1.一种用于检测甘薯黑斑病菌的lfd-rpa可视化检测引物组,其特征在于:包括2条引物cfrpaf和cflfd-rpar,以及1条探针cflf-probe,引物及探针序列分别为:
cfrpaf:5’-ttctcacaaccaggcaacactcctaataac-3’,seqidno.1;
cflfd-rpar:5’-tctcttggcaatgactcttgttgtagatgg-3’,seqidno.2;
cflf-probe:5’-[fam]cccagcagctcgggcctgaccctagtggcaaaggcacttgcctacc[c3spacer]-3’,seqidno.3;
所述下游引物cflfd-rpar的5’端用biotin标记,所述探针cflf-probe的5’端用fam标记,3’端有c3-spacer修饰,且在探针中间距5’端31bpa和32bpa中间用thf修饰。
2.一种利用权利要求1所述用于检测甘薯黑斑病菌的lfd-rpa可视化检测引物组的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)待检测样品基因组dna的提取;
(2)lfd-rpa检测:以步骤(1)提取的dna为模板,利用引物cfrpaf、cflfd-rpar及cflfprobe探针进行扩增和温育;
(3)采用侧流层析试纸条进行检测;取步骤(2)的反应产物与hybridetectassaybuffer混合,然后将试纸条置于混合液中,室温静置5min后观察结果。
3.如权利要求2所述的检测方法,其特征在于,反应体系为50μl,包含29.5μlrehydrationbuffer反应缓冲液,10μmcfrpaf和cflfd-rpar各2.1μl,探针10μmcflf-probe0.6μl,待测模板dna2.0μl,无菌双蒸水11.2μl,rpa冻干酶粉5mg,2.5μl280mm醋酸镁。
4.如权利要求3所述的检测方法,其特征在于,步骤(2)所述温育为:39℃温育5min,将反应管再次混匀,继续39℃温育20min。
5.如权利要求4所述的检测甘薯黑斑病菌的方法,其特征在于,步骤(3)所述反应产物和hybridetectassaybuffe体积比为1:10。
6.如权利要求5所述的检测方法,其特征在于,步骤(3)结果的评判标准:试纸条出现两条带颜色条带,一条位于质控区内,一条位于检测区,则结果为阳性,表明样本中含有甘薯黑斑病菌;当试纸条只有质控区出现一条带颜色条带,检测区没有条带,则结果是阴性,表明样本中不含有甘薯黑斑病菌。
7.权利要求1所述用于检测甘薯黑斑病菌的lfd-rpa可视化检测引物组在甘薯黑斑病菌的诊断、检测、鉴定中的应用。
8.权利要求1所述用于检测甘薯黑斑病菌的lfd-rpa可视化检测引物组在制备甘薯黑斑病菌的诊断、检测、鉴定试剂盒中的应用。