一种4的制作方法

一种4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的纯化方法
技术领域
1.本发明涉及农用化学品及制备技术领域，尤其涉及一种4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的纯化方法。


背景技术：

2.阿维菌素为发酵组分的混合物，共有8个组分：a1a、a1b、a2a、a2b、b1a、b1b、b2a、b2b。通过对阿维菌素进行多次分离纯化可得到阿维菌素b2a/2b。阿维菌素b2a与阿维菌素b2b结构如式(ii)和式(iii)所示：
[0003][0004]
近年来甲氨基阿维菌素b2a/2b逐渐被重视，大量文献报道了甲氨基阿维菌素b2a/2b的合成方法、阿维菌素b2a/2b相关衍生物、以及相关制剂方法。甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐是其中应用较多的一种物质。但是，目前合成方法制备所得的甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的纯度较低，含有较多的杂质，因此，影响后续制剂的杀虫活性。因此，有必要寻求一种收率和纯度较高的甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐异构体的分离纯化方法。


技术实现要素：

[0005]
针对目前合成方法制备所得的甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的纯度较低的问题，本发明提供一种4
″
位为s构型甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的纯化方法。
[0006]
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：
[0007]
一种4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的纯化方法，包括以下步骤：
[0008]
将甲氨基阿维菌素b2a/2b苯甲酸盐粗品加入甲基叔丁基醚中，加热溶解，然后滴加叔丁醇和正丁醚混合溶液，滴加结束后降温过滤，将所得滤液降温析晶，得到4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐产品。
[0009]
相对于现有技术，本发明提供的4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的纯化方法，通过选择甲基叔丁基醚、叔丁醇和正丁醚的混合溶液作为结晶溶剂，并配合两次降温析晶的方式，得到单一构型的含量98％以上的4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐产品，有利于提高其相关制剂的杀虫活性，为后续研发人员开发高活性的甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐产品提供了可能。
[0010]4″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的结构式如式(i)所示：
[0011][0012]
本发明中所述s构型指的是反应活性位点4
″
位的甲胺基是s构型。
[0013]
优选的，所述甲基叔丁基醚、叔丁醇和正丁醚的质量比为1:1～1.5:1.5～4。
[0014]
优选的，所述甲氨基阿维菌素b2a/2b苯甲酸盐粗品与甲基叔丁基醚、叔丁醇和正丁醚总量的质量比为1:3～5。
[0015]
优选的结晶溶剂以及溶剂的加入量，有利于去除甲氨基阿维菌素b2a/2b苯甲酸盐粗品中的杂质，并有利于获得高纯度的4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐产品。
[0016]
优选的，降温过滤的温度为0～5℃。
[0017]
优选的降温过滤的温度有利于充分去除甲氨基阿维菌素b2a/2b苯甲酸盐粗品中的氨基阿维菌素b2b苯甲酸盐和其他杂质，从而有利于后续得到高纯度的4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐。
[0018]
优选的，降温析晶的温度为
‑
10～
‑
5℃。
[0019]
优选的，降温析晶的时间为2～3h。
[0020]
优选的，所述叔丁醇和正丁醚混合溶液的滴加时间为1.5～2.5h。
[0021]
优选的降温析晶温度和时间，以及叔丁醇和正丁醚混合溶液的滴加时间，有利于增大4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐与其他物质在体系中的溶解度差异，从而获得高纯度的单一构型的4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐产品。
[0022]
优选的，所述甲氨基阿维菌素b2a/2b苯甲酸盐粗品中甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的含量不小于70％。
[0023]
优选的，加热溶解的温度为35～45℃。
[0024]
优选的加热温度有利于使甲氨基阿维菌素b2a/2b苯甲酸盐粗品充分溶解，从而有利于通过降温过滤除去杂质。
[0025]
优选的，采用核磁共振表征所得的1h
‑
nmr、
13
c
‑
nmr、dept135、dept90、cosy、hsqc和hmbc谱图对所得4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐产品进行结构鉴定。
[0026]
本发明采用核磁共振中的1h
‑
nmr、
13
c
‑
nmr、dept135、dept90、cosy、hsqc和hmbc谱图进行综合分析，证明了纯化所得的甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐为s
‑
构型。
[0027]
本发明提供的甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的纯化方法，通过选择甲基叔丁基醚、
叔丁醇和正丁醚的混合溶液作为结晶溶剂，并配合两次降温析晶的方式，得到含量98％以上的4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐产品，产品收率可达62％以上，且纯化方法简单，为后续研发人员开发高活性的甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐产品提供了可能。
附图说明
[0028]
图1为实施例1制备的4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的noesy谱；
[0029]
图2为图1中noesy谱的局部放大图。
具体实施方式
[0030]
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0031]
以下实施例中所用甲氨基阿维菌素b2a/2b苯甲酸盐粗品的含量为70％。
[0032]
实施例1
[0033]
一种4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的纯化方法，包括以下步骤：
[0034]
将50g甲氨基阿维菌素b2a/2b苯甲酸盐粗品加入50g甲基叔丁基醚中，加热至40℃使其完全溶解，然后缓慢滴加50g叔丁醇和150g正丁醚的混合溶液，滴加时间为2h，滴加结束后降温至0℃过滤，将所得滤液降温至
‑
5℃搅拌析晶3h，过滤，烘干，得到类白色4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐产品22.24g，hplc含量98.5％，收率62.6％。
[0035]
制备所得4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的核磁谱图解析过程如下：
[0036]
仪器：aviii
‑
500兆核磁共振仪，德国bruker公司，产地：瑞士。
[0037]
溶剂：氘代氯仿。
[0038]
测试条件：常温下，取制备所得4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐溶于适量cdcl3中，在303k温度下，对样品1h
‑
nmr、
13
c
‑
nmr、dept135、dept90、cosy、hsqc、hmbc谱进行测试，结果如图1
‑
图2所示。
[0039]4″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐核磁共振氢谱数据：
[0040]
l
h nmr(400.0mhz):8.13(s,1h),7.55(d,j＝6.1,2h),7.45(d,j＝7.5,2h),5.43(m,3h),5.00(m,lh),4.76(br d,j＝3.0,lh),4.69(m,2h),4.30(br d,j＝6.1,lh),4.03(br q,j＝6.7,lh),3.98(d,j＝6.2,lh),3.94(br s,lh),3.88(m,2h),3.85(s,1h),3.82(dq,j＝9.1,6.2,lh),3.74(ddd,j＝11.5,5.0,3.8,lh),3.68(s,lh),3.58(m,lh),3.48(dd,j＝9.9,1.3,lh),3.398(s,3h),3.395(s,3h),3.38(m,lh),3.32(s,1h),3.30(q,j＝2.2,lh),3.23(dd,j＝9.1,8.7,lh),2.87(br d,j＝3.8,lh),2.67(s,3h),2.52(m,lh),2.31
‑
2.25(m,3h),2.21(dd,j＝12.7,5.0,lh),2.05
‑
1.90(m,2h),1.87(br s,3h),1.78(m,lh),1.72(d,j＝4.1,2h),1.63
‑
1.46(m,6h),1.49(brs,3h),1.369(d,j＝6.7,3h),1.355(d,j＝6.7,3h),1.230(d,j＝6.2,3h),1.218(d,j＝7.0,3h),1.11(d,j＝7.6,3h),0.96
‑
0.91(m,9h),0.89(m,1h)。
[0041]4″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐核磁共振碳谱数据：
[0042]
13
c nmr(400.0mhz):174.98,170.30,139.56,138.15,136.31,135.15,133.90,130.50,130.30,130.20,130.10,128.60,128.40,126.03,120.57,118.42,118.13,98.68,
95.90,95.33,81.39,80.99,80.53,79.18,74.99,74.20,71.10,68.62,68.48,68.46,67.83,67.35,65.65,60.58,56.43,55.62,47.50,45.82,41.60,40.55,36.80,36.35,35.20,34.63,34.44,30.83,30.70,27.61,26.27,20.11,18.05,17.56,16.50,15.20,13.11,12.33,12.32。
[0043]
核磁共振氢谱(1h
‑
nmr)中，由于分子式中氢质子个数较多，造成许多氢质子峰交叉重叠。为了验证甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐结构式中4
″‑
甲胺基所在的含氧六元环中三个甲基的成键方向，下面只归属了相关联的甲基氢和甲基碳，以便确定相关甲基的成键方向，结果如表1
‑
表2所示。
[0044]
表1 氢谱测试结果
[0045]
化学位移(ppm)多重性氢质子数归属1.355,1.369d3h
‑5″
2.723s3h
‑4″
3.398s3h
‑3″
3.395s3h
‑
3'1.218,1.230d3h
‑
5'
[0046]
表2 碳谱测试结果
[0047]
化学位移(ppm)碳类型dept归属17.56伯碳正峰c
‑5″
36.35伯碳正峰c
‑4″
55.62伯碳正峰c
‑3″
56.43伯碳正峰c
‑
3'18.05叔碳正峰c
‑
5'
[0048]
上表中，δ3.398和δ3.395的积分值为3，出峰位置为甲氧基化学位移范畴，故归属为c
‑
3和c
‑
4。氮与氧相比，氮的去屏蔽效应稍弱，即与n相连的甲基应处在甲氧基的高场，δ36.35归属为h
‑4″
，δ1.355和δ1.218均有cosy相关，被相邻ch偶合为双峰，分别与甲氧基有较弱hmbc远程相关，应归属于h
‑5″
和h
‑
5'。
[0049]
核磁共振碳谱(
13
c
‑
nmr)中，δ55.62和δ56.43在dept135为负峰，并在dept90谱图中消失，证明为甲基碳峰，且与h
‑3″
和h
‑
3'有hsqc近程相关，故归属c
‑3″
和c
‑
3'。同理δ17.56、δ18.05和δ36.35均在dept135为负峰，并在dept90中消失，证明为甲基碳峰，且与h
‑5″
、h
‑
5'和h
‑4″
有hsqc近程相关，故依次归属c
‑5″
、c
‑
5'和c
‑
4'。
[0050]
在二维noesy谱中，h
‑4″
与h
‑3″
有相关峰、h
‑4″
与h
‑5″
有相关峰，说明他们之间空间距离小于表明这三个基团在空间上为同一方向，进而证明4
″
位甲胺基为s构型。
[0051]
综合上述分析，证明了本实施例制备所得的产品为4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐。
[0052]
在谱图中并未发现r构型相关出峰。
[0053]
实施例2
[0054]
一种4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的纯化方法，包括以下步骤：
[0055]
将50g甲氨基阿维菌素b2a/2b苯甲酸盐粗品加入23g甲基叔丁基醚中，加热至45℃
使其完全溶解，然后缓慢滴加35g叔丁醇和92g正丁醚的混合溶液，滴加时间为2h，滴加结束后降温至2℃过滤，将所得滤液降温至
‑
8℃搅拌析晶2.5h，过滤，烘干，得到类白色4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐产品21.97g，hplc含量98.9％，收率62.1％。
[0056]
实施例3
[0057]
一种4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐的纯化方法，包括以下步骤：
[0058]
将50g甲氨基阿维菌素b2a/2b苯甲酸盐粗品加入54g甲基叔丁基醚中，加热至35℃使其完全溶解，然后缓慢滴加65g叔丁醇和81g正丁醚的混合溶液，滴加时间为2h，滴加结束后降温至5℃过滤，将所得滤液降温至
‑
10℃搅拌析晶2h，过滤，烘干，得到类白色4
″‑
(s)
‑
甲氨基阿维菌素b2a苯甲酸盐产品22.34g，hplc含量98.2％，收率62.7％。
[0059]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。