一种中/长链脂肪乳注射液中甘油含量的测定方法与流程

本发明属于医药检测领域，涉及化学品的检测方法，具体涉及一种中/长链脂肪乳注射液中甘油含量的测定方法。

背景技术：

脂肪乳是静脉营养的组成部分之一，能为机体提供能量和必需脂肪酸。中/长链脂肪乳注射液（c8-24ve）为白色乳状液体，是能量补充药，用于胃肠外营养补充能量及必需脂肪酸，预防和治疗人体必需脂肪酸缺乏症，为经口服途径不能维持和恢复正常必需脂肪酸水平的病人提供必需脂肪酸。现行质量标准有国家食品药品监督管理总局进口药品注册标准jx20160361及国家食品药品监督管理总局标准ybh1132016，其【检查】中甘油含量项测定方法为酶反应法，由于反应步骤多、操作繁琐、反应时间控制难等问题，在实际检验过程中经常会出现反应的结果平行性不好、重复性差、试剂消耗量大、多样品测试耗时长的问题。因此，研究开发出平行性号、重复性佳，且操作简便的检测方法非常有必要，且具有广阔的应用前景。

技术实现要素：

要解决的技术问题：本发明的目的是提供一种中/长链脂肪乳注射液中甘油含量的测定方法，该方法操作便捷，测定结果平行性与重复性好、试剂消耗量小、耗时少，能够实现中/长链脂肪乳注射液（c8-24ve）中甘油含量含量的高通量检测，能更好的控制产品质量。

技术方案：一种中/长链脂肪乳注射液中甘油含量的测定方法，包括以下步骤：

（1）精密量取中/长链脂肪乳注射液（c8-24ve）1ml，置于100ml量瓶中，加70%高氯酸溶液0.1ml，混匀，加水稀释至100ml，摇匀；

（2）从中精密量取1ml，置20ml量瓶中，加水稀释至20ml，摇匀；

（3）离心5min，取上清液为供试品溶液；

（4）在20～25℃条件下，取甘氨酰替甘氨酸缓冲液50ul，丙酮酸激酶混悬液0.5ul，均以多通道电动移液器置于透明96孔板内；

（5）加入供试品溶液100ul，在脱色摇床充分混匀；

（6）10min后，以多功能酶标仪在340nm处，测定吸光度a0s；

（7）再加甘油含量激酶混悬液0.5ul，再以脱色摇床充分混匀；

（8）15min后，再测定吸光度a1s；

（9）另取不同浓度甘油对照品测得外标曲线公式，按公式计算，即得甘油含量。

进一步的，所述甘氨酰替甘氨酸缓冲液的ph为7.4，制备方法为：取还原型辅酶i7mg、三磷酸腺苷22mg、磷酸丙酮酸酯11mg、硫酸镁与稳定剂，加水11ml使溶解，摇匀即得。

进一步的，所述丙酮酸激酶混悬液的制备方法为取丙酮酸激酶240单位、乳糖脱氢酶220单位，加水0.4ml混匀即得。

进一步的，所述甘油含量激酶混悬液的制备方法为取甘油含量激酶约34单位，加水0.4ml，混匀即得。

进一步的，所述不同浓度甘油对照品的浓度依次为：0g/ml、1g/ml、1.5g/ml、2g/ml、3g/ml、4g/ml。

有益效果：

1.通过采用96孔板酶标仪检测，将单位时间检测量由每30min1个样品，提高到每30min可高通量检测96个样品。

2.减少取样量，缩小反应体系，采用多道电动移液器实现了快速精确加样，缩短样品间由试剂加样量偏差及加样反应时间偏差造成的实验结果误差，加样完成后采用脱色摇床将反应体系混匀，改变了原标准反应体系在比色皿中难以混匀的现状，从而解决了原标准结果平行性不好、重复性差、试剂消耗量大、多样品测试耗时长的问题。

3.方法学研究表明改进后的实验方法线性、平行性与重复性及回收率好，能够实现中/长链脂肪乳注射液（c8-24ve）中甘油含量的高通量检测，能更好的控制产品质量。

附图说明：

图1为线性关系考察试验结果，即不同浓度甘油对照品测得外标曲线。

具体实施方式

仪器：

uv2550紫外-可见分光光度法，日本岛津仪器有限公司；spectramaxplus384型全波长酶标仪，赛默飞世尔科技有限公司；multifugex3型离心机，赛默飞世尔科技有限公司；xse205型分析天平，梅特勒-托利多国际有限公司；e4xls多道电动移液器，梅特勒-托利多国际有限公司。

试剂：

甘油测定试剂盒，德国拜发公司(r-biopharm)；甘油对照品，中检院（190057-201602，含量99.6%）；中/长链脂肪乳注射液（c8-24ve），德国某制药企业3批次；中/长链脂肪乳注射液（c8-24ve），苏州某制药企业3批次；其余试剂均为市售分析纯。

实施例：

1.线性关系考察

介于本品标准规定应含甘油2.38～2.63%（g/ml），精密称取甘油对照品制成0%（g/ml）、1%（g/ml）、1.5%（g/ml）、2%（g/ml）、3%（g/ml）、4%（g/ml）的水溶液，按照本发明方法测定甘油含量，考察线性关系。以as（a0s-a1s）为纵坐标、甘油含量%（g/ml）为横坐标进行线性回归，得回归方程y=0.0214x+0.0037，r²=0.9996；结果表明本发明方法的甘油含量测定方法在0%～4%（g/ml）范围内线性关系良好。若as低于0.0037则不适用本快速检测方法。结果见图1。

1.重复性试验

取批次1样品6份，按本申请的方法测定甘油含量，考察重复性。测得甘油含量均值为2.57%（g/ml），相对偏差为0.29%（n=6），结果见表1。

表1重复性试验结果

2.回收率试验

取2.4.2中供试品，分别加入等体积含甘油对照品3.0%（g/ml）的水溶液，按2.3所述改进后的方法测定甘油含量，考察回收率。结果见表2。

表2回收率试验结果

3.中/长链脂肪乳注射液中甘油的测定

按照本发明方法分别对中/长链脂肪乳注射液（c8-24ve）进口3批次（批次1～3），国产3批次（批次4～6）中甘油含量进行测定。测得结果：进口3批次（批次1～3）甘油含量均值为2.58%（g/ml），相对偏差为0.32%。国产3批次（批次4～6）甘油含量均值为2.44%（g/ml），相对偏差为0.31%。均符合规定（标准规定应含甘油2.38～2.63%（g/ml））。测试表明本发明测定方法操作便捷，测定结果平行性与重复性好、试剂消耗量小、耗时少，且能实现快速高通量检测。结果见表3。

表3经本发明方法测定6批次中/长链脂肪乳注射液中甘油含量测定结果

对比例：

采用现行质量标准分别对中/长链脂肪乳注射液（c8-24ve）进口3批次（批次1～3），国产3批次（批次4～6）中甘油含量进行测定，测定结果：波动较大、重复性差、试剂消耗量大、多样品测试耗时长。具体测定结果如表4。

表46批次中/长链脂肪乳注射液中甘油含量测定结果