含马铃薯X病毒片段的黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变体质粒载体及其应用的制作方法

文档序号:23853198发布日期:2021-02-05 14:45阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种含马铃薯x病毒片段的黄瓜花叶病毒rna2弱毒突变体质粒载体,其特征在于,所述质粒载体含有cmv
fny
株系rna2全序列,并在2b蛋白编码框中插入提前终止密码子及马铃薯x病毒的保守片段。2.根据权利要求1所述的质粒载体,其特征在于,所述马铃薯x病毒的保守片段为马铃薯x病毒5890-6089位200bp的保守片段,其核苷酸序列如seq id no.1所示。3.根据权利要求1所述的质粒载体,其特征在于,所述质粒载体的核苷酸序列如seq id no.2所示。4.权利要求1-3任一项所述的质粒载体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)以cmv
fny rna2侵染性克隆质粒pcb301-cmv
fny2
为模板,利用反向pcr扩增技术获得中间载体pcb301-cmv
fny-r2-2bpt;(2)利用rt-pcr从pvx侵染的烟草中扩增得到pvx的保守区段5890-6089区域的200bp片段;(3)利用酶切和连接方法将pvx片段插入到中间载体中,构建得到含pvx片段的黄瓜花叶病毒rna2弱毒突变体质粒pcb301-cmv
fny-r2-2bpt-pvx
5890-6089
。5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,用于反向pcr扩增的引物序列分别如seq id no.3和seq id no.4所示。6.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述中间载体是2661位g后引入taatag,然后依次引入bamh i、spei和sma i酶切位点。7.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中,用于扩增pvx片段的引物序列分别如seq id no.5和seq id no.6所示。8.权利要求1-3任一项所述的质粒载体在弱毒疫苗制备和/或研究中的应用。9.权利要求1-3任一项所述的质粒载体在植物病毒病防治中的应用,所述植物病毒病是由黄瓜花叶病毒和/或马铃薯x病毒引起的。10.一种含权利要求1-3任一项所述的质粒载体的重组菌。
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