光学活性氯喹和羟氯喹及其类似物、其制备方法、组合物和用途与流程

1.本发明属于药物化学技术领域，具体涉及光学纯(s)-氯喹、(s)-羟氯喹及其类似物和(r)-氯喹、(r)-羟氯喹及其类似物及其制备方法、其药用组合物以及用途。


背景技术：

2.氯喹和羟氯喹是近50年来备受关注的一种抗疟药物。目前，羟氯喹的硫酸盐形式，即硫酸羟氯喹是目前临床治疗风湿性疾病，尤其是系统性红斑狼疮和类风湿关节炎最常用的药物之一。在相关的机制研究实验中表明，羟氯喹具有抗炎和免疫调节的活性。氯喹半衰期超长，连续服用容易出现蓄积毒性，当血浆浓度(谷浓度)大于0.8μg/ml时大部分患者出现毒性。每日≥20mg/kg即可引起心脏毒性甚至死亡。羟基氯喹作为类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等慢性疾病的常用药，长期或高剂量服用容易出现不可逆视网膜损伤。


技术实现要素：

3.为克服上述现有技术的缺陷和不足，本发明人进行了深入研究，意外地发现，(s)-氯喹和羟氯喹及(r)-氯喹和羟氯喹以及其类似物的(s)-构型化合物或(r)-构型化合物在药理活性、毒性等方面均优于外消旋体化合物。鉴于此，本发明通过以下技术方案解决上述技术问题。
4.本发明提供了一种如式ii或式iii所示化合物的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：
5.(a)式i所示化合物在溶剂中与手性拆分试剂反应生成盐，过滤，得到化合物(ii)的盐或化合物(iii)的盐；
6.(b)在溶剂中，对步骤(a)中获得的化合物(ii)的盐或化合物(iii)的盐进行重结晶；
7.(c)经步骤(b)重结晶的化合物(ii)的盐或化合物(iii)的盐在溶剂中与碱反应得到化合物(ii)或化合物(iii)；
[0008][0009]
式i，式ii和式iii中，
[0010]
r1为卤素、氨基、氰基、c
1-4
卤代烷基、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、c
3-6
环烷基、或c
1-4
卤代烷氧基；
[0011]
r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基；
[0012]
r3为氢、或、未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基；
[0013]
r
2-1
和r
3-1
独立地选自羟基、卤素、氨基或氰基；
[0014]
r4为氢、未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基或c
3-10
环烷基；
[0015]
r
4-1
为羟基、卤素、氨基或氰基。
[0016]
优选地，所述的制备方法中，步骤(a)中的溶剂选自以下任一混合溶剂：甲醇/乙酸乙酯、乙醇/乙酸乙酯、正丙醇/乙酸乙酯、异丙醇/乙酸乙酯、正丁醇/乙酸乙酯、叔丁醇/乙酸乙酯、四氢呋喃/乙酸乙酯、丙酮/乙酸乙酯、乙腈/乙酸乙酯、甲醇/乙醚、乙醇/乙醚、正丙醇/乙醚、正丁醇/乙醚、或丙酮/乙醚。
[0017]
优选地，所述的制备方法中，步骤(a)中的手性拆分试剂选自以下任意一种：l-苹果酸、d-苹果酸、d-酒石酸、l-酒石酸、d-扁桃酸、l-扁桃酸、(r)-1,1'-联萘酚磷酸酯、(s)-1,1'-联萘酚磷酸酯、d-樟脑-10-磺酸、l-樟脑-10-磺酸、d-(+)-樟脑酸、l-(-)-樟脑酸、(+)-二乙酰基-l-酒石酸酐、(-)-二乙酰基-l-酒石酸酐、(-)-二对甲苯酰-l-酒石酸、(+)-二对甲苯酰-d-酒石酸、(+)-二苯甲酰基-d-酒石酸、(-)-二苯甲酰基-l-酒石酸、l-谷氨酸、l-甘氨酸、d-天冬氨酸、l-天冬氨酸、d-焦谷氨酸、l-焦谷氨酸、或d-(-)-奎宁酸。
[0018]
优选地，所述的制备方法中，步骤(a)中的手性拆分试剂与式i所示化合物的比例为3:1～5:1。
[0019]
优选地，所述的制备方法中，步骤(b)中的溶剂选自以下任一混合溶剂：甲醇/乙酸乙酯、乙醇/乙酸乙酯、正丙醇/乙酸乙酯、异丙醇/乙酸乙酯、正丁醇/乙酸乙酯、叔丁醇/乙酸乙酯、四氢呋喃/乙酸乙酯、丙酮/乙酸乙酯、乙腈/乙酸乙酯、甲醇/乙醚、乙醇/乙醚、正丙醇/乙醚、正丁醇/乙醚、或丙酮/乙醚。优选地，所述重结晶可以是进行一次、两次或三次以上。
[0020]
优选地，所述的制备方法中，步骤(c)中的碱为选自甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾、丙醇钠、丙醇钾、异丙醇钠、异丙醇钾、正丁醇钾、正丁醇钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钠、三乙胺、或n,n-二异丙基乙胺中的一种或两种以上的组合。
[0021]
优选地，所述的制备方法中，步骤(c)的溶剂为选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、乙腈、1,4-二氧六环或四氢呋喃中的一种或两种以上的混合溶剂；
[0022]
或采用以下制备方法，
[0023]
将式3r所示化合物与式1h所示化合物反应得到如式ii所示化合物；或将式3s所示化合物与式1h所示化合物反应得到如式iii所示化合物；
[0024][0025]
其中，式3r，式3s和式1h中，
[0026]
r1为卤素、氨基、氰基、c
1-4
卤代烷基、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、c
3-6
环烷基、或c
1-4
卤代烷氧基；
[0027]
r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基；
[0028]
r3为氢、或、未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基；
[0029]
r
2-1
和r
3-1
独立地选自羟基、卤素、氨基或氰基；
[0030]
r4为氢、未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基或c
3-10
环烷基；
[0031]
r
4-1
为羟基、卤素、氨基或氰基；
[0032]
r5为卤素。
[0033]
优选地，当r1为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘；
[0034]
优选地，当r1为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘；
[0035]
优选地，当r1为c
1-4
卤代烷基时，所述的c
1-4
卤代烷基为-cf3；
[0036]
优选地，当r1为c
1-4
烷基时，所述的c
1-4
烷基为甲基、乙基、丙基或异丙基；
[0037]
优选地，当r1为c
1-4
烷氧基时，所述的c
1-4
烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基；
[0038]
优选地，当r1为c
3-6
环烷基时，所述的c
3-6
环烷基为环丙基；
[0039]
优选地，当r1为c
1-4
卤代烷氧基时，所述的c
1-4
卤代烷氧基为-ocf3；
[0040]
优选地，当r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
2-1
的个数为一个或多个，当存在多个r
2-1
时，所述的r
2-1
可相同或不同；
[0041]
优选地，当r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的c
1-6
烷基为c
1-4
烷基；
[0042]
优选地，当r3为未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
3-1
的个数为一个或多个，当存在多个r
3-1
时，所述的r
3-1
可相同或不同；
[0043]
优选地，当r3为未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的c
1-6
烷基为c
1-4
烷基；
[0044]
优选地，当r4为未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
4-1
的个数为一个或多个，当存在多个r
4-1
时，所述的r
4-1
可相同或不同；
[0045]
优选地，当r4为未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的c
1-6
烷基为c
1-4
烷基；
[0046]
优选地，当r4为c
3-10
环烷基时，所述的c
3-10
环烷基为c
3-6
环烷基；
[0047]
优选地，r5为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘；优选为氯。
[0048]
进一步优选地，当r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
2-1
的个数为1个、2
个或3个；
[0049]
优选地，当r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的c
1-6
烷基为甲基、乙基、丙基、丁基或异丙基，优选乙基；
[0050]
优选地，当r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
2-1
取代的c
1-6
烷基为优选为
[0051]
优选地，当r3为未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
3-1
的个数为1个、2个或3个；
[0052]
优选地，当r3为未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的c
1-6
烷基为甲基、乙基、丙基、丁基或异丙基，优选乙基；
[0053]
优选地，当r3为未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
3-1
取代的c
1-6
烷基为优选为
[0054]
优选地，当r4为未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
4-1
的个数为1个、2个或3个；
[0055]
优选地，当r4为未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的c
1-6
烷基为甲基、乙基、丙基、丁基或异丙基，优选乙基；
[0056]
优选地，当r4为未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
4-1
取代的c
1-6
烷基为
[0057]
优选地，当r4为c
3-10
环烷基时，所述的c
3-10
环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
[0058]
优选地，所述如式ii或式iii所示化合物选自以下化合物：
[0059]
或者
[0060]
另一方面，本发明还提供一种如上所述的式ii或式iii所示化合物的手性拆分方法，其中所述式ii或式iii所示化合物不为(r)-氯喹、(s)-氯喹、(r)-羟氯喹和(s)-羟氯喹。
[0061]
本发明还提供一种如上所述的式ii或式iii所示化合物、或其药学上可接受的盐。
[0062]
本发明还提供一种如上所述式3r或式3s所示化合物。
[0063]
本发明还供一种制备如上所述式3r或3s所示化合物的方法，包括以下步骤：
[0064]
(a’)溶剂中，在路易斯酸和还原剂的作用下，如式1所示化合物与第一手性辅基进行还原胺化反应，生成如式2r所示化合物，或者，与第二手性辅基进行还原胺化反应，生成如式2s所示化合物；
[0065]
(b’)溶剂中，在酸性条件、或、金属催化剂和氢气的作用下，如式2r所示化合物进行如下所示的反应，生成如式3r所示化合物，或者，如式2s所示化合物进行如下所示的反应，生成如式3s所示化合物；
[0066][0067]
其中，
[0068]
r2，r3，r4的定义如上所述；
[0069]
所述的第一手性辅基为r
6-nh2；
[0070]
所述的第二手性辅基为r
7-nh2；
[0071]
r6选自
[0072]
r7选自
[0073]
r8为甲氧基，n为1、2或3；
[0074]
优选地，步骤(a’)中，所述溶剂为卤代烃类溶剂、腈类溶剂、醚类溶剂、醇类溶剂和芳烃类溶剂中的一种或多种；
[0075]
优选地，步骤(a’)中，所述路易斯酸为ti(or9)4、b(or9)3、al(or9)3、zr(or9)4、或、yb(or9)3，其中r9为c
2-c4烷基；
[0076]
优选地，步骤(a’)中，所述还原剂为硼烷类还原剂或含铝还原剂；
[0077]
优选地，步骤(a’)中，所述反应温度为10-40℃；
[0078]
优选地，步骤(a’)中，所述路易斯酸与化合物1的摩尔比为1.0～6.0:1.0；
[0079]
优选地，步骤(a’)中，所述还原剂与化合物1的摩尔比为1.0～6.0:1.0；
[0080]
优选地，步骤(a’)中，所述第一手性辅基或第二手性辅基与化合物1的摩尔比为1.0～3.0:1.0；
[0081]
优选地，步骤(b’)中，所述溶剂为醇类溶剂、醚类溶剂或酯类溶剂；
[0082]
优选地，步骤(b’)中，所述酸性条件为乙酸乙酯的氯化氢溶液、1,4-二氧六环的氯化氢溶液或甲醇的氯化氢溶液；
[0083]
优选地，步骤(b’)中，所述金属催化剂为pd/c、pd(oh)2、pto2、ru/c、或、rh/c；
[0084]
优选地，步骤(b’)中，当在酸性条件下反应时，所述的反应温度为10～40℃；
[0085]
优选地，步骤(b’)中，当在金属催化剂和氢气作用下反应时，所述的反应温度为40～60℃；
[0086]
优选地，步骤(b’)中，所述酸与化合物2r或化合物2s的摩尔比为1.0～6.0:1.0；
[0087]
优选地，步骤(b’)中，所述的金属催化剂与化合物2r或化合物2s的质量比为0.1～0.3:1.0；
[0088]
优选地，步骤(a’)中，当所述溶剂包含卤代烃类溶剂时，所述的卤代烃类溶剂为二氯甲烷、氯仿、四氯化碳或二氯乙烷；
[0089]
优选地，步骤(a’)中，当所述溶剂包含腈类溶剂时，所述的腈类溶剂为乙腈；
[0090]
优选地，步骤(a’)中，当所述溶剂包含醚类溶剂时，所述的醚类溶剂为四氢呋喃、乙醚或1,4-二氧六环；
[0091]
优选地，步骤(a’)中，当所述溶剂包含醇类溶剂时，所述的醇类溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或2-丁醇；
[0092]
优选地，步骤(a’)中，当所述溶剂包含芳烃类溶剂时，所述的芳烃类溶剂为甲苯；
[0093]
优选地，步骤(a’)中，所述路易斯酸为ti(or9)4、b(or9)4、al(or9)4、zr(or9)4、或、yb(or9)4，其中，r9为乙基或异丙基；所述路易斯酸优选为钛酸四乙酯、钛酸四异丙酯、硼酸三乙酯、或、三乙氧基铝；
[0094]
优选地，步骤(a’)中，当所述还原剂为硼烷类还原剂时，所述的硼烷类还原剂为nabh4、libh4、kbh4、me4nbh4、三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三仲丁基硼氢化锂、硼烷、硼烷三甲胺络合物或四丁基氰基硼烷化铵；所述硼烷类还原剂优选为nabh4、libh4、kbh4、三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠、或、三仲丁基硼氢化锂；
[0095]
优选地，步骤(a’)中，当所述还原剂为含铝还原剂时，所述的含铝还原剂为lialh4、红铝或dibalh；所述含铝还原剂优选为lialh4或dibalh；
[0096]
优选地，步骤(b’)中，当所述溶剂为醇类溶剂时，所述的醇类溶剂为甲醇、乙醇或异丙醇；
[0097]
优选地，步骤(b’)中，当所述溶剂为醚类溶剂时，所述的醚类溶剂为四氢呋喃或1,4-二氧六环；
[0098]
优选地，步骤(b’)中，当所述溶剂为酯类溶剂时，所述的酯类溶剂为乙酸乙酯；
[0099]
优选地，步骤(a’)具体为，溶剂中，在路易斯酸的作用下，式1所示化合物与第一手性辅基在室温下反应得反应液；然后，将还原剂与所述的反应液混合，在室温下反应到式2r所示化合物，或者，式1所示化合物与第二手性辅基在室温下反应得到反应液；然后，将还原剂与所述的反应液混合，在室温下反应得到式2s所示化合物；所述路易斯酸的加入方式优选为滴加；所述路易斯酸优选在-20～0℃下加入；所述还原剂与所述的反应液优选在-78～-40℃下混合；
[0100]
优选地，步骤(b’)具体为，溶剂中，在酸性条件下，式2s所示化合物在10～40℃下反应得到式3s所示化合物，或式2r所示化合物在10～40℃下反应得到式3r所示化合物；或者，溶剂中，在金属催化剂和氢气的作用下，式2s所示化合物在40～60℃下反应得到式3s所示化合物，或式2r所示化合物在40～60℃下反应得到式3r所示化合物；所述酸的加入方式优选为滴加；所述的酸优选在-20～0℃下加入。
[0101]
本发明还提供一种式ii或式iii所示化合物、或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗病毒感染或免疫性疾病的药物中的用途。
[0102]
进一步，所述的病毒为中东综合征相关冠状病毒(mers-cov)、严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(sars-cov)、甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠状病毒肺炎(covid-19)、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、艾滋病病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、甲型流感a h5n1病毒、基孔肯雅病、登革热病毒、寨卡病毒、拉沙病毒、刚果出血热病毒、埃博拉病毒、乙型肝炎病毒或单纯性孢疹病毒；优选为甲型流感病毒或新型冠状病毒肺炎(covid-19)；优选地，所述的免疫性疾病为盘状红斑狼疮、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎或青少年慢性关节炎，优选为系统性红斑狼疮或类风湿关节炎。
[0103]
本发明还提供一种药物组合物，其包括如式ii所示化合物、其药学上可接受的盐，和药用辅料。
[0104]
进一步地，在所述的药物组合物中，如式ii所示的化合物、或其药学上可接受的盐的用量为治疗有效量。
[0105]
本发明还提供了一种上述药物组合物在制备预防或治疗病毒感染或免疫性疾病的药物中的用途。
[0106]
进一步地，所述的病毒为中东综合征相关冠状病毒(mers-cov)、严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(sars-cov)、甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠状病毒肺炎(covid-19)、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、艾滋病病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、甲型流感a h5n1病毒、基孔肯雅病、登革热病毒、寨卡病毒、拉沙病毒、刚果出血热病毒、埃博拉病毒、乙型肝炎病毒或单纯性孢疹病毒；优选为甲型流感病毒或新型冠状病毒肺炎(covid-19)；优选地，所述的免疫性疾病为盘状红斑狼疮、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎或青少年慢性关
节炎，优选为系统性红斑狼疮或类风湿关节炎。
[0107]
本发明还提供一种药物组合物，其包括如式iii所示的化合物或其药学上可接受的盐，和药用辅料。
[0108]
进一步地，所述的药物组合物中，式iii所示的化合物或其药学上可接受的盐的用量为治疗有效量。
[0109]
本发明还提供了一种上述药物组合物在制备预防或治疗病毒感染或免疫性疾病的药物中的用途。
[0110]
进一步地，所述的病毒为中东综合征相关冠状病毒(mers-cov)、严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(sars-cov)、甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠状病毒肺炎(covid-19)、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、艾滋病病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、甲型流感a h5n1病毒、基孔肯雅病、登革热病毒、寨卡病毒、拉沙病毒、刚果出血热病毒、埃博拉病毒、乙型肝炎病毒或单纯性孢疹病毒；优选为甲型流感病毒或新型冠状病毒肺炎(covid-19)；优选地，所述的免疫性疾病为盘状红斑狼疮、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎或青少年慢性关节炎，优选为系统性红斑狼疮或类风湿关节炎。
[0111]
所述的药用辅料可为药物生产领域中广泛采用的那些辅料。辅料主要用于提供一个安全、稳定和功能性的药物组合物，还可以提供方法，使受试者接受给药后活性成分以所期望速率溶出，或促进受试者接受组合物给药后活性成分得到有效吸收。所述的药用辅料可以是惰性填充剂，或者提供某种功能，例如稳定该组合物的整体ph值或防止组合物活性成分的降解。所述的药用辅料可以包括下列辅料中的一种或多种：粘合剂、助悬剂、乳化剂、稀释剂、填充剂、成粒剂、胶粘剂、崩解剂、润滑剂、抗粘着剂、助流剂、润湿剂、胶凝剂、吸收延迟剂、溶解抑制剂、增强剂、吸附剂、缓冲剂、螯合剂、防腐剂、着色剂、矫味剂和甜味剂等。
[0112]
本发明的药物组合物可根据公开的内容使用本领域技术人员已知的任何方法来制备。例如，常规混合、溶解、造粒、乳化、磨细、包封、包埋或冻干工艺。
[0113]
本发明所述的药物组合物可以任何形式给药，包括注射(静脉内)、粘膜、口服(固体和液体制剂)、吸入、眼部、直肠、局部或胃肠外(输注、注射、植入、皮下、静脉内、动脉内、肌内)给药。本发明的药物组合物还可以是控释或延迟释放剂型(例如脂质体或微球)。固体口服制剂的实例包括但不限于粉末、胶囊、囊片、软胶囊剂和片剂。口服或粘膜给药的液体制剂实例包括但不限于悬浮液、乳液、酏剂和溶液。局部用制剂的实例包括但不限于乳剂、凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、贴剂、糊剂、泡沫剂、洗剂、滴剂或血清制剂。胃肠外给药的制剂实例包括但不限于注射用溶液、可以溶解或悬浮在药学上可接受载体中的干制剂、注射用悬浮液和注射用乳剂。所述的药物组合物的其它合适制剂的实例包括但不限于滴眼液和其他眼科制剂；气雾剂：如鼻腔喷雾剂或吸入剂；适于胃肠外给药的液体剂型；栓剂以及锭剂。
[0114]
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的游离体形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的游离体形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸(形成碳酸盐
或碳酸氢盐)、磷酸((形成磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐)、硫酸(形成硫酸盐或硫酸氢盐)、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；有机酸盐还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。优选地，以常规方式使盐与碱或酸接触，再分离母体化合物，由此再生化合物的游离体形式。化合物的游离体形式与其各种盐的形式的不同之处在于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解度不同。
[0115]
本发明的“药学上可接受的盐”可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。
[0116]
本发明的有益效果为：
[0117]
(1)光学活性的氯喹/羟氯喹及其类似物的制备方法操作简便，收率高、产物光学纯度较高，能够实现工业化生产，具有广阔的应用前景。
[0118]
(2)单一构型的氯喹/羟氯喹及其类似物，特别是(r)-羟氯喹和(r)-氯喹比外消旋体对病毒感染和自身免疫性疾病具有更好的活性和更小的毒副作用。
附图说明
[0119]
图1为实施例65中(r)-羟氯喹、(s)-羟氯喹、羟氯喹组小鼠生存曲线图；
[0120]
图2为实施例65中(r)-氯喹、(s)-氯喹和氯喹组小鼠生存曲线图；
[0121]
图3为实施例65中(r)-羟氯喹、(s)-羟氯喹和羟氯喹组给药期间的体重变化曲线图；
[0122]
图4为实施例65中(r)-氯喹、(s)-氯喹和氯喹组给药期间的体重变化曲线图；
[0123]
图5为实施例66中(r)-羟氯喹、(s)-羟氯喹和羟氯喹组小鼠给药前后的尿蛋白含量变化图；
[0124]
图6为实施例66中(r)-氯喹、(s)-氯喹和氯喹组小鼠给药前后的尿蛋白含量变化图；
[0125]
图7为实施例66中(r)-羟氯喹、(s)-羟氯喹和羟氯喹组小鼠给药前后的抗ds-dna抗体水平变化图；
[0126]
图8为实施例66中(r)-氯喹、(s)-氯喹和氯喹组小鼠给药前后的抗ds-dna抗体水平变化图；
[0127]
图9为实施例66中(r)-羟氯喹、(s)-羟氯喹、羟氯喹、(r)-氯喹、(s)-氯喹和氯喹组小鼠肾组织病理学变化图；
[0128]
图10为实施例66中(r)-羟氯喹、(s)-羟氯喹、羟氯喹组、(r)-氯喹、(s)-氯喹和氯喹组小鼠生b细胞比例图；
[0129]
图11为实施例66中(r)-羟氯喹、(s)-羟氯喹、羟氯喹组、(r)-氯喹、(s)-氯喹和氯喹组小鼠生发中心b细胞比例图；
[0130]
图12为实施例66中(r)-羟氯喹、(s)-羟氯喹、羟氯喹、(r)-氯喹、(s)-氯喹和氯喹
组小鼠调节性t细胞比例图。
具体实施方式
[0131]
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0132]
实施例1：制备(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐
[0133]
将外消旋体羟氯喹(5g，14.88mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将l-苹果酸(6g，44.64mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将l-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(s)-羟氯喹的l-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐析出，抽滤得到(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐粗品(5.2g)。
[0134]
实施例2：(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐重结晶纯化
[0135]
称取(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐粗品(5.2g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.8％ee.的(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐(4.3g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为98.8％ee.的(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐(3.8g)。
[0136]
实施例3：(r)-羟氯喹的制备
[0137][0138]
将甲醇钠(1g,20.24mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐(3.8g，5.06mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-羟基氯喹(1.6g)，纯度>99％，手性纯度>99.92％，收率64％。
[0139]
实施例4：制备(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐
[0140]
将外消旋体羟氯喹(5g，14.88mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将d-苹果酸(6g，44.64mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将d-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(r)-羟氯喹的d-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐析出，抽滤得到(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐粗品(4.8g)。
[0141]
实施例5：(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐重结晶纯化
[0142]
称取(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐粗品(4.8g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为88.3％ee.的(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐(4.3g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为
97.4％ee.的(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐(3.6g)。
[0143]
实施例6：(s)-羟氯喹的制备
[0144][0145]
将甲醇钠(1g,19.17mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐(3.6g，4.79mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(s)-羟基氯喹(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.92％，收率56％。
[0146]
实施例7：制备(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐
[0147]
将外消旋体羟氯喹(5g，14.88mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3，40ml)中，将l-扁桃酸(7.9g，42.08mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3，20ml)，0℃，将l-扁桃酸的甲醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(s)-羟氯喹的l-扁桃酸盐溶解在甲醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐析出，抽滤得到(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐粗品(5.2g)。
[0148]
实施例8：(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐重结晶纯化
[0149]
称取(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐粗品(5.2g)悬浮于12ml甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为88.3％ee.的(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐(4.5g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-羟氯喹的l-扁桃酸进行一次重结晶得到光学纯度为97.2％ee.的(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐(3.8g)。
[0150]
实施例9：(r)-羟氯喹的制备
[0151]
(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐(3.8g，4.72mmol)溶于30ml甲醇中，置于室温下，将碳酸钾(2.7g,19.83mol)分批加入到上述溶液中，室温下搅拌约30min后，抽滤，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯溶解，加入水5min，然后乙酸乙酯萃取(20ml
×
2)，合并有机相，水洗(10ml
×
2)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，真空干燥，得到(r)-羟基氯喹(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.93％，收率56％。
[0152]
实施例10：制备(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐
[0153]
将外消旋体羟氯喹(5g，14.88mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3，40ml)中，将d-扁桃酸(7.9g，42.08mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3，20ml)，0℃，将d-扁桃酸的甲醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(r)-羟氯喹的d-扁桃酸盐溶解在甲醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐析出，抽滤得到(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐粗品(5.4g)。
[0154]
实施例11：(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐重结晶纯化
[0155]
称取(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐粗品(5.4g)悬浮于12ml甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.2％ee.的(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐(4.7g)。然后，按照上
述重结晶的方法，将上述得到的(s)-羟氯喹的d-扁桃酸进行一次重结晶得到光学纯度为98.3％ee.的(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐(4.0g)。
[0156]
实施例12：(s)-羟氯喹的制备
[0157]
(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐(4.0g，4.96mmol)溶于30ml甲醇中，置于室温下，将碳酸钾(3g,22.32mol)分批加入到上述溶液中，室温下搅拌约30min后，抽滤，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯溶解，加入水5min，然后乙酸乙酯萃取(20ml
×
2)，合并有机相，水洗(10ml
×
2)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，真空干燥，得到(s)-羟基氯喹(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.95％，收率56％。
[0158]
实施例13：制备(r)-氯喹的l-苹果酸盐
[0159]
将外消旋体氯喹(5g，15.67mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将l-苹果酸(6.7g，50.16mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将l-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(s)-氯喹的l-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-氯喹的l-苹果酸盐析出，抽滤得到(r)-氯喹的l-苹果酸盐粗品(5.0g)。
[0160]
实施例14：(r)-氯喹的l-苹果酸盐重结晶纯化
[0161]
称取(r)-氯喹的l-苹果酸盐粗品(5.0g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.8％ee.的(r)-氯喹的l-苹果酸盐(4.4g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-氯喹的l-苹果酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为98.8％ee.的(r)-氯喹的l-苹果酸盐(3.9g)。
[0162]
实施例15：(r)-氯喹的制备
[0163][0164]
将乙醇钠(1.5g,21.64mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(r)-氯喹的l-苹果酸盐(3.9g，5.41mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-氯喹(1.7g)，纯度>99％，手性纯度>99.92％，收率68％。
[0165]
实施例16：制备(s)-氯喹的d-苹果酸盐
[0166]
将外消旋体氯喹(5g，15.67mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将d-苹果酸(6.7g，50.16mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将d-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(r)-氯喹的d-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-氯喹的d-苹果酸盐析出，抽滤得到(s)-氯喹的d-苹果酸盐粗品(4.8g)。
[0167]
实施例17：(s)-氯喹的d-苹果酸盐重结晶纯化
[0168]
称取(s)-氯喹的d-苹果酸盐粗品(4.8g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌
30min，抽滤，得到光学纯度为88.3％ee.的(s)-氯喹的d-苹果酸盐(4.3g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-氯喹的d-苹果酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为97.4％ee.的(s)-氯喹的d-苹果酸盐(3.6g)。
[0169]
实施例18：(s)-氯喹的制备
[0170][0171]
将乙醇钠(1.36g,20.0mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(s)-氯喹的d-苹果酸盐(3.6g，5.0mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(s)-羟氯喹(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.92％，收率56％。
[0172]
实施例19：制备(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐
[0173]
将外消旋体n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(5g，16.39mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将l-苹果酸(7.7g，57.37mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将l-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐析出，抽滤得到(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐粗品(5.0g)。
[0174]
实施例20：(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐重结晶纯化
[0175]
称取(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐粗品(5.0g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.6％ee.的(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐(4.4g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为97.9％ee.的(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐(3.9g)。
[0176]
实施例21：(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的制备
[0177][0178]
将甲醇钠(1.3g,23.23mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果
酸盐(3.9g，5.53mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(1.3g)，纯度>99％，手性纯度>99.95％，收率52％。
[0179]
实施例22：制备(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐
[0180]
将外消旋体n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(5g，16.39mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将d-苹果酸(7.7g，57.37mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将d-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐析出，抽滤得到(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐粗品(4.7g)。
[0181]
实施例23：(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐重结晶纯化
[0182]
称取(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐粗品(4.7g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:4)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为88.3％ee.的(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐(4.3g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为97.4％ee.的(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐(3.6g)。
[0183]
实施例24：(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的制备
[0184][0185]
将乙醇钠(1.36g,20.0mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐(3.6g，5.0mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(1.6g)，纯度>99％，手性纯度>99.90％，收率64％。
[0186]
实施例25：制备(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐
[0187]
将外消旋体n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(5g，14.16mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:4，25ml)中，将l-樟脑酸酸(11.6g，58.07mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:4，12ml)，0℃，将l-樟脑酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸酸的盐溶解在乙醇/
乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐析出，抽滤得到(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐粗品(5.8g)。
[0188]
实施例26：(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐重结晶纯化
[0189]
称取(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐粗品(5.8g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:4)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.6％ee.的(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐(5.0g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为97.9％ee.的(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐盐(4.7g)。
[0190]
实施例27：(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的制备
[0191][0192]
将甲醇钠(1.1g,20.71mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐(4.7g，4.93mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(1.3g)，纯度>99％，手性纯度>99.95％，收率52％。
[0193]
实施例28：制备(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐
[0194]
将外消旋体n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(5g，14.16mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:4，25ml)中，将d-樟脑酸(11.6g，58.07mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:4，12ml)，0℃，将d-樟脑酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐析出，抽滤得到(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐粗品(4.7g)。
[0195]
实施例29：(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐重结晶纯化
[0196]
称取(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐粗品(4.7g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为88.3％ee.的(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐(4.5g)。然
后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为97.4％ee.的(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐(3.7g)。
[0197]
实施例30：(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的制备
[0198][0199]
将乙醇钠(1.1g,15.53mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐(3.7g，3.88mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(1.6g)，纯度>99％，手性纯度>99.93％，收率64％。
[0200]
实施例31：制备(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的l-酒石酸盐
[0201]
将外消旋体2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇(5g，13.55mol)溶于乙腈/乙酸乙酯(v/v＝1:4，25ml)中，将l-酒石酸(7.1g，47.42mol)溶于乙腈/乙酸乙酯(v/v＝1:4，12ml)，0℃，将l-酒石酸的乙腈/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙腈/乙酸乙酯溶液中。升温至10℃时，反应1h，待反应完全，大部分(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的l-酒石酸的盐溶解在乙腈/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的l-酒石酸盐析出，抽滤得到(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的l-酒石酸盐粗品(5.2g)。
[0202]
实施例32：(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的l-酒石酸盐重结晶纯化
[0203]
称取(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的l-酒石酸盐粗品(5.2g)悬浮于10ml乙腈/乙酸乙酯(v/v＝1:4)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为88.8％ee.的(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的l-酒石酸盐(4.8g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的l-酒石酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为98.2％ee.的(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的l-酒石酸盐(4.2g)。
[0204]
实施例33：(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的制备
[0205][0206]
将甲醇钠(1.1g,20.52mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的l-酒石酸盐(4.2g，5.13mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇(1.3g)，纯度>99％，手性纯度>99.92％，收率52％。
[0207]
实施例34：制备(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐
[0208]
将外消旋体2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇(5g，13.55mol)溶于乙腈/乙酸乙酯(v/v＝1:4，25ml)中，将d-酒石酸(7.1g，47.42mol)溶于乙腈/乙酸乙酯(v/v＝1:4，12ml)，0℃，将d-酒石酸的乙腈/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙腈/乙酸乙酯溶液中。升温至10℃时，反应1h，待反应完全，大部分(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸的盐溶解在乙腈/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐析出，抽滤得到(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐粗品(4.9g)。
[0209]
实施例35：(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐重结晶纯化
[0210]
称取(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐粗品(4.9g)悬浮于10ml乙腈/乙酸乙酯(v/v＝1:4)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为89.9％ee.的(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐(4.8g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为98.6％ee.的(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐(4.3g)。
[0211]
实施例36：(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的制备
[0212][0213]
将甲醇钠(1.2g,21.53mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min
后，体系变澄清，缓慢加入(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐(4.3g，5.25mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.94％，收率56％。
[0214]
实施例37：制备(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺l-酒石酸盐
[0215]
将外消旋体n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺(5g，15.02mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3，30ml)中，将l-酒石酸(7.9g，52.55mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3，15ml)，0℃，将l-酒石酸的甲醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的甲醇/乙酸乙酯溶液中。升温至10℃时，反应1h，待反应完全，大部分(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸的盐溶解在乙腈/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐析出，抽滤得到(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐粗品(5.0g)。
[0216]
实施例38：(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐重结晶纯化
[0217]
称取(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐粗品(5.0g)悬浮于12ml乙腈/乙酸乙酯(v/v＝1:3)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.9％ee.的(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐(4.5g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为98.2％ee.的n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐(4.2g)。
[0218]
实施例39：(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的制备
[0219][0220]
将甲醇钠(1.2g,21.99mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐(4.2g，5.36mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.90％，收率56％。
[0221]
实施例40：制备(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺d-酒石酸盐
[0222]
将外消旋体n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺(5g，
4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇进行一次重结晶得到光学纯度为98.0％ee.的(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐(3.7g)。
[0239]
实施例48：(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的制备
[0240][0241]
将甲醇钠(1.1g,19.70mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐(3.7g，4.93mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(1.1g)，纯度>99％，手性纯度>99.93％，收率44％。
[0242]
实施例49：制备(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐
[0243]
将外消旋体2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(5g，13.33mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将l-苹果酸(7.1g，5.33mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将l-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐析出，抽滤得到(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐粗品(5.0g)。
[0244]
实施例50：(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐重结晶纯化
[0245]
称取(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐粗品(5.0g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.3％ee.的(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐(4.6g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的盐进行一次重结晶得到光学纯度为98.9％ee.的(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐(4.0g)。
[0246]
实施例51：(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的制备
[0247][0248]
将甲醇钠(1.1g,20.59mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐(4.0g，5.15mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(1.3g)，纯度>99％，手性纯度>99.90％，收率52％。
[0249]
实施例52：制备(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐
[0250]
将外消旋体2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(5g，13.33mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将d-苹果酸(7.1g，5.33mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将d-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐析出，抽滤得到(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐粗品(5.2g)。
[0251]
实施例53：(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐重结晶纯化
[0252]
称取(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐粗品(5.2g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.3％ee.的(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的盐(4.7g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的盐进行一次重结晶，得到光学纯度为98.9％ee.的(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐(4.2g)。
[0253]
实施例54：(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的制备
[0254][0255]
将甲醇钠(1.2g,21.62mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min
后，体系变澄清，缓慢加入(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d苹果酸盐(4.2g，5.40mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.91％，收率56％。
[0256]
采用合成的方法制备(r)-氯喹和(s)-氯喹，见以下实施例55-62，其中，如没有特别强调温度，可在例如10～40℃下反应；通常在常温下进行反应。
[0257]
实施例55：
[0258]
(1)化合物2s-1的合成
[0259][0260]
0℃下，将化合物1(2g，12.7mmol)和手性辅基(r)-叔丁基亚磺酰胺(2.3g，19.1mmol)溶于无水四氢呋喃(30ml)中，将钛酸四乙酯(12ml，57.3mmol)缓慢滴加至上述溶液中，待滴加完毕，将反应升至室温，搅拌30min，然后加热回流8h。将反应冷却至室温，-78℃下，将上述反应液缓慢滴加至nabh4(2.2g，57.3mmol)的四氢呋喃(20ml)混悬液中，保持-78℃搅拌3h，将反应液缓慢升温至室温，在室温下搅拌6h，直至反应完全后停止反应。将反应移至0℃下，滴加甲醇淬灭反应，直至没有气泡产生，然后将反应液倒入冰盐水中，硅藻土过滤，二氯甲烷洗涤滤饼，收集滤液，减压浓缩，dcm(30ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤(50ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到化合物2s-1(2.6g，78％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ3.37(h,j＝6.4hz,1h,-ch-nh),2.96(d,j＝6.9hz,1h,-nh-),2.55(q,j＝7.2hz,4h,n(-ch
2-ch3)2),2.46
–
2.39(m,2h,-ch
2-n),1.60
–
1.37(m,4h,-ch
2-ch
2-ch),1.27(d,j＝6.5hz,4h,ch
3-ch),1.20(s,9h,(ch3)3c),1.03(t,j＝7.2hz,6h,ch
3-ch2).
[0261]
(2)化合物3s-1的合成
[0262][0263]
0℃下，将2s-1(3.0g，11.5mmol)溶于乙酸乙酯(10ml)中，将氯化氢的乙酸乙酯溶液(9ml，36mmol，4m)缓慢滴加至上述溶液中，然后将反应转移至室温，搅拌反应3h，直至原料反应完全后，停止反应，过滤，得到白色滤饼3s-1(2.1g，95％)。将白色固体混悬于甲醇中，加入k2co3(1.5g，10.8mmol)，室温下搅拌30min，抽滤，滤液减压浓缩，直接投入下一步反应。
[0264]
(3)(s)-氯喹的合成
[0265][0266]
称取化合物3s-1(1.6g，10.3mmol)、4,7-二氯喹啉(2.0g，10.3mmol)和苯酚(4.8g，52mmol)至100ml烧瓶中，然后升高反应温度至135℃，过夜反应，待原料反应完全后，冷却至室温，加入氢氧化钠溶液调ph至12，二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到(s)-氯喹(2.3g，70％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.50(d,j＝5.5hz,1h,2-h),7.94(d,j＝2.2hz,1h,5-h),7.73(d,j＝9.0hz,1h,8-h),7.35(dd,j＝8.9,2.2hz,1h,6-h),6.41(d,j＝5.5hz,1h,3-h),5.35(d,j＝5.8hz,1h,-nh-),3.78
–
3.66(m,1h,-ch-nh-),2.57(q,j＝7.2hz,4h,n(-ch
2-ch3)2),2.49(t,j＝6.6hz,2h,-ch
2-n),1.80
–
1.62(m,4h,-ch
2-ch
2-ch),1.32(d,j＝6.3hz,3h,ch
3-ch),1.04(t,j＝7.2hz,6h,ch
3-ch2).纯度>99％，手性纯度>99.95％.
[0267]
实施例56：
[0268]
(1)化合物2r-1的合成
[0269][0270]
0℃下，将化合物1(2g，12.7mmol)和手性辅基(s)-叔丁基亚磺酰胺(4.6g，38.1mmol)溶于无水四氢呋喃(30ml)中，将钛酸四异丙酯(11.3ml，38.1mmol)缓慢滴加至上述溶液中，待滴加完毕，将反应升至室温，搅拌30min，然后加热回流8h。将反应冷却至室温，-78℃下，将上述反应液缓慢滴加至kbh4(2.1g，38.1mmol)的四氢呋喃(20ml)混悬液中，保持-78℃搅拌3h，将反应液缓慢升温至室温，在室温下搅拌6h，直至反应完全后停止反应。将反应移至0℃下，滴加甲醇淬灭反应，直至没有气泡产生，然后将反应液倒入冰盐水中，硅藻土过滤，二氯甲烷洗涤滤饼，收集滤液，减压浓缩，dcm(30ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤(50ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到化合物2r-1(2.5g，78％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ3.37(h,j＝6.4hz,1h,-ch-nh),2.96(d,j＝6.9hz,1h,-nh-),2.55(q,j＝7.2hz,4h,n(-ch
2-ch3)2),2.46
–
2.39(m,2h,-ch
2-n),1.60
–
1.37(m,4h,-ch
2-ch
2-ch),1.27(d,j＝6.5hz,4h,ch
3-ch),1.20(s,9h,(ch3)3c),1.03(t,j＝7.2hz,6h,ch
3-ch2).
[0271]
(2)化合物3r-1的合成
[0272][0273]
0℃下，将2r-1(3.0g，11.5mmol)溶于甲醇(10ml)中，将氯化氢的甲醇溶液(9ml，
36mmol，4m)缓慢滴加至上述溶液中，然后将反应转移至室温，搅拌反应3h，直至原料反应完全后，停止反应，过滤，得到白色滤饼3r-1(2.1g，95％)。将白色固体混悬于甲醇中，加入k2co3(1.5g，10.8mmol)，室温下搅拌30min，抽滤，滤液减压浓缩，直接投入下一步反应。
[0274]
(3)(r)-氯喹的合成
[0275][0276]
称取化合物3r-1(1.6g，10.3mmol)、4,7-二氯喹啉(2.0g，10.3mmol)和苯酚(4.8g，52mmol)至100ml烧瓶中，然后升高反应温度至135℃，过夜反应，待原料反应完全后，冷却至室温，加入氢氧化钠溶液调ph至12，二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到(r)-氯喹(2.3g，70％)。hplc纯度＞99％，光学纯度99.2％ee.1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.50(d,j＝5.5hz,1h,2-h),7.94(d,j＝2.2hz,1h,5-h),7.73(d,j＝9.0hz,1h,8-h),7.35(dd,j＝8.9,2.2hz,1h,6-h),6.41(d,j＝5.5hz,1h,3-h),5.35(d,j＝5.8hz,1h,-nh-),3.78
–
3.66(m,1h,-ch-nh-),2.57(q,j＝7.2hz,4h,n(-ch
2-ch3)2),2.49(t,j＝6.6hz,2h,-ch
2-n),1.80
–
1.62(m,4h,-ch
2-ch
2-ch),1.32(d,j＝6.3hz,3h,ch
3-ch),1.04(t,j＝7.2hz,6h,ch
3-ch2).纯度>99％，手性纯度>99.95％.
[0277]
实施例57：
[0278]
(1)化合物2s-1的合成
[0279][0280]
0℃下，将化合物1(2g，12.7mmol)和手性辅基(r)-叔丁基亚磺酰胺(1.8g，15.2mmol)溶于无水甲醇(30ml)中，将硼酸三乙酯(4.3ml，25.4mmol)缓慢滴加至上述溶液中，待滴加完毕，将反应升至室温，搅拌1h，然后加热回流12h。将反应冷却至室温，-40℃下，将上述反应液缓慢滴加至三乙酰氧基硼氢化钠(10.8g，50.8mmol)的四氢呋喃(50ml)混悬液中，保持-40℃搅拌5h，将反应液缓慢升温至室温，在室温下搅拌8h，直至反应完全后停止反应。将反应移至0℃下，滴加饱和氯化铵淬灭反应，直至没有气泡产生，dcm(40ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤(50ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到化合物2s-1(2.3g，70％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ3.37(h,j＝6.4hz,1h,-ch-nh),2.96(d,j＝6.9hz,1h,-nh-),2.55(q,j＝7.2hz,4h,n(-ch
2-ch3)2),2.46
–
2.39(m,2h,-ch
2-n),1.60
–
1.37(m,4h,-ch
2-ch
2-ch),1.27(d,j＝6.5hz,4h,ch
3-ch),1.20(s,9h,(ch3)3c),1.03(t,j＝7.2hz,6h,ch
3-ch2).
[0281]
(2)化合物3s-1的合成
[0282][0283]
0℃下，将2s-1(2.0g，7.6mmol)溶于1,4-二氧六环(10ml)中，将氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4ml，15.2mmol，4m)缓慢滴加至上述溶液中，然后将反应转移至室温，搅拌反应2h，直至原料反应完全后，停止反应，过滤，得到白色滤饼3s-1(1.3g，90％)。将白色固体混悬于甲醇中，加入k2co3(924mg，6.7mmol)，室温下搅拌30min，抽滤，滤液减压浓缩，直接投入下一步反应。
[0284]
(3)(s)-氯喹的合成
[0285][0286]
称取化合物3s-1(1.6g，10.3mmol)、4,7-二氯喹啉(2.0g，10.3mmol)和苯酚(4.8g，52mmol)至100ml烧瓶中，然后升高反应温度至135℃，过夜反应，待原料反应完全后，冷却至室温，加入氢氧化钠溶液调ph至12，二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到s-氯喹(2.3g，70％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.50(d,j＝5.5hz,1h,2-h),7.94(d,j＝2.2hz,1h,5-h),7.73(d,j＝9.0hz,1h,8-h),7.35(dd,j＝8.9,2.2hz,1h,6-h),6.41(d,j＝5.5hz,1h,3-h),5.35(d,j＝5.8hz,1h,-nh-),3.78
–
3.66(m,1h,-ch-nh-),2.57(q,j＝7.2hz,4h,n(-ch
2-ch3)2),2.49(t,j＝6.6hz,2h,-ch
2-n),1.80
–
1.62(m,4h,-ch
2-ch
2-ch),1.32(d,j＝6.3hz,3h,ch
3-ch),1.04(t,j＝7.2hz,6h,ch
3-ch2).纯度>99％，手性纯度>99.92％.
[0287]
实施例58：
[0288]
(1)化合物2r-1的合成
[0289][0290]
0℃下，将化合物1(2g，12.7mmol)和手性辅基(s)-叔丁基亚磺酰胺(4.6g，38.1mmol)溶于无水四氢呋喃(30ml)中，将三乙氧基铝(10.3g，63.5mmol)分批至上述溶液中，然后将反应升至室温，搅拌1h，将反应升温至加热回流8h。-78℃下，将上述反应液缓慢滴加至lialh4(530mg，14mmol)的无水四氢呋喃(20ml)混悬液中，保持-78℃搅拌2h，将反应液缓慢升温至室温，在室温下搅拌6h，直至反应完全后停止反应。将反应移至0℃下，向反应液中缓慢加入水润湿的硫酸钠，至无气泡产生时，硅藻土过滤，二氯甲烷洗涤滤饼，收集滤液，减压浓缩，dcm(20ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30ml)，无水硫酸钠干燥，
过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到化合物2-1(3.3g，78％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ3.37(h,j＝6.4hz,1h,-ch-nh),2.96(d,j＝6.9hz,1h,-nh-),2.55(q,j＝7.2hz,4h,n(-ch
2-ch3)2),2.46
–
2.39(m,2h,-ch
2-n),1.60
–
1.37(m,4h,-ch
2-ch
2-ch),1.27(d,j＝6.5hz,4h,ch
3-ch),1.20(s,9h,(ch3)3c),1.03(t,j＝7.2hz,6h,ch
3-ch2).
[0291]
(2)化合物3r-1的合成
[0292][0293]
0℃下，将2r-1(3.0g，11.5mmol)溶于甲醇(10ml)中，将氯化氢的甲醇溶液(9ml，36mmol，4m)缓慢滴加至上述溶液中，然后将反应转移至室温，搅拌反应3h，直至原料反应完全后，停止反应，过滤，得到白色滤饼3r-1(2.1g，95％)。将白色固体混悬于甲醇中，加入k2co3(1.5g，10.8mmol)，室温下搅拌30min，抽滤，滤液减压浓缩，直接投入下一步反应。
[0294]
(3)(r)-氯喹的合成
[0295][0296]
称取化合物3r-1(1.6g，10.3mmol)、4,7-二氯喹啉(2.0g，10.3mmol)和苯酚4.8g，52mmol)至100ml烧瓶中，然后升高反应温度至135℃，过夜反应，待原料反应完全后，冷却至室温，加入氢氧化钠溶液调ph至12，二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到(r)-氯喹(2.3g，70％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.50(d,j＝5.5hz,1h,2-h),7.94(d,j＝2.2hz,1h,5-h),7.73(d,j＝9.0hz,1h,8-h),7.35(dd,j＝8.9,2.2hz,1h,6-h),6.41(d,j＝5.5hz,1h,3-h),5.35(d,j＝5.8hz,1h,-nh-),3.78
–
3.66(m,1h,-ch-nh-),2.57(q,j＝7.2hz,4h,n(-ch
2-ch3)2),2.49(t,j＝6.6hz,2h,-ch
2-n),1.80
–
1.62(m,4h,-ch
2-ch
2-ch),1.32(d,j＝6.3hz,3h,ch
3-ch),1.04(t,j＝7.2hz,6h,ch
3-ch2).纯度>99％，手性纯度>99.90％.
[0297]
实施例59：
[0298]
(1)化合物2s-2的合成
[0299][0300]
0℃下，将化合物1(2g，12.7mmol)和手性辅基(r)-1-(4-甲氧基苯)乙胺(2.1g，
14mmol)溶于无水四氢呋喃(30ml)中，将ti(oet)4(12ml，57.3mmol)缓慢滴加至上述溶液中，待滴加完毕，将反应升至室温，室温下搅拌30min，加热回流12h。将反应冷却至室温，-78℃下，将上述反应液缓慢滴加至nabh4(2.2g，57.3mmol)的四氢呋喃(20ml)混悬液中，保持-78℃搅拌5h，将反应液缓慢升温至室温，在室温下搅拌10h，直至反应完全后停止反应。将反应移至0℃下，滴加甲醇淬灭反应，直至没有气泡产生，然后将反应液倒入冰盐水中，硅藻土过滤，二氯甲烷洗涤滤饼，收集滤液，减压浓缩，dcm(30ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤(50ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到化合物2s-2(2.9g，80％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ7.20
–
7.13(m,2h),6.82
–
6.76(m,2h),3.98-3.90(m,1h),3.79(s,2h),2.87(dq,j＝11.9,7.2hz,2h),2.70
–
2.58(m,3h),2.53(dt,j＝12.3,6.2hz,1h),2.41(dt,j＝12.1,6.2hz,1h),2.04(t,j＝8.2hz,1h),1.57
–
1.49(m,1h),1.52(s,2h),1.53
–
1.47(m,2h),1.51
–
1.41(m,1h),1.44
–
1.29(m,2h),1.15
–
1.07(m,9h).
[0301]
(2)化合物3s-2的合成
[0302][0303]
将2s-2(2g，6.8mmol)溶于甲醇(10ml)中，加入pd/c(0.2g)，通入氢气，升温至50℃，搅拌反应8h。硅藻土过滤，滤液减压浓缩，柱层析分离制得化合物3s-2(913mg，85％)。
[0304]
(3)(s)-氯喹的合成
[0305][0306]
称取化合物3s-2(500mg，3.2mmol)、4,7-二氯喹啉(689mg，3.5mmol)和苯酚(1.6g，17.5mmol)至100ml烧瓶中，然后升高反应温度至135℃，过夜反应，待原料反应完全后，冷却至室温，加入氢氧化钠溶液调ph至12，二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到(s)-氯喹(714mg，70％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.50(d,j＝5.5hz,1h,2-h),7.94(d,j＝2.2hz,1h,5-h),7.73(d,j＝9.0hz,1h,8-h),7.35(dd,j＝8.9,2.2hz,1h,6-h),6.41(d,j＝5.5hz,1h,3-h),5.35(d,j＝5.8hz,1h,-nh-),3.78
–
3.66(m,1h,-ch-nh-),2.57(q,j＝7.2hz,4h,n(-ch
2-ch3)2),2.49(t,j＝6.6hz,2h,-ch
2-n),1.80
–
1.62(m,4h,-ch
2-ch
2-ch),1.32(d,j＝6.3hz,3h,ch
3-ch),1.04(t,j＝7.2hz,6h,ch
3-ch2).纯度>99％，手性纯度>99.95％.
[0307]
实施例60：
[0308]
(1)化合物2r-2的合成
[0309][0310]
0℃下，将化合物1(2g，12.7mmol)和手性辅基(s)-1-(4-甲氧基苯)乙胺(2.9g，19mmol)溶于无水四氢呋喃(30ml)中，将钛酸四异丙酯(19ml，63.5mmol)缓慢滴加至上述溶液中，待滴加完毕，将反应升至室温，室温下搅拌1h，然后将温度加热回流反应8h。将反应液冷却至-40℃，将三仲丁基硼氢化锂的四氢呋喃溶液(38ml，38.1mmol，1m)缓慢滴加至上述反应液中，保持-40℃搅拌8h，将反应液缓慢升温至室温，在室温下搅拌5h，直至反应完全后停止反应。将反应移至0℃下，滴加饱和氯化铵溶液淬灭反应，直至没有气泡产生，然后将反应液倒入冰盐水中，硅藻土过滤，二氯甲烷洗涤滤饼，收集滤液，减压浓缩，dcm(30ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤(50ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到化合物2r-2(2.9g，80％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ7.20
–
7.13(m,2h),6.82
–
6.76(m,2h),3.98-3.90(m,1h),3.79(s,2h),2.87(dq,j＝11.9,7.2hz,2h),2.70
–
2.58(m,3h),2.53(dt,j＝12.3,6.2hz,1h),2.41(dt,j＝12.1,6.2hz,1h),2.04(t,j＝8.2hz,1h),1.57
–
1.49(m,1h),1.52(s,2h),1.53
–
1.47(m,2h),1.51
–
1.41(m,1h),1.44
–
1.29(m,2h),1.15
–
1.07(m,9h).
[0311]
(2)化合物3r-2的合成
[0312][0313]
将2r-2(2g，6.8mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，加入pto2(308mg，1.36mmol)，通入氢气，升温至45℃，搅拌反应6h。硅藻土过滤，滤液减压浓缩，柱层析分离制得化合物3r-2(902mg，84％)。
[0314]
(3)(r)-氯喹的合成
[0315][0316]
称取化合物3r-2(500mg，3.2mmol)、4,7-二氯喹啉(689mg，3.5mmol)和苯酚(1.6g，
17.5mmol)至100ml烧瓶中，然后升高反应温度至135℃，过夜反应，待原料反应完全后，冷却至室温，加入氢氧化钠溶液调ph至12，二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到(s)-氯喹(765mg，75％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.50(d,j＝5.5hz,1h,2-h),7.94(d,j＝2.2hz,1h,5-h),7.73(d,j＝9.0hz,1h,8-h),7.35(dd,j＝8.9,2.2hz,1h,6-h),6.41(d,j＝5.5hz,1h,3-h),5.35(d,j＝5.8hz,1h,-nh-),3.78
–
3.66(m,1h,-ch-nh-),2.57(q,j＝7.2hz,4h,n(-ch
2-ch3)2),2.49(t,j＝6.6hz,2h,-ch
2-n),1.80
–
1.62(m,4h,-ch
2-ch
2-ch),1.32(d,j＝6.3hz,3h,ch
3-ch),1.04(t,j＝7.2hz,6h,ch
3-ch2).纯度>99％，手性纯度>99.96％.
[0317]
实施例61：
[0318]
(1)化合物2s-2的合成
[0319][0320]
0℃下，将化合物1(2g，12.7mmol)和手性辅基(r)-1-(4-甲氧基苯)乙胺(2.1g，14mmol)溶于无水四氢呋喃(30ml)中，将硼酸三乙酯(13ml，76.2mmol)缓慢滴加至上述溶液中，待滴加完毕，将反应升至室温，室温下搅拌1h，加热回流12h。将反应冷却至室温，-78℃下，将上述反应液缓慢滴加至libh4(1.4g，63.5mmol)的四氢呋喃(20ml)混悬液中，保持-78℃搅拌5h，将反应液缓慢升温至室温，在室温下搅拌10h，直至反应完全后停止反应。将反应移至0℃下，滴加甲醇淬灭反应，直至没有气泡产生，然后将反应液倒入冰盐水中，硅藻土过滤，二氯甲烷洗涤滤饼，收集滤液，减压浓缩，dcm(30ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤(50ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到化合物2s-2(2.9g，80％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ7.20
–
7.13(m,2h),6.82
–
6.76(m,2h),3.98-3.90(m,1h),3.79(s,2h),2.87(dq,j＝11.9,7.2hz,2h),2.70
–
2.58(m,3h),2.53(dt,j＝12.3,6.2hz,1h),2.41(dt,j＝12.1,6.2hz,1h),2.04(t,j＝8.2hz,1h),1.57
–
1.49(m,1h),1.52(s,2h),1.53
–
1.47(m,2h),1.51
–
1.41(m,1h),1.44
–
1.29(m,2h),1.15
–
1.07(m,9h).
[0321]
(2)化合物3s-2的合成
[0322][0323]
将2s-2(2g，6.8mmol)溶于甲醇(10ml)中，加入ru/c(0.1g)，通入氢气，升温至50℃，搅拌反应8h。硅藻土过滤，滤液减压浓缩，柱层析分离制得化合物3s-2(913mg，85％)。
[0324]
(3)(s)-氯喹的合成
[0325][0326]
称取化合物3s-2(500mg，3.2mmol)、4,7-二氯喹啉(689mg，3.5mmol)和苯酚(1.6g，17.5mmol)至100ml烧瓶中，然后升高反应温度至135℃，过夜反应，待原料反应完全后，冷却至室温，加入氢氧化钠溶液调ph至12，二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到s-氯喹(714mg，70％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.50(d,j＝5.5hz,1h,2-h),7.94(d,j＝2.2hz,1h,5-h),7.73(d,j＝9.0hz,1h,8-h),7.35(dd,j＝8.9,2.2hz,1h,6-h),6.41(d,j＝5.5hz,1h,3-h),5.35(d,j＝5.8hz,1h,-nh-),3.78
–
3.66(m,1h,-ch-nh-),2.57(q,j＝7.2hz,4h,n(-ch
2-ch3)2),2.49(t,j＝6.6hz,2h,-ch
2-n),1.80
–
1.62(m,4h,-ch
2-ch
2-ch),1.32(d,j＝6.3hz,3h,ch
3-ch),1.04(t,j＝7.2hz,6h,ch
3-ch2).纯度>99％，手性纯度>99.94％.
[0327]
实施例62：
[0328]
(1)化合物2r-2的合成
[0329][0330]
0℃下，将化合物1(2g，12.7mmol)和手性辅基(s)-1-(4-甲氧基苯)乙胺(2.9g，19mmol)溶于无水四氢呋喃(30ml)中，将钛酸四异丙酯(19ml，63.5mmol)缓慢滴加至上述溶液中，待滴加完毕，将反应升至室温，室温下搅拌1h，然后将温度加热回流反应8h。将反应液冷却至-40℃，将dibalh的正己烷溶液(51ml，50.8mmol，1m)缓慢滴加至上述反应液中，保持-40℃搅拌8h，将反应液缓慢升温至室温，在室温下搅拌5h，直至反应完全后停止反应。将反应移至0℃下，滴加饱和氯化铵溶液淬灭反应，直至没有气泡产生，然后将反应液倒入冰盐水中，硅藻土过滤，二氯甲烷洗涤滤饼，收集滤液，减压浓缩，dcm(30ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤(50ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到化合物2r-2(2.9g，80％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ7.20
–
7.13(m,2h),6.82
–
6.76(m,2h),3.98-3.90(m,1h),3.79(s,2h),2.87(dq,j＝11.9,7.2hz,2h),2.70
–
2.58(m,3h),2.53(dt,j＝12.3,6.2hz,1h),2.41(dt,j＝12.1,6.2hz,1h),2.04(t,j＝8.2hz,1h),1.57
–
1.49(m,1h),1.52(s,2h),1.53
–
1.47(m,2h),1.51
–
1.41(m,1h),1.44
–
1.29(m,2h),1.15
–
1.07(m,9h).
[0331]
(2)化合物3r-2的合成
[0332][0333]
将2r-2(2g，6.8mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，加入pd(oh)2(0.2g)，通入氢气，升温至45℃，搅拌反应6h。硅藻土过滤，滤液减压浓缩，柱层析分离制得化合物3r-2(902mg，84％)。
[0334]
(3)(r)-氯喹的合成
[0335][0336]
称取化合物3r-2(500mg，3.2mmol)、4,7-二氯喹啉(689mg，3.5mmol)和苯酚(1.6g，17.5mmol)至100ml烧瓶中，然后升高反应温度至135℃，过夜反应，待原料反应完全后，冷却至室温，加入氢氧化钠溶液调ph至12，二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(30ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析分离纯化得到(s)-氯喹(765mg，75％)。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.50(d,j＝5.5hz,1h,2-h),7.94(d,j＝2.2hz,1h,5-h),7.73(d,j＝9.0hz,1h,8-h),7.35(dd,j＝8.9,2.2hz,1h,6-h),6.41(d,j＝5.5hz,1h,3-h),5.35(d,j＝5.8hz,1h,-nh-),3.78
–
3.66(m,1h,-ch-nh-),2.57(q,j＝7.2hz,4h,n(-ch
2-ch3)2),2.49(t,j＝6.6hz,2h,-ch
2-n),1.80
–
1.62(m,4h,-ch
2-ch
2-ch),1.32(d,j＝6.3hz,3h,ch
3-ch),1.04(t,j＝7.2hz,6h,ch
3-ch2).纯度>99％，手性纯度>99.92％.
[0337]
实施例63：待测化合物细胞毒性以及抗流感病毒药效测试实验
[0338]
待测化合物细胞毒性实验：化合物对vero细胞的细胞毒作用采用mtt方法来检测，mtt法又称mtt比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。mtt(黄色的噻唑兰)可透过细胞膜进入细胞内，活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性mtt还原为难溶于水的蓝紫色的针状formazan结晶并沉积在细胞中，结晶能被二甲基亚砜(dmso)溶解，用酶联免疫检测仪在490nm/570nm波长处检测其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
[0339]
1)将vero细胞接种于在96孔板中，每孔加入100μl细胞悬液；每孔细胞数量约为100000个，在5％co2，37℃孵育培养24h；
[0340]
2)设置药物浓度梯度，每个浓度梯度设置3个复孔，将药物稀释到对应培养基中至所需终浓度，吸出96孔板中原有培养基，加入配好的含所需终浓度药物的培养基100μl，在5％co2，37℃孵育；并同时设置空白组(只含100μl培养基，不含细胞，后续处理与其他各孔相同)与对照组(含有细胞与培养基)；
[0341]
3)药物处理至44小时时每孔加入10μl mtt溶液(5mg/ml)，继续培养4h(药物处理
细胞共48小时)；
[0342]
4)吸干净孔内培养液(如细胞出现悬浮，则先2500rpm离心5min再吸出培养基)。每孔加入150μl二甲基亚砜，振荡至结晶物充分溶解。在酶标仪上检测od 490nm处各孔的吸光值；
[0343]
5)计算抑制率：抑制率＝1-(加药组od值-空白组od值)/(对照组od值-空白组od值)＝(对照组od值-加药组od值)/(对照组od值-空白组的od值)；
[0344]
6)采用graphpad软件计算ic
50
值；
[0345]
待测化合物的抗流感活性采用空斑抑制法测定，具体操作步骤：
[0346]
1)将vero细胞接种于96孔板(5
×
105细胞/孔)，在5％co2，37℃孵育培养过夜；
[0347]
2)流感病毒株a/pr/8/34采用无血清培养基稀释到100pfu/ml的病毒液，将病毒液(0.5ml/孔)加入到96孔板中，感染vero细胞1h；
[0348]
3)完成接种和吸附后，弃掉病毒培养液，pbs(ph＝7.2)洗涤细胞1次；
[0349]
4)向96孔板中加入80％琼脂、1％牛血血清蛋白和3μg/ml乙酰基胰蛋白酶以及emem培养基稀释到所需浓度的待测化合物和阳性对照法匹拉韦(设置8个浓度，每个浓度3个复孔)，另外设置病毒对照孔(感染了病毒的细胞，不含待测化合物)和正常细胞孔(正常的细胞，不含待测化合物)。待混合物完全凝结后，上下翻转，培养72h；
[0350]
5)培养完成后，去掉琼脂糖，室温下，细胞层采用70％乙醇固定3min；除掉乙醇，加入1ml结晶紫染色剂，室温下染色5min；除掉结晶紫染色剂，pbs洗涤细胞两次；然后计算空斑数。通过与对病毒对照比较所得的百分率来表示斑抑制率；
[0351]
6)采用graphpad软件计算ec
50
值；
[0352]
7)最终计算化合物的选择指数(si)，si＝ic
50
/ec
50
；
[0353]
具体实验结果如表1所示，实施例化合物对细胞毒性较小，(r)构型的氯喹、羟氯喹及其类似物和(s)构型的氯喹、羟氯喹及其类似物对流感病毒感染抑制活性和选择指数均优于外消旋体氯喹、羟氯喹及其类似物，且具有更好的选择指数；且(r)-构型优于(s)-构型。
[0354]
表1细胞毒性、抗流感活性和选择指数
[0355]
[0356]
[0357][0358]
实施例64：抗新型冠状病毒肺炎(covid-19)活性测试
[0359]
待测化合物的抗新型冠状病毒肺炎活性检测具体操作步骤如下：
[0360]
1)将vero细胞接种于96孔板(5
×
104细胞/孔)，在5％co2，37℃孵育培养过夜；
[0361]
2)新型冠状病毒(moi＝0.05)加入到96孔板中，感染vero细胞2h，弃掉病毒液；
[0362]
3)向96孔板中加入含有培养培养基稀释到所需浓度的待测化合物和阳性对照法匹拉韦(设置8个浓度，每个浓度3个复孔)，另外设置病毒对照孔(感染了病毒的细胞，不含待测待测化合物)和正常细胞孔(正常的细胞，不含待测化合物)；继续培养48h后，收集细胞上清液，采用裂解缓冲液裂解，用于后续的qrt-pcr测定rna拷贝数；
[0363]
4)收集100μl细胞上清液，按照minibest病毒rna/dna提取试剂盒说明书提取病毒rna；rna采用不含rnase的水进行洗脱。反转录采用含有gdna eraser的primescript rt reagent试剂盒进行，qrt-pcr采用stepone plus real-time pcr系统和tb green premix ex taq ii进行。
[0364]
5)采用gdna eraser去掉3μl total rna中的基因组dna，然后在20μl反应液中合成第一链cdna，2μl cdna用作定量pcr的模板；以cdna为模板，spike基因受体结构域采用pcr扩增所用的引物：rbd-f:5
’-
gctccatggcctaatattacaaacttgtgcc3’，rbd-r:5
’-
tgctctagactcaagtgtctgtggatcac-3’，然后克隆到pmt/bip/v5-his载体中，通过测序确认后作为质粒标准品；
[0365]
6)定量pcr的引物为rbd-qf1:5
’-
caatggtttaacaggcacagg-3’，rbd-qr1:5
’-
ctcaagtgtctgtggatcacg-3；反应条件：95℃预变性5min，95℃变性15s，54℃退火15s，72℃延伸30s，反应循环数为40cycles；
[0366]
7)根据标准曲线计算拷贝数，采用graphpad软件计算ec
50
值；
[0367]
8)最终计算化合物的选择指数(si)，si＝ec
50
/ic
50
；
[0368]
具体实验结果如表2所示，(r)构型的氯喹、羟氯喹及其类似物和(s)构型的氯喹、羟氯喹及其类似物对流感病毒感染抑制活性和选择指数优于外消旋体氯喹、羟氯喹及其类似物，且具有更好的选择指数；且(r)-构型优于(s)-构型。
[0369]
表2细胞毒性、抗新型冠状病毒肺炎活性和选择指数
[0370]
[0371]
[0372][0373]
实施例65：待测化合物的急性毒性实验
[0374]
对光学纯羟氯喹/氯喹和外消旋体进行了毒性测试，分为7组，每组5只小鼠：
①
对照组；
②
(r)-羟氯喹给药组；
③
(s)-羟氯喹给药组；
④
(r)-氯喹给药组；
⑤
(s)-氯喹给药组；
⑥
羟氯喹给药组；
⑦
氯喹给药组。各组给药方法相同，每日清晨给药1次，给药剂量280mg/kg，药液均为当天配置当天使用，连续给药观察7天。如图1、图2、图3和图4所示，给药期间，(r)-羟氯喹和(r)-氯喹小鼠体重相对稳定，且没有出现小鼠死亡，而(s)-羟氯喹、(s)-氯喹、羟氯喹和氯喹给药组小鼠体重下降，且给药第7天时小鼠全部死亡。
[0375]
实施例66：待测化合物对mrl/lpr狼疮小鼠的治疗效果
[0376]
(1)动物分组及实验干预
[0377]
将35只雌性mrl/lpr自发狼疮模型小鼠(3月龄)按体重随机分成7组，每组5只：
①
对照组；
②
(r)-羟氯喹给药组(10mg/kg)灌胃；
③
(s)-羟氯喹给药组(10mg/kg)灌胃；
④
(r)-氯喹给药组(10mg/kg)灌胃；
⑤
(s)-氯喹给药组(10mg/kg)灌胃；
⑥
阳性对照组一(羟氯喹给药，10mg/kg灌胃)；
⑦
阳性对照组二(氯喹给药，10mg/kg灌胃)。各组给药方法相同，每日清晨给药1次，药液均为当天配置当天使用，连续给药观察8周。
[0378]
(2)标本采集
[0379]
①
给药前、给药2周、4周、6周、8周代谢笼收集各组动物尿液，置于-80℃冰箱中保存。
[0380]
②
给药前、给药2周、4周、6周、8周各组动物分别采血0.2-0.4ml，离心取血清，-80℃保存。
[0381]
③
实验结束后，处死小鼠，取动物血约lml。
[0382]
(3)尿蛋白含量测定
[0383]
采用bradford法(考马斯亮蓝法)定量检测小鼠尿液中的蛋白含量。收集10μl无污染的新鲜小鼠尿液，用40μl考马斯亮蓝稀释，待震荡混匀后，避光显色约5-20分钟，酶标仪检测570nm处的吸光度值，在标准曲线上查得样品的蛋白含量。以查得的蛋白含量除以样品体积，再乘以稀释倍数即得到待测样品的实际浓度。
[0384]
如图5和图6所示，用药前及用药后2周和4周时，6组给药组小鼠的尿蛋白含量与空白对照组相比较，无明显变化(p>0.05)；用药后6周，(r)-羟氯喹的尿蛋白含量相对于对照组显著降低，差异具有统计学意义(p＜0.001)，(s)-羟氯喹、羟氯喹的尿蛋白含量相对于对照组也有所降低，差异具有统计学意义(分别是p＜0.01和p＜0.05)；用药后6周，(r)-氯喹的尿蛋白含量相对于对照组显著降低，差异具有统计学意义(p＜0.01)，(s)-氯喹尿蛋白含量相对于对照组也有所降低，差异具有统计学意义(p＜0.05)，而氯喹的尿蛋白含量相对于
对照组有所降低，但是差异不具有统计学意义。总之，(r)-羟氯喹效果优于(s)-羟氯喹，而(s)-羟氯喹效果优于外消旋体羟氯喹；(r)-氯喹效果优于(s)-氯喹，而(s)-氯喹效果优于外消旋体氯喹。
[0385]
(4)血清抗dsdna抗体滴度检测
[0386]
采用elisa法检测血清抗dsdna抗体滴度：
[0387]
①
取出试剂盒和样品，置室温中平衡30分钟；
[0388]
②
分别设标准品孔，空白对照孔和样品孔，每个样品均设3个复孔，每个孔内加入100μl检测稀释液，用膜封闭，37℃下保持30分钟；
[0389]
③
弃掉每孔中液体，加入200μl洗液，对酶标板进行洗涤，再重复3次；
[0390]
④
每孔分别加入100μl标准品，样品或空白对照，在500
±
50rpm微型水平震荡器上室温孵育3小时；
[0391]
⑤
弃掉每孔中液体，每个孔中加入200μl洗液进行洗涤，如此重复4次；
[0392]
⑥
每孔加入100μl抗体与hrp铰链物，在微型水平震荡器上室温孵育1小时，然后洗板5次；
[0393]
⑦
每孔加入100μl底物，避光，室温孵育30分钟；
[0394]
⑧
每孔加入50μl终止液；
[0395]
⑨
在终止后15分钟内用450nm波长测吸光值；
[0396]
⑩
最后，根据标准品的浓度及对应的吸光度值，计算出标准曲线回归方程，再根据样品的吸光度值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，最终浓度＝实测浓度
×
稀释倍数。
[0397]
如图7和图8所示，给药前和给药2周、4周时，6组给药组小鼠的抗ds-dna抗体水平与对照组相比较，无明显变化(p>0.05)；用药后6周，(r)-羟氯喹的抗ds-dna抗体水平相对于对照组显著降低，差异具有统计学意义(p＜0.05)，(s)-羟氯喹、羟氯喹的抗ds-dna抗体水平相对于对照组也有所降低，但是差异无统计学意义；用药后6周，(r)-氯喹抗ds-dna抗体水平相对于对照组显著降低，差异具有统计学意义(p＜0.01)，而(s)-氯喹和氯喹的抗ds-dna抗体水平相对于对照组也有所降低，但是差异无统计学意义。总之，(r)-羟氯喹效果优于(s)-羟氯喹和氯喹；(r)-氯喹效果优于(s)-氯喹和氯喹。
[0398]
(5)肾he染色
[0399]
取出小鼠肾脏，肾切片经4％福尔马林固定，石蜡包埋，切取6μm厚组织切片进行he染色,光镜下成像，然后对肾组织学进行形态学分析。肾组织病理评分根据肾小球增大、肾小球萎缩、免疫复合物沉积和炎性浸润程度计算积分:0分,无累及；1分，1％～25％；2分，26％～50％；3分，51％～75％；4分，76％～100％。每只小鼠的肾组织取其下极皮质部分的肾小球，每个肾取10个肾小球，累计积分，计算平均值。
[0400]
如图9所示，与对照组相比，给药6周后，(r)-羟氯喹的给药后显著降低了肾脏损伤(p＜0.01)，(s)-羟氯喹和羟氯喹也降低了肾脏损伤(p＜0.05)；(r)-氯喹的给药后显著降低了肾脏损伤(p＜0.01)，(s)-氯喹和氯喹也降低了肾脏损伤(p＜0.05)。
[0401]
(6)流式细胞术检测脾脏b淋巴细胞和调节性t细胞比例
[0402]
①
小鼠采用颈椎脱臼法处死，浸泡至75％乙醇中约2-3分钟，后挥去乙醇。
[0403]
②
打开其腹腔，取出脾脏，将其加入盛有6ml生理盐水的培养皿中。
[0404]
③
用镊子将脾脏夹碎，得到脾脏的单细胞悬液，用200μm的尼龙网过滤后将细胞悬
液滤入离心管中。1500rpm
×
5分钟室温离心，弃去上清，用6ml的rpmi-1640培养液将细胞重悬，重复操作2次。
[0405]
④
10ml离心管中加入3ml淋巴细胞分离液，吸取
③
中得到的细胞悬液，沿离心管内壁缓慢而匀速的将其加入到淋巴细胞分离液的上层，可见其与分离液形成明显的界面。
[0406]
⑤
经水平式离心2000rpm/分钟
×
20分钟，小心的取出离心管，可见液体分为三层，用移液管轻轻取出第二层中间的白膜层，并将其转移到新的离心管中。离心1500rpm/分钟
×
10分钟，弃掉上清，用rpmi-1640完全培养基6ml重悬，取出少许细胞计数。
[0407]
⑥
脾细胞悬液以50μl cd16/32抗体封闭30min，加入抗体混合液避光孵育30min，400r/min离5min，弃上清；加入1ml预冷多聚甲醛固定20min，以200μl pbs重悬细胞，24h在流式细胞仪上检测。抗体表面标记为：cd19-buv737、cd38-pe、cd95-bv510、cd3e-apc-cy7、cd4-buv395、cd8a-percp-cy5.5、cd25-bb515；胞内标记为：foxp3-bv421、il-17a-bv510。
[0408]
如图10和11所示，(r)-羟氯喹给药组小鼠脾炎症反应相关b淋巴细胞比例显著低于对照组(p＜0.001)，且生发中心b淋巴细胞比例显著低于对照组(p＜0.001)；(s)-羟氯喹给药组小鼠脾炎症反应相关b淋巴细胞比例均显著低于对照组(p＜0.01)，且生发中心b淋巴细胞比例显著低于对照组(p＜0.01)；羟氯喹给药组小鼠脾炎症反应相关b淋巴细胞比例均显著低于对照组(p＜0.01)，且生发中心b淋巴细胞比例显著低于对照组(p＜0.01)。(r)-羟氯喹效果优于(s)-羟氯喹，而(s)-羟氯喹优于外消旋体氯喹。
[0409]
如图10和图11所示，(r)-氯喹给药组小鼠脾炎症反应相关b淋巴细胞比例显著低于对照组(p＜0.001)，且生发中心b淋巴细胞比例显著低于对照组(p＜0.001)；(s)-氯喹给药组小鼠脾炎症反应相关b淋巴细胞比例均显著低于对照组(p＜0.05)，且生发中心b淋巴细胞比例显著低于对照组(p＜0.01)；氯喹给药组小鼠脾炎症反应相关b淋巴细胞比例均显著低于对照组(p＜0.01)，且生发中心b淋巴细胞比例显著低于对照组(p＜0.01)。(r)-氯喹效果优于(s)-氯喹，而(s)-氯喹优于外消旋体氯喹。
[0410]
如图12所示，(r)-羟氯喹给药组小鼠调节性t细胞比例明显高于对照组(p＜0.001)，(s)-羟氯喹给药组小鼠调节性t细胞比例明显优于对照组(p＜0.001)，羟氯喹给药组小鼠调节性t细胞比例优于对照组(p＜0.01)。(r)-羟氯喹效果优于(s)-羟氯喹，而(s)-羟氯喹优于外消旋体羟氯喹。
[0411]
如图12所示，(r)-氯喹给药组小鼠调节性t细胞比例明显高于对照组(p＜0.001)，(s)-氯喹给药组小鼠调节性t细胞比例明显优于对照组(p＜0.001)，氯喹给药组小鼠调节性t细胞比例也明显优于对照组(p＜0.001)。(r)-氯喹效果优于(s)-氯喹，(s)-氯喹优于外消旋体氯喹。
[0412]
实施例67：对大鼠胶原诱导性关节炎的治疗作用
[0413]
(1)大鼠胶原诱导性关节炎模型的建立
[0414]
雄性wistar大鼠120只(160
±
20g)，适应性喂养一周后，选取110只大鼠作为造模用鼠，余下10只设为正常对照组。在造模组大鼠背部选取3个注射点、与尾根部共4个部位一起进行ii型胶原乳化剂的皮内注射，每个点注射0.1ml配制好的ⅱ型胶原(1mg/ml)，作为初次免疫。正常对照组注射0.9％的生理盐水。7天后用同样方法、同等剂量加强注射一次，作为激发，以建立ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠模型(cia)。定期观察大鼠的一般情况，四肢关节肿胀度，颜色，关节活动情况等变化，每周测量一次体重。
[0415]
(2)分组与给药
[0416]
初次注射后，每天观察大鼠的足跖肿胀情况，当发现至少有5只以上的大鼠出现足跖肿胀时，每隔3天对大鼠进行称重并测量记录后足踝关节以下容积。初次免疫14天后，选取出现足肿胀(即造模成功)的70只大鼠进入试验。70只大鼠随机分组：
①
对照组；
②
(r)-羟氯喹给药组(10mg/kg)灌胃；
③
(s)-羟氯喹给药组(10mg/kg)灌胃；
④
(r)-氯喹给药组(10mg/kg)灌胃；
⑤
(s)-氯喹给药组(10mg/kg)灌胃；
⑥
阳性对照组一(羟氯喹给药，10mg/kg灌胃)；
⑦
阳性对照组二(氯喹给药，10mg/kg灌胃)。加上原来的正常对照组，共8组。各组给药方法相同，每日清晨给药1次，药液均为当天配置当天使用，连续给药观察28天。每周测量一次体重和后足容积。
[0417]
(3)cia大鼠关节炎指数(ai)评分
[0418]
致炎后第10天开始观察并记录全身关节病变程度，每周1次对关节炎症状进行评分。全身病变按大鼠多发性关节炎全身病变5级评分进行记录。0分：无红肿；1分：小趾关节红斑或轻度肿胀；2分：趾关节和趾跖关节中度肿胀；3分：踝关节以下的足爪肿胀；4分：包括踝关节在内全部足爪肿胀。四肢关节的得分累计为每只大鼠的ai，最高为16分。由于cia大鼠较少累及前肢关节，故6～8分以上可认为关节炎表现严重。
[0419]
如表3所示，各造模组关节炎指数评分如下。各给药组在给药前(14天时)与模型组关节炎指数无明显差异，给药后关节炎指数的最大值出现在28d左右，且(r)-羟氯喹、(s)-羟氯喹、羟氯喹、(r)-氯喹、(s)-氯喹和氯喹给药组，大鼠关节炎指数最大分值与模型对照组相比，有明显降低。42d时，(r)-羟氯喹和(r)-氯喹给药组大鼠关节炎指数已呈现大幅降低。
[0420]
表3对cia大鼠关节炎指数的影响
[0421]
组别14d21d28d35d42d模型对照组4.7
±
1.210.7
±
2.510.6
±
1.46.7
±
0.65.8
±
0.7(r)-羟氯喹3.1
±
1.14.8
±
0.75.3
±
1.03.9
±
0.61.4
±
0.2(s)-羟氯喹4.8
±
1.25.4
±
0.96.2
±
1.54.2
±
1.22.0
±
0.5羟氯喹4.9
±
1.37.8
±
3.06.7
±
1.44.7
±
0.83.0
±
1.2(r)-氯喹4.0
±
1.25.9
±
0.96.3
±
0.83.8
±
0.31.6
±
0.5(s)-氯喹4.8
±
1.25.9
±
0.96.8
±
1.54.3
±
1.62.1
±
0.2氯喹5.0
±
2.26.8
±
2.35.7
±
2.24.5
±
2.82.5
±
1.2
[0422]
(4)大鼠血清no、mda、sod的测定
[0423]
实验结束后，所有大鼠处死，收集全血，待凝固后4℃，2500r/min，15min离心，取得血清，保存于-80℃冰箱。一氧化氮(no)含量的测定：硝酸还原酶法；丙二醛(mda)含量的测定：硫代巴比妥酸法(tba法)；超氧化物歧化酶(sod)活力的测定：黄嘌呤氧化酶法。
[0424]
由表4所示，与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清内no和mda水平显著上升，血清sod活力显著下降。而(r)-羟氯喹、(s)-羟氯喹、羟氯喹、(r)-氯喹、(s)-氯喹和氯喹给药组均表现除了较强的抗氧化作用，与模型对照组相比，血清中no和mda含量明显减低，sod水平显著提高。
[0425]
表4对cia大鼠血清no、mda和sod的影响
[0426]
组别no(μmol/l)mda(nmol/ml)sod(u/ml)
正常对照组98.2
±
22.08.4
±
1.5866.7
±
92.3模型对照组213.9
±
56.714.2
±
3.1551.7
±
61.8(r)-羟氯喹162.1
±
45.89.2
±
0.8696.0
±
80.1
[0427]
(s)-羟氯喹178.1
±
56.010.0
±
2.1587.4
±
77.2羟氯喹182.3
±
77.210.5
±
2.0623.4
±
65.3(r)-氯喹165.3
±
38.49.8
±
3.1677.0
±
55.3(s)-氯喹180.1
±
72.411.0
±
1.9647.4
±
43.9氯喹180.3
±
44.511.8
±
2.0632.4
±
45.4
[0428]
(5)大鼠血清中tnf-α、il-1β和il-6测定
[0429]
采用elisa试剂盒进行检测血清中tnf-α、il-1β、il-6的水平。具体操作如下：
[0430]
①
准备：标准品稀释和配制生物素抗体工作液和酶结合物工作液。将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:20)，加入标准品稀释液1.0ml至冻干标准品中(浓度为10ng/ml)，再配成1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8、0pg/ml浓度。
[0431]
②
取出冷冻血清解冻，12000
×
g，3min。从tnf-α、il-1β或il-6试剂盒取出所需板条，除空白孔外，分别将标本和不同浓度标准品(100μl/孔)加入相应孔中，用封板封住反应孔，37℃孵育90min。
[0432]
③
洗板：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350μl，静置30sec，在厚迭吸水纸上拍干，洗板5次。
[0433]
④
除空白孔外，加入生物素化抗体工作液(100μl/孔)，用封板胶封住反应孔，37℃孵育60min。
[0434]
⑤
洗板4次。
[0435]
⑥
除空白孔外，加入酶结合工作液(100μl/孔)，用封板胶封住反应孔，37℃孵育30min。
[0436]
⑦
洗板4次。
[0437]
⑧
加入显色剂100μl/孔，避光37℃孵育10-20min。
[0438]
⑨
加入终止液100μl/孔，混匀后即刻测量450nm波长处的吸光度值。
[0439]
由表5所示，与正常对照组相比，造模各组血清中促炎细胞因子tnf-α、il-1β和il-6的含量明显升高。(r)-羟氯喹和(r)-氯喹均显著降低血清中tnf-α、il-1β和il-6的含量，(s)-羟氯喹、羟氯喹、(s)-氯喹和氯喹也不同程度地降低了nf-α、il-1β和il-6的含量。
[0440]
表5待测化合物对cia模型大鼠血清tnf-α、il-1β和il-6
[0441]
组别tnf-α(ng/l)il-1(ng/l)il-6(ng/l)正常对照组179.9
±
38.743.3
±
11.2151.6
±
38.5模型对照组277.1
±
48.578.9
±
15.9311.5
±
37.7(r)-羟氯喹201.6
±
32.546.5
±
10.9245.3
±
33.2(s)-羟氯喹222.0
±
23.455.7
±
16.2275.3
±
24.6羟氯喹235.2
±
44.257.3
±
10.4288.3
±
41.2(r)-氯喹202.1
±
30.247.2
±
11.2251.2
±
30.4(s)-氯喹234.1
±
31.565.2
±
12.4265.3
±
22.4氯喹227.4
±
13.968.2
±
24.5278.2
±
33.5