技术特征:
1.一种类器官培养液,其特征在于,包括为含有占总体积的45-55%的产wnt-3a、r-spondin1和noggin的wrn细胞系条件培养基、以及50
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5ng/ml egf、500
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5nm a8301、10
±
5μm sb202190、10
±
1μm y-27632、1
±
0.25mm n-acetylcysteine、10
±
1nm gastrin、1xb27、10
±
1mm nicotinamide、2
±
0.1mm glutamax、1
±
0.1mm hepes的advanced dmem/f12培养液。2.根据权利要求1所述的类器官培养液,其特征在于,还包括100
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5u/ml的青霉素和链霉素。3.根据权利要求1所述的类器官培养液,其特征在于,所述产wnt-3a、r-spondin1和noggin的wrn细胞系条件培养基的制备方法包括:解冻低代数的l-wrn细胞,在dmem培养基中培养22-26h,然后换成加入g418和hygromycin的常规培养基至交汇;在37℃te消化3-5分钟,用常规培养基重悬,传代比率为1:4-1:6;培养3-4天后至交汇后,将常规培养基换成原代培养基;培养22-26h后,离心收集上清;用同等体积的原代培养基继续培养,每隔22-26h,收集上清,培养三至五次,汇总全部上清,然后加入等体积的原代培养基,即得。4.一种结直肠癌类器官的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:样本的取样和预处理:在结直肠癌患者手术样本的边缘突起实质部分剪切组织,低温培养基保存送至实验室,清洗干净;结直肠癌单细胞的分离:清洗干净后的组织剪切至无可见颗粒为止,按10ml/1g加入酶消化液进行消化,至消化液里大量颗粒沉淀变为絮状物为止;过滤获得细胞,加入权利要求1-3任一项所述细胞培养液,得到细胞混悬液;结直肠癌组织消化后细胞体外培养:将细胞混悬液和基质胶按照体积比为1:1.5-3混合,得混合物,每40ul混合物中含有结直肠癌单细胞2~3万个;然后所述混合物接种于六孔板中,培养4-6天后进行传代。5.根据权利要求4所述的结直肠癌类器官的培养方法,其特征在于,所述培养于37℃培养箱中,固化后加入新鲜配制的结直肠癌类器官培养液,继续培养。6.根据权利要求4所述的结直肠癌类器官的培养方法,其特征在于,按照1:4-1:6的传代比率进行传代,传代后可稳定生长,且在传代前不需要再次更换新鲜的培养基。7.根据权利要求4所述的结直肠癌类器官的培养方法,其特征在于,所述酶消化液为含1
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0.1mg/ml的胶原酶ⅳ、100
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5μg/ml的dna酶、100
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5μg/ml的透明质酸酶和10
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1μm的y-27632。8.根据权利要求4所述的结直肠癌类器官的培养方法,其特征在于,剪切组织为0.4g-1g;和/或所述酶消化液的用量为每1g组织加入8-12ml。9.根据权利要求4所述的结直肠癌类器官的培养方法,其特征在于,剪切组织为0.45g-0.55g;和/或细胞混悬液和基质胶按照体积比为1:1.8-2.2混合。10.根据权利要求4-9任一项所述培养方法得到的结直肠癌类器官。