一种外泌体提取装置的制作方法

本实用新型涉及分子生物学器械技术领域，特别涉及一种外泌体提取装置。

背景技术：

外泌体是由通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成多泡内涵体，多泡内涵体再与细胞膜融合后，释放到细胞外基质中的一种直径约30-150nm的膜性囊泡。外泌体内含物的很大部分是蛋白质，如：cd9、cd63、cd81、mhc-i等；肿瘤细胞产生的外泌体中还可以检测到过度表达的特异性的蛋白标志物，如trail和tgf-β等。除已经发现的蛋白质外，外泌体中还含有大量的mrna、mirna、cirrna和dna片段等成分，由于这些内含物的存在提供了丰富的生物信息，可以多方位、多角度的揭示出疾病信息，这就蕴藏了巨大潜力。而且，外泌体来源广泛，淋巴细胞、树突状细胞、肥大细胞及上皮细胞、肿瘤细胞等都可以分泌外泌体，被分泌出的外泌体(exosome)还会进入羊水，腹水，唾液，血液，乳汁，尿液中，这就极大地拓展了检测途径，使临床检测变为可能。目前针对外泌体的提取方法主要有：超速离心法、多聚物沉淀法、磁珠法以及超滤法，但这些方法普遍存在提取耗时长的问题。

公开号为cn207908243u的实用新型专利公开了一种外泌体的分离提取试剂盒，包括一级过滤装置、承接一级过滤装置的二级过滤装置以及承接二级过滤装置的废液收集管，其使用方法包括：把样品转移至一级过滤装置初步过滤去除样品中的一些较大的杂质，再通过二级过滤装置过滤去除样品中的一些较小的杂质及废液，截留得到位于二级过滤管体内富含外泌体的悬液。本实用新型成本低廉、操作简便快捷，且无需特定的离心设备，具有很广的适用场境。但是该技术方案通过手动施压过滤，还是比较费时费力，并且手动无法掌握准确的力度，用力过大可能会导致超滤膜损坏。

技术实现要素：

本实用新型的目的是提供一种外泌体提取装置，用机械代替人工施压过滤外泌体，省时省力，并且施力均匀，不易损坏超滤膜。

本实用新型的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种外泌体提取装置，包括底座，所述底座的一端垂直向上设置有支撑臂，垂直所述支撑臂向所述底座的另一端延伸设置有连接臂，所述连接臂远离所述支撑臂的一端安装有向下伸缩的电动推杆，所述电动推杆的动力轴的端部设置有连接头，所述连接头连接有可更换的橡胶活塞；

所述底座与所述连接臂之间设置有转轴，所述转轴从下至上轴向转动连接有两个试管固定器，每一试管固定器均包括与所述转轴转动连接的转动套环、与所述转动套环垂直连接的连接杆、与所述连接杆的自由端连接且两端开口的试管卡套，每一试管卡套可转动至所述活塞的正下方；

还包括上端开口且与所述试管卡套可拆卸连接的粗过滤管，所述粗过滤管的开口端向外延伸形成与所述试管卡套相配合的第一支撑环，所述粗过滤管下端的内部设置有第一网孔支撑层，所述第一网孔支撑层的上端设置有粗过滤膜，所述第一网孔支撑层与所述粗过滤试管底部之间形成第一集液腔，所述粗过滤管的下端设置有连通所述第一集液腔及外界的第一出口管；

还包括上端开口且与所述试管卡套可拆卸连接的超滤管，所述超滤管的开口端向外延伸形成与所述试管卡套相配合的第二支撑环，所述超滤管下端的内部设置有第二网孔支撑层，所述第二网孔支撑层的上端设置有超滤膜，所述第二网孔支撑层与所述粗过滤试管底部之间形成第二集液腔，所述超滤管的下端设置有连通所述第二集液腔及外界的第二出口管；

还包括上端开口且与所述试管卡套可拆卸连接的废液收集管，所述废液收集管的开口端向外延伸形成与所述试管卡套相配合的第三支撑环。

通过采用上述技术方案，提取外泌体时，首先将样品添加到粗过滤管内，将粗过滤管放入到上端的试管卡套内，取超滤管放到下端的试管卡套内，随后将粗过滤管及超滤管转动至橡胶活塞的正下方，接通电源，启动电动推杆，电动推杆推动橡胶活塞进入到粗过滤管内，推动样品穿过粗过滤膜，样品中绝大部分微囊泡被粗过滤膜截留在粗过滤管内，而外泌体、可溶性蛋白、高丰度蛋白酶解片段及更微小的颗粒等则通过了粗过滤膜进入到超滤管内；

随后将超滤管更换到上端的试管卡套内，取一根废液收集管放到下端的试管卡套内，更换一个新的橡胶活塞，将超滤管及废液收集管转动至橡胶活塞的正下方后启动电动推杆，电动推杆推动橡胶活塞进入到超滤管内，推动样品穿过超滤膜，样品中可溶性蛋白、高丰度蛋白酶解片段及更微小的颗粒从侧壁的超滤膜滤除，进入废液收集管内，最终在超滤管中得到纯度较高的外泌体。

本实用新型的进一步设置为：所述臂远离所述连接臂的一侧设置有控制台，所述控制台内设置有控制器，所述控制台的前面板安装有开关按钮、速度调节旋钮及显示器，所述电动推杆、所述开关按钮、所述速度调节旋钮及所述显示器均与所述控制器电连。

本实用新型的进一步设置为：所述控制台的下端连接有与所述控制器电连的电源线。

本实用新型的进一步设置为：所述转轴于每一连接套环的下端均设置有限位环。

本实用新型的进一步设置为：每一连接套环的上端均设置有与所述转轴转动连接的限位块，所述转轴于每一连接套环的上端均设置有与对应限位块相配合的挡块，所述限位块与所述挡块的一侧接触时，所述试管卡套转动至所述橡胶活塞的正下方。

通过采用上述技术方案，使试管卡套能够更加精确的转动至橡胶活塞的正下方。

本实用新型的进一步设置为：所述粗过滤膜的孔径为130～150nm。

本实用新型的进一步设置为：所述超滤膜的孔径为40～50nm。

综上所述，本实用新型具有以下有益效果：本实用新型采用电动推杆代替人力施压过滤外泌体，省时省力，并且对超滤膜施加的压力均匀且可调，不易损坏超滤膜。

附图说明

图1是本实用新型的整体结构示意图；

图2主要用于展示试管固定器与转轴的连接方式；

图3主要用于展示电动推杆与橡胶活塞的连接；

图4是粗过滤管的剖视图；

图5是超滤管的剖视图。

图中：1、底座；11、支撑臂；12、连接臂；2、电动推杆；21、动力轴；22、连接头；23、橡胶活塞；3、转轴；31、限位环；32、挡块；4、试管固定器；41、转动套环；42、连接杆；43、试管卡套；44、限位块；5、控制台；51、开关按钮；52、速度调节旋钮；53、显示器；54、电源线；6、粗过滤管；61、第一支撑环；62、第一网孔支撑层；63、粗过滤膜；64、第一集液腔；65、第一出口管；7、超滤管；71、第二支撑环；72、第二网孔支撑层；73、超滤膜；74、第二集液腔；75、第二出口管；8、废液收集管；81、第三支撑环。

具体实施方式

以下结合附图对本实用新型作进一步详细说明。

实施例，一种外泌体提取装置，参照图1-5，包括底座1，底座1的一端垂直向上设置有一个支撑臂11，垂直支撑臂11向底座1的另一端延伸设置有一条连接臂12，连接臂12远离支撑臂11的一端安装有一个向下伸缩的电动推杆2，电动推杆2的动力轴21的端部设置有一个连接头22，连接头22连接有一个可更换的橡胶活塞23。

底座1与连接臂12之间设置有一根转轴3，转轴3从下至上轴向转动连接有两个试管固定器4，每一试管固定器4均包括与转轴3转动连接的转动套环41、与转动套环41垂直连接的连接杆42、与连接杆42的自由端连接且两端开口的试管卡套43，每一试管卡套43可转动至活塞的正下方；转轴3于每一连接套环的下端均设置有一个限位环31，每一连接套环的上端均设置有一块与转轴3转动连接的限位块44，转轴3于每一连接套环的上端均设置有一块与对应限位块44相配合的挡块32，限位块44与挡块32的一侧接触时，试管卡套43转动至橡胶活塞23的正下方，使试管卡套43能够更加精确的转动至橡胶活塞23的正下方。

臂远离连接臂12的一侧设置有一个控制台5，控制台5内设置有一个控制器(图略)，控制台5的前面板安装有开关按钮51、速度调节旋钮52及显示器53，电动推杆2、开关按钮51、速度调节旋钮52及显示器53均与控制器电连，通过速度调节旋钮52调整电动推杆2伸长的速度，以此来调节对过滤膜施加的压力，控制台5的下端连接有一根与控制器电连的电源线54。

还包括一根上端开口且与试管卡套43可拆卸连接的粗过滤管6，粗过滤管6的开口端向外延伸形成一圈与所述试管卡套43相配合的第一支撑环61，粗过滤管6下端的内部设置有一层第一网孔支撑层62，第一网孔支撑层62的上端设置有一张粗过滤膜63，粗过滤膜63的孔径为140nm，第一网孔支撑层62与粗过滤试管底部之间形成一个第一集液腔64，粗过滤管6的下端设置有一个连通第一集液腔64及外界的第一出口管65。

还包括一根上端开口且与试管卡套43可拆卸连接的超滤管7，超滤管7的开口端向外延伸形成一圈与所述试管卡套43相配合的第二支撑环71，超滤管7下端的内部设置有一层第二网孔支撑层72，第二网孔支撑层72的上端设置有一张超滤膜73，超滤膜73的孔径为45nm，第二网孔支撑层72与粗过滤试管底部之间形成一个第二集液腔74，超滤管7的下端设置有一个连通第二集液腔74及外界的第二出口管75。

还包括一个上端开口且与试管卡套43可拆卸连接的废液收集管8，废液收集管8的开口端向外延伸形成一圈与所述试管卡套43相配合的第三支撑环81。

使用方式：提取外泌体时，首先将样品添加到粗过滤管6内，将粗过滤管6放入到上端的试管卡套43内，取超滤管7放到下端的试管卡套43内，随后将粗过滤管6及超滤管7转动至橡胶活塞23的正下方，接通电源，启动电动推杆2，电动推杆2推动橡胶活塞23进入到粗过滤管6内，推动样品穿过粗过滤膜63，样品中绝大部分微囊泡被粗过滤膜63截留在粗过滤管6内，而外泌体、可溶性蛋白、高丰度蛋白酶解片段及更微小的颗粒等则通过了粗过滤膜63进入到超滤管7内；

随后将超滤管7更换到上端的试管卡套43内，取一根废液收集管8放到下端的试管卡套43内，更换一个新的橡胶活塞23，将超滤管7及废液收集管8转动至橡胶活塞23的正下方后启动电动推杆2，电动推杆2推动橡胶活塞23进入到超滤管7内，推动样品穿过超滤膜73，样品中可溶性蛋白、高丰度蛋白酶解片段及更微小的颗粒从侧壁的超滤膜73滤除，进入废液收集管8内，最终在超滤管7中得到纯度较高的外泌体。

本具体实施例仅仅是对本实用新型的解释，其并不是对本实用新型的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本实用新型的权利要求范围内都受到专利法的保护。