一种拮抗志贺氏菌的鼠李糖乳杆菌LRa05、筛选方法及其应用与流程

本发明涉及微生物
技术领域：
，特别涉及一种拮抗志贺氏菌的鼠李糖乳杆菌lra05、筛选方法及其应用。
背景技术：
：志贺氏菌属(shigellacastellani)是一类革兰氏阴性短小杆菌，是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，属于肠杆菌科，分4个群：痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌和宋内氏志贺氏菌。无芽胞，无荚膜，无鞭毛，多数有菌毛。是人和灵长类动物的肠道致病菌，引起细菌性痢疾。每年全球感染志贺氏菌的人数高达2亿，每年有上百万的人需要住院治疗，其中很大部分的致死病例发生在发展中国家。每年可导致多达五十万人死亡。志贺氏杆菌导致的痢疾主要是由于肠道上皮粘膜被破坏(特别是盲肠和直肠)。一些系可以产生肠毒素和志贺氏毒素，与大肠杆菌细菌外毒素类似，最常见的症状是腹泻(水腹泻)、发烧、恶心、呕吐、胃抽筋、肠胃气胀和便秘。一般针对志贺氏菌所引起的病症，主要是采用抗生素来进行治疗，如氨苄青霉素、氯霉素等，但是采用抗生素，极易导致志贺氏菌产生抗药性，破坏正常的肠道菌群平衡，而且随着抗生素的滥用会产生的“超级细菌”，其抗生素的使用越来越受到人们的重视及慎用。肠道微生态疗法是最近许多研究学者所进行研究的一个热点，尤其是对乳酸菌的研究。乳酸菌是一类能够使碳水化合物发酵产生大量乳酸的细菌的统称，广泛存在于自然发酵乳制品、发酵传统食品及人肠道中，乳酸菌能调节肠道菌群平衡，控制内毒素，抑制肠道内致病菌的的生长繁殖，从而对机体的营养状态、生理功能、药物效应、免疫反应等产生有益的影响，其属于肠道中的有益菌，拮抗其它致病菌的生长，无毒副作用，不产生耐药性，但由于不同菌株之间其生理生化特性、抑菌特性不相同，目前暂时还没有专门针对拮抗志贺氏菌的乳酸菌的筛选、鉴定及其应用。技术实现要素：为解决上述技术问题，本发明提供一种拮抗志贺氏菌的鼠李糖乳杆菌lra05、筛选方法及其应用。本发明采用的技术方案如下：本发明提供本一种抗志贺氏菌的鼠李糖乳杆菌，命名为lra05，已于2020年7月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc1.12734，分类命名为鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。进一步地，所述鼠李糖乳杆菌lra05的16srrna基因序列如序列表中seqidno：1所示。进一步地，所述鼠李糖乳杆菌lra05的phes基因序列如序列表中seqidno：2所示。所述鼠李糖乳杆菌lra05的菌株特征为：革兰氏阳性菌，杆状，成链状，无鞭毛，无荚膜，不运动，兼性厌氧菌，最适温度一般是30-40度，菌落呈圆形，颜色为乳白色，表面光滑不透明，边缘整齐。本发明的另一个目的是提供抗志贺氏菌的鼠李糖乳杆菌lra05的筛选方法，依次通过样品的采集、分离、纯化、鉴定、保存等试验，最终筛选出拮抗志贺氏菌的鼠李糖乳杆菌lra05。具体包括如下步骤：样品采集，先将从采集的传统发酵食品做前处理，取25ml的样品加入至225ml的灭菌生理盐水中，充分混匀，得到菌悬液；菌株的分离，将菌悬液进行10倍梯度稀释至10-3、10-4、10-5、10-6后，涂布于含有放线菌酮(10-50ug/g，oxid公司)和万古霉素(20-50ug/g，浙江海正药业股份有限公司)的mrs琼脂平板培养基上，mrs琼脂平板培养基表面有碳酸钙浇注，于30-37℃厌氧培养48-72h；挑取溶钙圈较大的菌落，接入tpy的增菌液体培养基中(其中含胆盐浓度0.1-0.3％)，30-37℃厌氧培养12-48h；将第二步培养好的、菌浓度(od600)较高的菌落液体培养基，采用牛津杯法，进行拮抗志贺氏菌的的抑菌试验，30-37℃厌氧培养12-48h挑取抑菌圈最大的单菌落，将菌落培养物划线接种到mrs琼脂培养基上，于30-37℃厌氧培养48-72h。菌株的纯化，挑取培养皿上长出的单菌落，继续划线接种到mrs琼脂培养基上，30-37℃厌氧培养48-72h；连续划线培养三次，获得纯种鼠李糖乳杆菌lra05；菌株的鉴定，将鼠李糖乳杆菌lra05进行革兰氏染色、显微镜下观察，结果显示菌株为革兰氏阳性、杆状菌株，通过将其送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行16srrna基因序列和phes基因序列的鉴定，鉴定结果显示该菌株属于鼠李糖乳杆菌。菌株的保存，将菌落培养物物置于无菌的20％甘油中于-80℃保存，同时接种mrs琼脂培养基试管斜面用于临时保存。进一步地，所述mrs琼脂平板培养基组成为：蛋白胨10.00g、牛肉膏10.00g、酵母膏5.00g、柠檬酸氢二铵2.00g、葡萄糖20.00g、吐温-801ml、磷酸氢二钾2.00g、硫酸锰0.58g、硫酸镁0.28g和1l蒸馏水，ph值为6.4±0.1。进一步地，所述tpy增菌培养基组成：水解酪蛋白胨10.0g、大豆胨5.0g、酵母粉2.0g、葡萄糖5.0g、l-半胱氨酸0.5g、磷酸氢二钾2.0g、氯化镁0.5g、硫酸镁0.25g、氯化钙0.15g、氯化铁0.000001g、吐温801.0g和1l蒸馏水，ph值为4.5±0.5。本发明另一个目的是提供了鼠李糖乳杆菌lra05抗志贺氏菌的应用，具体为所述鼠李糖乳杆菌lra05在保健食品中的应用。进一步地，所述保健食品的组成为：按照质量百分比计算，鼠李糖乳杆菌lra052-5％，植物乳杆菌1-4％，嗜酸乳杆菌1-5％，乳双歧杆菌0.5-3％，副干酪乳杆菌0.5-5％，菊粉20-50％，聚葡萄糖20-60％。优选的，所述保健食品的组成为：按照质量百分比计算，鼠李糖乳杆菌lra054％，植物乳杆菌1％，嗜酸乳杆菌2％，乳双歧杆菌1％，副干酪乳杆菌2％，菊粉30％，聚葡萄糖60％。与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下优点和有益效果：本发明提供的鼠李糖乳杆菌lra05，对志贺氏菌具有良好的拮抗作用，其拮抗能力优于普通常用的乳杆菌和商业菌株鼠李糖乳杆菌lgg；具有良好的耐酸、耐胆盐的特性；鼠李糖乳杆菌lra05制备的保健食品，动物试验及人体试验结果表明，可有效缓解志贺氏菌引起的腹痛、腹泻、发烧等症状；另外，鼠李糖乳杆菌属于益生菌，已纳入可应用于食品名单目录中的安全菌株，安全性优异，可替代传统抗生素使用。附图说明图1鼠李糖乳杆菌lra05的形态学特性的镜检图图2鼠李糖乳杆菌lra05的菌落形态特征图具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、装置、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其他步骤或单元。以下实施例中使用的鼠李糖乳杆菌，命名为lra05，已于2020年7月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc1.12734，分类命名为鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。以下实施例中使用到的材料和方法，如无特别说明，均为本
技术领域：
的常规材料和常规方法；实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到；以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例1鼠李糖乳杆菌lra05菌株的筛选一、样品采集采集传统发酵食品(本实施例选取青海省果洛藏族自治州采集的当地传统手工制作的酸奶)做前处理获得样品处理液，取25ml的样品处理液于225ml灭菌生理盐水中，充分混匀，得到菌悬液；二、菌株分离将菌悬液进行10倍梯度稀释至10-3、10-4、10-5、10-6四个浓度，分别涂布于含有放线菌酮(放线菌酮浓度为10-50ug/g，赛默飞世尔科技(oxid)公司)和万古霉素(万古霉素20-50ug/g，浙江海正药业股份有限公司)的mrs琼脂平板培养基上，每个梯度浓度10个平板，mrs琼脂平板培养基表面有碳酸钙浇注，于30-37℃厌氧培养48-72h，观察溶钙圈大小；选择100株具溶钙圈(以溶钙圈直径表示，单位mm)的菌株，编号1-100，其中选取溶钙圈较大的前20个菌株编号数据，结果如表1所示：表1溶钙圈排名前20的菌株菌株编号溶钙圈直径(mm)菌株编号溶钙圈直径(mm)编号219.62±0.04编号7218.88±0.04编号616.88±0.03编号7816.48±0.04编号1313.75±0.06编号8323.90±0.02编号1612.99±0.03编号8514.05±0.06编号2918.78±0.06编号8617.26±0.04编号4114.25±0.05编号8819.47±0.04编号5713.52±0.08编号9017.11±0.05编号6110.21±0.07编号9313.37±0.03编号6322.45±0.02编号9514.67±0.04编号6917.25±0.04编号9712.54±0.04挑取溶钙圈较大的菌落前20株，接入tpy增菌液体培养基中，30-37℃厌氧培养12-48h，检测菌液浓度(od值)；将上述菌液浓度较高的菌液进行离心，收集上清液，采用牛津杯法，进行拮抗志贺氏菌(痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌和宋内氏志贺氏菌)的抑菌试验，于30-37℃厌氧培养12-48h，重新编号1-50，选取抑菌圈较大的10个菌株编号，结果如表2所示：表2混合菌液对志贺氏菌的抑菌效果挑取抑菌圈最大的编号为25的菌株，将25号菌株划线接种到mrs琼脂培养基上，于30-37℃厌氧培养48-72h，获得具有较强抗志贺氏菌的拮抗菌株。菌株的纯化将分离到的拮抗菌株继续划线接种到mrs琼脂培养基上，30-37℃厌氧培养48-72h；连续多次划线培养，获得纯种拮抗菌株，作为鼠李糖乳杆菌lra05。菌株的保存将鼠李糖乳杆菌lra05置于无菌的20％甘油中于-80℃保存，同时接种mrs琼脂培养基试管斜面用于临时保存，备用。实施例2鼠李糖乳杆菌lra05的鉴定将实施例1中筛选得到的鼠李糖乳杆菌lra05进行16srrna基因序列和phes基因序列的鉴定，经过与模式菌株进行blast对比，鉴定结果显示，鼠李糖乳杆菌lra05属于鼠李糖乳杆菌。其中16srrna基因序列和phes基因序列如下：鼠李糖乳杆菌lra05的16srrna基因序列为：tatacatgcagtcgaacgagttctgattattgaaaggtgcttgcatcttgatttaattttgaacgagtggcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcccttaagtgggggataacatttggaaacagatgctaataccgcataaatccaaaaaccgcatggttcttggctgaaagatggcgtaagctatcgcttttggatggacccgcggcgtattaactagttggtgaggtaacggctcaccaaggcaatgatacgtaacccaactgaaaggttgatcggccacattgggactgaaacacggcccaaactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccacaatggacgcaagtctgatggaacaacgccccgtgagtgaagaaggctttcgggtcgtaaaactctgttgttggaaaaaaatggtcggcagaataactgttgtcggcgtgacggtatccaaccagaaagccacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaagtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgcaggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaagaagtgcatcggaaactgggaaacttgagtgcagaagaagacagtggaactccatgtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaargcggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaacaggattagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgaatgctaggtgttggagggtttccgcccttcagtgccgcagctaacgcattaagcattccgcctggggagtacgaccgcaaggttgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcttttgatcacctgagagatcaggtttccccttcgggggcaaaatgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatgactagttgccagcatttagttgggcactctagtaagactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatctcttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacgaagtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcacgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgagagtttgtaacacccgaagccggtggcgtaacccttttagggagcgagccgtctaaggtgggacaaatgattagggtgaagtcgtaac鼠李糖乳杆菌lra05的phes基因序列为：gctgatgcggtccaaaccagcccgatgcaggcgcggacgatggagaaacatgactttactaagggcccgctgaaaatgatcagtccaggcgtggtttatcggcgtgatgatgatgatgccacacatagccaccagttccatcagatggaaggcctggtgatcgacaagcatattacaatggctgatcttaaggggacgttactcgccatgtgtcagcatgtgtttggcgctgatcggacgattcgcctgcgcccgagctattttccgtttacagaaccgtctgtagaagtggacgtttcctgcttccgctgcggtggcaagggctgccctgtttgcaagtataccggctggattgaagttctcggtgccggcatggtgcatccgaatgttttacgtgcggctaatattgacgccgatgtatatggc实施例3鼠李糖乳杆菌lra05的形态学特性对鼠李糖乳杆菌lra05进行革兰氏染色后进行镜检，结果如图1所示，从图中可以看出，鼠李糖乳杆菌lra05具有以下特征：菌体呈杆状，有圆形末端，长4.0-10.0μm，宽0.4-1.0μm，呈成对、链状、短链状存在。实施例4鼠李糖乳杆菌lra05的菌落形态特征将鼠李糖乳杆菌lra05在mrs培养基中于37℃培养18h后，进行稀释涂平板，观察所得的鼠李糖乳杆菌lra05，结果如图2所示，鼠李糖乳杆菌lra05的菌落形态为：乳白色菌落，不透明，圆形，表面光滑，凸起，直径约为1.3-2.0mm。实施例5根据《伯杰氏细菌手册》中微生物分类的传统指标及生理生化特征的鉴定方法，对鼠李糖乳杆菌lra05进行鉴定，鼠李糖乳杆菌lra05的细胞形态和理化实验结果如表3所示。表3鼠李糖乳杆菌lra05的细胞形态和理化实验结果由表3可知，鼠李糖乳杆菌lra05为革兰氏阳性、杆状、接触酶和氧化酶实验阴性的菌株。碳水化合物产酸特性中，“+”表示发酵可利用，“-”表示发酵不能利用。实施例6鼠李糖乳杆菌lra05的抗生素敏感实验表4鼠李糖乳杆菌lra05的抗生素敏感实验结果由表4可知，鼠李糖乳杆菌lra05对测试的27种抗生素敏感。实施例7鼠李糖乳杆菌lra05对志贺氏菌的抑菌实验取实施例1分离纯化的鼠李糖乳杆菌lra05，活化处理，在mrs液体培养基中，37℃培养传代3次后，接种于mrs液体培养基中，37℃培养18-24h，于6500rpm，4℃离心15min，收集上清液，上清液经0.22um微膜过滤，得到鼠李糖乳杆菌lra05发酵上清液，4℃冰箱保存备用。以痢疾志贺氏菌(中国工业微生物菌种保藏管理中心(cicc)编号为10983)、福氏志贺氏菌(cicc10865)、鲍氏志贺氏菌(cicc21680)和宋内氏志贺氏菌(cicc21535)肠道致病菌为指标菌，指标菌于nb液体培养基中进行活化培养，得到指示菌菌液，备用；nb液体培养基组成是：蛋白胨10g/l、牛肉膏3g/l、氯化钠5g/l，调节ph至7.4左右，121℃，灭菌15min。将指示菌菌悬液稀释到106-107cfu/ml，以1：100体积比将指示菌液添加至45℃左右的灭菌mrs培养基中，摇匀后倾倒平板，15ml/平皿，冷却制成含菌平板；在每个平板上用8mm打孔器均匀打出4个小孔并标注菌号。每孔加入50-100μl鼠李糖乳杆菌lra05发酵上清液，同时以常规乳酸菌、商业菌株鼠李糖乳杆菌lgg的发酵上清液作为对照。全部平板于4℃冰箱中扩散12h后，于37℃恒温培养48h，观测抑菌圈大小，结果如表5所示。表5鼠李糖乳杆菌lra05对志贺氏菌的抑菌结果其中，鼠李糖乳杆菌lgg为1983年由美国北卡罗来纳州立大学两名美国教授(gorbachandgoldin)自健康人体分离出来，其在耐胃酸和胆汁方面的性能非常突出，可以进入人体肠道定植并保持活性，具有平衡和改善胃肠道功能、增强人体自身免疫能力、预防和帮助治疗腹泻的作用，因此成为全球研究最多的第三代益生菌。从表5可以看出，鼠李糖乳杆菌lra05发酵上清液对志贺氏菌的抑菌圈直径最大，说明鼠李糖乳杆菌lra05发酵上清液对志贺氏菌具有良好的抑菌效果。实施例8鼠李糖乳杆菌lra05的耐酸耐胆盐特性耐酸实验：取试验菌株鼠李糖乳杆菌lra05在mrs培养基中培养至对数生长期中期，取试验菌株菌悬液分别在ph2.0和ph3.0的mrs培养基中37℃培养3小时，用平板计数方法测定培养前和培养后的活菌数，得出其存活率；取其他乳杆菌(详见表6)作为对照菌，进行耐酸实验，结果如表6所示。耐胆盐实验：试验菌株(鼠李糖乳杆菌lra05)按4％接种量接入含0.3％(质量分数)胆盐的mrs培养基中，在37℃进行培养，以培养液在波长600nm下的吸光度达到0.3单位时所需时间作为菌株胆盐耐受力的评判依据，结果如表7所示。表6鼠李糖乳杆菌在酸性环境下的存活率表7鼠李糖乳杆菌在0.3％胆盐条件下的递增时间对比备注：所需时间越短，说明耐胆盐能力越强。表6和表7的结果表明，与对照组其他乳杆菌相比，鼠李糖乳杆菌lra05具有良好的耐酸性和耐胆盐能力。实施例9含有鼠李糖乳杆菌lra05保健食品的制备鼠李糖乳杆菌lra05保健食品(以下简称lra05保健食品)制备方法如下：鼠李糖乳杆菌lra05于mrs培养基进行发酵得到发酵液，经过6500rpm离心20min，得到菌泥，菌泥与保护剂(10-25％海藻糖、1-5％蔗糖、10-15％麦芽糊精)以1：1-3的比例混合乳化后，经过真空冷冻干燥或喷雾干燥、粉碎，加相应的辅料，搅拌混匀得到。含有鼠李糖乳杆菌lra05保健食品主要成份包括：鼠李糖乳杆菌lra054％，植物乳杆菌1％，嗜酸乳杆菌2％，乳双歧杆菌1％，副干酪乳杆菌2％，菊粉30％，聚葡萄糖60％。实施例10含有鼠李糖乳杆菌lra05保健食品的动物试验(1)对志贺氏菌引起的肠道病变的影响对大鼠构建志贺氏菌引起的腹泻模型，其中未造模大鼠作为正常对照组，正常饮水，进食；造模成功大鼠分为模型对照组(n＝10)、大剂量测试lra-h组(将lra05保健食品稀释成1010cfu/ml，n＝10)、小剂量测试lra-l组(将lra05保健食品稀释成109cfu/ml，n＝10)。各组予1ml/100g体重相应制剂1次/d灌胃，连续14d，观察大鼠结肠病变情况，结果如下表8和表9所示。表8鼠李糖乳杆菌lra05对志贺氏菌引起的肠道病变的影响从表8中可以看出，直肠和结肠下段组织学评分测试组低于模型对照组，但无统计学意义；而结肠中上段组织学评分、结肠溃疡指数的测试组均低于模型对照组，均有显著性差异，说明鼠李糖乳杆菌lra05对志贺氏菌引起的肠道病变的改善有一定的促进作用。表9鼠李糖乳杆菌lra05对淋巴细胞转化率和血清il-8、tnf-α水平的影响从表9可以看出，模型对照组t细胞转化率与正常对照组相比明显降低(p<0.05)，测试组中t细胞转化率较模型对照组有一定升高，但不显著。模型对照组血清il-8水平较正常对照组显著升高。各治疗组血清il-8、tnf-α水平均较模型对照组显著降低；说明鼠李糖乳杆菌lra05对志贺氏菌引起的大鼠炎症因子有明显的改善作用，提升淋巴细胞的转化率，提升免疫力。(2)鼠李糖乳杆菌lra05对志贺氏菌引起的腹泻的影响选取大鼠(48只)作为研究对象，随机分为正常对照组、模型组和实验组，其中实验组分为低(l)和高(h)剂量组两组。正常对照组和模型组每天灌胃生理盐水，实验组分别灌胃等量体积的实施例9制备的产品；第八天，对照组仍正常灌胃生理盐水，其余各组在正常灌胃0.5h后灌服一定量的志贺氏菌菌液，观察各组大鼠腹泻情况，对实验大鼠进行各项指标检测，结果如表10和表11所示。表10各组大鼠的生长及腹泻情况对比注：不同字母表示差异显著(p<0.05)，相同字母表示差异不显著(p>0.05)由表10中数据可知，各组大鼠平均日增体重及料重比在初始和灌服志贺氏菌前无显著差异(p>0.05)。而灌服志贺氏菌后，模型组、lra-l组和lra-h组均出现不同程度的稀便，但其lra-l组、lra-h组稀便率显著性(p>0.05)低于模型组，而lra-l组与lra-h组的稀便率差异不显著；第8天腹泻指数呈现显著差异，其中灌胃lra-l组和lra-h分别比模型组降低12.5％和18.5％，说明鼠李糖乳杆菌lra05对志贺氏菌引起的腹泻情况具有一定的抵御效果。从表11中可以看出，模型组大鼠血清中内毒素和d-乳酸含量显著高于对照组，而灌胃鼠李糖乳杆菌lra05后，无论是lra-l组还是lra-h组，其血清中内毒素和d-乳酸含量均显著降低，表明灌胃鼠李糖乳杆菌lra05可降低急性腹泻大鼠肠道通透性。表11各组大鼠血清中内毒素和d-乳酸含量注：不同字母表示差异显著(p<0.05)，相同字母表示差异不显著(p>0.05)实施例11含有鼠李糖乳杆菌lra05保健食品的人体试验志愿者为60名年龄在25-45岁的人群。测试组、对照组各30名；在测试开始前，了解受试人群的初始的基本情况，如志贺氏菌引起的腹痛程度、腹泻频率、食欲欲望等。使用实施例8制备的鼠李糖乳杆菌lra05保健食品作为测试对象，测试组服用活菌数为1×1010-2×1010cfu/g的含有鼠李糖乳杆菌lra05的保健食品，测试组受试者每天早晚服用含鼠李糖乳杆菌lra05保健食品各一次，使用两周后对腹痛程度、腹泻频率、食欲进行统计汇总；对照组服用麦芽糊精，其它条件相同。结果如表12所示。表12志愿者测试对照表从表12可以看出，服用鼠李糖乳杆菌lra05保健食品的测试组能明显改善人群的因志贺氏菌引起腹痛程度、腹泻频率及饮食的食欲。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。sequencelisting<110>江苏微康生物科技有限公司<120>一株拮抗志贺氏菌的鼠李糖乳杆菌及其应用<130>20200101<160>2<170>patentinversion3.3<210>1<211>1479<212>dna<213>lactobacillusrhamnosus<400>1tatacatgcagtcgaacgagttctgattattgaaaggtgcttgcatcttgatttaatttt60gaacgagtggcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcccttaagtgggggataaca120tttggaaacagatgctaataccgcataaatccaaaaaccgcatggttcttggctgaaaga180tggcgtaagctatcgcttttggatggacccgcggcgtattaactagttggtgaggtaacg240gctcaccaaggcaatgatacgtaacccaactgaaaggttgatcggccacattgggactga300aacacggcccaaactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccacaatggacgcaagt360ctgatggaacaacgccccgtgagtgaagaaggctttcgggtcgtaaaactctgttgttgg420aaaaaaatggtcggcagaataactgttgtcggcgtgacggtatccaaccagaaagccacg480gctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaagtggcaagcgttatccggatttatt540gggcgtaaagcgagcgcaggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccg600aagaagtgcatcggaaactgggaaacttgagtgcagaagaagacagtggaactccatgtg660tagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaargcggctgtctggtct720gtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaacaggattagataccctggtagtc780catgccgtaaacgatgaatgctaggtgttggagggtttccgcccttcagtgccgcagcta840acgcattaagcattccgcctggggagtacgaccgcaaggttgaaactcaaaggaattgac900gggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttac960caggtcttgacatcttttgatcacctgagagatcaggtttccccttcgggggcaaaatga1020caggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacg1080agcgcaacccttatgactagttgccagcatttagttgggcactctagtaagactgccggt1140gacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggcta1200cacacgtgctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatctct1260taaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacgaagtcggaatcgct1320agtaatcgcggatcagcacgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccg1380tcacaccatgagagtttgtaacacccgaagccggtggcgtaacccttttagggagcgagc1440cgtctaaggtgggacaaatgattagggtgaagtcgtaac1479<210>2<211>426<212>dna<213>lactobacillusrhamnosus<400>2gctgatgcggtccaaaccagcccgatgcaggcgcggacgatggagaaacatgactttact60aagggcccgctgaaaatgatcagtccaggcgtggtttatcggcgtgatgatgatgatgcc120acacatagccaccagttccatcagatggaaggcctggtgatcgacaagcatattacaatg180gctgatcttaaggggacgttactcgccatgtgtcagcatgtgtttggcgctgatcggacg240attcgcctgcgcccgagctattttccgtttacagaaccgtctgtagaagtggacgtttcc300tgcttccgctgcggtggcaagggctgccctgtttgcaagtataccggctggattgaagtt360ctcggtgccggcatggtgcatccgaatgttttacgtgcggctaatattgacgccgatgta420tatggc426当前第1页12