一种解脲脲原体快速培养方法及其培养基与流程

文档序号:22917337发布日期:2020-11-13 16:00阅读:1236来源:国知局

本说明书一个或多个实施例涉及生物培养领域,尤其涉及一种解脲脲原体快速培养方法及其培养基。



背景技术:

脲原体是从人体中分离的能自身繁埴的13种支原体之一,属硬壁菌门柔膜体纲支原体目支原体科脲原体属。脲原体介于病毒和细菌之间,是在人工培养基上能繁殖的最小的原核细胞型微生物,无细胞壁,能自我复制,呈球杆状,大小为125~250nm,分子量为4.5xio8,具高度多形性。脲原体根据分子生物学特征分为两个生物群和14个血清型,两个生物群包括微小脲原体和解脲脲原体,14个血清型中,基因组较小的血清型1、3、6、14属于微小脲原体,占脲原体感染的90%~92%;基因组较大的血清型2、4、5、8~13属于解脲脲原体,占脲原体感染的8%~10%;

解脲脲原体大多采用液体培养法进行培养,虽然液体培养法使用方便、快捷、容易判断,但是这种方法只能从液体颜色的改变来推断支原体是否存在,假阳性率高,准确性不高。而固体培养法则可以通过显微镜观察到人型支原体和解脲脲原体的菌落,从而确证支原体的存在,较好地解决临床标本假阳性率高的问题。但是固体培养法判读结果的时间较长,因而需要时间较长才能对uumh引起的泌尿道生殖道感染进行确诊,不利于疾病的诊断和治疗,综上所述,本申请现提出一种解脲脲原体快速培养方法及其培养基来解决上述出现的问题。



技术实现要素:

有鉴于此,本说明书一个或多个实施例的目的在于提出一种解脲脲原体快速培养方法及其培养基,以解决背景技术中提出的问题。

基于上述目的,本说明书一个或多个实施例提供了一种解脲脲原体的培养基,包括15-20%的琼脂、10-15%的鱼肉、3-5%的hepes缓冲剂、3-5%的酸性混合物、15-20%的人体血球蛋白、30-40%的青霉素、3-5%的厌氧混合物、0.3-0.5%的多粘霉素、5-10%的鸡胚绒毛尿囊膜和5-10%的干冰。

优选的,包括17.5%的琼脂、6.5%的鱼肉、3-5%的hepes缓冲剂、4%的酸性混合物、17.5%的人体血球蛋白、35%的青霉素、4%的厌氧混合物、0.5%的多粘霉素、7.5%的鸡胚绒毛尿囊膜和7.5%的干冰。

优选的,包括17.5%的琼脂、12.5%的鱼肉、3-5%的hepes缓冲剂、4%的酸性混合物、11.5%的人体血球蛋白、35%的青霉素、4%的厌氧混合物、0.5%的多粘霉素、7.5%的鸡胚绒毛尿囊膜和7.5%的干冰。

优选的,包括17.5%的琼脂、12.5%的鱼肉、3-5%的hepes缓冲剂、4%的酸性混合物、17.5%的人体血球蛋白、29%的青霉素、4%的厌氧混合物、0.5%的多粘霉素、7.5%的鸡胚绒毛尿囊膜和7.5%的干冰。

一种解脲脲原体快速培养方法,包括以下步骤:

s1,取适量琼脂,并打成粉末,投入培养皿,并取新鲜鱼肉经过清洗、过滤和提纯之后,并打成粉末,投入培养皿;

s2,取适量hepes缓冲剂、多粘霉素和鸡胚绒毛尿囊膜投入s1的培养皿中,进行搅拌;

s3,取适量的酸性混合物投入步骤s2的培养皿中,使培养皿内部液体ph值在7.8-8.0之间;

s4,取适量的干冰投入步骤s3中的培养皿中,干冰升华产生co2;

s5,取适量的人体血球蛋白、厌氧混合物和青霉素,并投入步骤s4的培养皿中;

s6,加入适量的蒸馏水,定容至2000ml,得到最终的培养基。

更为优选的,所述步骤s3中的酸性混合物为硝酸锰和硫酸钾的混合物。

更为优选的,所述厌氧混合物为麦芽糖、葡萄糖和糊精的混合物。

从上面所述可以看出,本发明的有益效果:使用本发明的固体培养基可选择性地培养解脲脲原体,通过菌落的形成确证支原体的存在,并能从菌落形态判断支原体的类型,因此,相对于液体培养基常出现假阳性的情况;本发明的固体培养基在诊断泌尿生殖道感染方面的准确性大大提高,同时在支原体菌落形成时间上,目前固体培养基的结果判读时间较长,而使用本发明的支原体培养基判读时间较短,大大缩短了检测时间,实现了解脲脲原体的快速检测,并且所形成的菌落比在市售培养基上形成的菌落要大得多,为医生制订合理的治疗方案提供了快速可靠的检验结果。

具体实施方式

为使本公开的目的、技术方案和优点更加清楚明白,以下结合具体实施例,对本公开进一步详细说明。

需要说明的是,除非另外定义,本说明书一个或多个实施例使用的技术术语或者科学术语应当为本公开所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本说明书一个或多个实施例中使用的“第一”、“第二”以及类似的词语并不表示任何顺序、数量或者重要性,而只是用来区分不同的组成部分。“包括”或者“包含”等类似的词语意指出现该词前面的元件或者物件涵盖出现在该词后面列举的元件或者物件及其等同,而不排除其他元件或者物件。“连接”或者“相连”等类似的词语并非限定于物理的或者机械的连接,而是可以包括电性的连接,不管是直接的还是间接的。“上”、“下”、“左”、“右”等仅用于表示相对位置关系,当被描述对象的绝对位置改变后,则该相对位置关系也可能相应地改变。

一种解脲脲原体的培养基,包括15-20%的琼脂、10-15%的鱼肉、3-5%的hepes缓冲剂、3-5%的酸性混合物、15-20%的人体血球蛋白、30-40%的青霉素、3-5%的厌氧混合物、0.3-0.5%的多粘霉素、5-10%的鸡胚绒毛尿囊膜和5-10%的干冰。

一种解脲脲原体快速培养方法,包括以下步骤:

s1,取适量琼脂,并打成粉末,投入培养皿,并取新鲜鱼肉经过清洗、过滤和提纯之后,并打成粉末,投入培养皿;

s2,取适量hepes缓冲剂、多粘霉素和鸡胚绒毛尿囊膜投入s1的培养皿中,进行搅拌;

s3,取适量的酸性混合物投入步骤s2的培养皿中,使培养皿内部液体ph值在7.8-8.0之间;

s4,取适量的干冰投入步骤s3中的培养皿中,干冰升华产生co2;

s5,取适量的人体血球蛋白、厌氧混合物和青霉素,并投入步骤s4的培养皿中;

s6,加入适量的蒸馏水,定容至2000ml,得到最终的培养基。

实施例一

一种解脲脲原体的培养基,包括17.5%的琼脂、6.5%的鱼肉、3-5%的hepes缓冲剂、4%的酸性混合物、17.5%的人体血球蛋白、35%的青霉素、4%的厌氧混合物、0.5%的多粘霉素、7.5%的鸡胚绒毛尿囊膜和7.5%的干冰。

按上述步骤,得到第一组培养基。

实施例二

一种解脲脲原体的培养基,包括17.5%的琼脂、12.5%的鱼肉、3-5%的hepes缓冲剂、4%的酸性混合物、11.5%的人体血球蛋白、35%的青霉素、4%的厌氧混合物、0.5%的多粘霉素、7.5%的鸡胚绒毛尿囊膜和7.5%的干冰。

按上述步骤,得到第二组培养基。

实施例三

一种解脲脲原体的培养基,包括17.5%的琼脂、12.5%的鱼肉、3-5%的hepes缓冲剂、4%的酸性混合物、17.5%的人体血球蛋白、29%的青霉素、4%的厌氧混合物、0.5%的多粘霉素、7.5%的鸡胚绒毛尿囊膜和7.5%的干冰。

按上述步骤,得到第三组培养基。

对比例

第四组培养基为支原体肉汤固体培养基。

实验流程:首先进行标本采集,取妇科患者的泌尿生殖标本拭子四例(需通过cn102409098a中解脲脲原体pcr检测试剂盒进行准确性鉴定,解脲脲原体呈阳性为合格标本),分别接种第一组培养基、第二组培养基、第三组培养基以及第四组培养基,均在环境温度为32-38摄氏度的环境下培养8-12个小时,分别检验培养结果,观察第一组培养基、第二组培养基、第三组培养基以及第四组培养基的颜色,得到如下表的结果。

本说明书一个或多个实施例旨在涵盖落入所附权利要求的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此,凡在本说明书一个或多个实施例的精神和原则之内,所做的任何省略、修改、等同替换、改进等,均应包含在本公开的保护范围之内。

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