一种促进蓝莓生长的内生菌根真菌及其应用的制作方法

1.本发明属于菌株技术领域，具体涉及一种促进蓝莓生长的内生菌根真菌及其应用。


背景技术：

2.蓝莓种植由于需要高有机质、高湿和酸性的特殊土壤环境，生产上的土壤需要用硫磺调酸和添加有机质等，生产成本高，技术要求高，而且对土地的后续利用和可持续造成了危害。


技术实现要素：

3.本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种促进蓝莓生长的内生菌根真菌及其应用，该大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1接种到蓝莓上实现菌根化，促进蓝莓生长，接种后拓宽了蓝莓的适应范围，在适合的有机质条件下，不用调酸就能够很好的生长，对环境友好。
4.为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种促进蓝莓生长的内生菌根真菌，所述内生菌根真菌菌株为大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.21050，保藏日期为2020年11月12日。
5.优选地，所述内生菌根真菌的its rdna如seq id no:1所示。
6.本发明还提供了上述的促进蓝莓生长的内生菌根真菌的应用，所述内生菌根真菌用于促进蓝莓生长。
7.本发明与现有技术相比具有以下优点：
8.本发明大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1是一个新菌株，接种到蓝莓上实现菌根化，促进蓝莓生长，接种后拓宽了蓝莓的适应范围，在适合的有机质条件下，不用调酸就能够很好的生长，是一种环境友好的绿色生物促生方法。
9.下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。
附图说明
10.图1是本发明实施例1的dyd-1菌落图。
11.图2是本发明实施例1的dyd-1菌在蓝莓根部菌根化的状态图。
12.图3是本发明的促进蓝莓生长的内生菌根真菌促进蓝莓生长的生物量增长图。
具体实施方式
13.实施例1
14.本实施例的促进蓝莓生长的内生菌根真菌，所述内生菌根真菌菌株为大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生
物中心，保藏编号为cgmcc no.21050，保藏日期为2020年11月12日；所述内生菌根真菌的its rdna如seq id no:1所示。
15.本实施例的大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1在中国黑龙江省伊春市新青区泉林林场的野生蓝莓根中分离、纯化得到的，将本实施例中分离和纯化后得到的dyd-1接种到蛋白胨琼脂固体培养基上培养，所述蛋白胨琼脂固体培养基由以下重量份的原料制成：蛋白胨10g/l、麦芽糖20g/l和琼脂20g/l。如图1所示，菌落灰黑色，菌落边缘细密(图1a)，菌丝深入培养基(图1b)。在显微镜下观察，菌丝有分支、深色有隔(图2e，箭头所示)。
16.大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1的菌丝在蓝莓根部定植模式如图2所示，图2中a为根部细胞内，由透明的厚菌丝形成浓密的螺旋结构，染色后变为蓝色(图2a箭头)。图2b所示，菌丝即使染色后仍保持浅棕色(2b箭头)，在定植的细胞间(2c箭头)和细胞内穿梭(图2c所示)。菌丝侵染后主要定植在根部外表皮部(如图2d所示)，细胞间暗色有隔菌丝进入根表皮细胞后附着到细胞内壁如图2f所示(图2f箭头)。菌丝鞘:由狭窄的透明质菌丝形成，染色后变为蓝色。部分根系嵌入由暗色有隔膜的菌丝形成的松散网中。这些通常在定植的细跟表面的薄壁组织(图2d箭头)图2d。图2a、2b、2c、2e样品用台盼蓝染色，用装有dic的立式显微镜观察得到，图2d、2f样品用透射电镜观察得到。
17.实施例2
18.本实施例1的促进蓝莓生长内生菌根真菌的应用，所述内生菌根真菌大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1用于促进蓝莓生长。
19.试验植物为蓝莓组培苗，所述蓝莓的品种为美登，试验在室内人工气候培养箱内进行，采用分生孢子液盆栽灌根接种法。
20.采用灌根接种法，将含1
×
106个孢子/ml的大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1分生孢子悬浮液接种苗龄为60天的蓝莓组培苗，每株蓝莓幼苗接种5ml分生孢子悬浮液，共接种3次，每间隔一周接种一次，作为处理组，处理组共设置3个重复，每个重复有3株蓝莓幼苗，同时设置对照组，所述对照组的蓝莓幼苗接种等量的灭菌蒸馏水。栽培基质选择灭菌后的苔藓(如图3a、3c所示)，不用硫磺调酸，基质ph为6.0。于25℃人工气候室内培养(喷水保持湿润)60天后将植株整株完整挖出(图3b)，测量植株根茎叶各部位氮浓度，并称量植株鲜重和根长、根表面积、根体积，并计算接种了大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1的蓝莓幼苗与对照组(蒸馏水处理)比的生物量增长率。
21.生物量增长率(％)＝100
×
(处理组生物量-对照组生物量)/对照组生物量
22.由图3可知，大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1能够显著促进蓝莓幼苗生物量的增加，增长率为26.67
±
0.94％。
23.表1大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1接种蓝莓幼苗(60d)的根长、根表面积、根体积等指标的变化
24.样品根长(cm)根表面积(cm2)根体积(cm3)对照组2056.39
±
462.26b1953.52
±
271.32b280.87
±
88.87b处理组4564.58
±
970.81a4339.23
±
952.62a665.58
±
176.15a
25.注：表中字母表示p＜0.01水平的差异显著性，表2同。
26.由表1可知，大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1能够显著促进蓝莓根长、根表面积和根体积的增加。
27.表2大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1接种蓝莓幼苗(60d)的氮浓度
[0028][0029]
由表2可知，大豆疫霉(phialocephala fortinii)dyd-1能够显著促进蓝莓叶部位氮浓度的增加，提高生物量，促进蓝莓幼苗的生长。
[0030]
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。