一种大规模生产重组Exendin-4多肽的发酵方法与流程

文档序号:24556805发布日期:2021-04-06 12:07阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种大规模生产重组exendin-4多肽的发酵方法,采用pet32a(+)-exendin-4/bl21(de3)发酵培养,其特征在于,在发酵中,以乳糖作为发酵培养的诱导剂。

2.根据权利要求1所述的生产重组exendin-4多肽的发酵方法,其特征在于,诱导的条件为,加入乳糖的终浓度为5g/l-20g/l;可选的为5g/l。

3.根据权利要求1或2所述的生产重组exendin-4多肽的发酵方法,其特征在于,所述的诱导的条件为,诱导温度为25℃-40℃,诱导时间为4-6小时;

可选的,所述的诱导温度为25℃-30℃或30℃-40℃;

可选的,所述的诱导时间为4-6小时,可选的为6小时。

4.根据权利要求1-3任一所述的生产重组exendin-4多肽的发酵方法,其特征在于,发酵过程还包括加入补料培养基的步骤;

可选的,在开始诱导时加入补料培养基;

可选的,发酵使用的发酵培养基为tb培养基;

可选的,所述tb培养基含有8ml/l甘油。

5.根据权利要求1-4任一所述的生产重组exendin-4多肽的发酵方法,其特征在于,菌体od600值为8~12时,加入诱导剂。

6.根据权利要求1-5任一所述的生产重组exendin-4多肽的发酵方法,其特征在于,发酵培养基的体积为50l-500l;可选的,为200l。

7.根据权利要求1-6任一所述的生产重组exendin-4多肽的发酵方法,其特征在于,

诱导剂分1-6次加入;可选的为诱导剂分2-6次加入;可选的,将开始诱导时记为第0小时,于第0、1、2、3、4小时各加1/5体积诱导剂。

8.根据权利要求1-7任一所述的生产重组exendin-4多肽的发酵方法,其特征在于,发酵之前还包括:1)一级种子制备和2)二级种子制备的步骤。

9.根据权利要求1-8任一所述的生产重组exendin-4多肽的发酵方法,其特征在于,补料培养基由mgso4·7h2o、胰蛋白胨、酵母提取物和甘油组成,mgso4·7h2o的浓度为11-12g/lg/l,胰蛋白胨的浓度为98g/l-102g/l、酵母提取物的浓度为98g/l-102g/l,甘油的体积百分数为20%。


技术总结
本发明提供一种大规模生产重组Exendin‑4多肽的发酵方法,采用pET32a(+)‑Exendin‑4/BL21(DE3)发酵培养,在发酵中,以乳糖作为发酵培养的诱导剂。乳糖代替IPTG作为工程菌发酵培养的诱导剂,乳糖在发酵过程中会被菌体做为碳源分解代谢,不会产生毒性残留物质;此外,为使重组Exendin‑4多肽的工艺更加适用于产业化生产,对发酵工艺参数进行了优化,发酵规模由30L扩大为500L,优化后的菌体湿重、蛋白表达量(高达14.1%~14.6%)优于前工艺。

技术研发人员:樊欣迎;李静;郭静雅;刘月峰;梁国龙;闻亚磊
受保护的技术使用者:北京博康健基因科技有限公司
技术研发日:2020.12.18
技术公布日:2021.04.06
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