1.一种用于鉴定黄纹大胡蜂的dna条形码标准检测片段,其特征在于,所述dna条形码标准检测片段的核苷酸序列如seqidno.1所示。
2.根据权利要求1所述的dna条形码标准检测片段,其特征在于,所述dna条形码标准检测片段为黄纹大胡蜂coi(cytochromecoxidasesubuniti,细胞色素c氧化酶亚基i)基因片段。
3.一种用于鉴定黄纹大胡蜂的引物对,其特征在于,所述引物对用于扩增权利要求1或2所述的dna条形码标准检测片段;所述引物对中,正向引物的核苷酸序列如seqidno.2所示,反向引物的核苷酸序列如seqidno.3所示。
4.一种利用权利要求1-2任一项所述的dna条形码标准检测片段鉴定黄纹大胡蜂的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)提取待测样品的dna,以待测样品的dna作为模板dna,使用权利要求3所述的引物对进行pcr扩增,得到coi基因片段;
(2)将得到的coi基因片段进行琼脂糖凝胶电泳分析,经溴化乙锭染色后于紫外灯下观察,根据扩增产物的大小判定结果,对特异性目的条带进行测序;
(3)将测序得到的结果经过校对、序列拼接后,除去引物序列,再与所述dna条形码标准检测片段进行比对,若同源性在98%或以上,则可以判定待测样品为黄纹大胡蜂来源。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,pcr扩增时设置阴性对照和阳性对照,所述阳性对照为含有所述dna条形码标准检测片段的pcr反应产物。
6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述pcr扩增程序为:
首先94℃预变性3.5分钟;然后94℃变性35秒,49℃退火35秒,72℃延伸45秒,共33个循环;最后72℃延伸5分钟,置4℃保存。
7.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述pcr扩增反应体系为:
双蒸水19μl,pcr反应混合液25μl,2μl正向引物p1,2μl反向引物p2,2μldna模板;其中,正向与反向引物的浓度为10μmol/l,pcr反应混合液内含0.1u的taq聚合酶、500μmol/l的脱氧核糖核苷三磷酸、20mmol/l的酸碱度ph=8.3的三羟甲基氨基甲烷-盐酸、100mmol/l的氯化钾、3mmol/l氯化镁。
8.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述待测样品包括待鉴定的昆虫药材的鲜品或干品、炮制品或粉末状样品、全虫或部分虫体、蛹或幼虫或成虫。
9.一种权利要求1或2任一项所述的dna条形码标准检测片段在黄纹大胡蜂物种鉴定及中药药材鉴定中的应用。