一种高品质达肝素钠的制备方法与流程

[0001]
本发明属于达肝素钠生产技术领域。更具体地，涉及一种高品质达肝素钠的制备方法。


背景技术：

[0002]
肝素是广泛存在于一些哺乳动物脏器中的硫酸氨基葡聚糖，属糖胺聚糖类产品，与金属离子结合成盐，在临床上主要用于抗凝血和防治血栓栓塞性疾病，还具有抗炎、抗动脉粥样硬化、抗病毒、抗哮喘及抗肿瘤等多种生物功能。其中，达肝素钠为肝素钠经亚硝酸解聚所得的一种低分子肝素钠盐，其抗血栓作用优于肝素，具有皮下注射吸收良好、生物利用度高、体内半衰期长、出血倾向小等优点，并且能有效解决未分级肝素钠长期使用后易出现的出血、骨质疏松、诱导血小板减少等，目前已广泛应用于临床。
[0003]
目前，现有技术公开了一些达肝素钠的制备方法，如中国专利申请cn104045744a公开了一种达肝素钠的制备方法，该方法经过肝素钠降解、还原、阴离子交换层析、酒精沉淀、除菌等步骤制备得到达肝素钠，简单易行、自动化程度高，操作简便。但是起始原料肝素钠的结构与组成复杂，该方法制备得到的达肝素钠仍存在重均分子量控制不到位，各批次质量不均一，产率低，溶解澄清度差，杂质含量多，产品品质低等问题。


技术实现要素：

[0004]
本发明要解决的技术问题是克服现有达肝素钠制备方法得到的达肝素钠存在重均分子量控制不到位，各批次质量不均一，溶解澄清度差，杂质含量多，产品品质低的缺陷和不足，提供一种控制重均分子量各批次质量均一，溶解澄清度好，脱色除杂，产率高的高品质达肝素钠的制备方法。
[0005]
本发明的目的是提供一种高品质达肝素钠的制备方法。
[0006]
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
[0007]
一种高品质达肝素钠的制备方法，包括以下步骤：
[0008]
s1、降解：取肝素钠加入质量体积比1:(20～30)g/ml水，搅拌溶解，调节ph为2.0～4.0，加入亚硝酸钠，20～30℃反应2～3h，得降解液a；
[0009]
s2、还原：将步骤s1所得降解液a调节ph为9.0～10.5，加入硼氢化钠，搅拌反应8～10h，反应后调节ph为6.5～7.5，得还原液x；
[0010]
s3、醇沉：于步骤s2所得还原液x中加入氯化钠，过滤，加入体积比为1:(6～7)的乙醇，搅拌均匀，在18℃以下静置沉淀4h以上，得沉淀物o；
[0011]
s4、超滤：于步骤s3所得沉淀物o中加入质量体积比为1:(20～25)g/ml水，溶解后用超滤膜进行超滤，得超滤透过液h和超滤截留液i；
[0012]
s5、二次降解：将步骤s4所得超滤截留液i调节ph为2.0～4.0，加入亚硝酸钠，20～30℃反应2～3h，得降解液b；
[0013]
s6、二次还原：将步骤s5所得降解液b调节ph为9.0～10.5，加入硼氢化钠，搅拌反
应8～10h，反应后调节ph为6.5～7.5，得还原液y；
[0014]
s7、氧化：将步骤s4所得超滤透过液h和步骤s6所得还原液y合并，调节ph为9.0～10.5，加入过氧化氢溶液，20～30℃反应6～8h，得氧化液；
[0015]
s8、二次醇沉：将步骤s7所得氧化液过滤，滤液中加入氯化钠，调节ph为6.0～7.0，加入体积比为1:(6～7)的乙醇，搅拌均匀，在18℃以下静置沉淀4h以上，得沉淀物p；
[0016]
s9、二次超滤：于步骤s8所得沉淀物p中加入质量体积比为1:(20～25)g/ml水，溶解后用超滤膜进行超滤，得超滤截留液j；
[0017]
s10、三次醇沉：于步骤s9所得超滤截留液j中加入氯化钠，调节ph为6.2～7.4，加入体积比为1:(7～9)的乙醇，搅拌均匀，在18℃以下静置沉淀6h以上，得沉淀物q，干燥，即得。
[0018]
进一步地，步骤s1中，所述亚硝酸钠的添加量为肝素钠重量的1～2％。
[0019]
更进一步地，步骤s2中，所述硼氢化钠的添加量为肝素钠重量的0.3～1％。
[0020]
进一步地，步骤s4中，所述超滤膜截留分子量为10000d，所述超滤当超滤出料液总体积50～60％的透过液时，停止超滤。
[0021]
更进一步地，步骤s5中，所述亚硝酸钠的添加量为肝素钠重量的0.25～0.5％。
[0022]
进一步地，步骤s6中，所述硼氢化钠的添加量为肝素钠重量的0.1～0.2％。
[0023]
更进一步地，步骤s7中，所述过氧化氢溶液的质量分数为30％，添加量为合并料液总体积的1.0～1.2％。
[0024]
进一步地，步骤s9中，所述超滤膜截留分子量为1000d，所述超滤为先超滤出料液总体积15％的透过液，然后向料液补加总体积5％的水；当超滤出料液总体积15％的透过液时，再补加总体积5％的纯化水；当超滤出料液总体积10％的透过液时，所得截留液即为超滤截留液j。
[0025]
更进一步地，步骤s3、s8、s10中，所述氯化钠的添加量为料液总重量的1～2％。
[0026]
进一步地，步骤s3中，所述过滤采用微孔过滤器过滤，所述微孔过滤器过滤孔径为0.45μm；步骤s8中，所述过滤采用微孔过滤器过滤，所述微孔过滤器过滤孔径为0.22μm。
[0027]
更进一步地，所述调节ph的试剂为4～6mol/l的盐酸溶液或20wt％的氢氧化钠溶液。
[0028]
本发明具有以下有益效果：
[0029]
本发明一种高品质达肝素钠的制备方法，以肝素钠作为原料依次经过降解、还原、醇沉、超滤、二次降解、二次还原、氧化、二次醇沉、二次超滤、三次醇沉的步骤制备得到达肝素钠，所得达肝素钠重均分子量各批次质量均一，溶解澄清度好，杂质含量少，且该方法操作简单，回收率高，非常适用于大规模产业化生产，具有较好的经济和社会效益。
具体实施方式
[0030]
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
[0031]
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0032]
实施例1一种高品质达肝素钠的制备方法
[0033]
所述高品质达肝素钠的制备方法包括以下步骤：
[0034]
s1、降解：称取肝素钠，加入质量体积比1:20g/ml的纯化水，搅拌溶解，用6mol/l的盐酸调节ph为2.0，加入肝素钠重量1％的亚硝酸钠，20℃反应2h，得降解液a；
[0035]
s2、还原：将步骤s1所得降解液a用20％氢氧化钠溶液调节ph为9.0，加入肝素钠重量0.3％的硼氢化钠，搅拌反应8h，反应后用4mol/l的盐酸调节ph为6.5，得还原液x；
[0036]
s3、醇沉：于步骤s2所得还原液x中加入料液总重量1％的氯化钠，0.45μm微孔过滤器过滤，加入体积比为1:6的乙醇，搅拌30分钟使均匀，在18℃以下静置沉淀4h，得沉淀物o；
[0037]
s4、超滤：于步骤s3所得沉淀物o中加入质量体积比为1:20g/ml纯化水，搅拌溶解后用截留分子量为10000d超滤膜进行超滤，当超滤出料液总体积50％的透过液时，停止超滤，得超滤透过液h和超滤截留液i；
[0038]
s5、二次降解：将步骤s4所得超滤截留液i用6mol/l的盐酸调节ph为2.0，加入肝素钠重量0.25％的亚硝酸钠，20℃持续搅拌反应2h，得降解液b；
[0039]
s6、二次还原：将步骤s5所得降解液b用20％氢氧化钠溶液调节ph为9.0，加入肝素钠重量0.1％的硼氢化钠，搅拌反应8h，反应后用4mol/l的盐酸调节ph为6.5，得还原液y；
[0040]
s7、氧化：将步骤s4所得超滤透过液h和步骤s6所得还原液y合并，用20％氢氧化钠溶液调节ph为9.0，加入料液总体积1.0％质量分数为30％的过氧化氢溶液，20℃反应6h，得氧化液；
[0041]
s8、二次醇沉：将步骤s7所得氧化液用0.22μm的微孔过滤器过滤，滤液中加入总重量1％的氯化钠，用4mol/l盐酸溶液调节ph为6.0，加入体积比为1:6的乙醇，搅拌30分钟使均匀，在18℃以下静置沉淀4h，得沉淀物p；
[0042]
s9、二次超滤：于步骤s8所得沉淀物p中加入质量体积比为1:20g/ml的纯化水，溶搅拌解后用截留分子量为1000d超滤膜进行超滤，先超滤出料液总体积15％的透过液，然后向料液补加总体积5％的水；当超滤出料液总体积15％的透过液时，再补加总体积5％的纯化水；当超滤出料液总体积10％的透过液时，得超滤截留液j；
[0043]
s10、三次醇沉：于步骤s9所得超滤截留液j中加入总重量2％的氯化钠，调节ph为6.2，加入体积比为1:8的乙醇，搅拌30分钟使均匀，在18℃以下静置沉淀6h，得沉淀物q，减压真空干燥，即得。
[0044]
实施例2一种高品质达肝素钠的制备方法
[0045]
所述高品质达肝素钠的制备方法包括以下步骤：
[0046]
s1、降解：称取肝素钠，加入质量体积比1:25g/ml的纯化水，搅拌溶解，用6mol/l的盐酸调节ph为3.0，加入肝素钠重量1.5％的亚硝酸钠，25℃反应2.5h，得降解液a；
[0047]
s2、还原：将步骤s1所得降解液a用20％氢氧化钠溶液调节ph为10.0，加入肝素钠重量0.6％的硼氢化钠，搅拌反应9h，反应后用4mol/l的盐酸调节ph为7.0，得还原液x；
[0048]
s3、醇沉：于步骤s2所得还原液x中加入料液总重量1％的氯化钠，0.45μm微孔过滤器过滤，加入体积比为1:6.5的乙醇，搅拌30分钟使均匀，在18℃以下静置沉淀4h，得沉淀物o；
[0049]
s4、超滤：于步骤s3所得沉淀物o中加入质量体积比为1:22g/ml纯化水，搅拌溶解后用截留分子量为10000d超滤膜进行超滤，当超滤出料液总体积55％的透过液时，停止超滤，得超滤透过液h和超滤截留液i；
[0050]
s5、二次降解：将步骤s4所得超滤截留液i用6mol/l的盐酸调节ph为3.0，加入肝素
钠重量0.4％的亚硝酸钠，25℃持续搅拌反应2.5h，得降解液b；
[0051]
s6、二次还原：将步骤s5所得降解液b用20％氢氧化钠溶液调节ph为10.0，加入肝素钠重量0.15％的硼氢化钠，搅拌反应9h，反应后用4mol/l的盐酸调节ph为7.0，得还原液y；
[0052]
s7、氧化：将步骤s4所得超滤透过液h和步骤s6所得还原液y合并，用20％氢氧化钠溶液调节ph为9.5，加入料液总体积1.1％质量分数为30％的过氧化氢溶液，25℃反应7h，得氧化液；
[0053]
s8、二次醇沉：将步骤s7所得氧化液用0.22μm的微孔过滤器过滤，滤液中加入总重量1％的氯化钠，用4mol/l盐酸溶液调节ph为6.5，加入体积比为1:6.5的乙醇，搅拌30分钟使均匀，在18℃以下静置沉淀4h，得沉淀物p；
[0054]
s9、二次超滤：于步骤s8所得沉淀物p中加入质量体积比为1:22g/ml的纯化水，溶搅拌解后用截留分子量为1000d超滤膜进行超滤，先超滤出料液总体积15％的透过液，然后向料液补加总体积5％的水；当超滤出料液总体积15％的透过液时，再补加总体积5％的纯化水；当超滤出料液总体积10％的透过液时，得超滤截留液j；
[0055]
s10、三次醇沉：于步骤s9所得超滤截留液j中加入总重量2％的氯化钠，调节ph为6.8，加入体积比为1:8的乙醇，搅拌30分钟使均匀，在18℃以下静置沉淀6h，得沉淀物q，减压真空干燥，即得。
[0056]
实施例3一种高品质达肝素钠的制备方法
[0057]
所述高品质达肝素钠的制备方法包括以下步骤：
[0058]
s1、降解：称取肝素钠，加入质量体积比1:30g/ml的纯化水，搅拌溶解，用6mol/l的盐酸调节ph为4.0，加入肝素钠重量2％的亚硝酸钠，30℃反应3h，得降解液a；
[0059]
s2、还原：将步骤s1所得降解液a用20％氢氧化钠溶液调节ph为10.5，加入肝素钠重量1％的硼氢化钠，搅拌反应10h，反应后用4mol/l的盐酸调节ph为7.5，得还原液x；
[0060]
s3、醇沉：于步骤s2所得还原液x中加入料液总重量1％的氯化钠，0.45μm微孔过滤器过滤，加入体积比为1:7的乙醇，搅拌30分钟使均匀，在18℃以下静置沉淀4h，得沉淀物o；
[0061]
s4、超滤：于步骤s3所得沉淀物o中加入质量体积比为1:25g/ml纯化水，搅拌溶解后用截留分子量为10000d超滤膜进行超滤，当超滤出料液总体积60％的透过液时，停止超滤，得超滤透过液h和超滤截留液i；
[0062]
s5、二次降解：将步骤s4所得超滤截留液i用6mol/l的盐酸调节ph为4.0，加入肝素钠重量0.5％的亚硝酸钠，30℃持续搅拌反应3h，得降解液b；
[0063]
s6、二次还原：将步骤s5所得降解液b用20％氢氧化钠溶液调节ph为10.5，加入肝素钠重量0.2％的硼氢化钠，搅拌反应10h，反应后用4mol/l的盐酸调节ph为7.5，得还原液y；
[0064]
s7、氧化：将步骤s4所得超滤透过液h和步骤s6所得还原液y合并，用20％氢氧化钠溶液调节ph为10.0，加入料液总体积1.2％质量分数为30％的过氧化氢溶液，30℃反应78h，得氧化液；
[0065]
s8、二次醇沉：将步骤s7所得氧化液用0.22μm的微孔过滤器过滤，滤液中加入总重量1％的氯化钠，用4mol/l盐酸溶液调节ph为7.0，加入体积比为1:7的乙醇，搅拌30分钟使均匀，在18℃以下静置沉淀4h，得沉淀物p；
[0066]
s9、二次超滤：于步骤s8所得沉淀物p中加入质量体积比为1:25g/ml的纯化水，溶搅拌解后用截留分子量为1000d超滤膜进行超滤，先超滤出料液总体积15％的透过液，然后向料液补加总体积5％的水；当超滤出料液总体积15％的透过液时，再补加总体积5％的纯化水；当超滤出料液总体积10％的透过液时，得超滤截留液j；
[0067]
s10、三次醇沉：于步骤s9所得超滤截留液j中加入总重量2％的氯化钠，调节ph为7.4，加入体积比为1:8的乙醇，搅拌30分钟使均匀，在18℃以下静置沉淀6h，得沉淀物q，减压真空干燥，即得。
[0068]
对比例1一种达肝素钠的制备方法
[0069]
所述高品质达肝素钠的制备方法包括以下步骤：
[0070]
s1、降解：称取肝素钠，加入质量体积比1:30g/ml的纯化水，搅拌溶解，用6mol/l的盐酸调节ph为4.0，加入肝素钠重量2％的亚硝酸钠，30℃反应3h，得降解液；
[0071]
s2、还原：将步骤s1所得降解液用20％氢氧化钠溶液调节ph为10.5，加入肝素钠重量1％的硼氢化钠，搅拌反应10h，反应后用4mol/l的盐酸调节ph为7.5，得还原液；
[0072]
s3、醇沉：于步骤s2所得还原液中加入料液总重量1％的氯化钠，0.45μm微孔过滤器过滤，加入体积比为1:7的乙醇，搅拌30分钟使均匀，在18℃以下静置沉淀4h，得沉淀物，减压真空干燥，即得。
[0073]
实验例1达肝素钠性质测定
[0074]
对本发明实施例1～3制备得到的达肝素钠的性质进行测定，结果参见表1。
[0075]
表1达肝素钠的性质测定结果
[0076][0077]
由表1可知，本发明实施例1～3方法制备的达肝素钠回收率高，重均分子量、抗xa因子效价、抗iia因子效价等均符合标准要求，且亚硝酸、硼离子含量均较低，溶解性也较好，所得达肝素钠品质较好。
[0078]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。