碱性蛋白酶基因、碱性蛋白酶及其制备方法和应用与流程

文档序号:22835053发布日期:2020-11-06 16:27阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种碱性蛋白酶基因aprbp,其特征在于,其核苷酸序列如seqidno:1所示。

2.一种碱性蛋白酶aprbp,其特征在于,其氨基酸序列如seqidno:2所示。

3.一种重组表达载体,其特征在于,包括权利要求1所述的碱性蛋白酶基因aprbp。

4.一种重组表达菌株,其特征在于,包括权利要求3所述的重组表达载体。

5.一种碱性蛋白酶aprbp的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

提供碱性蛋白酶基因aprbp、表达载体和表达菌株;

对所述碱性蛋白酶基因aprbp进行扩增,所得扩增产物与所述表达载体进行连接,得到重组表达载体;

将所述重组表达载体转入表达菌株,得到重组表达菌株;

对所述重组表达菌株进行培养,得到所述碱性蛋白酶aprbp;

其中,所述碱性蛋白酶基因aprbp的核苷酸序列如seqidno:1所示。

6.根据权利要求5所述碱性蛋白酶aprbp的制备方法,其特征在于,将所述碱性蛋白酶基因aprbp进行扩增的步骤中,用于扩增的引物包括正向引物和反向引物,所述正向引物的核苷酸序列如seqidno:3所示,所述反向引物的核苷酸序列如seqidno:4所示。

7.根据权利要求5所述碱性蛋白酶aprbp的制备方法,其特征在于,所述表达载体为枯草芽孢杆菌表达载体。

8.根据权利要求5所述碱性蛋白酶aprbp的制备方法,其特征在于,所述表达菌株为枯草芽孢杆菌表达菌株。

9.权利要求2所述碱性蛋白酶aprbp或权利要求5-8任一项所述碱性蛋白酶aprbp的制备方法制备得到的碱性蛋白酶aprbp在水解蛋白质中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,在所述水解蛋白质的反应中,所述碱性蛋白酶aprbp的反应温度为50℃-65℃;和/或

所述碱性蛋白酶aprbp的反应ph为7.0-11.0。


技术总结
本发明属于基因工程技术领域,具体涉及一种碱性蛋白酶基因、碱性蛋白酶及其制备方法和应用。本发明碱性蛋白酶基因aprbp的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,其是通过对来源于芽孢杆菌Bacillus patagoniensis碱性蛋白酶的序列(GenBank:WP_078392427.1)进行综合优化得到。本发明碱性蛋白酶AprBp的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,其不仅丰富了碱性蛋白酶的种类和来源途径,且其自身具有较高的酶活性,在5L发酵罐中的最高酶活可达18035U/mL,同时,在较宽的温度范围和碱性条件下均表现出良好的稳定性,具有良好的应用前景和产业价值。

技术研发人员:王建荣;祝木金;余思;王平;孟建军;刘小慧;曹革
受保护的技术使用者:深圳润康生态环境股份有限公司
技术研发日:2020.07.01
技术公布日:2020.11.06
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