1.一种epcam基因表达检测试剂盒,其特征在于,包括针对检测epcam基因mrna的捕获探针以及信号放大系统;所述信号放大系统包括有扩增探针和末端修饰有荧光基团的标记探针;其中,
所述捕获探针用于连接epcam基因mrna与扩增探针,每条捕获探针从5’端到3’端的组成依次为:能与待检测epcam基因mrna结合的特异性p1序列、助溶基团、p2序列;所述特异性p1序列为碱基长度为16~20bp的肽核酸序列;所述助溶基团选自o-linker、e-linker、x-linker中的至少一种;所述p2序列为不存在发夹结构,探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配,与p1和epcam基因mrna之间均不存在特异性结合的核酸序列;
所述扩增探针连接捕获探针与标记探针,每条扩增探针从5’端到3’端的组成依次为:能与捕获探针的p2序列互补配对的p3序列、间隔臂序列、p4序列;所述p4序列为不存在发夹结构,探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配,与p1、p2、p3和epcam基因mrna之间均不存在特异性结合的核酸序列;
所述标记探针连接扩增探针与荧光基团,每条标记探针具有与相应扩增探针p4互补配对的p5序列,且末端修饰有荧光基团。
2.根据权利要求1所述的epcam基因表达检测试剂盒,其特征在于,所述助溶基团的数量为2~3个。
3.根据权利要求2所述的epcam基因表达检测试剂盒,其特征在于,所述助溶基团为2~3个o-linkers。
4.根据权利要求1所述的epcam基因表达检测试剂盒,其特征在于,针对epcam基因mrna的捕获探针中,特异性p1序列的碱基序列选自seqidno.1~seqidno.10中的5条或5条以上,p2序列的碱基序列为seqidno.21;
和/或,针对epcam基因mrna的扩增探针中,p3序列的碱基序列为seqidno.23,p4序列的碱基序列为seqidno.25;
和/或,针对epcam基因mrna的标记探针中,p5序列的碱基序列为seqidno.27。
5.根据权利要求1所述的epcam基因表达检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括针对内参基因mrna的捕获探针以及信号放大系统;所述信号放大系统包括有扩增探针和末端修饰有荧光基团的标记探针;其中,
所述捕获探针用于连接内参基因mrna与扩增探针,每条捕获探针从5’端到3’端的组成依次为:能与待检测内参基因mrna结合的特异性p1序列、助溶基团、p2序列,所述特异性p1序列为碱基长度为16~20bp的肽核酸序列;所述助溶基团选自o-linker、e-linker、x-linker中的至少一种;所述p2序列为不存在发夹结构,探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配,与p1和epcam基因mrna之间均不存在特异性结合的核酸序列;
所述扩增探针连接捕获探针与标记探针,每条扩增探针从5’端到3’端的组成依次为:能与捕获探针的p2序列互补配对的p3序列、间隔臂序列、p4序列;所述p4序列为不存在发夹结构,探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配,与p1、p2、p3和内参基因mrna之间均不存在特异性结合的核酸序列;
所述标记探针连接扩增探针与荧光基团,每条标记探针具有与相应扩增探针p4互补配对的p5序列,且末端修饰有荧光基团,所述荧光基团与针对epcam基因mrna的标记探针的末端修饰的荧光基团互不相同。
6.根据权利要求5所述的epcam基因表达检测试剂盒,其特征在于,所述内参基因为actb基因;所述actb基因mrna的捕获探针中,特异性p1序列的碱基序列选自seqidno.11~seqidno.20中的5条或5条以上,助溶基团为2~3个o-linkers,p2序列的碱基序列为seqidno.22;针对actb基因mrna的扩增探针中,p3序列的碱基序列为seqidno.24,p4序列的碱基序列为seqidno.26;针对actb基因mrna的标记探针中,p5序列的碱基序列为seqidno.28。
7.根据权利要求1~6任一项所述的epcam基因表达检测试剂盒,其特征在于,所述间隔臂序列的碱基长度为5~10个;优选地,所述间隔臂序列的碱基为5~10个t。
8.根据权利要求1~6任一项所述的epcam基因表达检测试剂盒,其特征在于,所述荧光基团选自:fam、tet、joe、hex、cy3、tamra、rox、texas、red、lcred640、cy5、lcred705、alexafluor488和alexafluor750。
9.一种非疾病诊断目的的epcam基因表达检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)得到生物样本;
(2)富集待检测细胞;
(3)对富集的待检测细胞进行前处理,使待检测细胞的mrna暴露;
(4)使用权利要求1~8任一项所述试剂盒检测epcam基因是否表达:a)捕获探针杂交,捕获探针的特异性p1序列与epcam基因mrna序列特异性结合;b)扩增杂交,捕获探针的p2序列与扩增探针的p3序列特异性结合,epcam基因mrna序列信号放大;c)显色,扩增探针的p4序列与带有荧光基团修饰的标记探针的p5序列特异性结合,荧光标记目标信号;d)通过荧光检测仪检测。
10.根据权利要求9所述的非疾病诊断目的的epcam基因表达检测方法,其特征在于,所述步骤(4)中捕获探针杂交的条件为:40±1℃孵育1.5~2小时。