清洗液，cv最小，信噪比最高。故综合考虑，0.1％w/v硅油型消泡剂最合适。经对比各组实施例实验数据可知，缓冲液、表面活性剂、ph用酸及防腐剂的协同作用使得500mmtris缓冲液、0.5％w/v的chaps、0.5％w/v的tritonx-100、500mmnacl、0.6％w/v的proclin-300、0.1％w/v的bnd、0.1％w/v的尼泊金丙酯和0.1％w/v的硅油型消泡剂、使用固体酸氨基磺酸调节ph为7.3为本发明化学发光清洗液的最优条件。缓冲液可以为检测系统提供缓冲环境，使溶液保持较为稳定的ph，但其本身不参与检测反应。最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。当前第1页12