苯并硫代吡喃酮类化合物及其制备方法和用途

1.本发明属于医药技术领域。特别涉及通式(i)所示的苯并硫代吡喃酮类化合物，其制备方法，以该化合物为活性成分的药物组合物，以及它们在治疗和/或预防由结核分枝杆菌引起的感染性疾病中的应用。


背景技术：

2.结核病(tuberculosis，tb)是由结核分枝杆菌引起的肺部感染致死性传染病，作为十大致死性疾病之一，现已超越艾滋病成为单一致死性感染疾病之首。据who估算，2018年全球新发结核病患者约1000万，死亡患者约145万。近年来随着多药耐药结核(mdr-tb)和广泛耐药结核(xdr-tb)发病率的增高，全球结核病的防控面临着严重的威胁。不同于敏感型结核病采用的一线药物六个月的治疗方案，利福平耐药或广泛耐药的结核病患者需要采用二线或三线抗结核药物，治疗周期较长，副作用较大，治疗费用高，这使得病人的依从性以及治疗的有效性大打折扣，增加了细菌产生耐药性的风险。相对结核病巨大的危害，目前抗结核新药因研发周期长、风险高、资金需求量大以及商业回报低而导致发展相对缓慢，临床需求与研发能力之间存在着巨大差距，多数研究仍集中在对传统抗结核药物的结构优化和联合用药等方面。自1963年第一个半合成抗结核药物利福平问世以来，直到2019年全球才有三个抗结核新药贝达喹啉、德拉马尼和pretomanid被批准上市。开发具有新作用机制的药物应对耐药菌感染，增强抗结核药物的产品线，减轻全球尤其是我国在结核病防治方面的负担，显得尤为迫切。
3.近年来，本技术发明人针对苯并硫代吡喃酮类化合物开展了系统深入的研究，并申请了专利(专利号：201810092333.x和pct/cn2018/080787)。所申请专利公开了式v-1所示化合物的实施例(实施例11)及其在治疗和/或预防结核分枝杆菌引起的感染性疾病药物中的应用，但未公开式v-2和v-3的具体实施例和实验结果。
4.

技术实现要素：

5.本发明要解决的技术问题是提供一种抗结核分枝杆菌活性强、毒性低、代谢性质和理化性质显著改善的苯并硫代吡喃酮类化合物。本发明发现，苯并硫代吡喃酮类化合物具有强的抗结核分枝杆菌作用，同时具有低细胞毒作用，肝细胞代谢稳定性和水溶性等成药性方面相较于对比化合物具有明显的改善，可用于由细菌引起的感染性疾病，特别是由结核分枝杆菌引起的肺结核疾病的治疗或预防性治疗。本发明基于以上发现而得以完成。
6.发明概述
7.为此，本发明第一方面提供通式(i)所示的化合物及其异构体、或其药学上可接受
的盐，
[0008][0009]
其中，
[0010]
x选自o或nh；
[0011]
r1选自h、c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、cn、oh、(＝o)或(＝s)；
[0012]
r2为cor3,so2r4,po3r5r6；
[0013]
r3、r4、r5、r6独立的选自c
1-c3烷基、卤代c
1-c3烷基、乙烯基、甲胺基、叔丁氧基、取代或未取代的c
3-c6环烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的萘基、取代或未取代的c
2-c9杂芳基；
[0014]
所述的c
2-c9杂芳基至少含有一个选自n、o、s中的杂原子；
[0015]
所述r3、r4、r5、r6中取代或未取代的c
3-c6环烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的萘基及取代或未取代的c
2-c9杂芳基中的取代基任选自以下基团：f、cl、br、羟基、氨基、硝基、氰基、三氟甲氧基、c
1-c3烷基、卤代c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基或c
1-c3烷胺基。
[0016]
在一优选例中，所述的化合物由通式(i)所示：
[0017]
其中，
[0018]
x选自o或nh；
[0019]
r1选自h、c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、cn、oh、(＝o)或(＝s)；
[0020]
r2选自cor3,so2r4,po3r5r6；
[0021]
r3、r4、r5、r6独立的选自c
1-c3烷基、卤代c
1-c3烷基、乙烯基、甲胺基、叔丁氧基、取代或未取代的环丙烷基、取代或未取代的环丁烷基、取代或未取代的环戊烷基、取代或未取代的环己烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的萘基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的呋喃基、取代或未取代的吡咯基、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的噻唑基、取代或未取代的喹啉基、取代或未取代的苯并五元杂环基；
[0022]
所述r3、r4、r5、r6中取代或未取代的环丙烷基、取代或未取代的环丁烷基、取代或未取代的环戊烷基、取代或未取代的环己烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的萘基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的呋喃基、取代或未取代的吡咯基、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的噻唑基、取代或未取代的喹啉基、取代或未取代的苯并五元杂环基中的取代基任选自以下基团：f、cl、br、羟基、氨基、硝基、氰基、三氟甲氧基、c
1-c3烷基、卤代c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基或c
1-c3烷胺基。
[0023]
在一些方面，式(i)化合物选自式(ii-a)所示化合物：
[0024]
[0025]
其中，x、r1、r3定义同上述优选例中x、r1、r3的定义。
[0026]
在一些方面，式(i)化合物选自式(ii-b)或(ii-c)所示化合物：
[0027][0028]
其中，x、r1、r3定义同上述优选例中x、r1、r3的定义。
[0029]
在一些方面，式(i)化合物选自式(iii-a)所示化合物：
[0030][0031]
其中，x、r1、r4定义同上述优选例中x、r1、r3的定义。
[0032]
在一些方面，式(i)化合物选自式(iii-b)或(iii-c)所示化合物：
[0033][0034]
其中，x、r1、r4定义同上述优选例中x、r1、r3的定义。
[0035]
在一些方面，式(i)化合物选自式(iv-a)所示化合物：
[0036][0037]
其中，
[0038]
r1选自h、c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、cn、oh、(＝o)或(＝s)；
[0039]
r5、r6独立的选自c
1-c3烷基、卤代c
1-c3烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的吡啶基；
[0040]
所述r5、r6中取代或未取代的苯基、取代或未取代的吡啶基中的取代基任选自以下基团：f、cl、br、氰基、三氟甲氧基、c
1-c3烷基、卤代c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基或c
1-c3烷胺基。
[0041]
在一些方面，式(i)化合物选自式(iv-b)或(iv-c)所示化合物：
[0042][0043]
其中，
[0044]
r1选自h、c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基、f、cl、br、cn、oh、(＝o)或(＝s)；
[0045]
r5、r6独立的选自c
1-c3烷基、卤代c
1-c3烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的吡啶基；
[0046]
所述r5、r6中取代或未取代的苯基、取代或未取代的吡啶基中的取代基任选自以下基团：f、cl、br、氰基、三氟甲氧基、c
1-c3烷基、卤代c
1-c3烷基、c
1-c3烷氧基或c
1-c3烷胺基。
[0047]
本发明中所述的药学上可接受的盐为本发明化合物与选自下列的酸形成的盐：盐酸、对甲苯磺酸、酒石酸、马来酸、乳酸、甲磺酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、乙酸或三氟乙酸。优选为盐酸、马来酸、对甲苯磺酸或三氟乙酸。
[0048]
根据本发明第一方面任一项的化合物，其为实施例制备的本发明目标化合物(以结构式表示的或以系统命名描述的)及其异构体，其药学可接受的盐。
[0049]
根据本发明第一方面任一项化合物，其为选自下列的化合物：
[0050]
[0051][0052]
本发明第二方面提供了制备本发明第一方面任一项所述化合物的方法，其包括以下步骤：
[0053][0054]
化合物a与化合物在合适的溶剂(例如叔丁醇、异丙醇、乙二醇、乙二醇二甲醚、dmf、dmso，优选异丙醇)中，在空气或惰性气体(ar或n2)保护下，于60-100℃下反应1-48小时，优选70℃反应4小时，得到化合物b，此化合物b中x为o；或化合物a与化合物在合适的溶剂(例如叔丁醇、异丙醇、乙二醇、乙二醇二甲醚、dmf、dmso，优选异丙醇)中，在空气或惰性气体(ar或n2)保护下，于60-100℃下反应1-48小时，优选70℃反应4小时，随后在三氟乙酸中于室温下反应1小时脱去boc保护基得到化合物b，此化合物b中x为nh。
[0055]
化合物b与化合物r2cl，在合适的溶剂(例如二氯甲烷、四氢呋喃，优选二氯甲烷)中，在碱性条件(例如4-二甲氨基吡啶、三乙胺、氢化钠、氢氧化钠、甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾、叔丁醇钠，优选4-二甲氨基吡啶、三乙胺)下，在空气或惰性气体(ar或n2)保护下，于
–
10-30℃下反应1-48小时，优选25℃反应12小时，得到式(i)化合物。
[0056]
本发明第三方面提供了一种药用组合物，其包括治疗有效量的本发明第一方面任一项所述化合物及其药学可接受的盐，以及任选的一种或多种药学可接受的辅料。
[0057]
本发明第四方面提供了本发明第一方面任一项所述化合物及其药学可接受的盐，或者本发明第三方面任一项所述药物组合物在制备治疗和/或预防结核分枝杆菌引起的感染性疾病药物中的应用。
[0058]
前面所述内容只概述了本发明的某些方面，但并不限于这方面。这些方面及其他的方面内容将在下面做更加具体完整的描述。
[0059]
发明详述
[0060]
下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。
[0061]
本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。下面是本发明所用多种术语的定义，这些定义适用于本技术整个说明书中所用的术语，除非在具体情况中另作说明。
[0062]
一般而言，术语“取代或未取代的”表示所给结构中的一个或多个氢原子被具体取代基所取代。除非其他方面表明，一个任选的取代基团可以在基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构始终不只有一个位置能被选自具体基团得一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。
[0063]ci-cj表示具有整数“i”(包含i)至整数“j”(包含j)个碳原子的部分。因此，例如c
1-c3烷基指具有1至3个(包含1和3)碳原子的烷基。例如c
2-c9杂芳基指具有2至9个(包含2和9)碳原子的杂芳基，包含四氮唑基、三氮唑基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、喹啉基。
[0064]
如本文所述的，术语“烷基”是指具有指定数目碳原子数的烷基，其为直链或支链的烷基，并且其可包括其子基团，例如提及“c
1-c3烷基”时，其还可以包括c
1-c2烷基表示的子范围的基团，以及具体基团例如甲基、乙基、正丙基、异丙基。
[0065]
如本文所述的，术语“烷氧基”和“烷胺基”属于惯用表达，是指分别通过一个氧原子或胺基连接到分子的其余部分的烷基基团，其中的烷基如本发明所述。
[0066]
如本文所述的，术语“卤代烷基”表示烷基基团上的氢被一个或多个卤素原子所取代，这样的实例包含，但并不限于，单氟甲基、双氟甲基、三氟甲基等。
[0067]
如本文所述的，术语“环烷基”是指具有指定数目环碳原子数的环状烷基，并且其可包括其子基团，例如提及“c
3-c6环烷基”时，其还可以包括c
3-c5环烷基、c
4-c6环烷基等表示的子范围的基团，以及具体基团例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
[0068]
如本文所述的，术语“c
2-c9杂芳基”在本文中指具有1至3个杂原子作为环原子，其余的环原子为碳的芳香基团，杂原子包括氧、硫和氮。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、哒嗪基、三氮唑基、四氮唑基、噁唑基、异噁唑基、嘧啶基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、吡嗪基、苯并五元杂环基等。
[0069]
如本文所述的，术语“环”表示被取代或未被取代的环烷基、被取代或未被取代的杂环基、被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的杂芳基。所谓的环包括稠环。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如“c
3-c6环”是指环绕排列3-6个原子。
[0070]
如本文所述的，术语“杂原子”是指o、s、n，包括n、s的任何氧化态的形式；伯、仲、叔胺和季铵盐的形式；或者杂环中氮原子上的氢被取代的形式。
[0071]
如本文所述的，术语“卤素”、“卤代”等表示氟(f)、氯(cl)或溴(br)。
[0072]
本发明中“室温”指的是温度由10℃到40℃。在一些实施例中，“室温”指的是温度由20℃到30℃；在另一些实施例中，室温指的是25℃。
[0073]
如本文所述的，术语“有效量”是指可在受试者中实现所期望的治疗本发明所述疾病或病症的药物用量。
[0074]
如本文所述的，术语“药学可接受的”例如在描述“药学可接受的盐”时，表示该盐不但是受试者生理学上可接受，而且还可指在药学上有使用价值的合成物质。
[0075]
如本文所述的，术语“药物组合物”，其还可以是指“组合物”，其可用于在受试者特别是哺乳动物中实现治疗本发明所述疾病或病症。
[0076]
疾病的“治疗”包括：
[0077]
(1)预防该疾病，即，使暴露至或易感染该疾病但未经历或显示该疾病症状的哺乳动物不发生该疾病的临床症状，
[0078]
(2)抑制该疾病，即，阻止或减少该疾病或其临床症状的进展，
[0079]
(3)减轻该疾病，即，引起该疾病或其临床症状的复原。
[0080]“治疗有效量”指为了治疗疾病向哺乳动物施用时足以实现对该疾病的治疗的化合物的量。治疗有效量将根据化合物、待治疗的疾病及其严重性以及哺乳动物的年龄、体重、性别等因素而变化。治疗有效量还可指足以实现所需的有益效果的化合物的任何量，该
有益效果包括如以上(1)-(3)所述的预防疾病、抑制疾病或减轻疾病。例如化合物的量可以介于0.1-250 mg/kg，或优选地，0.5-100mg/kg，或更优选地，1-50 mg/kg，或甚至更优选地，2-20 mg/kg。优选地，所述量的化合物每天两次向哺乳动物施用。更优选地，所述量的化合物每天一次向哺乳动物施用。
[0081]
如本文所述的，术语“疾病和/或病症”是指所述受试者的一种身体状态，该身体状态与本发明所述疾病和/或病症有关。例如，本发明所述疾病和/或病症指结核杆菌感染性疾病。
[0082]
如本文所述的，术语“受试者”可以指患者或者其它接受本发明式(i)化合物或其药物组合物以治疗本发明所述疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，例如人、狗、猴、牛、马等。
[0083]
本发明再一方面还涉及以本发明中的化合物作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。
[0084]
本发明中的化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。
[0085]
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
[0086]
本发明化合物可以制成普通制剂、也可以制成缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
[0087]
为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助溶剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助溶剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
[0088]
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
[0089]
为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助溶剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助溶剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
[0090]
为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、ph调节剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；ph调节剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
[0091]
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。
[0092]
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
[0093]
本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。
[0094]
有益技术效果
[0095]
本技术的发明人经过广泛的研究，合成了一系列化合物，并通过maba(microplate alamar blue assay)法以m.tuberculosis h
37
rv菌株进行最低抑菌浓度mic(minimum inhibitory concentration)测定，显示出较强的抗结核分枝杆菌活性，其中大部分化合物的最低抑菌浓度(mic)达到微摩尔水平，其中获得mic《0.5μg/ml的化合物23个，19个化合物的mic达到10-8 g/ml，与抗结核一线药物异烟肼相当且大部分化合物的活性优于对比化合物v-2及v-3，在耐药菌株测定中，本发明的化合物同样展示出良好的抗结核活性。此外本发明的化合物对vero细胞毒性低(ic
50
》64μg/ml)，优于对比化合物v-3，显示出良好的安全性。本发明的化合物普遍具有更优的人源及鼠源肝细胞代谢稳定性(t
1/2
》93.2min,cl
int
《7.4μl/min/million cell)，人源中优于对比化合物v-1，人源和鼠源均显著优于对比化合物v-2。值得注意的是本发明化合物7、化合物11的水溶性优于对比化合物v-1，显示其具有更好的理化性质。本发明提供了一类结构新颖、抗结核活性强、毒性低、代谢性质和理化性质显著改善的新化合物，其母核结构为苯并硫代吡喃酮结构，可用于由细菌引起的感染性疾病，特别是由结核分枝杆菌引起的结核病的治疗或预防性治疗，同时也可用于克服与耐药性有关的问题。
具体实施方式
[0096]
通过下面的实施例可以对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进是显而易见的。
[0097]
对于以下全部实施例，可使用本领域技术人员已知的标准操作和纯化方法。除非另有说明，所有温度以℃(摄氏度)表示。化合物的结构是通过核磁共振谱(nmr)来确定的。
[0098]
制备实施例部分
[0099]
化合物的结构是通过核磁共振氢谱(1h nmr)来确定的。核磁共振氢谱及碳谱位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。耦合常数(j)以赫兹(hz)为单位。核磁共振谱用mercury-400或mercury-500型核磁共振仪测定，氘代氯仿(cdcl3)或氘代二甲基亚砜(dmso-d6)作溶剂，四甲基硅烷(tms)为内标。
[0100]
柱层析一般使用300～400目硅胶为载体。
[0101]
无水溶剂均通过标准方法处理。其它试剂均为市售分析纯。
[0102]
实施例
[0103]
实施例1
[0104][0105]
2-(4-(4-乙酰氧基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0106]
合成路线：
[0107][0108]
实验步骤：
[0109]
第一步2-(4-(4-羟基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮b-1的制备
[0110]
于25ml反应瓶中，将2-乙基亚磺酰基-8-硝基-6-(三氟甲基)-4h-硫代色烯-4-酮(702mg，2.0mmol)(采用beilstein j.org.chem.2019.15.703-709中所报道方法合成)、1-(4-羟基环己基甲基)哌嗪(793mg，4.0mmol)溶于异丙醇(10ml)，于70℃反应4小时。减压蒸干溶剂，剩余物经硅胶(300-400目)柱色谱分离，流动相甲醇-二氯甲烷(v：v＝1～7:100)，得到化合物b-1，红色固体734mg，收率77.8％。
[0111]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ8.82(d,j＝2.4hz,2h),6.27(d,j＝3.1hz,1h),4.47(d,j＝4.4hz,1h),3.68
–
3.58(m,4h),2.49
–
2.44(m,4h),2.12(d,j＝7.1hz,2h),1.85
–
1.72(m,4h),1.47
–
1.36(m,1h),1.17
–
1.06(m,2h),0.92
–
0.80(m,2h).
[0112]
第二步2-(4-(4-乙酰氧基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮ii-1(化合物1)的制备
[0113]
于10ml反应瓶中，将化合物2-(4-(4-羟基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮b-1(94mg，0.2mmol)溶于5ml无水二氯甲烷，ar气保护。加入4-二甲氨基吡啶(36mg，0.3mmol)室温下搅拌均匀。乙酰氯(16mg，0.2mmol)加入其中，室温下搅拌4小时。减压蒸干溶剂，剩余物硅胶(300-400目)柱色谱分离，流动相甲醇-二氯甲烷(v：v＝1～3:100)。得到化合物ii-1(化合物1)，红色固体62mg，收率60.4％。
[0114]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.76(s,1h),6.25(s,1h),4.72
–
4.62(m,1h),3.71
–
3.62(m,4h),2.61-2.54(m,4h),2.22(d,j＝7.2hz,2h),2.10
–
1.96(m,5h),1.90(d,j＝13.4hz,2h),1.56
–
1.46(m,1h),1.42
–
1.32(m,2h),1.10
–
0.95(m,2h).
[0115]
实施例2
[0116][0117]
2-(4-(4-环丁甲酰氧基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0118]
以环丁甲酰氯(24mg，0.2mmol)和b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物ii-2(化合物2)，黄色固体78mg，收率70.4％。
[0119]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.76(s,1h),6.29(s,1h),4.74
–
4.62(m,1h),3.74
–
3.60(m,4h),3.24
–
3.04(m,1h),2.62
–
2.52(m,4h),2.36
–
2.12(m,6h),2.06
–
1.93(m,3h),1.95
–
1.83(m,4h),1.39
–
1.27(m,2h),1.11
–
0.96(m,2h).
[0120]
实施例3
[0121][0122]
2-(4-(4-丙烯酰氧基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0123]
以丙烯酰氯(18mg，0.2mmol)和b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物ii-3(化合物3)，黄色固体76mg，收率72.3％。
[0124]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.76(s,1h),6.40(d,j＝17.3hz,1h),6.26(s,1h),6.14(dd,j＝17.3,10.4hz,1h),5.82(d,j＝10.4hz,1h),5.16
–
5.07(m,1h),3.75
–
3.61(m,4h),2.69
–
2.53(m,4h),2.37
–
2.22(m,2h),1.99
–
1.85(m,2h),1.75
–
1.52(m,5h),1.42
–
1.29(m,2h).
[0125]
实施例4
[0126][0127]
2-(4-(4-氯代乙酰氧基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0128]
以氯乙酰氯(22mg，0.2mmol)和b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物ii-4(化合物4)，黄色固体69mg，收率63.0％。
[0129]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.76(s,1h),6.25(s,1h),4.84
–
4.73(m,1h),4.04(s,2h),3.71
–
3.61(m,4h),2.62
–
2.52(m,4h),2.21(d,j＝7.2hz,2h),2.11
–
2.01(m,2h),1.97
–
1.87(m,2h),1.54
–
1.47(m,1h),1.46
–
1.33(m,2h),1.11
–
0.96(m,2h).
[0130]
实施例5
[0131][0132]
2-(4-(4-苯甲酰氧基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0133]
以苯甲酰氯(28mg，0.2mmol)和b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物ii-5(化合物5)，黄色固体77mg，收率66.9％。
[0134]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.76(s,1h),8.07
–
8.02(m,2h),7.58
–
7.53(m,1h),7.47
–
7.41(m,2h),6.26(s,1h),4.99
–
4.89(m,1h),3.70
–
3.63(m,4h),2.63
–
2.56(m,4h),2.25(d,j＝7.2hz,2h),2.16(d,j＝10.0hz,2h),1.95(d,j＝13.5hz,2h),1.60
–
1.45(m,3h),1.17
–
1.04(m,2h).
[0135]
实施例6
[0136][0137]
2-(4-(4-(4-吡啶甲酰氧基)环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0138]
以异烟酰氯(28mg，0.2mmol)和b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物ii-6(化合物6)，黄色固体80mg，收率69.4％。
[0139]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.80
–
8.73(m,3h),7.87
–
7.82(m,2h),6.26(s,1h),5.02
–
4.91(m,1h),3.72
–
3.61(m,4h),2.65
–
2.53(m,4h),2.25(d,j＝7.2hz,2h),2.16(d,j＝12.2hz,2h),1.97(d,j＝13.5hz,2h),1.59
–
1.46(m,3h),1.19
–
1.05(m,2h).
[0140]
实施例7
[0141][0142]
2-(4-(4-甲基磺酰氧基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0143]
以甲基磺酰氯(22mg，0.2mmol)和b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iii-1(化合物7)，黄色固体68mg，收率61.9％。
[0144]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.76(s,1h),6.26(s,1h),5.02
–
4.96(m,1h),3.74
–
3.59(m,4h),3.02(s,3h),2.68
–
2.51(m,4h),2.31
–
2.15(m,2h),2.15
–
2.02(m,2h),1.78
–
1.54(m,5h),1.45
–
1.33(m,2h).
[0145]
实施例8
[0146][0147]
2-(4-(4-乙基磺酰氧基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0148]
以乙基磺酰氯(26mg，0.2mmol)和b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iii-2(化合物8)，黄色固体90mg，收率81.9％。
[0149]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.76(s,1h),6.25(s,1h),4.66
–
4.55(m,1h),3.72
–
3.59(m,4h),3.12(q,j＝7.4hz,2h),2.61
–
2.51(m,4h),2.25
–
2.14(m,4h),1.94(d,j＝13.5hz,2h),1.66
–
1.64(m,1h),1.62
–
1.50(m,2h),1.43(t,j＝7.4hz,3h),1.12
–
0.96(m,2h).
[0150]
实施例9
[0151][0152]
2-(4-(4-三氟甲基磺酰氧基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0153]
以三氟甲基磺酰氯(34mg，0.2mmol)和b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iii-3(化合物9)，黄色固体100mg，收率82.8％。
[0154]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.76(s,1h),6.26(s,1h),4.85(s,1h),3.72
–
3.59(m,4h),2.66
–
2.52(m,4h),2.31
–
2.19(m,2h),2.14
–
1.97(m,2h),1.76
–
1.58(m,5h),1.46
–
1.34(m,2h).
[0155]
实施例10
[0156][0157]
2-(4-(4-苯磺酰氧基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0158]
以苯磺酰氯(35mg，0.2mmol)和b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iii-4(化合物10)，黄色固体98mg，收率80.1％。
[0159]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.75(s,1h),7.95
–
7.90(m,2h),7.68
–
7.62(m,1h),7.59
–
7.52(m,2h),6.24(s,1h),4.52
–
4.40(m,1h),3.70
–
3.58(m,4h),2.60
–
2.47(m,4h),2.16(d,j＝7.2hz,2h),2.04
–
1.96(m,2h),1.87(d,j＝13.4hz,2h),1.74
–
1.60(m,1h),1.56
–
1.40(m,2h),1.00
–
0.88(m,2h).
[0160]
实施例11
[0161][0162]
2-(4-(4-(3-吡啶磺酰氧基)环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0163]
以吡啶-3-磺酰氯(36mg，0.2mmol)和b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iii-5(化合物11)，红色固体84mg，收率68.6％。
[0164]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(d,j＝5.1hz,2h),8.88(d,j＝4.0hz,1h),8.76(s,1h),8.21(d,j＝8.0hz,1h),7.52(dd,j＝8.2,4.8hz,1h),6.26(s,1h),4.95
–
4.88(m,0.5h),4.61
–
4.49(m,0.5h),3.81
–
3.57(m,4h),2.72
–
2.44(m,4h),2.32
–
2.14(m,2h),2.11
–
1.97(m,2h),1.98
–
1.87(m,2h),1.73
–
1.62(m,1h),1.62
–
1.46(m,2h),1.06
–
0.89(m,2h).
[0165]
实施例12
[0166][0167]
2-(4-(4-甲胺基甲酰氧基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0168]
以甲胺基甲酰氯(19mg，0.2mmol)和b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物ii-7(化合物12)，黄色固体64mg，收率60.5％。
[0169]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.75(s,1h),6.25(s,1h),4.65
–
4.50(m,1h),4.29(s,1h),3.73
–
3.56(m,4h),2.82(s,3h),2.65
–
2.52(m,4h),2.21(d,j＝7.2hz,2h),2.04(d,j＝12.0hz,2h),1.88(d,j＝13.4hz,2h),1.79
–
1.69(m,1h),1.59
–
1.47(m,2h),1.10
–
0.96(m,2h).
[0170]
实施例13
[0171][0172]
2-(4-(4-叔丁氧羰基胺基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0173]
以1-(4-n-boc-胺基环己基甲基)哌嗪(1.19g，4mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到化合物ii-8(化合物13)，黄色固体750mg，收率65.7％。
[0174]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.76(s,1h),6.25(s,1h),4.39(s,1h),3.70
–
3.57(m,4h),3.48
–
3.32(m,1h),2.80(s,2h),2.63
–
2.49(m,4h),2.20(d,j＝7.1hz,2h),2.04(d,j＝11.8hz,2h),1.86(d,j＝12.7hz,2h),1.61(s,1h),1.45(s,9h),1.17
–
0.94(m,4h).
[0175]
实施例14
[0176][0177]
合成路线：
[0178][0179]
实验步骤：
[0180]
第一步2-(4-(4-氨基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮b-2的制备
[0181]
将化合物ii-8(571mg，1.0mmol)溶解在3ml三氟乙酸中，室温下搅拌1小时。蒸干溶剂，剩余物加30ml二氯甲烷，依次用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗，水洗，饱和nacl水洗，na2so4干燥，过滤蒸干得到化合物b-2，黄色固体420mg，收率89.3％。
[0182]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.83(s,2h),6.28(s,1h),3.68
–
3.60(m,4h),2.69(s,2h),2.49
–
2.43(m,4h),2.12(d,j＝7.2hz,2h),1.75(d,j＝11.3hz,4h),1.45
–
1.35(m,1h),1.07
–
0.94(m,2h),0.94
–
0.80(m,2h).
[0183]
第二步2-(4-(4-乙酰胺基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0184]
以乙酰氯(16mg，0.2mmol)和化合物b-2(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物ii-9(化合物14)，黄色固体78mg，收率76.1％。
[0185]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.76(s,1h),6.25(s,1h),5.27(d,j＝8.3hz,1h),3.80
–
3.69(m,1h),3.69
–
3.61(m,4h),2.63
–
2.50(m,4h),2.21(d,j＝7.1hz,2h),2.04(d,j＝11.5hz,2h),1.97(s,3h),1.87(d,j＝12.2hz,2h),1.59(s,1h),1.16
–
0.99(m,4h).
[0186]
实施例15
[0187][0188]
2-(4-(4-苯甲酰基胺基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0189]
以苯甲酰氯(28mg，0.2mmol)和化合物b-2(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物ii-10(化合物15)，黄色固体95mg，收率82.7％。
[0190]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.76(s,1h),7.78
–
7.73(m,2h),7.52
–
7.46(m,1h),7.46
–
7.40(m,2h),6.25(s,1h),5.94(d,j＝8.1hz,1h),4.02
–
3.91(m,1h),3.69
–
3.63(m,4h),2.63
–
2.55(m,4h),2.24(d,j＝7.1hz,2h),2.16(d,j＝10.9hz,2h),1.92(d,j
＝12.5hz,2h),1.57
–
1.45(m,1h),1.31
–
1.17(m,2h),1.17
–
1.04(m,2h).
[0191]
实施例16
[0192][0193]
2-(4-(4-苯磺酰基胺基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0194]
以苯磺酰氯(35mg，0.2mmol)和化合物b-2(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iii-6(化合物16)，黄色固体103mg，收率84.3％。
[0195]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.75(s,1h),7.94
–
7.85(m,2h),7.62
–
7.55(m,1h),7.55
–
7.47(m,2h),6.25(s,1h),4.38(d,j＝7.7hz,1h),3.71
–
3.58(m,4h),3.23
–
3.03(m,1h),2.63
–
2.47(m,4h),2.20(m,2h),1.89(d,j＝14.1hz,2h),1.81(d,j＝13.4hz,2h),1.45
–
1.33(m,1h),1.20
–
1.04(m,2h),0.98
–
0.81(m,2h).
[0196]
实施例17
[0197][0198]
2-(4-(4-甲磺酰基胺基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0199]
以甲磺酰氯(22mg，0.2mmol)和化合物b-2(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iii-7(化合物17)，黄色固体88mg，收率80.2％。
[0200]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.76(s,1h),6.25(s,1h),4.12(d,j＝7.7hz,1h),3.72
–
3.58(m,4h),3.35
–
3.22(m,1h),2.99(s,3h),2.64
–
2.50(m,4h),2.21(d,j＝7.0hz,2h),2.12(d,j＝12.3hz,2h),1.90(d,j＝13.2hz,2h),1.52
–
1.40(m,1h),1.34
–
1.17(m,2h),1.10
–
0.94(m,2h).
[0201]
实施例18
[0202][0203]
2-(4-(4-(o,o-二甲基磷酰胺基)环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0204]
以o,o-二甲基磷酰氯(28mg，0.2mmol)和化合物b-2(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iv-1(化合物18)，黄色固体91mg，收率78.6％。
[0205]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.76(s,1h),6.25(s,1h),3.73(s,3h),3.71(s,3h),3.70
–
3.63(m,4h),3.00
–
2.89(m,1h),2.68
–
2.54(m,4h),2.41(t,j＝9.8hz,1h),
2.29
–
2.18(m,2h),2.05(d,j＝12.5hz,2h),1.87(d,j＝13.3hz,2h),1.52
–
1.42(m,1h),1.22
–
1.08(m,2h),1.07
–
0.91(m,2h).
[0206]
实施例19
[0207][0208]
2-(4-(4-(o,o-二苯基磷酰胺基)环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0209]
以氯磷酸二苯酯(54mg，0.2mmol)和化合物b-2(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iv-2(化合物19)，黄色固体103mg，收率73.3％。
[0210]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.76(s,1h),7.38
–
7.29(m,4h),7.29
–
7.22(m,4h),7.17(t,j＝7.3hz,2h),6.24(s,1h),3.69
–
3.59(m,4h),3.27
–
3.13(m,1h),2.87
–
2.77(m,1h),2.60
–
2.49(m,4h),2.19(d,j＝7.2hz,2h),2.02(d,j＝12.4hz,2h),1.84(d,j＝13.2hz,2h),1.47
–
1.37(m,1h),1.22
–
1.08(m,2h),1.05
–
0.91(m,2h).
[0211]
实施例20
[0212][0213]
2-(4-(4-(n
’‑
甲基脲基)环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0214]
以甲胺基甲酰氯(18mg，0.2mmol)和化合物b-2(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物ii-11(化合物20)，黄色固体78mg，收率73.9％。
[0215]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.85(s,2h),6.30(s,1h),5.72(d,j＝7.9hz,1h),5.57(d,j＝5.2hz,1h),3.73
–
3.54(m,4h),3.33
–
3.21(m,1h),2.55
–
2.42(m,7h),2.14(d,j＝7.1hz,2h),1.85
–
1.72(m,4h),1.51
–
1.38(m,1h),1.12
–
1.01(m,2h),0.96
–
0.86(m,2h).
[0216]
实施例21
[0217][0218]
2-(4-(4-(2-呋喃甲酰氧基)环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0219]
以2-呋喃甲酰氯(26mg，0.2mmol)和化合物b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物ii-12(化合物21)，黄色固体90mg，收率79.6％。
[0220]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.76(s,1h),7.58(s,1h),7.18(s,1h),6.51(s,1h),6.25(s,1h),5.03
–
4.87(m,1h),3.80
–
3.59(m,4h),2.70
–
2.51(m,4h),2.33
–
2.19
(m,2h),2.14(d,j＝12.3hz,2h),1.95(d,j＝13.6hz,2h),1.64
–
1.42(m,3h),1.19
–
1.01(m,2h).
[0221]
实施例22
[0222][0223]
2-(4-(4-(2-噻吩甲酰氧基)环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0224]
以2-噻吩甲酰氯(29mg，0.2mmol)和化合物b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物ii-13(化合物22)，黄色固体98mg，收率84.2％。
[0225]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.76(s,1h),7.79(dd,j＝3.7,1.3hz,1h),7.54(dd,j＝4.9,1.3hz,1h),7.10(dd,j＝5.0,3.7hz,1h),6.25(s,1h),4.96
–
4.84(m,1h),3.71
–
3.62(m,4h),2.63
–
2.54(m,4h),2.24(d,j＝7.2hz,2h),2.15(d,j＝10.4hz,2h),1.94(d,j＝13.5hz,2h),1.56
–
1.42(m,3h),1.17
–
1.02(m,2h).
[0226]
实施例23
[0227][0228]
2-(4-(4-异丙基磺酰氧基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0229]
以异丙基磺酰氯(28mg，0.2mmol)和化合物b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iii-8(化合物23)，黄色固体91mg，收率78.8％。
[0230]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.76(s,1h),6.25(s,1h),4.27
–
4.16(m,1h),3.71
–
3.61(m,4h),2.62
–
2.52(m,4h),2.25
–
2.12(m,4h),1.94(d,j＝13.7hz,2h),1.74(s,6h),1.62
–
1.46(m,4h),1.09
–
0.94(m,2h).
[0231]
实施例24
[0232][0233]
2-(4-(4-(4-硝基苯磺酰氧基)环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0234]
以4-硝基苯磺酰氯(44mg，0.2mmol)和化合物b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iii-9(化合物24)，黄色固体104mg，收率79.2％。
[0235]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.75(s,1h),8.40(d,j＝8.9hz,2h),8.12(d,j＝8.9hz,2h),6.24(s,1h),4.64
–
4.51(m,1h),3.70
–
3.57(m,4h),2.63
–
2.48(m,4h),2.17
(d,j＝7.2hz,2h),2.04(d,j＝12.5hz,2h),1.91(d,j＝13.7hz,2h),1.60
–
1.47(m,3h),1.04
–
0.89(m,2h).
[0236]
实施例25
[0237][0238]
2-(4-(4-(4-甲氧基苯磺酰氧基)环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0239]
以4-甲氧基苯磺酰氯(41mg，0.2mmol)和化合物b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iii-10(化合物25)，黄色固体99mg，收率77.1％。
[0240]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.75(s,1h),7.85(d,j＝8.8hz,2h),7.00(d,j＝8.9hz,2h),6.24(s,1h),4.47
–
4.33(m,1h),3.89(s,3h),3.70
–
3.56(m,4h),2.60
–
2.47(m,4h),2.16(d,j＝7.3hz,2h),1.99(d,j＝12.6hz,2h),1.86(d,j＝13.8hz,2h),1.52
–
1.42(m,3h),1.00
–
0.87(m,2h).
[0241]
实施例26
[0242][0243]
2-(4-(4-(2-萘磺酰氧基)环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0244]
以2-萘磺酰氯(45mg，0.2mmol)和化合物b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iii-11(化合物26)，黄色固体84mg，收率63.5％。
[0245]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.11(s,1h),8.75(s,1h),8.50(s,1h),8.00(d,j＝9.1hz,2h),7.94(d,j＝7.0hz,1h),7.87(dd,j＝8.7,1.9hz,1h),7.72
–
7.62(m,2h),6.22(s,1h),4.55
–
4.43(m,1h),3.69
–
3.56(m,4h),2.58
–
2.46(m,4h),2.14(d,j＝7.2hz,2h),2.01(d,j＝12.5hz,2h),1.85(d,j＝13.6hz,2h),1.58
–
1.44(m,3h),0.99
–
0.83(m,2h).
[0246]
实施例27
[0247][0248]
2-(4-(4-(2,3-二氢苯并呋喃-5-磺酰氧基)环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0249]
以2,3-二氢苯并呋喃-5-磺酰氯(44mg，0.2mmol)和化合物b-1(94mg，0.2mmol)为
原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物iii-12(化合物27)，黄色固体90mg，收率68.8％。
[0250]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.75(s,1h),7.74
–
7.68(m,2h),6.86(d,j＝8.3hz,1h),6.24(s,1h),4.70(t,j＝8.8hz,2h),4.46
–
4.33(m,1h),3.68
–
3.59(m,4h),3.29(t,j＝8.8hz,2h),2.59
–
2.49(m,4h),2.16(d,j＝7.2hz,2h),2.01(d,j＝12.6hz,2h),1.87(d,j＝13.5hz,2h),1.54
–
1.44(m,3h),1.01
–
0.88(m,2h).
[0251]
实施例28
[0252][0253]
2-(4-(4-(4-乙氧基苯甲酰氧基)环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮
[0254]
以4-乙氧基苯甲酰氯(37mg，0.2mmol)和化合物b-1(94mg，0.2mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到化合物ii-14(化合物28)，黄色固体98mg，收率79.1％。
[0255]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.76(s,1h),7.98(s,2h),6.90(s,2h),6.25(s,1h),4.90(s,1h),4.09(s,2h),3.80
–
3.53(m,4h),2.70
–
2.46(m,4h),2.33
–
2.21(m,2h),2.21
–
2.07(m,2h),2.01
–
1.86(m,2h),1.62
–
1.36(m,6h),1.22
–
0.96(m,2h).
[0256]
对比例
[0257]
对比例1
[0258][0259]
2-(4-(环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮(化合物v-1)
[0260]
化合物v-1参照专利201810092333.x和pct/cn2018/080787实施例11(化合物11)合成，并测定了其体外抗结核分枝杆菌活性和初步成药性。
[0261]
对比例2
[0262][0263]
2-(4-(4-羟基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮(化合物v-2)
[0264]
采用本技术实施例1中化合物b-1的合成方法得到式v-2所示化合物，并测定了其
体外抗结核分枝杆菌活性和初步成药性。
[0265]
对比例3
[0266][0267]
2-(4-(4-氨基环己基甲基)哌嗪-1-基)-6-(三氟甲基)-8-硝基-苯并硫代吡喃-4-酮(化合物v-3)
[0268]
采用本技术实施例14中化合物b-2的合成方法得到式v-3所示化合物，并测定了其体外抗结核分枝杆菌活性和初步成药性。
[0269]
生物活性测试
[0270]
1、体外抗结核活性测试
[0271]
测定方法：microplate alamar blue assay(maba)法测定体外抗结核活性。
[0272]
实验原理：alamar blue加入培养基可作为氧化还原指示剂，颜色由蓝色向红色转变，反映所研究的微生物对氧分子的消耗。alamar blue的颜色改变可用光度计测定，其发射波长为590 nm。
[0273]
实验方法：无菌96孔板(falcon3072；becton dickinson,lincoln park,n.j.)，实验化合物以dmso溶解，制成浓度为5 mg/ml的初溶液，最高浓度孔加入199μl7h9培养基，1μl化合物初溶液，混合均匀后，向其余各孔依次2倍稀释，化合物终浓度为：25、12.5、6.25、3.125、1.56、0.78、0.39、0.2、0.1、0.05、0.025、0.016、0.008、0.004、0.001μg/ml。选取结核分枝杆菌标准株h
37rv
培养2～3周的培养物制成菌悬液，接种到含0.05％吐温80、10％adc的7h9培养基中，37℃静止培养1～2周，生长至浊度为mcfarland 1(相当于107cfu/ml)时，1：20稀释后，加入各孔100μl，菌液的终浓度为10
6 cfu/ml。每板上均设2个不含抗菌药的生长对照孔，96孔板于37℃孵育。7天后加入生长对照孔20μl10
×
alamar blue和5％tween80 50μl的混合液，37℃孵育24小时，如果颜色从蓝色变为粉色，则在各实验药物的孔内加入上述量的alamar blue和tween 80混合液，37℃孵育24小时记录各孔的颜色，并应用酶标仪测定590 nm荧光值，计算mic。
[0274]
表1、本发明部分化合物体外抗结核分枝杆菌h
37rv
活性
[0275][0276][0277]
表2、本发明部分化合物体外抗耐药结核分枝杆菌活性
[0278][0279]a耐异烟肼，链霉素，利福平，乙胺丁醇，对氨基水杨酸，丙硫异酰胺和卷曲霉素
[0280]b耐异烟肼，链霉素，利福平，乙胺丁醇，利福喷丁，对氨基水杨酸，氧氟沙星
[0281]
结论：
[0282]
由表1及表2数据可知，本发明中的化合物具有很强的体外抗结核敏感菌和耐药菌的活性，并且大部分化合物的活性优于对比化合物v-2、v-3，值得注意的是化合物7、化合物8及化合物11的抗敏感及耐药菌的活性达到了10-9 g/ml，显示出极强的体外抗结核活性。
[0283]
2、细胞毒性测试
[0284]
测定方法：mtt法
[0285]
实验原理：细胞活性通过线粒体内脱氢酶(如琥珀酸脱氢酶)将氧化态的3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(商品名：噻唑蓝)/mtt[3-(4,5-dimethylthiazo-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide]还原为难溶的蓝色甲臜(formazan)化合物，经dmso溶解后显色来测定，转化量与活细胞数量呈正性相关。
[0286]
实验方法：1.细胞悬液的制备。将已培养至对数生长期的vero细胞用0.25％胰酶消化2～3min，吸弃消化液，加入适量培养液，混匀后取20μl用血球计数仪在显微镜下计数，配制成合适浓度的细胞悬液，备用。同时用pbs(phosphate buffered solution)配制5g/l的mtt溶液，过滤除菌，备用。2.药物配制与细胞毒性检测。将受试药物溶于dmso中，以培养基稀释50倍，制成受试的最高浓度，然后用培养基在96孔板上按1∶3进行系列稀释，每个化合物设6个浓度，最高浓度64μg/ml,每个浓度设6个平行孔，50μl/孔。将制备好的细胞悬液接种于96孔板内，50μl/孔，细胞浓度4
×
105个/ml.。同时设不含药的细胞对照孔及培养基空白对照孔。培养48小时后，加入mtt 10μl/孔，继续培养4小时。取出培养板，小心弃去孔内培养基，每孔加dmso100μl，振荡至甲臜颗粒完全溶解后，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光密度值(od
570
)。3.数据处理。细胞抑制百分率(％)＝[(细胞对照od
570
值－加药组od
570
值)/(细胞对照od
570
值－空白od
570
值)]
×
100％。用origin7.0软件进行剂量－反应关系曲线拟合，计算各种化合物对细胞抑制率50％时的浓度(ic
50
)。
[0287]
表3、本发明部分化合物vero细胞毒性
[0288][0289][0290]
结论：
[0291]
由表3数据可知，本发明的化合物的细胞毒性低，表现出了较对比化合物v-3更高的安全性。
[0292]
3、肝细胞代谢稳定性测试
[0293]
实验方法：使用来自雄性小鼠(bioreclamation ivt)和混合的人(bioreclamation ivt)的肝细胞进行测定。在1μm浓度下测试化合物，最终肝细胞浓度为1百万个细胞/ml。通过向化合物溶液(2μm)中加入预热的肝细胞溶液(200万细胞/ml)来引发反应。将反应混合物在100转/分钟的co2培养箱中于37℃孵育120分钟。在预定的时间点(0,15,30,60,90和120分钟)，取出30μl反应混合物，通过加入300μl含内标的冰冷的acn/meoh(50:50)终止反应。将样品充分混合，在4℃离心15分钟(4,000转/分)，并通过lc-ms/ms分析上清液。色谱条件：色谱柱：kinetex c18 100a(30mm
×
3.0mm，2.6μm)；柱温：室温，流动相：乙腈-水(含0.1％甲酸)梯度；流速：0.9ml/min。通过测定化合物的剩余量来评估化合物在肝细胞中的代谢稳定性。
[0294]
选取目标化合物进行人及小鼠肝细胞代谢稳定性测试。
[0295]
表4、本发明部分化合物的肝细胞代谢稳定性数据
[0296][0297][0298]
结论：
[0299]
由表4数据可知，本发明的化合物普遍具有更优的人源及鼠源肝细胞代谢稳定性，其中，人源中优于对比化合物v-1，人源和鼠源均显著优于对比化合物v-2。
[0300]
4、溶解度测试
[0301]
实验方法：取适量化合物加1ml纯净水，超声20min，用0.45μm水相滤膜过滤，取滤液，采用waters e2695-pda hplc系统检测。色谱条件：色谱柱：kromasil c
18
(250mm
×
4.6mm，5μm)，柱温：30℃，进样量：10μl，检测波长：245nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈/水(85:15，v/v)等梯度，水相为10.1mm醋酸铵缓冲溶液。
[0302]
表5、本发明部分化合物溶解度考察结果
[0303]
化合物溶解度化合物10.3μg/ml化合物5《0.5μg/ml化合物70.6μg/ml化合物1136.3μg/ml化合物v-1《0.1μg/ml
[0304]
结论：
[0305]
由表5数据可知，本发明的化合物具有较对比化合物v-1更高的水溶性，显示该类化合物具有更好的理化性质。
[0306]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。