一种纯化地诺前列酮的方法与流程

本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及一种纯化地诺前列酮的方法。

背景技术：

地诺前列酮(简称前列腺素e2，pge2)为天然前列腺素，对各期妊娠子宫均有收缩作用，用于妊娠足月(从妊娠第38周开始)时促宫颈成熟，其宫颈bishop评分小于或等于6分，单胎头先露，有引产指征且无母婴禁忌症。

目前，地诺前列酮常通过化学合成方法制得。酶催化法制备地诺前列酮的方法较少。cn201911326101.7的申请文件中提到酶催化法制备前列腺素e2得到反应液，但是从该反应液中分离纯化获得高纯度的地诺前列酮还没有合适的方法。

技术实现要素：

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种纯化地诺前列酮的方法，本发明可以有效分离纯化地诺前列酮的酶促反应液，获得的地诺前列酮的纯度和收率较高。

本发明提出的一种纯化地诺前列酮的方法，包括如下步骤：

s1、取地诺前列酮的酶促反应液依次经微滤、超滤和纳滤处理得到纳滤液；

s2、将纳滤液上层析柱，然后用溶液a预洗，再用溶液b洗脱并收集洗脱液，脱除溶剂即得地诺前列酮，其中，层析柱的填料为硅胶unisil10-120c18。

上述硅胶unisil10-120c18可以从市场购得，如苏州纳微科技股份有限公司，硅胶unisil10-120c18可以经再生处理后重复利用。

上述“地诺前列酮的酶促反应液”是指申请号为cn201911326101.7的申请文件中实施例5获得的反应液。

优选地，在s2中，用紫外检测器在线监控，检测波长为208-212nm，当洗脱液的紫外响应值为1600mau时，开始收集洗脱液，至洗脱液的紫外响应值≤500mau时停止收集。

优选地，在s2中，溶液a为体积分数为14.5-15.5％的乙醇水溶液。

上述15％的乙醇水溶液预洗可以有效的除去无机盐及一部分有机杂质，且不会将pge2洗脱下来。

优选地，在s2中，溶液b为体积分数为44.5-45.5％的乙醇水溶液。

优选地，在s2中，层析柱中，填料高度与层析柱内径的比值为7-7.5:1。

优选地，在s2中，层析柱中每1ml填料上纳滤液中地诺前列酮的量为3.9-6.2mg。

优选地，在s2中，纳滤液的上样流速、洗脱流速均为每小时2.4-3.6倍柱床体积。

优选地，在s2中，溶液a的用量为2.5-3.5倍柱床体积。

上述柱床体积是指层析柱中的填料体积。

优选地，在s1中，用陶瓷膜微滤。

优选地，陶瓷膜孔径为90-110nm。

优选地，在s1中，用中空纤维柱超滤。

优选地，中空纤维柱的截留分子量为5000da。

优选地，在s1中，纳滤膜的截留分子量为150da。

有益效果：

发明人先选用葡聚糖凝胶cm-25作为层析柱的填料，对地诺前列酮的酶促反应液进行分离纯化，但是发现地诺前列酮的纯度和收率均不高，因此发明人通过多次试验，选用硅胶unisil10-120c18作为层析柱的填料，并选用合适的洗脱液和适宜的洗脱工艺，使得到的地诺前列酮具有较高的纯度，且收率较高；并且本发明操作简单，硅胶unisil10-120c18重复利用率高，寿命较长，硅胶unisil10-120c18的再生处理简单。

附图说明

图1为实施例1中纳滤液高效液相色谱图。

图2为实施例1中洗脱液的高效液相色谱图。

图3为实施例2中纳滤液高效液相色谱图。

图4为实施例2中洗脱液的高效液相色谱图。

图5为实施例3中纳滤液高效液相色谱图。

图6为实施例3中洗脱液的高效液相色谱图。

图7为实施例4中纳滤液高效液相色谱图。

图8为实施例4中洗脱液的高效液相色谱图。

图9为实施例5中纳滤液高效液相色谱图。

图10为实施例5中洗脱液的高效液相色谱图。

图11为实施例6中纳滤液高效液相色谱图。

图12为实施例6中洗脱液的高效液相色谱图。

图13为实施例7中纳滤液高效液相色谱图。

图14为实施例7中洗脱液的高效液相色谱图。

图15为实施例8中纳滤液高效液相色谱图。

图16为实施例8中洗脱液的高效液相色谱图。

具体实施方式

下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。

实施例1

一种纯化地诺前列酮的方法，包括如下步骤：

s1、取地诺前列酮的酶促反应液依次经孔径为100nm的陶瓷膜微滤、截留分子量为5000da的中空纤维柱超滤和截留分子量为150da的纳滤膜纳滤得到纳滤液；

s2、将纳滤液上层析柱(柱高为40cm，内径为3.5cm，填料的填装高度为26cm，柱床体积为250ml)，然后用3倍柱床体积的体积分数为15％的乙醇水溶液预洗，再用体积分数为45％的乙醇水溶液洗脱(预洗和洗脱的流速均为10ml/min)，洗脱过程中用紫外检测器在线监控，检测波长为210nm，当洗脱液的紫外响应值为1600mau时，开始收集洗脱液，至洗脱液的紫外响应值≤500mau时停止收集，脱除洗脱液中的溶剂即得地诺前列酮，其中，层析柱的填料为硅胶unisil10-120c18；每1ml填料上纳滤液中地诺前列酮的量为3.89mg(即地诺前列酮的上样量为972.4mg)；每小时纳滤液的上样体积为柱床体积的2.4倍(即纳滤液的上样流速为10ml/min)。

实施例2

预洗、洗脱、纳滤液的上样流速均为12ml/min，每1ml填料上纳滤液中地诺前列酮的量为3.934mg(即地诺前列酮的上样量为983.4mg)，其他同实施例1。

实施例3

预洗、洗脱、纳滤液的上样流速均为15ml/min，每1ml填料上纳滤液中地诺前列酮的量为3.96mg(即地诺前列酮的上样量为990.6mg)，其他同实施例1。

实施例4

预洗、洗脱、纳滤液的上样流速均为15ml/min，每1ml填料上纳滤液中地诺前列酮的量为4.82mg(即地诺前列酮的上样量为1204.5mg)，其他同实施例1。

实施例5

预洗、洗脱、纳滤液的上样流速均为15ml/min，每1ml填料上纳滤液中地诺前列酮的量为6.23mg(即地诺前列酮的上样量为1558mg)，其他同实施例1。

实施例6

预洗、洗脱、纳滤液的上样流速均为15ml/min，每1ml填料上纳滤液中地诺前列酮的量为5.36mg(即地诺前列酮的上样量为1341mg)，其他同实施例1。

实施例7

填料为葡聚糖凝胶cm-25，预洗、洗脱、纳滤液的上样流速均为12ml/min，每1ml填料上纳滤液中地诺前列酮的量为3.68mg(即地诺前列酮的上样量为921mg)，其他同实施例1。

实施例8

填料为葡聚糖凝胶cm-25，预洗、洗脱、纳滤液的上样流速均为12ml/min，每1ml填料上纳滤液中地诺前列酮的量为4.0mg(即地诺前列酮的上样量为1003mg)，其他同实施例1。

分别取实施例1-8的纳滤液、洗脱液；分别用高效液相检测地诺前列酮(pge2)的含量及纯度，结果如表1和图1-16所示。

表1

由表1和图1-16可以看出，纳滤液的上样流速、预洗流速和洗脱流速在每小时2.4-3.6倍柱床体积(10-15ml/min)内，地诺前列酮的上样量在3.9-6.2倍柱床体积内，填料为硅胶unisil10-120c18的层析柱在收率和纯度方面都比葡聚糖凝胶cm-25高，且稳定性较好。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。