一种人工诱导槭菌刺孢产生分生孢子的方法与流程

文档序号:23848944发布日期:2021-02-05 13:38阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种人工诱导槭菌刺孢产生分生孢子的方法,其特征在于:包括以下步骤:步骤1、用组织分离法从三七圆斑病病叶上分离槭菌刺孢,获得纯培养菌株;步骤2、将纯化后的菌株接种到pda(potato dextrose agar)培养基;步骤3、在20℃、全光照条件下的光照培养箱中培养5~7天;步骤4、首先用灭菌的手术刀将培养皿菌落表面的菌丝刮去,然后将刮去菌丝的菌落切割成直径3~4cm的圆形菌块;步骤5、在直径为90mm的无菌培养皿中加入15~20ml灭菌的ddh2o,再将菌块正面向上放入ddh2o中;步骤6、将装有菌块的培养皿放入光照培养箱(20℃、黑暗光照交替)培养;步骤7、产孢观察,15天后即可获得大量的分生孢子,产孢量可达1
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103个/ml。2.根据权利要求1所述的一种人工诱导槭菌刺孢产生分生孢子的方法,其特征在于:所述步骤1中的用组织分离法从三七圆斑病病叶上分离槭菌刺孢菌株,分离完成后需要2~3次纯化,获得纯培养菌株。3.根据权利要求1所述的一种人工诱导槭菌刺孢产生分生孢子的方法,其特征在于:所述步骤2中采用的pda培养基配方为:马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,蒸馏水1000毫升,自然ph值,100mg/l氯霉素,配制完成后121℃高压灭菌30min。4.根据权利要求1所述的一种人工诱导槭菌刺孢产生分生孢子的方法,其特征在于:所述步骤3中全光照条件是指一天之内24h全时间段光照,无黑暗培养,待槭菌刺孢菌落面积占整个培养皿面积的2/3即可。5.根据权利要求1所述的一种人工诱导槭菌刺孢产生分生孢子的方法,其特征在于:所述步骤4中所使用的手术刀需在高压灭菌锅中,121℃下灭菌30min后使用,菌块切割需要在超净工作台中操作。6.根据权利要求1所述的一种人工诱导槭菌刺孢产生分生孢子的方法,其特征在于:所述步骤5中ddh2o需经0.22μm滤膜过滤后使用,将菌丝块放入到含有无菌ddh2o的无菌培养皿中,使ddh2o刚好淹没菌块。7.根据权利要求1所述的一种人工诱导槭菌刺孢产生分生孢子的方法,其特征在于:所述步骤6中需要将培养皿放在恒温20℃和黑暗光照交替条件下15~20天才可以产生孢子,成熟的孢子会漂浮在无菌ddh2o表面,将无菌ddh2o倒入50ml离心管中并加入2%的吐温20之后放入低温离心机,在4℃、10000r/min条件下离心5min,然后再根据需要进行稀释即可得到期望浓度的槭菌刺孢孢子悬浮液。
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