本发明属于中药提取领域，涉及一种中药枳实中有效成分的提取方法，尤其涉及一种分离纯化枳实中多甲氧基黄酮的方法。
背景技术：
枳实是芸香科植物酸橙及其栽培变种或甜橙的干燥幼果，具有破气消积、化痰散痞的作用，用于治疗积滞内停、痞满胀痛、泻痢后重、大便不通、结胸、胃下垂、脱肛、子宫脱垂等症，主要含挥发油、生物碱(辛弗林、n-甲基酪胺)、黄酮类化合物、维生素c及维生素d等成分。
黄酮类化合物是枳实中的主要有效活性成分，此前的研究多集中在枳实中含有的芸香柚皮苷与柚皮苷、橙皮苷与新橙皮苷等黄酮苷类化合物中，而对多甲氧基类黄酮化合物(pmfs)的研究较少。近年来有关pmfs抗癌的研究取得了很大进展，由于pmfs对多种癌细胞有较强的抑制作用，受到国内外的广泛关注。国内外对多甲氧基黄酮类成分的抗癌活性报道越来越多，提示这类成分具有潜在的新药开发价值。但是现有技术中枳实有效成分提取较困难，且方法复杂，得率低且成本高，同时，得到的样品纯度也不高等。
随着各种天然有效成分的利用价值越来越受到人们的重视，从植物中提取这个有效成分也很重要，但一般都是为获得单一活性成分而开发设计提取方法。由于各种活性成分之间的性质差异，导致了这些方法生产的产品较为单一，也会损失剩余部分的药用价值。
技术实现要素：
本发明为了解决上述技术问题，提供了一种分离纯化枳实中多甲氧基黄酮的方法，该方法步骤简单，易于操作，成本低，得率高且产物纯度高。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种分离纯化枳实中多甲氧基黄酮的方法，包括以下步骤：a)按照体积比1：1～10的比例，将粉碎的干燥枳实，加入浓度为60-80％的乙醇中，回流提取2-4次，每次1～2h，过滤后将多次的过滤液合并，浓缩至浓度为30～35％，调节ph值为4-5后，得到预处理后的枳实提取液备用；
b)将步骤a)中得到的枳实提取液通过备好的大孔吸附树脂柱进行上样，上样时枳实提取液的流速为10-20ml/h，枳实提取液与大孔吸附树脂柱中树脂的体积比为1～3:1，吸附流速为0.4-0.6bv/h，大孔吸附树脂柱径高比为1:10，上样后用与树脂体积比为3:1的乙醇作洗脱剂进行洗脱，并将洗脱液浓缩后，结晶，即得到多甲氧基黄酮晶体。
步骤a)之前还包括，c)大孔吸附树脂柱预处理：
将大孔吸附树脂用浓度为90-95％的乙醇浸泡20-24h后，用水进行清洗，再用浓度为5-6％的盐酸浸泡5-8h，用水洗至中性，然后用5-7％氢氧化钠溶液浸泡5-8h，用水洗至中性后，湿法装注，再用乙醇对树脂进行清洗至洗出液澄清，用水清洗后备用。
步骤c)中，所述的湿法装柱的具体步骤为：将树脂与水的体积比为1：3的比例，倒入柱子中。
步骤c)中，所述的大孔吸附树脂为d-101型树脂。
步骤c)中，所述的水为蒸馏水。
步骤c)中，所述的乙醇对树脂进行清洗，乙醇浓度为90-95％。
步骤a)中，所述的粉碎的干燥枳实的粒度为10-50目。
步骤b)中，所述的乙醇浓度为50％。
步骤b)中，所述的洗脱液浓缩至，以溶液中乙醇浓度小于25％为止。
步骤b)中，所述的结晶是在室温下，结晶5～8h。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
1、与现有的传统提取技术相比较，本发明中利用枳实中多甲氧基黄酮的理化特性，通过控制提取条件和树脂吸附条件对提取物进行提取和纯化。具有方法简单，易于操作，成本低，得率高的优点。
2、本发明中步骤a中的大孔吸附树脂型号为d-101，它是一种较为常见的大孔树脂，普遍吸附能力强，对黄酮类分离纯化的效果比较好。
3、本发明步骤a中的水为蒸馏水，通过蒸馏作用的水，所含杂质较少，不会导致产品中有效成分受影响。
4、本发明通过对工艺参数进行控制，优化了各个步骤中乙醇的浓度，旨在提高枳实中多甲氧基黄酮的提取率，实现成本低，得率高的目的。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1：
一种分离纯化枳实中多甲氧基黄酮的方法，包括以下步骤：
a)大孔吸附树脂柱预处理：将大孔吸附树脂用浓度为90-95％的乙醇浸泡20-24h后，用蒸馏水进行清洗，再用浓度为5-6％的盐酸浸泡5-8h，用蒸馏水洗至中性，然后用5-7％氢氧化钠溶液浸泡5-8h，用蒸馏水洗至中性后，湿法装注，再用浓度为90-95％的乙醇对树脂进行清洗至洗出液澄清，用蒸馏水清洗后备用；其中，步骤a)中，所述的湿法装柱的具体步骤为：将树脂与水的体积比为1：3的比例，倒入柱子中。步骤a)中，所述的大孔吸附树脂为d-101型树脂。
b)将干燥的枳实粉碎至粒度为10-50目，按照体积比1：1～10的比例，将其加入浓度为60-80％的乙醇中，回流提取2-4次，每次1～2h，过滤后将多次的过滤液合并，浓缩至浓度为30～35％，调节ph值为4-5后，得到预处理后的枳实提取液备用；
c)将步骤b)中得到的枳实提取液通过备好的大孔吸附树脂柱进行上样，上样时枳实提取液的流速为10-20ml/h，枳实提取液与大孔吸附树脂柱中树脂的体积比为1～3:1，吸附流速为0.4-0.6bv/h，大孔吸附树脂柱径高比为1:10，上样后用与树脂体积比为3:1的浓度为50％的乙醇作洗脱剂进行洗脱，并将洗脱液浓缩至溶液中乙醇浓度小于25％为止后，在室温下，结晶5～8h，即得到多甲氧基黄酮晶体。
实施例2：
一种分离纯化枳实中多甲氧基黄酮的方法，包括以下步骤
a.大孔吸附树脂预处理
将大孔吸附树脂用浓度为90％的乙醇浸泡24h后，用水进行清洗，再用浓度为5％的盐酸浸泡8h，用水洗至中性，然后用5％氢氧化钠溶液浸泡8h，用水洗至中性后，湿法装注，再用乙醇对树脂进行清洗至洗出液澄清，用水清洗后备用；其中，步骤a中，所述的湿法装柱的具体步骤为：将树脂与水的体积比为1：3的比例，倒入柱子中。步骤a中，所述的大孔吸附树脂为d-101型树脂。步骤a中，所述的水为蒸馏水。步骤a中，所述的乙醇对树脂进行清洗，乙醇浓度为90％。
b.枳实预处理
将干燥的枳实粉碎，加入体积比为1：10，浓度60％的乙醇，回流提取4次，每次2h，过滤后将多次的过滤液合并，浓缩至浓度为30％，调节ph值为5后备用；其中，步骤b中，所述的粉碎枳实的粒度为10目。
c.多甲氧基黄酮的提取
将步骤b中得到的枳实提取液通过步骤a中备好的大孔吸附树脂柱进行上样，上样时溶液的流速为10ml/h，溶液与树脂的体积比为2:1，吸附流速为0.4bv/h，树脂柱径高比为1:10，上样后用与树脂体积比为3:1的乙醇作洗脱剂进行洗脱，并将洗脱液浓缩后，结晶，即得到多甲氧基黄酮晶体。
其中，步骤c中，所述的乙醇浓度为50％。步骤c中，所述的浓缩洗脱液，以溶液中乙醇浓度小于25％为止。步骤c中，所述的结晶是在室温下，结晶5h。
实施例3
一种分离纯化枳实中多甲氧基黄酮的方法，包括以下步骤：
a.大孔吸附树脂预处理
将大孔吸附树脂用浓度为95％的乙醇浸泡20h后，用水进行清洗，再用浓度为6％的盐酸浸泡5h，用水洗至中性，然后用7％氢氧化钠溶液浸泡5h，用水洗至中性后，湿法装注，再用乙醇对树脂进行清洗至洗出液澄清，用水清洗后备用；其中，步骤a中，所述的湿法装柱的具体步骤为：将树脂与水的体积比为1：3的比例，倒入柱子中。步骤a中，所述的大孔吸附树脂为d-101型树脂。步骤a中，所述的水为蒸馏水。步骤a中，所述的乙醇对树脂进行清洗，乙醇浓度为95％。
b.枳实预处理
将干燥的枳实粉碎，加入体积比为1：10，浓度80％的乙醇，回流提取2次，每次2h，过滤后将多次的过滤液合并，浓缩至浓度为35％，调节ph值为4后备用；其中，步骤b中，所述的粉碎枳实的粒度为50目。
c.多甲氧基黄酮的提取
将步骤b中得到的枳实提取液通过步骤a中备好的大孔吸附树脂柱进行上样，上样时溶液的流速为20ml/h，溶液与树脂的体积比为2:1，吸附流速为0.6bv/h，树脂柱径高比为1:10，上样后用与树脂体积比为3:1的乙醇作洗脱剂进行洗脱，并将洗脱液浓缩后，结晶，即得到多甲氧基黄酮晶体。其中，步骤c中，所述的乙醇浓度为50％。步骤c中，所述的浓缩洗脱液，以溶液中乙醇浓度小于25％为止。步骤c中，所述的结晶是在室温下，结晶8h。
实施例4：
一种分离纯化枳实中多甲氧基黄酮的方法，包括以下步骤：
a)大孔吸附树脂柱预处理：将大孔吸附树脂用浓度为93％的乙醇浸泡22h后，用蒸馏水进行清洗，再用浓度为5.5％的盐酸浸泡7h，用蒸馏水洗至中性，然后用6％氢氧化钠溶液浸泡7h，用蒸馏水洗至中性后，湿法装注，再用浓度为93％的乙醇对树脂进行清洗至洗出液澄清，用蒸馏水清洗后备用；其中，步骤a)中，所述的湿法装柱的具体步骤为：将树脂与水的体积比为1：3的比例，倒入柱子中。步骤a)中，所述的大孔吸附树脂为d-101型树脂。
b)将干燥的枳实粉碎至粒度为30目，按照体积比1：5的比例，将其加入浓度为70％的乙醇中，回流提取3次，每次1.5h，过滤后将多次的过滤液合并，浓缩至浓度为33％，调节ph值为4.5后，得到预处理后的枳实提取液备用；
c)将步骤b)中得到的枳实提取液通过备好的大孔吸附树脂柱进行上样，上样时枳实提取液的流速为15ml/h，枳实提取液与大孔吸附树脂柱中树脂的体积比为3:1，吸附流速为0.5bv/h，大孔吸附树脂柱径高比为1:10，上样后用与树脂体积比为3:1的浓度为50％的乙醇作洗脱剂进行洗脱，并将洗脱液浓缩至溶液中乙醇浓度小于25％为止后，在室温下，结晶7h，即得到多甲氧基黄酮晶体。
本发明提供的一种分离纯化枳实中多甲氧基黄酮的方法，是一种采用大孔树脂吸附分离提取枳实中多甲氧基黄酮的方法，该方法该方法步骤简单，得率高且产物纯度高，解决了现有技术中枳实有效成分提取较困难，方法复杂，得率低且成本高以及得到的样品纯度不高等问题。
本发明提供的一种分离纯化枳实中多甲氧基黄酮的方法，其是采用大孔离子交换树脂，依次经过3个步骤即大孔吸附树脂预处理、枳实预处理、多甲氧基黄酮的提取，分步提取枳实中多甲氧基黄酮。其方法过程简单，效率高并可将枳实黄酮中的多甲氧基黄酮分离，具有成本低，效率高，资源得到充分利用的优点。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。