神经降压素能激动剂和使用其预防或治疗疼痛的方法与流程

神经降压素能激动剂和使用其预防或治疗疼痛的方法
1.相关申请的交叉引用
2.本技术是2020年2月10日提交的pct申请号ca2020/*，根据pct第21(2)条以英文公布，其要求于2019年2月8日提交的美国临时申请号62/803,041的权益。以上所有文件通过引用整体并入本文。
3.关于联邦赞助的研究或开发的声明。
4.n.a.
技术领域
5.本发明涉及神经降压素能激动剂(neurotensinergic agonists)和使用其预防或治疗疼痛的方法。更具体地说，本发明涉及大环化合物，优选对nts2受体具有选择性的大环化合物，以及使用其预防或治疗疼痛的方法。
6.序列表引用
7.根据37 c.f.r.1.821(c)，在此提交一个序列列表，作为一个符合ascii的文本文件，名为序列表1469259_st25，该文件创建于2020年2月10日，大小为15kb。前述名为序列表1469259_st25的文件的内容通过引用整体并入本文。
8.发明背景
9.在大多数发达国家，疼痛是向医生咨询的最常见原因。它是许多疾病的主要症状，会干扰一个人的生活质量和一般功能。它还给社会造成了沉重的负担，并且是缺勤的主要原因之一。急性疼痛，如与受伤、手术或疾病有关的疼痛，可能很严重，对患者康复有重大影响，而慢性疼痛，影响约20％人口，也可能造成孤立、焦虑症状，并经常伴有抑郁症，这可能包括情绪、食欲和睡眠的变化，从而使患者无法进行典型的日常活动。急性疼痛通常通过药物治疗得到有效控制，尤其是一线药物对乙酰氨基酚和非甾体抗炎药(nsaid)。严重的急性疼痛通常用强效阿片类药物治疗。然而，慢性疼痛的管理要困难得多。止痛药仅对20％至70％的病例有效。
10.目前用于治疗疼痛的药物并不总是有效(抗炎)或表现出严重的副作用，如便秘、恶心/呕吐、呼吸抑制和耐受性/依赖性(阿片类药物，如吗啡)。尽管阿片类药物有不良反应，但其使用非常普遍，因为它们对缓解疼痛非常有效。阿片类药物通过激活中枢神经系统中的mu阿片受体起作用。然而，也正是这种阿片类受体的激活导致了不良的影响。迄今为止，几乎所有激活该受体的药物都具有相同的有害副作用，而由耐受和依赖导致的阿片类药物滥用现已成为西方国家普遍存在的问题。
11.激活属于g蛋白偶联受体(gpcrs)超家族的nts1和nts2受体，会产生与激活mu阿片受体类似的镇痛作用，但不会引起同样的不良反应。激活神经紧张素受体后，没有观察到mu阿片受体所特有的便秘和呼吸抑制现象。
12.激活nts1的化合物也会出现不良副作用，例如体温过低和低血压。
13.需要具有减少mu和/或nts1相关的不良反应的化合物。
14.本说明书参考了许多文件，其内容通过引用整体并入本文。


技术实现要素：

15.本发明提供了表现出镇痛作用的新型大环化合物。在具体的实施方案中，其为选择性nts2配体，并且不表现出体温过低、低血压或回肠松弛。
16.本发明还提供了一种式(i)化合物
[0017][0018]
其中，
[0019]
(i)r1为h、c1
‑
c6烷基或c1
‑
c6氨基烷基；且r
17
为h；或r
17
为h、c1
‑
c6烷基或c1
‑
c6氨基烷基；且r1为h；
[0020]
(ii)r3为h、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)环烷基、c1
‑
c8氨基烷基、c1
‑
c8烷基或c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh，其中p为1至51至5；且r4为h或c1
‑
c6烷基；或
[0021]
r4为h、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)环烷基、c1
‑
c8氨基烷基、c1
‑
c8烷基或c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh，其中p为1至5；且r3为h或c1
‑
c6烷基；
[0022]
(iii)r6为h、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)环烷基、c1
‑
c8氨基烷基、c1
‑
c8烷基或c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh，其中p’为1至5；且r7为h或c1
‑
c6烷基；或
[0023]
r7为h、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)环烷基、c1
‑
c8氨基烷基、c1
‑
c8烷基或c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh；其中p’为1至5；且r6为h或c1
‑
c6烷基；
[0024]
(iv)r
10
为h、
‑
(ch2)q(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)芳基、_(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)环烷基、c1
‑
c8氨基烷基、c1
‑
c8烷基或c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh，其中，q为1至5；且r
11
为h或c1
‑
c6烷基；或
[0025]
r
11
为
‑
(ch2)q(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)环烷基、c1
‑
c8氨基烷基、c1
‑
c8烷基或c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh，其中q为1至5；且r
10
为h或c1
‑
c6烷基；
[0026]
(v)r
13
为h或c1
‑
c6烷基；且r
14
为h、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂环烷基、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)环烷基、c1
‑
c8氨基烷基、c1
‑
c8烷基或c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh，其中q’为1至5；或
[0027]
r
14
为h或c1
‑
c6烷基；且r
13
为h、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂环烷基、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)环烷基、c1
‑
c8氨基烷基、c1
‑
c8烷基或
[0047]
(iv)r
10
为h或
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中q为1至5；或丙氨酸(环戊基)、丙氨酸(呋喃基)、苯丙氨酸(4
‑
氨基)、苯丙氨酸(4
‑
硝基)、苯丙氨酸(4
‑
甲基)、苯丙氨酸(2，3，4，5，6
‑
[0048]
五氟)、酪氨酸、酪氨酸(oac)、色氨酸、赖氨酸、间酪氨酸、酪氨酸(ome)、苯丙氨酸、苯丙氨酸(4
‑
氟)、苯丙氨酸(4
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
叔丁基)、苯丙氨酸(4
‑
cf3)、丙氨酸(萘基)、苯丙氨酸(3
‑
氯)、苯丙氨酸(4
‑
氯)、苯丙氨酸(3
‑
溴)、苯丙氨酸(4
‑
溴)、苯丙氨酸(3
‑
碘)或苯丙氨酸(4
‑
氰基)的侧链；且r
11
为h或
‑
ch3或
[0049]
r
11
为h或
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中q为1至5；或丙氨酸(环戊基)、丙氨酸(呋喃基)、苯丙氨酸(4
‑
氨基)、苯丙氨酸(4
‑
硝基)、苯丙氨酸(4
‑
甲基)、苯丙氨酸(2，3，4，5，6
‑
五氟)、酪氨酸、酪氨酸(oac)、色氨酸、赖氨酸、间酪氨酸、酪氨酸(ome)、苯丙氨酸、苯丙氨酸(4
‑
氟)、苯丙氨酸(4
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
叔丁基)、苯丙氨酸(4
‑
cf3)、丙氨酸(萘基)、苯丙氨酸(3
‑
氯)、苯丙氨酸(4
‑
氯)、苯丙氨酸(3
‑
溴)、苯丙氨酸(4
‑
溴)、苯丙氨酸(3
‑
碘)或苯丙氨酸(4
‑
氰基)的侧链；且r
10
为h或
‑
ch3；
[0050]
(v)r
13
为h或
‑
ch3；且r
14
为h、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中q’为1至5；或亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、缬氨酸、新戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、环己基丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸(ome)、2，4，5，
‑
三氟苯丙氨酸、环己基丁氨酸(homo cyclohexyl alanine)、环丙基丙氨酸、环丁基丙氨酸、环戊基丙氨酸或环庚基丙氨酸的侧链；或
[0051]
r
14
为h或
‑
ch3；且r
13
为h、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中q’为1至5；或亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、缬氨酸、新戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、环己基丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸(ome)、2，4，5
‑
三氟苯丙氨酸、环己基丁氨酸、环丙基丙氨酸、环丁基丙氨酸、环戊基丙氨酸或环庚基丙氨酸的侧链；
[0052]
(vi)r2、r5、r8、r9和r
12
独立地为h、(c1
‑
12)烷基或(c4
‑
c14)芳烷基；或
[0053]
r2、r5、r8、r9和r
12
中的至少一个如下，另一个为：：
[0054]
a)r2为
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中p为1至5；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链，其条件是r3和r4为h；
[0055]
b)r5为
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中p’为1至5；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链，其条件是r6和r7为h；
[0056]
c)r9为
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中q为1至5；或丙氨酸(环戊基)、丙氨酸(呋喃基)、苯丙氨酸(4
‑
氨基)、苯丙氨酸(4
‑
硝基)、苯丙氨酸(4
‑
甲基)、苯丙氨酸(2，3，4，5，6
‑
五氟)、酪氨酸、酪氨酸(oac)、色氨酸、赖氨酸、间酪氨酸、酪氨酸(ome)、苯丙氨酸、苯丙氨酸(4
‑
氟)、苯丙氨酸(4
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
叔丁基)、苯丙氨酸(4
‑
cf3)、丙氨酸(萘基)、苯丙氨酸(3
‑
氯)、苯丙氨酸(4
‑
氯)、苯丙氨酸(3
‑
溴)、苯丙氨酸(4
‑
溴)、苯丙氨酸(3
‑
碘)或苯丙氨酸(4
‑
氰基)的侧链，其条件是r
10
和r
11
为h；
[0057]
d)r
12
为
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中q’为1至5；或亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、缬氨酸、新戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、环己基丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸(ome)、2，4，5，
‑
三氟苯丙氨酸、环己基丁氨酸、环丙基丙氨酸、环丁基丙氨酸、环戊基丙氨酸或环庚基丙氨酸的侧链，其条件是r
13
和r
14
为h；
[0058]
且r2、r5、r8、r9和r
12
中的其他基团独立地为h、(c1
‑
12)烷基或(c4
‑
c14)芳烷基；
[0059]
(vii)r
15
为h、
‑
or
18
，其中r
18
是h、苄基、(c4
‑
c14)芳烷基或(c1
‑
12)烯丙基；
[0060]
(viii)r
16
为h、
‑
ch3；且
[0061]
(x)x为
‑
(ch2)n，其中n为0
‑
4；且y为
‑
ch＝ch(ch2)m
‑
、
‑
nr
1s
c(＝o)(ch2)m
‑
或
‑
c(＝o)nr
18
(ch2)m
‑
，其中m为1
‑
4；或
[0062]
x和y一起形成
‑
(ch2)n
‑
芳基
‑
(ch2)m
‑
，其中n和m定义如上，其中芳基为邻、间或对位苯基，或在2、3、4、2’、3’或4’中至少一个位置被取代或未被取代的联芳基；
[0063]
或其立体异构体或其混合物，或其药学上可接受的盐、酯或溶剂合物。
[0064]
或，所述化合物为式i化合物，其中
[0065]
(i)r1为h、(c1
‑
c5)烷基或nhr，其中r’为一个或多个氨基酸残基；且r
17
独立地为h或ch3；或r
17
为h、(c1
‑
c5)烷基或nhr，其中r’是一个或多个氨基酸残基；且r1独立地为h或ch3；
[0066]
(ii)(a)r3为h、
‑
(c1
‑
c5)烷基、
‑
(c1
‑
c5)氨基烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
c(＝o)oh、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
nh
‑
c(＝o)
‑
nh2、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)环烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂环烷基，其中，所述烷基、氨基烷基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中各个取代基独立地为氨基、(c1
‑
c5)烷基、羰基、oh、
‑
o
‑
乙酰基或卤素；且r4为h或(c1
‑
c5)烷基，其中所述烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基的定义如上；或
[0067]
(b)r4为h、
‑
(c1
‑
c5)烷基、
‑
(c1
‑
c5)氨基烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
c(＝o)oh、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
nh
‑
c(＝o)
‑
nh2、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)环烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂环烷基，其中，所述烷基、氨基烷基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上，且r3为h或(c1
‑
c5)烷基，其中，所述烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上；
[0068]
(iii)(a)r6为h、
‑
(c1
‑
c5)烷基、
‑
(c1
‑
c5)氨基烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
c(＝o)oh、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
nh
‑
c(＝o)
‑
nh2、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)环烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂环烷基，其中，所述烷基、氨基烷基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上，且r7是为h或(c1
‑
c5)烷基，其中所述烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上；或
[0069]
(b)r7为h、
‑
(c1
‑
c5)烷基、
‑
(c1
‑
c5)氨基烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
c(＝o)oh、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
nh
‑
c(＝o)
‑
nh2、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)环烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂环烷基，其中，所述烷基、氨基烷基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上；且r6为h或(c1
‑
c5)烷基，其中所述烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上；
[0070]
(iv)(a)(a)r
10
为h、
‑
(c1
‑
c5)烷基、
‑
(c1
‑
c5)氨基烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
c(＝o)oh、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
nh
‑
c(＝o)
‑
nh2、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)环烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂环烷基，其中所述芳基、杂芳基、环烷
基和杂环烷基可与另一个独立地芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基的环形成并环；其中所述烷基、氨基烷基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上；且r
11
为h或(c1
‑
c5)烷基，其中所述烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上；或
[0071]
(b)r
11
为h、
‑
(c1
‑
c5)烷基、
‑
(c1
‑
c5)氨基烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
c(＝o)oh、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
nh
‑
c(＝o)
‑
nh2、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)环烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂环烷基，其中所述芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基可与另一个独立地芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基的环形成并环；其中所述烷基、氨基烷基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上；且r
10
为h或(c1
‑
c5)烷基，其中所述烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上；或
[0072]
(b)r
10
和r9一起形成(c3
‑
c8)芳基、(c3
‑
c8)杂芳基、(c3
‑
c8)环烷基、(c3
‑
c8)杂环烷基，其中所述芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基可与另一个独立地(c3
‑
c8)芳基、(c3
‑
c8)杂芳基、(c3
‑
c8)环烷基和(c3
‑
c8)杂环烷基的环形成并环，其中所述芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上；
[0073]
(v)(a)r
13
为h、
‑
(c1
‑
c5)烷基、
‑
(c1
‑
c5)氨基烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
c(＝o)oh、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
nh
‑
c(＝o)
‑
nh2、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)环烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂环烷基，其中，所述烷基、氨基烷基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地为氨基、(c1
‑
c5)烷基、羰基、oh、
‑
o
‑
乙酰基和卤素；且r
14
为h或(c1
‑
c5)烷基，其中所述烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基的定义如上；或
[0074]
(b)r
14
为h、
‑
(c1
‑
c5)烷基、
‑
(c1
‑
c5)氨基烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
c(＝o)oh、
‑
(c1
‑
c5)烷基
‑
nh
‑
c(＝o)
‑
nh2、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)环烷基、
‑
(c1
‑
c5)烷基(c3
‑
c8)杂环烷基，其中，所述烷基、氨基烷基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上；且r
13
为h或(c1
‑
c5)烷基，其中所述烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地定义如上所述；
[0075]
且其他基团定义如上。
[0076]
或，所述化合物为式i’化合物
[0077][0078]
其中r1至r7、r9至r
15
和x定义如上，且其中
[0079]
(a)r
18
和r
20
连接在一起形成y，且y定义如上，r
19
的定义如上的r8定义；或
[0080]
(b)r
18
和r
19
连接在一起形成y，且y定义如上所述，r
20
的定义如上的r8定义，
[0081]
或其立体异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、酯或溶剂合物。
[0082]
或，所述化合物为式ia化合物
[0083][0084]
其中，r1至r7、r9至r
15
、r
17
、x、y定义如上，且其中
[0085]
r8为h、
‑
(ch2)r
‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)r
‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)r
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基、
‑
(ch2)r
‑
(c3
‑
c8)环烷基、c1
‑
c8氨基烷基、c1
‑
c8烷基或c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh，其中r为1至5；且r
16
为h或c1
‑
c6烷基；或
[0086]
r
16
为h、
‑
(ch2)r
‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)r
‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)r
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基、
‑
(ch2)r
‑
(c3
‑
c8)环烷基、c1
‑
c8氨基烷基、c1
‑
c8烷基或c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh，其中r为1至5；且r8为h或c1
‑
c6烷基；或
[0087]
r8和r
16
一起形成(c4
‑
c6)环烷基或杂环烷基；
[0088]
或其立体异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、酯或溶剂合物。
[0089]
本发明还提供了一种组合物，包括(a)如本文所定义的化合物(例如式i、i’、ia、ii、iii等中的任一种)、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；和(b)(i)至少另一种本文所定义的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；(ii)另一种止痛剂；(iii)抗焦虑剂；(iv)抗抑郁剂；(v)药学上可接受的载体；或(vi)(i)至(v)中至少两种的组合。
[0090]
本发明还提供了一种预防或治疗疼痛的试剂盒，包括(a)如本文所定义的化合物(例如式i、i’、ia、ii、iii等中的任一种)、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；和(b)(i)至少另一种如本文所定义的化合物(例如式i、i’、ia、ii、iii等中的任一种)、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；(ii)另一种止痛剂；(iii)抗焦虑剂；(iv)抗抑郁剂；(v)药学上可接受的载体；(vi)在预防或治疗疼痛或其症状中使用所述试剂盒的说明；或者(vii)(i)至(vi)中至少两种的组合。
[0091]
本发明还提供了一种预防或治疗疼痛的方法，包括向受试者施用有效量的如本文所定义的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；或包括所述化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物和药学上可接受的载体的组合物。
[0092]
本发明还提供了如seq id nos：1
‑
59中定义的化合物，所述化合物通过例如表i中
所列的化合物中的任何替换进行修饰，包含如本文所定义的包含所述化合物的组合物和试剂盒和根据本文所述方法使用这些化合物的方法。
[0093]
更具体地，根据本发明，提供了以下项目：
[0094]
第1项.式(i)化合物
[0095][0096]
其中：
[0097]
(i)r1为h、
‑
ch3或
‑
nh2；且r
17
为h；或r
17
为h、
‑
nh2或
‑
ch3；且r1为h；
[0098]
(ii)r3为h或
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中p为1至5；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链；且r4为h或
‑
ch3；或
[0099]
r4为h或
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中p为1至5；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链；且r3为h或
‑
ch3[0100]
(iii)r6为h或
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中p’为1至5；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链；且r7为h或
‑
ch3；或
[0101]
r7为h或
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中p’为1至5；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链；且r6为h或
‑
ch3[0102]
(iv)r
10
为h或
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中q为1至5；或丙氨酸(环戊基)、丙氨酸(呋喃基)、苯丙氨酸(4
‑
氨基)、苯丙氨酸(4
‑
硝基)、苯丙氨酸(4
‑
甲基)、苯丙氨酸(2，3，4，5，6
‑
五氟)、酪氨酸、酪氨酸(oac)、色氨酸、赖氨酸、间酪氨酸、酪氨酸(ome)、苯丙氨酸、苯丙氨酸(4
‑
氟)、苯丙氨酸(4
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
叔丁基)、苯丙氨酸(4
‑
cf3)、丙氨酸(萘基)、苯丙氨酸(3
‑
氯)、苯丙氨酸(4
‑
氯)、苯丙氨酸(3
‑
溴)、苯丙氨酸(4
‑
溴)、苯丙氨酸(3
‑
碘)或苯丙氨酸(4
‑
氰基)的侧链；且r
11
为h或
‑
ch3或
[0103]
r
11
为h或
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中q为1至5；或丙氨酸(环戊基)、丙氨酸(呋喃基)、苯丙氨酸(4
‑
氨基)、苯丙氨酸(4
‑
硝基)、苯丙氨酸(4
‑
甲基)、苯丙氨酸(2，3，4，5，6
‑
五氟)、酪氨酸、酪氨酸(oac)、色氨酸、赖氨酸、间酪氨酸、酪氨酸(ome)、苯丙氨酸、苯丙氨酸(4
‑
氟)、苯丙氨酸(4
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
叔丁基)、苯丙氨酸(4
‑
cf3)、丙氨酸(萘基)、苯丙氨酸(3
‑
氯)、苯丙氨酸(4
‑
氯)、苯丙氨酸(3
‑
溴)、苯丙氨酸(4
‑
溴)、苯丙氨酸(3
‑
碘)或苯丙氨酸(4
‑
氰基)的侧链；且r
10
为h或
‑
ch3；
[0104]
(v)r
13
为h或
‑
ch3；且r
14
为h、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中q’为1至5；或亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、缬氨酸、新戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、环己基丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸(ome)、2，4，5
‑
三氟苯丙氨酸、环己基丁氨酸、环丙基丙氨酸、环丁基丙氨酸、环戊基丙氨酸或环庚基丙氨酸的侧链；或
[0105]
r
14
为h或
‑
ch3；且r
13
为h、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中q’为1至5；或亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、缬氨酸、新戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、环己基丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸(ome)、2，4，5
‑
三氟苯丙氨酸、环己基丁氨酸、环丙基丙氨酸、环丁基丙氨酸、环戊基丙氨酸或环庚基丙氨酸的侧链；
[0106]
(vi)r2、r5、r8、r9和r
12
各自独立地为h、(c1
‑
12)烷基或(c4
‑
c14)芳烷基；或
[0107]
r2、r5、r8、r9和r
12
中的至少一个如下，另一个为：：
[0108]
a)r2为
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中p为1至5；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链，其条件是r3和r4为h；
[0109]
b)r5为
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中p’为1至5；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链，其条件是r6和r7为h；
[0110]
c)r9为
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中q为1至5；或丙氨酸(环戊基)、丙氨酸(呋喃基)、苯丙氨酸(4
‑
氨基)、苯丙氨酸(4
‑
硝基)、苯丙氨酸(4
‑
甲基)、苯丙氨酸(2，3，4，5，6
‑
五氟)、酪氨酸、酪氨酸(oac)、色氨酸、赖氨酸、间酪氨酸、酪氨酸(ome)、苯丙氨酸、苯丙氨酸(4
‑
氟)、苯丙氨酸(4
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
叔丁基)、苯丙氨酸(4
‑
cf3)、丙氨酸(萘基)、苯丙氨酸(3
‑
氯)、苯丙氨酸(4
‑
氯)、苯丙氨酸(3
‑
溴)、苯丙氨酸(4
‑
溴)、苯丙氨酸(3
‑
碘)或苯丙氨酸(4
‑
氰基)，其条件是r
10
和r
11
为h；
[0111]
d)r
12
为
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中q’为1至5；或亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、缬氨酸、新戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、环己基丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸(ome)、2，4，5
‑
三氟苯丙氨酸、环己基丁氨酸、环丙基丙氨酸、环丁基丙氨酸、环戊基丙氨酸或环庚基丙氨酸的侧链，其条件是r
13
和r
14
为h；
[0112]
且r2、r5、r8、r9和r
12
中的其他基团各自独立地为h、(c1
‑
12)烷基或(c4
‑
c14)芳烷基；
[0113]
(vii)r
15
为h、
‑
or
18
，其中r
18
为h、苄基、(c4
‑
c14)芳烷基或(c1
‑
12)烯丙基；
[0114]
(viii)r
16
为h、
‑
ch3；且
[0115]
(x)x为
‑
(ch2)n，其中n为0
‑
4；且y为
‑
ch＝ch(ch2)m
‑
、
‑
nr
18
c(＝o)(ch2)m
‑
或
‑
c(＝o)nr
18
(ch2)m
‑
，其中m为1
‑
4；或
[0116]
x和y一起形成
‑
(ch2)n
‑
芳基
‑
(ch2)m
‑
，其中n和m定义如上所述，其中芳基为邻、间或对位苯基，或在2、3、4、2’、3’或4’中至少一个位置被取代或未被取代的联芳基；
[0117]
或其立体异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、酯或溶剂合物。
[0118]
第2项.第1项的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物，其中：
[0119]
(a)r
10
为取代的或未取代的
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)芳基或
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂芳基；且r
11
为h或
‑
ch3；
[0120]
(b)r
13
为h或
‑
ch3且r
14
为被取代或未被取代的
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)环烷基或
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂环烷基；
[0121]
(c)r1为h，r
17
为h，x为
‑
ch2且y为
‑
ch＝ch
‑
ch2‑
；和/或
[0122]
(d)r1为
‑
nh2，r
17
为h，x为
‑
ch2且y为
‑
ch＝ch
‑
ch2‑
。
[0123]
第3项.第1项的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物，其中所述化合物是表i的化合物之一。
[0124]
第4项.第1项或第2项的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物，其中所述化合物是为
[0125]
[0126][0127]
第5项.一种组合物，包括(a)如第1至5项中任何一项所定义的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；和(b)(i)如第1至5项中任何一项所定义的至少另一种化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；(ii)另一种止痛剂；(iii)抗焦虑剂；(iv)抗抑郁剂；(v)药学上可接受的载体；或(vi)(i)至(v)中至少两种的组合。
[0128]
第6项.一种预防或治疗疼痛的试剂盒，包括(a)如第1至5项中任何一项所定义的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；和(b)(i)如第1项中所定义的至少另一种化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；(ii)另一种止痛剂；(iii)抗焦虑剂；(iv)抗抑郁剂；(v)药学上可接受的载体；(vi)在预防或治疗疼痛或其症状中使用该试剂盒的说明；或(vii)(i)至(vi)中至少两种的组合。
[0129]
第7项.一种预防或治疗疼痛的方法，包括向受试者施用有效量的如第1至5项中任何一项所定义的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；或包括所述化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物和药学上可接受的载体的组合物。
[0130]
还提供了以下项目：
[0131]
1.式(i)化合物，
[0132][0133]
其中：
[0134]
(i)r1为h、(c3
‑
c8)烷基或(c3
‑
c8)氨基烷基；或h、
‑
ch3或nh2或
‑
nh
‑
氨基酸；且r
17
为h或ch3；或r
17
为h、(c3
‑
c8)烷基或(c3
‑
c8)氨基烷基；或h、
‑
nh2、
‑
nh氨基酸或
‑
ch3；且r1为h或ch3；(ii)r3为h或
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)烷基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)环烷基或
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基，其中p为1至5，其中所述芳基或杂芳基任选与一个或两个(c3
‑
c8)芳基形成并环，且其中所述烷基、杂芳基、芳基、环烷基和杂环烷
基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地为卤素或(c1
‑
c6)烷基；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、瓜氨酸、高赖氨酸(homolysine)、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链；且r4为h或
‑
ch3；或
[0135]
r4为h或
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)烷基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)环烷基或
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基，其中p为1至5，其中所述芳基或杂芳基任选与一个或两个(c3
‑
c8)芳基稠合；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、瓜氨酸、高赖氨酸、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链；且r3为h或
‑
ch3；
[0136]
(iii)r6为h或
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)烷基、
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)环烷基或
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)杂环烷基，其中p’为1至5，其中所述芳基或杂芳基任选地与一个或两个(c3
‑
c8)芳基形成并环，其中所述烷基、杂芳基、芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地为卤素或(c1
‑
c6)烷基；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、瓜氨酸、高赖氨酸、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链；且r7为h或
‑
ch3；或
[0137]
r7为h，或
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)烷基、
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)环烷基或
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)杂环烷基，其中p’为1至5，其中所述芳基或杂芳基任选与一个或两个(c3
‑
c8)芳基稠合，其中所述烷基、杂芳基、芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地为卤素或(c1
‑
c6)烷基；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、瓜氨酸、高赖氨酸、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链；且r6为h或
‑
ch3；
[0138]
(iv)(a)r
10
为h、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)烷基、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)环烷基或
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基，其中q是1至5，其中所述芳基或杂芳基任选与一个或两个(c3
‑
c8)芳基稠合，其中所述烷基、杂芳基、芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地为卤素或(c1
‑
c6)烷基；或丙氨酸(环戊基)、丙氨酸(环己基)、丙氨酸(环丁基)、丙氨酸(环丙基)、丙氨酸(溴苯基)、丙氨酸(噻吩基)、丙氨酸(苯甲酰基苯基)、丙氨酸(苯乙烯基)、丙氨酸(丙氨酸(苯乙烯基)；丙氨酸(吡啶基)、丙氨酸(苯并噻吩基)、丙氨酸(萘基)、联苯丙氨酸、二苯丙氨酸、甘氨酸(4
‑
羟基苯基)、丙氨酸(高酪氨酸)、丙氨酸(呋喃基)、苯丙氨酸(4
‑
氨基)、苯丙氨酸(4
‑
硝基)、苯丙氨酸(4
‑
甲基)、苯丙氨酸(2，3，4，5，6
‑
五氟)、酪氨酸、酪氨酸(o
‑
乙酰基)、色氨酸、赖氨酸、间酪氨酸、酪氨酸(o
‑
甲基)、苯丙氨酸、苯丙氨酸(4
‑
氟)、苯丙氨酸(4
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
叔丁基)、苯丙氨酸(4
‑
cf3)、苯丙氨酸(3
‑
氯)、苯丙氨酸(4
‑
氯)、苯丙氨酸(3
‑
溴)、苯丙氨酸(4
‑
溴)、苯丙氨酸(3
‑
碘)或苯丙氨酸(4
‑
氰基)的侧链；且r
11
为h或
‑
ch3；且r9如(vi)中所定义；或
[0139]
(b)r
11
为h、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)烷基、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)环烷基或
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基，其中q为1至5，其中所述芳基或杂芳基任选与一个或两个(c3
‑
c8)芳基稠合；且其中所述烷基、杂芳基、芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地为卤素，或(c1
‑
c6)烷基；或丙氨酸(环戊基)、丙氨酸(环己基)、丙氨酸(环丁基)、丙氨酸(环丙基)、丙氨酸(溴苯基)、丙氨酸(噻吩基)、丙氨酸(苯甲酰基苯基)、丙氨酸(苯乙烯基)、丙氨酸(丙氨酸(苯乙烯基)、丙氨酸
(吡啶基)、丙氨酸(苯并噻吩基)、丙氨酸(萘基)、联苯丙氨酸、二苯丙氨酸、甘氨酸(4
‑
羟基苯基)、丙氨酸(高酪氨酸)、丙氨酸(呋喃基)、苯丙氨酸(4
‑
氨基)、苯丙氨酸(4
‑
硝基)、苯丙氨酸(4
‑
甲基)、苯丙氨酸(2，3，4，5，6
‑
五氟)、酪氨酸、酪氨酸(o
‑
乙酰基)、色氨酸、赖氨酸、间酪氨酸、酪氨酸(o
‑
甲基)、苯丙氨酸、苯丙氨酸(4
‑
氟)、苯丙氨酸(4
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
叔丁基)、苯丙氨酸(4
‑
cf3)、丙氨酸(萘基)、苯丙氨酸(3
‑
氯)、苯丙氨酸(4
‑
氯)、苯丙氨酸(3
‑
溴)、苯丙氨酸(4
‑
溴)、苯丙氨酸(3
‑
碘)或苯丙氨酸(4
‑
氰基)的侧链；且r
10
为h或
‑
ch3；且r9如(vi)中所定义；或
[0140]
(c)r9与r
10
或r
11
形成一个环或一个环系，其中所述环或环系为一个(c3
‑
c8)环烷基、(c3
‑
c8)杂环烷基或(c3
‑
c8)杂芳基任选与另一个(c3
‑
c8)环烷基、(c3
‑
c8)杂环烷基或(c3
‑
c8)杂芳基形成并环，其中当r9与r
10
形成所述环或环系时，r
11
为h；且当r9与r
n
形成环状或环系时，r
i0
为h；且其中(vi)中的r9定义不适用；
[0141]
(v)r
13
为h或
‑
ch3；且r
14
为h、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)烷基、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)环烷基或
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂环烷基，其中q’为1至5，其中所述芳基或杂芳基任选与一个或两个(c3
‑
c8)芳基稠合；其中所述烷基、杂芳基、芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地为卤素或(c1
‑
c6)烷基；或亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、缬氨酸、新戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、环己基丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸(o
‑
甲基)、2，4，5
‑
三氟苯丙氨酸、环己基丁氨酸、环丙基丙氨酸、环丁基丙氨酸、环戊基丙氨酸、环庚基丙氨酸或甘氨酸的侧链；或
[0142]
r
14
为h或
‑
ch3；且r
13
为h、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)烷基、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基或
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)芳基、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)环烷基或
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂环烷基，其中q’为1至5，其中所述芳基或杂芳基任选与一个或两个(c3
‑
c8)芳基稠合；其中所述烷基、杂芳基、芳基、环烷基和杂环烷基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地为卤素，或(c1
‑
c6)烷基，或亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、缬氨酸、新戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、环己基丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸(o
‑
甲基)、2，4，5
‑
三氟苯丙氨酸、环己基丁氨酸、环丙基丙氨酸、环丁基丙氨酸、环戊基丙氨酸、环庚基丙氨酸或甘氨酸的侧链；
[0143]
(vi)(a)r2、r5、r8、r9和r
12
各自独立地为h、(c1
‑
12)烷基或(c4
‑
c14)芳烷基；或(b)r2、r5、r8、r9和r
12
中至少一个如下所示：
[0144]
a)r2为
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基或
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)芳基，其中p为1至5；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链，其条件为r3和r4为h；
[0145]
b)r5为
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基或
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)芳基，其中p’为1至5；或赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸或谷氨酸的侧链，其条件是r6和r7为h；
[0146]
c)r9为
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂芳基或
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)芳基，其中q为1至5；或丙氨酸(环戊基)、丙氨酸(呋喃基)、苯丙氨酸(4
‑
氨基)、苯丙氨酸(4
‑
硝基)、苯丙氨酸(4
‑
甲基)、苯丙氨酸(2，3，4，5，6
‑
五氟)、酪氨酸、酪氨酸(oac)、色氨酸、赖氨酸、间酪氨酸、酪氨酸(ome)、苯丙氨酸、苯丙氨酸(4
‑
氟)、苯丙氨酸(4
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
叔丁基)、苯丙氨酸(4
‑
cf3)、丙氨酸(萘基)、苯丙氨酸(3
‑
氯)、苯丙氨酸(4
‑
氯)、苯丙氨酸(3
‑
溴)、苯丙氨酸(4
‑
溴)、苯丙氨酸(3
‑
碘)或苯丙氨酸(4
‑
氰基)的侧链；其条件是r
10
和r
11
为h；
[0147]
d)r
12
为
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基或
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)芳基，其中q’为1至5；或亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、缬氨酸、新戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、环己基丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸(ome)、2，4，5
‑
三氟苯丙氨酸、环己基丁氨酸、环丙基丙氨酸、环丁基丙氨酸、环戊基丙氨酸或环庚基丙氨酸的侧链，其条件是r
13
和r
14
为h；
[0148]
r2、r5、r8、r9和r
12
中的其他基团各自独立地为h、(c1
‑
12)烷基或(c4
‑
c14)芳烷基；其条件是当为(iv)(c)时，这里r9的定义不适用；
[0149]
(vii)r
1s
为h或
‑
or
18
，其中r
18
为h、苄基、(c4
‑
c14)芳基或(c1
‑
12)烯丙基；
[0150]
(viii)r
16
为h或
‑
ch3；且
[0151]
(ix)(a)x为
‑
(ch2)n，其中n为0
‑
4；且y为
‑
(ch2)m
‑
、
‑
ch＝ch(ch2)m
‑
、
‑
c(r
22
)(r
23
)
‑
s
‑
c(r
24
)(r
25
)
‑
，其中r
22
、r
23
、r
24
和r
25
独立为h或(c1
‑
c4)烷基、
‑
nr
19
c(＝o)(ch2)m
‑
或
‑
c(＝o)nr
19
(ch2)m
‑
，其中m为1
‑
4，其中r
19
为h或(c1
‑
c5)烷基；或
[0152]
(b)x和y一起形成
‑
(ch2)n
‑
芳基
‑
(ch2)m
‑
，其中n和m定义如上，其中所述芳基为邻、间或对位苯基，或在2、3、4、2’、3’或4’中至少一个位置被取代或未被取代的联芳基；
[0153]
或其立体异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、酯或溶剂合物。
[0154]
2.项
′
1所述的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物，其中：
[0155]
(iv)r
10
为亮氨酸或取代或未取代的
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)芳基或
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂芳基，其中所述芳基或杂芳基任选与一个或两个(c3
‑
c8)芳基稠合，并且所述芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基取代，其中每个取代基独立地为卤素或(c1
‑
c6)烷基；且r
11
为h或
‑
ch3，或r
10
或r
11
与r9形成一个(c3
‑
c8)环烷基与另一个(c3
‑
c8)环烷基形成的并环；且
[0156]
(v)r
13
为h或
‑
ch3；且r
14
为被取代或未被取代的
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)环烷基、
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)烷基
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂环烷基，或
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)芳基。
[0157]
3.项
′
1所述的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物，其中所述化合物为本发明的任何一种化合物，例如本文所定义的化合物14
‑
17、21、27
‑
34、38
‑
49、51
‑
156、159
‑
170。
[0158]
4.项
′1‑
3中任一项所述的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物，其中所述化合物对nts2受体的选择性高于100。
[0159]
5.项
′1‑
4中任一项所述的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物，其中：(ii)r
10
或r
11
为苯丙氨酸、亮氨酸、联苯丙氨酸、色氨酸、噻吩丙氨酸、高酪氨酸、酪氨酸、苯并噻吩丙氨酸、呋喃丙氨酸、苯乙烯基丙氨酸、环戊基丙氨酸、吡啶基丙氨酸、环丁基丙氨酸或二苯丙氨酸的侧链；
‑
ch2‑
萘基；或
‑
ch2‑
环烷基，其中所述侧链、萘基和环烷基任选被一个或多个取代基取代，每个取代基独立为卤素或(c1
‑
c5)烷基；且r
10
或r
11
的另一个为h或ch3；和/或，
[0160]
(iii)r
13
或r
14
为
‑
(ch2)s
‑
(c3
‑
c7)环烷基或
‑
(ch2)s
‑
(c4
‑
c7)烷基，其中s为1
‑
3；或亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸或正亮氨酸的侧链，其中所述侧链任选被一个或多个取代基取代，每个取代基独立地定义如上所述；且r
14
是h或
‑
ch3。
[0161]
6.项1所述的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物，其中所述化合物为项3中定义的化合物43、30、101、108、86、58、57、146、84、140、72、82、147、138、55、87、92、32、28、63、54、155、65、143、52、169、149、142、53、150、74、81、62、80、132、73、
161、41、120、151、168、109、167、77、47、159、31、75、76、112、126、123、79、90、51、34、118、119、122、16、139、113、111、60、135、49、114、110、136、153、93、166、117、115、131、66、162、134、116、78、129、89、91、130、137、128、64、68、156、67、133和127中的任一个。
[0162]
7.项1
‑
3中任一项所述的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物，其中所述化合物为项3中所述的化合物34、67、116、127、128和133中的任一个。
[0163]
8.一种组合物，包括(a)项
′
1至7中任一项所述的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或其溶剂合物；和(b)(i)项
′
1至7中任一项所述的至少另一种化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或其溶剂合物；(ii)另一种止痛剂；(iii)抗焦虑剂；(iv)抗抑郁剂；(v)药学上可接受的载体；或(vi)(i)至(v)中至少两项的组合。
[0164]
9.一种预防或治疗疼痛的试剂盒，包括(a)项
′
1至7中任一项所述的化合物、其立体异构体、混合物、其药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；和(b)(i)项
′
1至7中任一项所述的至少另一种化合物、其立体异构体、混合物、其药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；(ii)另一种止痛剂；(iii)抗焦虑剂；(iv)抗抑郁剂；(v)药学上可接受的载体；(vi)在预防或治疗疼痛或其症状中使用所述试剂盒的说明；或(vii)(i)至(vi)中至少两项的组合。
[0165]
10.一种预防或治疗有需要的受试者的疼痛的方法，包括向受试者施用有效量的项
′
1至7中任一项所述的化合物、其立体异构体、混合物、药学上可接受的盐、酯或溶剂合物；或项
′
8中所述的组合物。
[0166]
在阅读以下对其具体实施方案的非限制性描述后，本发明公开的其他目的、优点和特征将变得更加明显，这些描述仅以举例的方式参照附图给出。
附图说明
[0167]
在附图中：
[0168]
图1a
‑
b：(图1a)化合物34通过烯烃复分解和(图1b)化合物94通过大环内酰胺化的大环化。
[0169]
图2a
‑
b：图2a：化合物34在急性热甩尾试验中的剂量
‑
反应曲线。与注射生理盐水的大鼠相比，在静脉注射不同剂量的化合物34后，每10分钟测量一次甩尾延迟，最长为60分钟。误差线代表平均值
±
sem。进行双因素方差分析，然后进行sidak校正。****p＜0.0001。图2b：在注射后10分钟计算化合物34对急性(甩尾)试验的最大可能效应的百分比(％mpe)，此时与注射生理盐水的大鼠相比，镇痛反应最大。误差线代表平均值
±
sem。进行单因素方差分析，然后进行dunnett校正。*p＜0.05，****p＜0.0001。
[0170]
图3：在注射后10分钟计算化合物34的mpe％，可以确定化合物34在急性疼痛中诱导止痛的最大半数有效剂量(ed
50
)。误差线代表平均值
±
sem。使用四个参数进行非线性回归，以计算从所得到的剂量
‑
反应曲线得到的化合物的ed
50
。
[0171]
图4a
‑
b：图4a化合物67在急性热甩尾试验中的剂量
‑
反应曲线。与注射生理盐水的大鼠相比，在静脉注射不同剂量的化合物67后，每10分钟测量一次甩尾延迟，最长为60分钟。误差线代表平均值
±
sem，n＝5
‑
8只大鼠。进行双因素方差分析，然后进行sidak校正。****p＜0.0001。图4b：在注射后10分钟计算化合物67对急性(甩尾)试验的最大可能效应的百分比(％mpe)，此时与注射盐水的大鼠相比，镇痛反应最大。****p＜0.0001.
[0172]
图5：在注射后10分钟计算化合物67的mpe％，可以确定化合物67在急性疼痛中诱
导止痛的最大半数有效剂量(ed
50
)。误差线代表平均值
±
sem。使用四个参数进行非线性回归，以计算n＝5
‑
8只大鼠从所得到的剂量
‑
反应曲线得到的化合物的ed
50
。
[0173]
图6a
‑
e：神经降压素能激动剂对急性疼痛的止痛效果。对大鼠进行甩尾试验，以化合物34(48.52μg/kg＝61nmol/kg)、化合物34(42nmol/kg、84nmol/kg和61nmol/kg)、60、67、91和116(61nmol/kg)的ed
50
进行鞘内注射(图6a
‑
b)；化合物34和127
‑
132(61nmol/kg)(图6c)；化合物34和133
‑
136(61nmol/kg)(图6d)；或化合物34和137(61nmol/kg)(图6e)，与注射生理盐水的大鼠相比。误差线代表平均值
±
sem。进行双因素方差分析，然后进行sidak校正。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。
[0174]
图7a
‑
b：急性鞘内注射30至150μg/kg的化合物34对大鼠足底注射福尔马林后疼痛行为的止痛作用。在急性期(图7a)和炎症期(图7b)，计算二级疼痛行为的曲线下面积(auc)。误差线代表平均值
±
sem(n＝5
‑
6/组)。进行单因素方差分析，然后进行dunnett校正。**p＜0.01。
[0175]
图8a
‑
e：化合物67在大鼠足底注射福尔马林后的强直性疼痛模型中的剂量反应曲线。图8a：在60分钟内测定每个测试剂量的疼痛评分，并计算所有测试时间内相应的曲线下面积(auc)。图8b
‑
d：获得的auc是在60分钟内的每个测试剂量下的疼痛评分，并计算出所有测试时间的相应曲线下面积(auc)。8b
‑
d：在急性期、炎症期和综合期用每个剂量得到的auc与用生理盐水得到的auc进行了比较。图8e：计算每个剂量的auc(急性期和炎症期合计图8d)，可以确定与注射生理盐水的大鼠相比化合物67的ed
50
诱导强直性疼痛的止痛作用。图8b
‑
d，进行单因素方差分析，然后进行dunnett校正。****p＜0.0001。对于图8e，使用四个参数进行非线性回归分析，从所得的剂量
‑
反应曲线中计算化合物的ed
50
。误差线代表平均值
±
sem，n＝5
‑
6只大鼠。
[0176]
图9a
‑
b：化合物34、67和pd149163对体温的影响。与注射生理盐水的大鼠相比，在静脉注射(i.t.injection)化合物34(150μg/kg)、化合物67(209nmol/kg)和pd149163(30μg/kg)后，每10分钟计算一次体温的变化(δ温度或体温)，最长为60分钟。误差线代表平均值
±
sem，n＝5
‑
6只大鼠。进行双因素方差分析，然后进行tukey校正。***p＜0.001；****p＜0.0001。
[0177]
图10a
‑
b：化合物34和67以及神经降压素8
‑
13对血压的影响。在静脉注射(i.v.injection)不同剂量的化合物34和67以及神经降压素8
‑
13(0.01mg/kg)后，每秒钟连续测量平均动脉血压的变化(δmabp)，直至1000s。每种化合物n＝5
‑
6只大鼠。误差线代表平均值
±
sem。神经降压素的ic
50
值从所产生的剂量
‑
反应曲线中获得。
[0178]
图11：化合物34和神经降压素8
‑
13对回肠松弛的影响。使用10
‑
11
至10
‑6m的神经紧张素8
‑
13(nt8
‑
13)和10
‑
11
至10
‑5m的化合物34的回肠松弛的百分比，每种化合物n＝4
‑
6大鼠。使用三个参数对回肠松弛的百分比进行非线性回归分析。从所得的剂量反应曲线中获得神经紧张素的ic
50
值。误差线代表平均值
±
sem。
具体实施方式
[0179]
本发明涉及大环化合物，其为神经降压素2(nts2)受体的特异性激动剂。因此，它们的优点是不会诱发低体温、低血压或回肠松弛，而这在nts1被激活时可能产生。其还涉及使用这些化合物或包含这些化合物的组合物来预防或治疗疼痛(例如，急性或慢性疼痛)的
方法。
[0180]
本发明的化合物
[0181]
在具体的实施方案中，本发明的大环化合物是通过从神经降压素肽(e
‑
l
‑
y
‑
e
‑
n
‑
k
‑
p
‑
r
‑
r
‑
p
‑
y
‑
i
‑
l)(seq id no：2)的7
‑
13片段(rrpyil)(seq id no：1)衍生的合成肽(通常由天然和/或非天然氨基酸制成)的环化而开发的。
[0182]
在具体的实施方案中，肽的环化是侧链到侧链的环化。在具体的实施方案中，合成肽的环化通过n
‑
和中心氨基酸(或酸)部分的每个侧链末端的烯烃(或炔)基的闭环复分解反应实现，环化产生单个碳
‑
碳双键(或单碳
‑
碳三键，如果使用炔基)。然后可以通过钯催化的氢化进一步修饰大环以将双键替换为单键。(参见例如化合物47)。
[0183]
在其他具体的实施方案中，肽的环化是通过n
‑
端氨基酸之一的侧链末端的胺和用于关闭循环的氨基酸残基(例如xaa4)的侧链末端的羧酸之间的大环内酰胺化反应或相反的反应实现的。
[0184]
在一个具体的实施方案中，本发明的化合物是如式i、ii或iii所示的化合物，或其立体异构体或混合物，或其药学上可接受的盐、酯或溶剂合物。如果本文提出的化合物或其部分的名称和结构不一致，当同时显示结构和名称时，应以结构为准。
[0185]
本文中作为本发明分子一部分的氨基酸或酸，应理解为指定的氨基酸或酸残基。它们中至少有一个末端与另一个氨基酸或酸相连，形成例如肽键，从而失去一个羟基和/或一个胺基的氢。因此，例如，在xaa1、xaa2、xaa3、xaa4、xaa5和xaa6的定义中的任何一个列出的氨基酸或酸应理解为相应的氨基酸或酸残基。
[0186]
在另一个具体的实施方案中，大环化合物具有以下结构：c[xaa1
‑
xaa2
‑
xaa3
‑
xaa4]
‑
xaa5
‑
xaa6(seq id no：3)，其中：
[0187]
xaa1和xaa4之间并环，且xaa1和xaa4相同或不同，为脂肪族残基、烯基残基、酸残基或天然或非天然的氨基酸、肽或其衍生物，这些基团任选被取代。在具体的实施方案中，其为[l
‑
烯丙基甘氨酸
‑
l
‑
烯丙基甘氨酸]、[l
‑
烯丙基甘氨酸
‑
d
‑
烯丙基甘氨酸]，[d
‑
烯丙基甘氨酸
‑
l
‑
烯丙基甘氨酸]、[d
‑
烯丙基甘氨酸
‑
d
‑
烯丙基甘氨酸]、[还原烯丙基甘氨酸
‑
烯丙基甘氨酸](烯丙基甘氨酸在反应后被还原)[l
‑
α
‑
甲基(4
‑
戊烯基)甘氨酸
‑
l
‑
烯丙基甘氨酸]、[d
‑
α
‑
甲基(4
‑
戊烯基)甘氨酸
‑
l
‑
烯丙基甘氨酸]、[l
‑
烯丙基甘氨酸
‑
l
‑
α
‑
甲基(4
‑
戊烯基)甘氨酸]、[l
‑
烯丙基甘氨酸
‑
d
‑
α
‑
甲基(4
‑
戊烯基)甘氨酸]、[l
‑
α
‑
甲基(4
‑
戊烯基)甘氨酸
‑
d
‑
α
‑
甲基(4
‑
戊烯基)甘氨酸]、[4
‑
戊烯酰基
‑
l
‑
甘氨酸]，[dap
‑
天门冬氨酸]、[dab
‑
天门冬氨酸]、[鸟氨酸
‑
天门冬氨酸]、[赖氨酸
‑
天门冬氨酸]、[dap
‑
谷氨酸]、[dab
‑
谷氨酸]、[鸟氨酸
‑
谷氨酸]、[赖氨酸
‑
谷氨酸]、[天门冬氨酸
‑
dap]、[天门冬氨酸
‑
dab]、[天门冬氨酸
‑
鸟氨酸]、[天门冬氨酸
‑
赖氨酸]、[谷氨酸
‑
dap]、[谷氨酸
‑
dab]、[谷氨酸
‑
鸟氨酸]、[谷氨酸
‑
赖氨酸]、[l
‑
烯丙基
‑
l
‑
g(α
‑
甲基(4
‑
戊烯基))]；[l
‑
cys
‑
l
‑
cys]；[l
‑
cys
‑
l
‑
青霉胺]；[l
‑
戊烯酰基
‑
l
‑
烯丙基甘氨酸]；[l
‑
戊烯酰基
‑
l
‑
g(α
‑
甲基
‑
(4
‑
戊烯基))]；[l
‑
青霉胺
‑
l
‑
cys]；及[l
‑
青霉胺
‑
l
‑
青霉胺]。在具体的实施方案中，这对xaal
‑
xaa2可以替代性地包括一个或两个上述任何天然或非天然氨基酸的类肽，或其衍生物。这些天然或非天然氨基酸、类肽或其衍生物任选被取代。在所有前述两个残基的组合中，它们可以是l、l；l
‑
d；d、l；或d；d的构型。在具体的实施方案中，xaa4和xaa1通过其侧链连接。在具体的实施方案中，当xaal为氨基酸时，其n端与一个或多个不构成环的附加氨基酸连接。在不作如此限制的情况下，大环
化合物具有以下结构：(xaa)r
‑
c[xaal
‑
xaa2
‑
xaa3
‑
xaa4]
‑
xaa5
‑
xaa6，其中r是0、1、2或3。
[0188]
xaa2为天然或非天然的氨基酸或其衍生物，这些基团任选被取代。在具体的实施方案中，xaa2为甘氨酸(
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂芳基)、甘氨酸(
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)芳基)、甘氨酸(
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基)甘氨酸(
‑
(ch2)p
‑
(c3
‑
c8)环烷基)、甘氨酸(
‑
c1
‑
c8氨基烷基)、甘氨酸(c1
‑
c8烷基)或甘氨酸(
‑
c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh)，其中p为1至5。在其他具体的实施方案中，xaa2为瓜氨酸、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、l
‑
正亮氨酸(nle)、正缬氨酸(nva)、甘氨酸、谷氨酸、高赖氨酸、或上述任何一种氨基酸的类肽或其衍生物，这种天然或非天然的氨基酸、类肽或其衍生物任选被取代。。更具体地说，为赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、l
‑
赖氨酸、组氨酸、正亮氨酸(nle)、正缬氨酸(nva)、甘氨酸、谷氨酸或其衍生物，所述天然或非天然的氨基酸或其衍生物任选被取代；
[0189]
xaa3为天然或非天然的氨基酸或其衍生物，这些分子任选被取代。在具体的实施方案中，其为甘氨酸(
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基)、甘氨酸(
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)芳基)、甘氨酸(
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)杂环烷基)、甘氨酸(
‑
(ch2)p
’‑
(c3
‑
c8)环烷基)、甘氨酸(
‑
c1
‑
c8氨基烷基)、甘氨酸(c1
‑
c8烷基)或甘氨酸(
‑
c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh)，其中p’为1至5。在具体的实施方案中，xaa3为瓜氨酸、精氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、赖氨酸、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、高赖氨酸，或上述任何一种氨基酸的类肽，或其衍生物，所述天然或非天然的氨基酸、类肽或其衍生物任选被取代。在具体的实施方案中，xaa3为赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸(dab)、二氨基丙酸(dap)、d
‑
赖氨酸、组氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、甘氨酸、谷氨酸或其衍生物，所述天然或非天然的氨基酸或其衍生物任选被取代；
[0190]
xaa5为天然或非天然的氨基酸或其衍生物，这些基团任选被取代。在具体的实施方案中，xaa5为甘氨酸(
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂芳基)、甘氨酸(
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)芳基)、甘氨酸(
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)杂环烷基)、甘氨酸(
‑
(ch2)q
‑
(c3
‑
c8)环烷基)、甘氨酸(
‑
c1
‑
c8氨基烷基)、甘氨酸(c1
‑
c8烷基)、或甘氨酸(
‑
c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh)，其中q为1至5。在更具体的实施方案中，xaa5为甘氨酸(噻吩基)、丙氨酸(噻吩基)、甘氨酸(噻唑基)、丙氨酸(噻唑基)、甘氨酸(吡啶基)、丙氨酸(吡啶基)、甘氨酸(喹啉基)、丙氨酸(喹啉基)、丝氨酸(o
‑
苄基)、酪氨酸(o
‑
乙酰基)、色氨酸、赖氨酸、d
‑
酪氨酸、m
‑
酪氨酸、d
‑
色氨酸、丙氨酸(呋喃基)、苯丙氨酸(4
‑
氨基)、苯丙氨酸(4
‑
硝基)、苯丙氨酸(2，3，4，5，6
‑
三氟)、苯丙氨酸(4
‑
甲基)、d
‑
赖氨酸、酪氨酸甲基、苯丙氨酸、苯丙氨酸(4
‑
氟)、苯丙氨酸(4
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
叔丁基)、苯丙氨酸(4
‑
cf3)、萘丙氨酸、苯丙氨酸(3
‑
氯)、苯丙氨酸(4
‑
氯)、苯丙氨酸(3
‑
溴)、苯丙氨酸(4
‑
溴)、苯丙氨酸(3
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
氰基)、或上述任何一种氨基酸的类肽，或其衍生物，这些天然或非天然的氨基酸、类肽或其衍生物任选被取代。更优选的为酪氨酸、酪氨酸(o
‑
乙酰基)、色氨酸、赖氨酸、d
‑
酪氨酸、m
‑
酪氨酸、d
‑
色氨酸、d
‑
赖氨酸、酪氨酸
‑
o
‑
甲基、苯丙氨酸、苯丙氨酸(4
‑
氟)、苯丙氨酸(4
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
叔丁基)、苯丙氨酸(4
‑
cf3)、萘丙氨酸、苯丙氨酸(3
‑
氯)、苯丙氨酸(4
‑
氯)、苯丙氨酸(3
‑
溴)、苯丙氨酸(4
‑
溴)、苯丙氨酸(3
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
氰基)或其衍生物，这些天然或非天然的氨基酸或其衍生物任选被取代。更优选地为芳香族氨基酸，例如酪氨酸、酪氨酸(o
‑
乙酰基)、色氨酸、赖氨酸、d
‑
酪氨酸、m
‑
酪氨酸、d
‑
色氨酸、酪氨酸甲酯、苯丙氨酸、苯丙氨酸(4
‑
氟)、苯丙氨酸(4
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
叔丁基)、
苯丙氨酸(4
‑
cf3)、萘丙氨酸、苯丙氨酸(3
‑
氯)、苯丙氨酸(4
‑
氯)、苯丙氨酸(3
‑
溴)、苯丙氨酸(4
‑
溴)、苯丙氨酸(3
‑
碘)、苯丙氨酸(4
‑
氰基)、4
‑
溴苯丙氨酸；高酪氨酸；4
‑
羟基苯基甘氨酸；丙氨酸；蒽丙氨酸；苯并环戊基；联苯丙氨酸；环丁基丙氨酸；环戊基丙氨酸；环丙基丙氨酸；二氢吲哚基甘氨酸；二苯丙氨酸；吲哚基丙氨酸；2
‑
噻吩基丙氨酸；八氢吲哚甘氨酸；苯乙烯基丙氨酸；苯甲酰苯丙氨酸；吡啶基丙氨酸；tic甘氨酸，或其衍生物，这些天然或非天然氨基酸或其衍生物任选被取代。
[0191]
xaa6为天然或非天然的氨基酸或其衍生物，这些分子任选被取代。xaa6也可以表示超过1个的氨基酸(例如2、3或4个氨基酸)。在具体的实施方案中，xaa6为甘氨酸(
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂芳基)、甘氨酸(
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)芳基)、甘氨酸(
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)杂环烷基)、甘氨酸(
‑
(ch2)q
’‑
(c3
‑
c8)环烷基)、甘氨酸(
‑
c1
‑
c8氨基烷基)、甘氨酸(c1
‑
c8烷基)，或甘氨酸(
‑
c1
‑
c8烷基
‑
c(＝o)oh)，其中q’为1至5。在具体的实施方案中，xaa6为天然的或非天然的氨基酸、类肽或其衍生物，具有连接到其β碳的单一取代基(参见例如，化合物15
‑
21、28
‑
29、31
‑
32、34、38
‑
49、51
‑
70、72
‑
170)。在一个具体的实施方案中，xaa6为天然的或非天然的氨基酸、类肽或其衍生物，没有2个(或3个)取代基连接到其β碳上。在其他实施方案中，xaa6为天然或非天然氨基酸、类肽或其衍生物，在其γ碳上连接有多个取代基(至少2个)(参见例如化合物15
‑
21、28
‑
29、31
‑
32、34、38
‑
49、51
‑
70、72
‑
170)。在更具体的实施方案中，xaa6为异亮氨酸、亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、缬氨酸、d
‑
亮氨酸、新戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、环己基丙氨酸、苯基、酪氨酸
‑
o
‑
甲基、苯丙氨酸(2，4，5
‑
三氟)、环己基丁氨酸，环丙基丙氨酸、环丁基丙氨酸、环戊基丙氨酸、环庚基丙氨酸或上述任何一种氨基酸的类肽或其衍生物，这些天然或非天然的氨基酸、类肽或其衍生物任选被取代。更优选地为亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、缬氨酸、d
‑
亮氨酸、新戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、环己基丙氨酸、苯基、酪氨酸
‑
o
‑
甲基、2，4，5
‑
三氟苯基、环己基丁氨酸、环丙基丙氨酸、环丁基丙氨酸、环戊基丙氨酸、环庚基丙氨酸或其衍生物，这些天然或非天然的氨基酸或其衍生物任选被取代；以及
[0192]
在一个具体的实施方案中，用于闭环的末端非天然氨基酸残基之一(例如xaa1
‑
对应于神经降压素中的第7位)，在闭环之前是烯基甘氨酸(例如xaa1是乙烯基甘氨酸，xaa1是烯丙基甘氨酸(例如化合物34、40
‑
42、91和92)；或α
‑
甲基(4
‑
戊烯基)
‑
甘氨酸(例如化合物89、90和93))，而另一端(例如xaa4)在闭环前是烯基残基(例如xaa4是乙烯基
‑
甘氨酸、烯丙基
‑
甘氨酸(例如化合物34、40
‑
42、89和90)；或α
‑
甲基(4
‑
戊烯基)
‑
甘氨酸(例如化合物91
‑
93)，酸残基或非天然氨基酸残基，所述烯基、酸或氨基酸残基在其末端(在氨基酸残基的情况下是其侧链的末端)包括烯烃部分。闭环后，每个部分的双键(烯)已经合并成一个单一的碳碳双键，例如闭环复分解反应。
[0193]
在其他实施方案中，用于闭环的末端(天然或非天然)氨基酸残基之一(例如，对应于神经降压素中第7位的xaa1或对应于神经降压素中第10位的xaa4)在闭环之前是一个(天然或非天然)氨基酸，其侧链上有胺，而另一末端(例如对应于神经降压素中的第10位的xaa4或对应于神经降压素中的第7位的xaa1)在闭环前是一个(天然或非天然)的氨基酸，其侧链上有羧酸，因此胺和羧酸通过大环内酰胺化反应形成一个酰胺。更具体地说，末端(天然或非天然)氨基酸残基之一可为闭环前的dap(例如化合物94和98中的xaa1；以及化合物102和103中的xaa4)；dab(例如化合物95和99中的xaa1；以及化合物104和105中的xaa4)；鸟
氨酸(例如化合物96和100中的xaa1；以及化合物106和107中的xaa4)；赖氨酸(例如化合物97和101中的xaa1；以及化合物108和109中的xaa4)；而另一端末端(天然或非天然)氨基酸残基可为闭环前的天冬氨酸(例如化合物94
‑
97中的xaa4和化合物103、105、107和109中的xaal；或谷氨酸(例如化合物98
‑
101中的xaa4和化合物102、104、106和108中的xaa1。闭合后，由偶联剂激活的侧链羧酸已与另一残基的侧链的氨基使用例如大环内酰胺化反应形成肽键。
[0194]
在其他实施方案中，xaa1在闭环前是具有4至11个碳原子的脂肪族尾部的酸残基，包括一个末端烯烃(例如，壬烯酸残基)或具有被末端烯烃取代的氨基烷基链的酸残基(例如氨基六
‑6‑
烯酸残基；具有包括末端烯烃的烷基链的非天然氨基酸(例如α
‑
甲基辛烯基丙氨酸残基)或具有包含末端烯烃的氨基烷基链的非天然氨基酸(例如n
‑
烯丙基鸟氨酸残基)、n
‑
烯丙基dab(二氨基丁酸)残基、n
‑
丁烯基dab残基、n
‑
戊烯基dap(二氨基丙酸)残基、n
‑
烯丙基赖氨酸残基(n
‑
烯丙基
‑
l
‑
赖氨酸；或n
‑
烯丙基
‑
d
‑
赖氨酸)、n
‑
丁烯基
‑
赖氨酸残基或n
‑
戊烯基
‑
赖氨酸残基。xaa1可以进一步被取代，例如在内环胺上被取代。
[0195]
如本文所使用的，提及上述c[xaa1
‑
xaa2
‑
xaa3
‑
xaa4]
‑
xaa5
‑
xaa6结构中的天然或非天然氨基酸或酸残基时，术语“被取代”是指被卤素(例如cl、f、br、i)、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、氨基烷基、氨基芳基、氨基芳基烷基、氨基环烷基、氨基杂芳基、氨基杂芳基烷基或氨基杂环烷基取代。
[0196]
在具体的实施方案中，本发明的化合物包括氨基酸残基序列xaa1
‑
xaa2
‑
xaa3
‑
xaa4
‑
xaa5
‑
l(seq id no：4)、xaal
‑
xaa2
‑
xaa3
‑
xaa4
‑
y
‑
xaa6(seq id no：5)、xaa1
‑
xaa2
‑
xaa3
‑
g
‑
xaa5
‑
xaa6(seq id no：6)、xaa1
‑
xaa2
‑
k
‑
xaa4
‑
xaa5
‑
xaa6(seq id no：7)、xaal
‑
k
‑
xaa3
‑
xaa4
‑
xaa5
‑
xaa6(seq id no：8)或g
‑
xaa2
‑
xaa3
‑
xaa4
‑
xaa5
‑
xaa6(seq id no：9)，其中xaa1、xaa2、xaa3、xaa4、xaa5和xaa6的定义如上所述。在具体的实施方案中，本发明的化合物包括氨基酸残基序列xaa1
‑
k
‑
k
‑
xaa4
‑
y
‑
l(seq id no：10)、xaal
‑
xaa2
‑
k
‑
xaa4
‑
y
‑
l(seq id no：11)、xaa1
‑
k
‑
xaa3
‑
xaa4
‑
y
‑
l(seq id no：12)、xaa1
‑
k
‑
k
‑
xaa4
‑
xaa5
‑
l(seq id no：13)、xaa1
‑
k
‑
k
‑
xaa4
‑
y
‑
xaa6(seq id n：14)，其中xaa1、xaa2、xaa3、xaa4、xaa5和xaa6的定义如上所述。在具体的实施方案中，xaa1和xaa4在其侧链上包括烯烃。在其他实施方案中，xaal和xaa4在其侧链上分别包括羧酸或胺，反之亦然。在其他具体的实施方案中，本发明的化合物包括氨基酸残基序列g
‑
k
‑
k
‑
g
‑
y
‑
l(seq id no：15)、xaa1
‑
k
‑
k
‑
g
‑
y
‑
l(seq id no：16)、g
‑
xaa2
‑
k
‑
g
‑
y
‑
l(seq id no：17)、g
‑
k
‑
xaa3
‑
g
‑
y
‑
l(seq id no：18)、g
‑
k
‑
k
‑
xaa4
‑
y
‑
l(seq id no：19)、g
‑
k
‑
k
‑
g
‑
xaa5
‑
l(seq id no：20)、g
‑
k
‑
k
‑
g
‑
y
‑
xaa6(seq id no：21)、其中xaal、xaa2、xaa3、xaa4、xaa5和xaa6的定义如上所述。在其他具体的实施方案中，本发明的化合物包括氨基酸残基序列g(烯烃)
‑
k
‑
k
‑
g(烯烃)
‑
y
‑
l(seq id no：10)、xaa1
‑
k
‑
k
‑
g(烯烃)
‑
y
‑
l(seq id no：10)、g(烯烃)
‑
xaa2
‑
k
‑
g(烯烃)
‑
y
‑
l(seq id no：11)、g(烯烃)
‑
k
‑
xaa3
‑
g(烯烃)
‑
y
‑
l(seq id no：12)、g(烯烃)
‑
k
‑
k
‑
xaa4
‑
y
‑
l(seq id no：10)、g(烯烃)
‑
k
‑
k
‑
g(烯烃)
‑
xaa5
‑
l(seq id no：13)、g(烯烃)
‑
k
‑
k
‑
g(烯烃)
‑
y
‑
xaa6(seq id no：14)，其中xaal、xaa2、xaa3、xaa4、xaa5和xaa6的定义如上所述。在其他具体的实施方案中，本发明的化合物包括表i的任何结构或包括一个或多个取代基(例如，在氨基酸残基上)的上述任何衍生物。在这些特定的化合物中，xaa1和xaa4的侧链上的烯烃共享其双键。在其他化合物中，xaal或xaa4侧链上的羧酸(例如谷氨酸或天冬氨酸)与xaa1和xaa4中另一个侧链上的胺
(例如赖氨酸、鸟氨酸、dab或dap)形成肽键。
[0197]
在具体的实施方案中，大环的大小可为14
‑
18个环原子，优选13
‑
20个环原子。在具体的实施方案中，大环的大小可为14
‑
18个环原子。在具体的实施方案中，大环的大小为13个环原子、14个环原子(例如化合物13
‑
17、21、27
‑
34、38
‑
49、51
‑
55、57
‑
88、84、103)、15个环原子(例如化合物95、98、102、105)、16个环原子(例如化合物89
‑
92、96、99、104、107)、17个环原子(例如化合物97、100、106、109)、18个环原子(例如化合物93、101、108)、19个环原子或20个环原子。
[0198]
在所有上述化合物中，残基(例如xaa1至xaa6)可为l或d构型。
[0199]
本发明的化合物优选为选择性nts2配体。如本文所用的术语“选择性nts2”或“对nts2有选择性”指与表达nts1的ic50的比率。抑制nts2所需的ic50大于1；或2或更多；3或更多；4或更多；5或更多；6或更多；7或更多；8或更多；9或更多；10或更多；11或更多；12或更多；13或更多；14或更多；15或更多；20或更多；25或更多；30或更多；35或更多；40更多；45更多；50或更多；55或更多；60或更多；65或更多；70或更多；75或更多；80或更多；85或更多；90或更多；55或更多；优选100或更多；110或更多；120或更多；130或更多；140或更多；150或更多；160或更多；170或更多；180或更多；190更多；200或更多；220或更多；230更多；240或更多；250或更多；260或更多；270或更多；280或更多；290或更多；更优选300或更多；350或更多；400或更多；450或更多；500或更多；550或更多；600或更多；650或更多；700或更多；750或更多；800或更多；850或更多；900更多；甚至更优选1000或更多；1500或更多；2000或更多；2500或更多；3000或更多；3500或更多；4000或更多；4500或更多；5000或更多；5500或更多；6000或更多；6500或更多；7000或更多；7500或更多；8000或更多；8500或更多；9000或更多；甚至更优选10000或更多；20000或更多；或30000或更多。本发明的化合物的选择性如表iii中提供，但不限于。
[0200]
化学基团
[0201]
如本文所用，术语“烷基”是指具有指定范围内的碳原子数的一价直链或支链、饱和或不饱和脂肪族烃基。因此，例如，“(c1
‑
12)烷基”(或“c1
‑
12烷基”)是指任何碳原子数最多为12的烷基，包括己基烷基和戊基烷基的异构体以及正、异、仲和叔丁基，正和异丙基，乙基和甲基。作为另一个例子，“(c1
‑
4)烷基”是指正、异、仲和叔丁基，正和异丙基，乙基和甲基。作为另一个例子，“c1
‑
3烷基”是指正丙基、异丙基、乙基和甲基。烷基包括不饱和脂肪族烃，包括烷基(r
‑
c≡c
‑
r)；和/或烯烃(r
‑
c＝c
‑
r)。
[0202]
术语“卤素”(halogen或halo)是指氟、氯、溴或碘(也称为氟、氯、溴和碘)。术语“卤代烷基”是指上述定义的烷基，其中一个或多个氢原子已被卤素(即f、cl、br和/或i)取代。因此，例如，“c1
‑
10卤代烷基”(或“c1
‑
c6卤代烷基”)是指带有一个或多个卤素取代基的上述定义的c1至c10直链或支链烷基。术语“氟代烷基”具有类似的含义，只是卤素取代基仅限于氟。合适的氟烷基包括(ch2)0‑4cf3系列(即三氟甲基、2，2，2
‑
三氟乙基、3，3，3
‑
三氟正丙基等)。
[0203]
术语“杂烷基”具有在本领域中通常的含义，是指本文所述的一个或多个碳原子被杂原子(例如氧、氮、硫或其衍生物等)取代的烷基。杂烷基的例子包括但不限于烷氧基、烷基取代的氨基、硫醇例如甲硫氨酸的侧基。最多两个杂原子可以是连续的。当用c2‑6这样的前缀来指代杂烷基时，碳量(2
‑
6，在这个例子中)是指也包括杂原子。
[0204]
术语“氨基烷基”是指上述定义的烷基，其中一个或多个氢原子或碳原子已被氮或氨基衍生物取代，例如但不限于胍。因此，例如，“c1
‑
6氨基烷基”(或“c1
‑
c6氨基烷基”)是指带有一个或多个氨基衍生物(如nh、酰胺、双吖丙啶基(diazirin)、叠氮化物(azide)等)的上述定义的c1至c6直链或支链烷基。
[0205]
术语“硫代烷基”是指上述定义的烷基，其中一个或多个氢原子或碳原子已被硫原子或硫醇衍生物取代。因此，例如，“c1‑6硫代烷基”(或“c1
‑
c6硫代烷基”)是指带有一个或多个硫原子或硫醇衍生物(例如s、sh等)的上文定义的c1至c6线性或支链烷基。
[0206]
氨基烷基和硫代烷基是术语“杂烷基”或取代的烷基的具体实施方案并包含在其中，取决于杂原子取代碳原子或氢原子。
[0207]
术语“环烷基”是指由饱和的3
‑
8个环原子组成的饱和脂环族烃，任选与额外的(1
‑
3个)脂肪族(环烷基)或芳香族环系形成并环，每个额外的环由3
‑
8个环原子环组成。其包括但不限于环丙基(例如化合物65和144)、环丁基(例如化合物66和143)、环戊基(例如化合物67、127
‑
129、133
‑
135、137、142)、环己基(例如化合物30
‑
31、64)和环庚烷(例如化合物68)。
[0208]
术语“杂环基”是指(i)含有独立选自n、o和s的1至3个杂原子的4至7元饱和杂环基，或(ii)是杂双环(例如苯并环戊基、八氢吲哚(例如化合物166))。本发明范围内的4
‑
7元饱和杂环基的例子包括，例如，氮杂环丁基(azetidinyl)、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、吡咯烷基、吡啶基、咪唑烷基、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、六氢嘧啶基、噻嗪基(thiazinanyl)、硫氮杂环庚基(thiazepanyl)、氮杂环戊烷基(azepanyl)、二氮杂环戊烷基(diazepanyl)、四氢吡喃基(tetrahydropyranyl)、四氢硫代吡喃基(tetrahydrothiopyranyl)和二噁烷基(dioxanyl)。本发明范围内的4
‑
7元不饱和杂环的例子包括与前句所列的饱和杂环相对应的单不饱和杂环，其中单键被替换为双键(例如碳
‑
碳单键被替换为碳
‑
碳双键)。
[0209]
术语“c(o)”是指羰基。术语“s(o)
2”和“so
2”分别是指磺酰基。术语“s(o)”是指亚磺酰基。
[0210]
术语“芳基”是指由3
‑
8个环原子组成的芳香族(不饱和)化合物，任选与额外的(1
‑
3个)脂肪族(环烷基)或芳香族环系形成并环，每个额外的环由3
‑
8元环组成(例如蒽(例如化合物162)、茚满(例如化合物164)、tic(例如化合物163、167)、3
‑
苯并噻吩基丙氨酸(例如化合物168)、二氢吲哚(例如化合物170))。在一个具体的实施方案中，其是指苯基(例如化合物32、62、63、34、15、21、39、75
‑
78、110
‑
111、113
‑
118、121
‑
137、139
‑
141、145
‑
155、157
‑
158、160
‑
161)、苯并环戊基，或萘基(例如化合物112)。术语“杂芳基”是指(i)含有独立选自n、o和s的1至4个杂原子的3、4、5、6、7或8元杂芳环(更具体为3
‑
7或3
‑
6元环)，例如苯硫基(例如化合物159)、噻吩基(例如化合物168)、吡啶基(例如化合物165、169)，或(ii)选自吲哚基(例如化合物43、166、168、170)、喹啉基(quinolinyl)、异喹啉基(isoquinolinyl)、tic(例如化合物163、167)、二氢吲哚甘氨酸(例如化合物170)和喹喔啉基(quinoxalinyl)的杂二环。合适的3、4、5和6元杂芳环包括，例如双吖丙啶基(diazirin)、吡啶基(pyridyl也称为pyridinyl)、吡咯基、二嗪基(diazine)(例如吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基)、三嗪基(triazinyl)、噻吩基、呋喃基、咪唑基(例如化合物55、83
‑
84)、吡唑基、三唑基(例如1，2，3三唑基)、四唑基(例如1，2，3，4四唑基)、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁三唑基、噻唑基、异噻唑基、和噻二唑基。特别感兴趣的杂芳基为吡咯基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、喹啉基
(quinolinyl或quinolyl)、异喹啉基(isoquinolinyl或isoquinolyl)和喹喔啉基。合适的杂双环包括吲哚基。
[0211]
术语“芳烷基”，更具体地说，“(c4
‑
c14)芳烷基”或“c4
‑
14芳烷基”在此是指包含被1
‑
7个烷基取代的3
‑
7个环状原子芳基的化合物。在具体实施中，它是指苄基或苯乙基。
[0212]
如本文所用，除非另有说明，术语“烷基”、“卤代烷基”、“氨基烷基”、“环烷基”、“杂环烷基”、“芳基”、“杂烷基”和“杂芳基”以及指定其具体实施方式的术语(例如丁基、氟丙基、氨基丁基、环丙烷、吗啉、苯基、吡唑等)包括这些基团的取代(即在卤代烷基和氨基烷基的情况下，除了它们各自的卤素和氮取代基之外)和这些基团的未取代的实施方案。因此，例如，术语“苯基”包括未被取代的苯基以及氟苯基、羟基苯基、甲磺酰基苯基(或联苯)、二苯基、三氟甲基二氮杂苯基(trifluoromethyl
‑
diazirin
‑
phenyl)、异丙基苯基、三氟羟基苯基。同样地，术语吡唑，包括未取代的吡唑以及甲基吡唑。一个或多个取代基可以是胺、卤素、羟基、c1
‑
6氨基烷基、c1
‑
6杂烷基、c1
‑
6烷基、c3
‑
8环烷基、c1
‑
6卤代烷基、芳基、杂芳基和杂环基(等)。
[0213]
可以理解的是，上面列出的特定环并不是对可用于本发明的环的限制。这些环只是具有代表性。
[0214]
除非在特定上下文中明确相反地说明，本文所述的各种环和环系中的任何一个都可以在任何环原子(即任何碳原子或任何杂原子)上连接到化合物的其余部分，只要由此产生一个稳定的化合物。
[0215]
异构体、互变异构体和多晶型物
[0216]
如本文所用，术语“异构体”是指立体异构体，包括光学异构体(对映异构体)、非对映异构体以及其他已知类型的异构体。
[0217]
本发明的化合物至少有5个不对称的碳原子，因此可以以光学纯的对映体(光学异构体)和其混合物(外消旋体)的形式存在。这些化合物至少有5个不对称的碳原子，因此可以以纯非对映异构体的形式存在，也可以以其混合物的形式存在。应当理解的是，除非另有规定，本发明公开内容包括本发明公开化合物的外消旋体、对映异构体和/或非对映异构体以及它们的混合物。例如，本发明的化合物40、41和42是非对映异构体；本发明的化合物89和90是非对映异构体；本发明公开的化合物91和92是非对映异构体；化合物34和38、化合物16和43、化合物17和48、化合物34和21、化合物83和84等。
[0218]
为了进一步明确，(s)
‑
h或(s)
‑
ch3表示带有h或ch3取代基的立体中心是(s)立体化学的。
[0219]
此外，本发明还包括所有几何异构体。例如，当本发明公开的化合物包含一个双键或稠环时，顺式和反式以及混合物都包含在本发明的范围内。
[0220]
在本发明中，应该理解的是，本发明的化合物可能表现出互变异构现象，本说明书中的结构图只能代表可能的互变异构形式中的一种。应当理解的是，本发明包括任何互变异构形式，而不仅仅限于结构图中所使用的任何一种同分异构体形式。
[0221]
还应理解的是，本发明的某些化合物可能表现出多晶型现象，而本发明包括所有此类形式。
[0222]
盐
[0223]
本发明涉及上述定义的公开化合物以及其盐。本文所用的术语“盐”是指与无机碱
和/或有机碱形成的碱式盐。用于药物组合物的盐将是药学上可接受的盐，但其它盐可用于生产本发明的化合物。术语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的盐，这些盐在药理学上是可接受的，并且对被施用的对象基本上没有毒性。更具体地说，这些盐保留了本公开的抗动脉粥样硬化化合物的生物有效性和性质，并由合适的无毒有机或无机酸或碱形成。
[0224]
例如，当本发明的化合物具有足够的酸性时，本发明的盐包括与无机或有机碱形成的碱式盐。这类盐包括碱金属盐，例如钠盐、锂盐和钾盐；碱土金属盐，例如钙盐和镁盐；金属盐，例如铝盐、铁盐、锌盐、铜盐、镍盐和钴盐；无机胺盐，例如铵盐或取代的铵盐，例如三甲基铵盐和有机碱(例如有机胺)的盐，例如氯普鲁卡因盐、二苄胺盐、二环己基胺盐、二乙醇胺盐、乙胺盐(包括二乙胺盐和三乙胺盐)、乙二胺盐、葡萄糖胺盐、胍盐、甲胺盐(包括二甲胺盐和三甲胺盐)、吗啉盐、吗啉盐、n，n
’‑
二苄基乙二胺盐、n
‑
苄基苯乙胺盐、n
‑
甲基葡萄糖胺盐、苯甘氨酸烷基酯盐、哌嗪盐、哌啶盐、普鲁卡因盐、叔丁基胺盐、四甲基胺盐、叔辛基胺盐、三(2
‑
羟乙基)胺盐和三(羟甲基)氨基甲烷盐。优选的盐包括与钠、锂、钾、钙和镁形成的盐。
[0225]
这类盐可以由本领域的技术人员使用标准技术常规地形成。事实上，将药物化合物(即药物)化学修饰成盐是药物化学家所熟知的技术，(参见例如，h.ansel等人，《药物剂型和给药系统》(第6版，1995年)第196页和1456
‑
1457页，在此作为参考。)(see，e.g.，h.ansel et.al.，pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems(6th ed.1995)at pp.196and 1456
‑
1457，incorporated herein by reference)。本发明的化合物的盐可以通过以下方式形成，例如，将本发明的化合物与一定量的酸或碱，例如等量的酸或碱，在例如盐在其中沉淀的介质中或在水介质中反应然后冻干。
[0226]
酯
[0227]
本发明涉及上述定义的公开化合物及其酯。本文所使用的术语“酯”是指本发明的化合物或其盐类，其中羧酸的羟基已通过醇和偶联试转化为相应的酯。用于药物组合物的酯将是药学上可接受的酯，但其他酯也可用于制备本发明的化合物。
[0228]
术语“药学上可接受的酯”是指本发明的化合物的酯，它们在药理学上是可接受的，并且对被施用的对象基本上无毒。更具体地说，这些酯类保留了本发明的抗动脉粥样硬化化合物的生物有效性和特性，并作为原药，在被温血动物的血液吸收后，以这样的方式裂解，产生母体醇类化合物。
[0229]
本发明的化合物的酯其中包括下组(1)通过酯化作用得到的羧酸酯，其中酯基的羧酸部分的非羰基分子选自直链或支链烷基(例如乙基、正丙基、叔丁基、正丁基、甲基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或戊基)、正己基、烷氧基烷基(例如甲氧基甲基、乙氧基甲基和2，2
‑
二甲基丙氧基甲基)、芳烷基(例如苄基)、芳氧基烷基(例如苯氧基甲基)、芳基(例如任选被卤素、c1
‑
4烷基或c1
‑
4烷氧基或氨基取代的苯基)。
[0230]
关于酯类化合物的例子和使用的进一步信息，可在《原药设计》中找到。bundgaard h编辑(elsevier，1985)，通过引用并入本文。另见h.ansel等人，1995年，第108
‑
109页；krogsgaard
‑
larsen，1996年，第152
‑
191页；jarkko rautio，2008年；和pen
‑
wei hsieh，2009年，均通过引用并入本文。
[0231]
本发明的化合物可以通过各种常规方法进行酯化，包括通过与偶联剂例如dic(二异丙基碳二亚胺)和碱例如nn
‑
二甲基氨基吡啶(dmap)，以及醇例如甲醇(甲酯)、乙醇、长链
醇或苄醇(苄酯)反应，由分子的酸形成酯。本领域的技术人员很容易知道如何成功地进行这些以及其他已知的酸的酯化方法。
[0232]
本发明的化合物的酯可能会形成盐类。在这种情况下，可以通过上述的常规技术实现。
[0233]
溶剂合物
[0234]
本发明的化合物可以非溶解形式以及与水、乙醇等溶剂的溶解形式存在，而且本发明的内容既包括溶解形式也包括非溶解形式。
[0235]“溶剂合物”是指本发明的化合物与一种或多种溶剂分子的物理结合。这种物理结合涉及不同程度的离子和共价键，包括氢键。在某些情况下，溶剂合物能够被分离，例如当一个或多个溶剂分子被纳入晶体固体的晶格中时。“溶剂合物”包括溶液相和可分离的溶剂合物。用于药物组合物的溶剂合物将是药学上可接受的溶剂合物，但其他溶剂合物也可用于生产本发明的化合物。
[0236]
如本文所用，术语“药学上可接受的溶剂合物”是指本发明公开的化合物的溶剂合物，这些溶剂合物在药理学上是可接受的，并且对被施用的对象基本上没有毒性。更具体地说，这些溶剂合物保留了本发明的抗动脉粥样硬化化合物的生物有效性和特性，并由合适的无毒溶剂形成。
[0237]
适合的溶剂的非限制性例子包括乙醇酸盐、甲醇酸盐等，以及水合物，其中溶剂分子为h2o。
[0238]
溶剂合物的制备方法通常是已知的。因此，例如，caira，2004，通过引用并入本文，描述了抗真菌剂氟康唑在乙酸乙酯中以及在水中的溶剂合物的制备。van tonder，2004；bingham，2001描述了类似的溶剂合物、半溶剂合物、水合物等的制备，两者均通过引用并入本文。
[0239]
一个典型的、非限制性的制备溶剂合物的方法包括在高于环境温度下将本发明化合物溶解在所需数量的所需溶剂(有机溶剂或水或其混合物)中，并以足以形成晶体的速度冷却该溶液，然后用标准方法分离晶体。分析技术，例如红外光谱，可用于显示溶剂(或水)在晶体中作为溶剂合物(或水合物)的存在。
[0240]
组合物、组合和试剂盒
[0241]
组合物
[0242]
本发明还涉及药物组合物，包括上述公开的化合物或其药学上可接受的盐、酯和溶剂合物，以及任选的药学上可接受的载体。
[0243]
如本文所用，术语“药学上可接受的”是指分子实体和组合物在生理上是可耐受的，并且在给受试者(如人类)服用时通常不会产生过敏或类似的不愉快反应，例如胃部不适、头晕等。优选地，如本文所用，术语“药学上可接受的”是指经联邦或州政府的监管机构批准，或被列入美国药典或其他公认的药典中列出的用于动物，更具体地说用于人类的药物。
[0244]
术语“载体”是指稀释剂、佐剂、赋形剂或溶媒，可与本发明的化合物一起施用。无菌水或盐水溶液以及葡萄糖和甘油水溶液可作为载体，特别是用于注射溶液。e.w.martin的”remington’s pharmaceutical sciences
″
中描述了合适的药物载体。本发明的药物组合物还可包含赋形剂/载体，例如防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、
增味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。
[0245]
可以采用任何适当的给药途径，包括肠外(注射)和肠内(胃肠道途径)。更具体地说，肠外途径包括例如静脉内、鞘内、脑室内、皮内、经皮(局部)、皮下、肌肉内、乳腺内、颅内、眶内、眼内、脑室内、囊内、关节内、脊柱内、腹膜内；肠内包括口服、鼻内、舌下、经黏膜或直肠给药。
[0246]
在不受限制的情况下，当本发明的化合物/药物组合物被口服时，其可采取片剂、包衣片、糖衣丸、硬胶囊或软胶囊、溶液、乳剂或悬浮液等形式；直肠使用例如栓剂；局部、外用或经皮，例如使用软膏、霜剂、凝胶或溶液；或肠外，例如静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鞘内注射或经皮注射，例如使用可注射的溶液。此外，可以通过舌下、鼻腔或眼科制剂或气雾剂，例如喷雾剂，例如鼻腔喷雾剂等形式进行给药。
[0247]
本发明的化合物可与药物制剂中通常使用的任何载体一起纳入剂型中。制备适当制剂的方法在本领域是公知的(参见例如remington’s pharmaceutical sciences，16th ed.，1980，a.oslo ed.，easton，pa.，通过引用并入本文)。常见的药学上可接受的载体包括但不限于无菌水溶液或非水溶液、悬浮液和乳液。非水溶液的例子包括但不限于丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射有机酯。水性载体包括但不限于水、酒精、盐水和缓冲溶液。药学上可接受的溶媒也可以包括生理上可接受的水溶液溶媒(例如生理盐水)或其他适合于特定给药途径的已知溶媒。
[0248]
为了制备片剂、包衣片、糖衣丸或硬胶囊时，可将本发明公开的化合物与任何已知的药学惰性、无机或有机赋形剂和/或载体混合。合适的赋形剂/载体的例子包括乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石或硬脂酸或其盐。适用于软胶囊的辅料包括例如植物油、蜡、脂肪、半固体或液体多元醇等。根据活性成分的性质，软胶囊可能根本不需要辅料。为了制备溶液和糖浆时，可使用的辅料包括水、多元醇、糖、转化糖和葡萄糖。
[0249]
对于栓剂和局部或经皮应用，可使用的辅料包括例如天然或硬化的油、蜡、脂肪和半固体或液体多元醇。
[0250]
在选择肠外给药作为给药途径的情况下，含有本发明化合物的制剂可与药学上可接受的无菌水性或非水性溶剂、悬浮液或乳剂一起提供给患者。非水性溶剂的例子有丙二醇、聚乙二醇、植物油、鱼油和可注射有机酯。水性载体包括水、水
‑
醇溶液、乳剂或悬浮液，包括生理盐水和缓冲的医用肠外载体，包括氯化钠溶液、林格葡萄糖溶液(ringer
′
s dextrose solution)、葡萄糖加氯化钠溶液、含乳糖的林格溶液或固定油。静脉注射剂可包括液体和营养补充剂、电解质补充剂，如基于林格葡萄糖的补充剂等。
[0251]
药剂/药物组合物还可包含防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、增味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。它们还可能含有其他治疗性活性剂。
[0252]
可以向受试者施用任何剂量的药物组合物。剂量将取决于许多因素，包括患者的年龄和要求以及应用方式。通常情况下，单剂量所含的本发明化合物的量将是有效预防、延缓或治疗所要治疗、延缓或预防的疾病或病症而不引起明显毒性的量。因此，本发明的特定化合物或其组合物的“治疗有效量”或“有效量”或“治疗有效剂量”可导致受试者的疼痛和/或体温降低。静脉注射，或口服给药是优选的使用形式。
[0253]
本发明的化合物的有效量也可以直接测量。有效量可以每天或每周给药，也可以
分次给药。通常，本发明的药物组合物的给药量为每天每公斤体重约0.001毫克至约500毫克(例如10毫克、50毫克、100毫克或250毫克)。剂量可以按单次或多次给药方案提供。例如，在一些实施方案中，有效量可以从每天约1毫克到约25克的组合物、每天约50毫克到约10克的组合物、每天约100毫克到约5克的组合物、每天约1克的组合物、每周约1毫克到约25克的组合物、每周约50毫克到约10克的组合物、每隔一天约100毫克到约5克的组合物和每周约1克的组合物。
[0254]
这些只是参考，因为实际剂量必须由主治医生根据每个病人特有的临床因素来仔细选择和滴定。最佳的每日剂量将通过本领域已知的方法确定，并将受到例如患者的年龄和其他临床相关因素的影响。此外，患者可能正在服用治疗其他疾病或病症的药物。在向病人提供本发明的药物组合物期间，可以继续服用其他药物，但在这种情况下，特别建议从低剂量开始，以确定是否出现不良副作用。
[0255]
联用
[0256]
根据另一个方面，提供了本文所述的至少一种化合物与本文所述的另一种化合物和/或与另一种止痛剂(例如镇痛剂)和/或与预防或治疗疼痛并发症例如焦虑(抗焦虑剂)和/或抑郁(抗抑郁剂)的制剂的联用。不受此限制，其他止痛(例如镇痛)剂包括乙酰水杨酸、非甾体抗炎药(nsaids)(例如布洛芬、酮洛芬)、对乙酰氨基酚等。不受此限制的弱阿片类药物例如可待因、二氢可待因、曲马多，以及强阿片类药物例如吗啡、丁丙诺啡和芬太尼。不受此限制的抗焦虑剂包括苯二氮卓类的四氢西泮(benzodiazepine tetrazepam)。不受此限制的抗抑郁剂包括阿那法尼、氯米帕明等。在一个具体的实施方案中，本发明的化合物与另一种活性成分(例如阿片类药物)的联用，有利地使减少如果单独使用每种化合物所需的剂量，从而减少每种化合物的有害副作用。例如参见eiselt等人，2019年。
[0257]
根据一个方面，提供了一种组合物，包括至少一种本文所述的化合物，以及(i)本文所述的另一种化合物；(ii)另一种镇痛(analgesic)和/或止痛(antalgic)剂；(iii)药学上可接受的载体；或(iv)(i)至(iii)中至少两种的组合。
[0258]
在一个具体的实施方案中，所述组合物是一种药物组合物。在另一个具体的实施方案中，所述组合物包括(i)如本文所述的化合物；和(ii)另一种止痛和/或镇痛剂。
[0259]
试剂盒
[0260]
根据本发明公开的另一个方面，提供了一种试剂盒，包括本文定义的化合物或上述组合物，以及在预防或治疗疼痛或其症状中使用其的说明。
[0261]
在所述试剂盒的一个具体实施方案中，所述试剂盒包括(i)本文所述化合物中的至少一种；(ii)另一种止痛剂(例如镇痛剂)；(iii)在预防或治疗疼痛或其症状中的使用说明；或(iv)(i)至(iii)中至少两种的组合。
[0262]
方法
[0263]
本发明还涉及一种预防或治疗疼痛的方法，包括向有需要的受试者施用有效量的本文所述化合物或本文所述组合物。在一个具体的实施方案中，该方法避免或限制了副作用的风险，例如低体温、低血压和/或回肠松弛。
[0264]
如本文所使用的术语“受试者”是指动物，例如但不限于人或宠物或其他动物(例如，宠物例如猫、狗、马等；以及牛、鱼、猪、家禽等)。
[0265]
如本文所使用的术语“有需要的受试者”是指将从接受有效量的本发明公开的化
合物或组合物中受益的对象。在预防或治疗疼痛的方法上下文中，它指的是正在经历或有可能经历疼痛(例如慢性或急性)的受试者。在另一个具体的实施方案中，有可能经历疼痛的受试者，在不受限制的情况下，是指在手术前的受试者。
[0266]
术语“一个”(a和an)或“所述”(the)以及在描述本发明上下文(特别是在权利要求的上下文中)的使用应被理解为涵盖单数和复数，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾。
[0267]
术语“包括”、“具有”、“包含”和“含有”应被理解为开放式术语(即意味着“包括，但不限于”)，除非另有说明。
[0268]
除非另有说明，否则此处对数值范围的叙述只是为了作为一种简写方法，单独指代落在范围内的每个单独的数值，每个单独的数值被纳入说明书，就像在本文中单独列举一样。范围内的所有数值子集也被纳入说明书中，就像它们被单独在本文中列举一样。
[0269]
本文所述的所有方法可以按任何合适的顺序执行，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾。
[0270]
除非另有说明，否则本文提供的任何和所有示例或示例性语言(例如，“例如”)的使用仅旨在更好地阐明本发明而不构成对本发明范围的限制。
[0271]
说明书中的任何语言都不应被解释为表明任何非权利要求的元素对于本发明公开的实践是必不可少的。
[0272]
在此，术语“约”具有普通含义。在实施方案中，它可以指合格数值的正负10％。
[0273]
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语与本发明所属行业的普通技术人员通常理解的含义相同。
[0274]
本发明的其他目的、优点和特征在阅读以下对其具体实施方案的非限制性描述后将变得更加明显，这些描述仅以参考附图的方式进行举例说明。
[0275]
通过以下非限制性实施例更详细地说明了本发明。
[0276]
实施例1：材料和方法
[0277]
多肽的合成
[0278]
所有的多肽都是使用标准的固相合成程序在200毫克的2
‑
氯三苯甲基氯树脂(负载量为0.25mmol/g)上合成的，这些树脂是从matrix innovation获得的。所有市售的fmoc保护的氨基酸都是从chem
‑
impex和matrix innovation购买的最高的可用纯度。多肽的合成是在150rpm的定轨摇床(orbital shaker)上进行的。从applied separations购买了带有20um熔块的12ml反应器，用作合成的容器。
[0279]
标准的树脂清洗程序
[0280]
按照此顺序用5ml：dmf x2、dcm x2、iproh x1、dcm x2、dmf x2清洗树脂。当需要干燥的树脂时，用dcm或et2o再洗2次，然后在真空中至少干燥5分钟。
[0281]
第一个氨基酸的偶联(a，图1a
‑
b)
[0282]
将树脂和第一种氨基酸(根据负载量为1当量，通常为0.25mmol/g)一起加入到12ml反应器中。然后加入5毫升的二氯甲烷，让其搅拌5分钟或直到氨基酸完全溶解。将2当量的二异丙基乙胺(dipea)加入混合液中，然后将其放在定轨摇床上反应2小时或过夜。然后用5毫升7/2/1的dcm/meoh/dipea混合液与树脂上未反应的位点反应45分钟。采用标准的洗涤程序。
[0283]
fmoc脱保护(b，图1a
‑
b)
[0284]
通过加入5毫升20％的哌啶在dmf中的溶液5分钟，重复一次，进行fmoc脱保护。采用标准的洗涤程序。
[0285]
第2位n
‑
甲基化氨基酸的fmoc脱保护
[0286]
第2位偶联的n
‑
甲基化氨基酸的fmoc
‑
脱保护是通过加入5ml 50％的哌啶在dmf中的溶液，剧烈摇晃30秒，重复一次。然后用dcm快速洗涤树脂3次，并立即将下一个氨基酸和hatu溶液加入到树脂中，接着加入dipea。这个程序与标准程序不同，因为第2位上的n
‑
甲基化氨基酸倾向于生成二酮哌嗪，而二酮哌嗪会将多肽从树脂上裂解下来。
[0287]
非昂贵的氨基酸的偶联(c，图1a
‑
b)
[0288]
将5当量的fmoc保护的氨基酸和5当量的氮杂苯并三唑四甲基脲六氟磷酸酯(hexafluorophosphate azabenzotriazole tetramethyl uronium)(hatu)加入到约8ml的dmf中，让其溶解，有时需要用声波浴。然后将该混合物加入清洗过的树脂中，并加入6当量的dipea。然后密封反应器，用手轻轻摇晃一到两次后释放内部压力，然后放在定轨摇床上30分钟到1小时。
[0289]
昂贵的氨基酸的偶联(c，图1a
‑
b)
[0290]
将2当量的fmoc保护的氨基酸和2当量的hatu加入到约8ml的dmf中，并让其有时用超声浴溶解。然后将所述混合物加入清洗过的树脂中，并加入3当量的dipea。然后将反应器密封，用手轻轻摇晃一到两次后释放内部压力，然后放在定轨摇床上至少2小时，有时过夜。
[0291]
闭环复分解(d，图1a)
[0292]
在一个带搅拌棒的火焰干燥的微波瓶中，加入0.2当量的grubbs
‑
hoveyda第二代产品，1当量的对苯醌和预先用et2o干燥的树脂。然后将固体混合物用氩气脱气10分钟，再加入3ml dce。然后将该混合物在cem discover微波炉以50℃的温度照射1小时。
[0293]
烯丙氧羰基(alloc)/烯丙基(allyl)脱保护(f，图1b)
[0294]
向预干燥的树脂中加入约8毫升的dcm。向该混合物中加入0.25当量的pd(pph3)4，并加入30当量的苯基硅烷。放在定轨摇床上30分钟之前，用手摇动该混合物多次释放内部压力。
[0295]
大环内酰胺化(g，图1b)
[0296]
使用5当量的hatu和6当量的dipea在约8ml的dmf中进行大环内酰胺化。然后将反应放在定轨摇床上至少20分钟，或直到完成。
[0297]
从树脂上裂解和侧链脱保护(e，图1a
‑
b)
[0298]
将树脂转移到一个8毫升的玻璃瓶中，用约2毫升的tfa/h2o/tips(95∶2，5∶2，5)溶液搅拌2小时。然后用20ml冷的二乙醚沉淀多肽，离心(3000rpm，10分钟，4℃)，并在真空中干燥。
[0299]
多肽的纯化
[0300]
将粗品重新悬浮在水/乙腈(1∶1)中，用waters的制备hplc
‑
ms系统(xselecttm cshtm prep c18(19x100mm)柱，填料为5μm颗粒，uv检测器2998，ms sq检测器2，样品管理器2767和二元梯度模块)进行纯化，使用乙腈和水+0.03％nh4oh，ph 10作为洗脱液。然后将纯化的馏分冻干，在uplc
‑
ms系统(acquitycshtm c18(2.1x50mm)柱，填料为1.7μm颗粒)上评估所得化合物的纯度，梯度如下：乙腈和含0.1％tfa的水(0
→
0.2min：5％乙腈；0.2
→
1.5min：5％
→
95％；1.5
→
1.8min：95％；1.8
→
2.0min：95％
→
5％；2.0
→
2.5min：5％)。所
有类似物的高分辨质谱都是用maxis的电喷雾灌注esi
‑
q
‑
tof
tm
获得的。
[0301]
结合试验
[0302]
细胞培养
[0303]
将稳定表达hnts1的cho
‑
k1(中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary))细胞和稳定表达hnts2的1321n1细胞(es
‑
690
‑
c和es
‑
691
‑
c来自perkinelmer，montr
é
al，加拿大)分别在ham’s f12和dmem培养基中进行培养。培养基添加有10％fbs、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素、20mm hepes和0.4mg/ml g418，在37℃、5％co2的湿润室内进行。
[0304]
hnts1和hnts2受体上的竞争性放射性配体结合试验
[0305]
当表达hnts1的细胞达到80％汇合度时将其冷冻。用10mm tris缓冲液、1mm edta、ph7.5将它们从培养皿上刮下来，在4℃下以15,000g离心5分钟。然后将沉淀物重新悬浮在1ml结合缓冲液中。当表达hnts2的细胞达到80％汇合度时也被冷冻。用pbs、0.5mm edta、ph7.5将它们从培养皿上刮下来，超声处理5分钟(脉冲30秒/5秒关闭，振幅40％)。在4℃下以100 000g超速离心60分钟。将沉淀物重新悬浮在1ml冷冻缓冲液(pbs，甘油，0.5mm edta)中，超声处理1分钟(脉冲30s/5s关闭，振幅50％)并进一步在结合缓冲液中稀释。竞争性放射性配体结合实验是将15μg表达hnts1受体的细胞膜与45pm的
125
i
‑
[tyr3]
‑
nt(2200ci/mmol)或50μg表达hnts2受体的细胞膜与300pm的
125
i
‑
[tyr3]
‑
nt在结合缓冲液(50mm tris
‑
hcl，ph 7.5，0.2％bsa)中一起孵育，在25℃下，在10
‑
11
至10
‑4m的类似物浓度增加的情况下，进行60分钟。孵育后，将结合反应混合物转移到涂有pei的96孔过滤板(玻璃纤维过滤器gf/b，millipore，billerica，ma)。通过过滤终止反应，用200μl冰冷的结合缓冲液洗板三次。然后用γ计数器(2470wizard2，perkinelmer，mississauga，ontario，加拿大)对玻璃过滤器进行计数。非特异性结合是在有10
‑5m未标记的nt(8
‑
13)的情况下测量的，占总结合的5％以下。ic
50
值由竞争曲线确定，即未标记的配体浓度抑制50％的
125
i
‑
[tyr3]
‑
nt特异性结合。
[0306]
使用非线性回归one
‑
site
‑
fit log(ic50)绘制竞争性放射性配体结合数据，并表示三组中至少三个独立实验的平均扫描电镜(mean
±
sem)。
[0307]
血浆稳定性测定
[0308]
大鼠血浆通过离心大鼠血液(13000rpm，5分钟，4℃)获得。6μl 1mm的多肽水溶液(10％dmso(二甲基亚砜))与27μl大鼠血浆在37℃下孵育5、10、30和60分钟(nt(神经降压素)孵育1、3和5分钟)。加入70μl乙腈/乙醇(1∶1)、0.5％烟酰胺溶液并涡旋，以终止蛋白质的降解。将样品离心(13000rpm，5分钟，4℃)，上清液在4mm尼龙0.2μm注射器过滤器上过滤，用uplc
‑
ms分析(waters 2695，ace c18柱2.0
×
100mm，2.7μm球形颗粒粒径，电喷雾微质zq
‑
2000
tm
来自waters)。使用graphpad prism
tm 7的单相衰变方程分析数据。
[0309]
体内镇痛试验
[0310]
动物、房舍和习性
[0311]
实验用成年雄性sprague
‑
dawley大鼠进行，体重225
‑
300克(charles river实验室，st constant，加拿大)。大鼠被安置在一个安静的房间里，每个笼子里有两只，放在白杨刨花(aspen shavings)上，保持12小时的光照/黑暗周期，允许自由获取食物和水。本研究中的实验程序得到了舍布鲁克大学(universit
éꢀ
de sherbrooke)动物护理委员会的批准，并符合加拿大动物护理委员会的政策和指令。
[0312]
鞘内给药
[0313]
用异氟烷/氧气(baxter公司，mississauga，on，加拿大；2l/min)对大鼠进行轻度麻醉，在l5
‑
l6椎间鞘内注射稀释于0.9％的生理盐水的浓度为10
‑
150μg/kg的化合物34、30μg/kg的pd149163或61nmol/kg的化合物60、67、91和116，或单独的0.9％生理盐水。
[0314]
急性和强直性抗痛作用
[0315]
甩尾试验：甩尾试验被用作结果测量热诱导的动物疼痛，并作为化合物镇痛效果的指标。
[0316]
使用甩尾试验(甩尾镇痛仪v2.00，美国俄亥俄州哥伦布市哥伦布仪器公司)(tail flick analgesia meter v2.00，colombus instruments，columbus，ohio，usa)来评估急性疼痛。甩尾试验测量对集中在大鼠尾部的高强度光束的敏感性。甩尾装置的光照强度设定为6，截止时间为10秒。将尾巴甩出光束路径的延迟时间与疼痛敏感性或镇痛的测量相对应。
[0317]
在测试前，动物单独适应操作和行为仪器，连续三天，每天5分钟。在测试日，在注射药物前进行延迟基线测量，以提供一个平均基线。将化合物按所需剂量稀释在0.9％的生理盐水中。化合物或生理盐水对热痛觉的影响在静脉注射后每10分钟评估一次，最长60分钟。
[0318]
对于ms03
‑
174，在测试的所有时间内(0
‑
60分钟)计算曲线下面积(auc)。此外，在镇痛作用达到最大峰值时，甩尾延迟被转换为最大可能效果百分比(％mpe)。％mpe根据以下公式计算。％mpe＝[(试验延迟)
‑
(盐水延迟)]/[(截止期)
‑
(盐水延迟)]
×
100。数据表示为每个剂量的5
‑
8只动物的平均扫描电镜。
[0319]
化合物的半数最大有效剂量(ed
50
)是根据auc和10分钟时的％mpe确定的，在甩尾试验中对每个剂量进行计算。然后，使用剂量
‑
反应刺激对数(激动剂)与反应(四个参数)来确定ed
50
值。
[0320]
福尔马林试验：使用福尔马林试验作为持久性疼痛的模型来评估化合物34的止疼效果。测试前，动物适应操作和有机玻璃室，连续三天，每天30分钟。在测试日，在鞘内注射30至150μg/kg(图7a
‑
b)或3至60μg/kg(图8a
‑
d)剂量的化合物后5分钟，大鼠接受50μl稀释的1.85％甲醛(即5％福尔马林；bioshop，burlington，ontario)到右后爪的足部表面。然后将大鼠放在透明的塑料室(30x30x30厘米)中，放在角度为45
°
的镜子上，以便能无障碍地观察大鼠的爪子，在接下来的60分钟内观察它们的行为。足底注射福尔马林产生了这种强直性疼痛模型的典型双相痛觉反应(tjollsen等人，1992)。在啮齿动物中发生的两个不同阶段的自发疼痛行为被认为首先反映了福尔马林对感觉受体的直接作用(急性期，0
‑
9分钟)和由于炎症和中枢敏感化而产生的较持久的疼痛(炎症期，21
‑
60分钟)。如前所述，痛觉行为通过加权分数来评估(dubuisson和dennis 1977；codere，1993)。在后爪注射福尔马林后，通过测量在四个行为类别中的每个类别中花费的时间量，确定60分钟内每3分钟阻滞的痛觉平均评分(疼痛评分)：0，注射的爪子与对侧的爪子相当；1，注射的爪子上几乎没有重量；2，注射的爪子被抬起，没有接触任何表面(抬高)；3，注射的爪子被舔、咬或摇晃。被认为代表较高水平的疼痛强度的行为被赋予较高的加权分数。然后，通过将每个类别所花费的时间乘以类别权重，将这些乘积相加，再除以给定时间间隔内的总时间，计算出从0到3的加权平均疼痛强度分数。因此，疼痛评分由以下公式计算(1t1+2t2+3t3)/180，其中t1、t2和t3是在每个180秒区间内分别在行为类别1、2或3中花费的时间(秒)。曲线下面积(auc)是在所
有的测试时间(0
‑
60分钟)内计算的。评分更高的时间的减少(痛觉行为的第2类)被选择来证明该化合物的镇痛效率，如前所述nts2选择性化合物(roussy，g，dansereau，m
‑
a.，baudisson，s.，ezzoubaa，f.，belleville，k.，beaudet，n.，martinez，j.，richelson，e.，sarret，p.mol.pain 2009，5：38)证明了nts2受体在调控强直性疼痛敏感性方面的作用。数据代表每个剂量的5
‑
6只大鼠的平均值
±
sem。
[0321]
体温
[0322]
使用插入大鼠直肠的热敏电阻探针测量体温。在连续三天的时间里，动物分别适应操作和热敏电阻探针，每天5分钟。在测试日，在34号化合物的鞘内给药前(基线)和每10分钟(最多60分钟)测量一次温度。该化合物被溶解在0.9％的生理盐水中，并以最高剂量150μg/kg进行注射。每个时间段和每只动物的体温变化(δ体温)都是从基线开始测定的。数据代表每种情况下5
‑
6只大鼠的平均值
±
sem。
[0323]
血压测量
[0324]
用氯胺酮/羟色胺(87mg/kg：13ma/kg，i.m)对大鼠进行麻醉，并以仰卧姿势置于加热垫上。通过插入右颈动脉的导管(填充肝素化盐水的pe 50)测量平均收缩压和舒张压以及心率，并与micro
‑
med传感器(型号tdx
‑
300，美国)连接到血压micro
‑
med分析仪(型号bpa
‑
100c)。在左颈静脉中插入另一根导管(填充肝素化盐水的pe10)，以注射0.01、0.1和1毫克阡克的化合物(体积为1毫升/千克，5
‑
10秒)或0.9％的盐水。静脉注射后，每秒钟记录一次血压，最长为1000秒。平均动脉血压的变化(δmabp)是根据大鼠的基础压力确定的。数据代表每种情况下4
‑
5只大鼠的平均值
±
sem。
[0325]
回肠松弛试验
[0326]
功能性回肠生物测定是按照其他地方的详细描述来进行的。(van der poorten，o.，van den hauwe，r.，eiselt，e.，betti，c.，guillemyn，k.，chung，n.n.，hall
é
，f.，bihel，f.，schiller，p.w.，tourw
é
，d.，sarret，p.。gendron，l.，...ballet，s.(2017).χ
‑
space screening of dermorphin
‑
based tetrapeptides through use of constrained arylazepinone and quinolinone scaffolds.acs medicinal chemistry letters，8(11)，1177
‑
1182)简而言之，对大鼠进行安乐死，在去除多余的脂肪和结缔组织之前，解剖出2厘米的回肠段。然后将回肠在0.5g的张力下置于一个10ml的器官浴中，其中含有温热的(37℃)和含氧的(95％o2，5％co2)克雷布斯溶液(krebs solution)(6.9g/l nacl，0.145g/l mgso4，2.1g/l nahco3，0.35g/l kcl，0.165g/l kh2po4，1.98g/l葡萄糖和0.28g/l cacl2)。每个回肠段的一端被悬挂在换能器上，另一端连接在放置在浴池底部的阳极电极上。一个刺激器(power lab 8/30，ad instruments，fairfax alexandria，va，usa)通过浴槽顶部和底部的铂金丝环形电极提供重复的场刺激(20v，10ms延迟，1ms持续时间)。肌肉的收缩通过一个等距力传感器(等距力传感器)(159901a，radnoti，monrovia，ca，usa)记录。在用50μm卡巴胆碱评估活力之前，允许回肠平衡30分钟，以确认回肠的分离和安装不会损害组织。在用卡巴胆碱收缩回肠后，对所测试的松弛剂的能力进行了调查。每种浓度的化合物测试后，都在克雷布斯溶液中经过2x15分钟的冲洗期，以允许充分放松。用nt(8
‑
13)(10
‑
11
至10
‑6)作为每个回肠的标准和化合物34(10
‑
11
至10
‑5)的标准获得剂量
‑
反应曲线，并确定ic
50
值。数据代表至少三个单独实验的平均值
±
sem。
[0327]
统计分析
[0328]
数据以平均值
±
标准误差的平均值(sem)表示。所有图表和统计分析都是用graphpad prism
tm 7(graphpad软件，la jolla，ca，usa)进行的。采用双因素方差分析和sidak的多重比较试验来确定不同浓度的化合物34、60、67、91、116和127
‑
137与生理盐水或溶媒(例如dmso)(图6a
‑
e)之间或不同浓度的化合物34或67与生理盐水之间的甩尾潜伏期的显著差异(图2a和4a)。采用双因素方差分析和tukey多重比较试验来确定不同浓度的化合物和生理盐水之间体温变化的显著差异(图9)。使用单因素方差分析，然后进行dunnett多重比较试验，以比较不同浓度的化合物和盐水处理(图2b、4b、7a
‑
b和8b
‑
d)，分析甩尾试验的％mpe和福尔马林试验的曲线下面积。使用四个参数进行非线性回归，以计算化合物的ed
50
，从所得的％mpe的剂量
‑
反应曲线得到(图3、5和8e)。使用三个参数对回肠松弛％进行了非线性回归，并从所得的剂量
‑
反应曲线中获得ic
50
值(图11)。响应的差异被认为是显著的，p值为*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001和****p＜0.0001。
[0329]
实例2：肽的合成
[0330]
如实施例1所述，合成了化合物。化合物在下面的表i中列出。
[0331]
表i：化合物的结构
[0332]
[0333]
[0334]
[0335]
[0336]
[0337]
[0338]
[0339]
[0340]
[0341]
[0342]
[0343]
[0344]
[0345]
[0346]
[0347]
[0348]
[0349]
[0350]
[0351]
[0352]
[0353]
[0354]
[0355]
[0356]
[0357]
[0358]
[0359]
[0360]
[0361]
[0362]
[0363]
[0364]
[0365]
[0366]
[0367]
[0368]
[0369]
[0370]
[0371]
[0372]
[0373]
[0374]
[0375]
[0376]
[0377]
[0378]
[0379]
[0380][0381]
all：烯丙基
[0382]
tle：叔亮氨酸
[0383]
tbu：叔丁基
[0384]
tic：四氢异喹啉
[0385]
nle：正亮氨酸
[0386]
nva：正缬氨酸
[0387]
npg：新戊基甘氨酸
[0388]
pen：青霉胺
[0389]
chg：环己基甘氨酸
[0390]
cha：环己基丙氨酸
[0391]
y(ome)：o
‑
甲基酪氨酸
[0392]
homo
‑
cha：环己基丁氨酸
[0393]
氨基酸残基后面的
″
*
″
表示该残基为d/(r)构型
[0394]
y(oac)：o
‑
乙酰基酪氨酸
[0395]
my：m
‑
酪氨酸(meta
‑
tyrosine)
[0396]
实例7：化合物的化学表征
[0397]
所列化合物的纯度、理论质量、液相色谱质谱(uplc
‑
ms)的质荷比m/z和电离状态都已确定，并在下文表ii中列出。
[0398]
表ii：化合物的生物化学特性分析
[0399]
[0400]
[0401]
[0402]
[0403]
[0404][0405]
实施例8：结合和稳定性测定
[0406]
表i的化合物在xaa1和xaa4位置的残基之间环化。评估了对nts1和nts2受体的亲和力(见表iii)。
[0407]
这些实验可以确定这一系列的大环化合物对nts2具有选择性，即能够与nts2结合，其程度比nts1受体强得多。
[0408]
表iii
[0409]
[0410]
[0411]
[0412]
[0413]
[0414]
[0415]
[0416]
[0417]
[0418]
[0419]
[0420]
[0421]
[0422]
[0423]
[0424]
[0425][0426]
*表示xaa5、xaa3和xaa2位置的化合物侧链的结构也显示了结构的其余部分。为清楚起见，应参考上述表i。
[0427]
上述表i中的“戊烯基甘氨酸”是指α
‑
甲基(4
‑
戊烯基)甘氨酸。
[0428]
实例9：在体内急性疼痛模型中的镇痛情况
[0429]
化合物34和67在体内急性疼痛测试中进行了测试，即甩尾测试，测量它们在sprague
‑
dawley大鼠中延长对热毒性刺激反应延迟的能力。在鞘内注射10至150μg/kg(化合物34)或3nmol/kg至61nmol/kg(化合物67)后，与注射生理盐水相比，观察到的延迟时间明显增加，表明存在镇痛作用(分别为图2a和4a)。对于最低剂量的10μg/kg，化合物34的延迟没有明显增加(数据未显示)，镇痛效果在90μg/kg左右达到平稳(图2a)。同样，对于低于3nmol/kg的剂量，化合物67的延迟没有明显增加。通过分析化合物34和67的最大可能效应(％mpe)也证明了类似的结果(分别为图3和图5)。化合物34表现出mpe％的剂量依赖性增加，ed50为43.8μg/kg(图3)。mpe在90μg/kg左右达到一个高峰，两个较高剂量的mpe至少提高了98％(图2b)。化合物67也表现出％mpe的剂量依赖性增加，ed50为8.14nmol/kg(图5)。mpe在测试剂量下没有达到平稳状态，最高剂量时至少升高了91％(图4b)。化合物34(42nmol/kg和84nmol/kg或61nmol/kg时)与化合物60、67、91、116和127
‑
137(即化合物34的ed50)在61nmol/kg时的镇痛效果比较见图6a
‑
e。与基线相比，化合物67、116、127、128和133在静脉注射后可持续增加甩尾反射的延迟，而其他测试的化合物没有显示出明显的镇痛效果。在等摩尔剂量下，化合物67在测试的化合物中引起最高的止痛效果。
[0430]
在福尔马林强直性疼痛模型中也测试了化合物34和67的镇痛作用(分别为图7a
‑
b和8a
‑
d)。将福尔马林注入经盐水处理的大鼠的右后爪后，观察到一种双相痛觉行为反应，其特点是在持续的炎症阶段之前有一个急性阶段(0
‑
9分钟)。
[0431]
对于用化合物34进行的实验，福尔马林诱导的疼痛相关行为是通过测量发作性行为反应的持续时间来量化的，如抬头。在急性期和炎症期，化合物34分别从60μg/kg和从90μg/kg起，显著减少了抬头花费的时间(time spent in lifting)(图7a
‑
b)。
[0432]
对于用化合物67进行的实验，通过测量如上所述的疼痛评分来量化两个阶段的福尔马林诱导的疼痛相关行为。在所有测试剂量下(即从10nmol/kg开始)，化合物67显著降低了疼痛评分(图8a
‑
c)。化合物67表现出疼痛强度的剂量依赖性下降，ed50为30nmol/kg(图8d)。
[0433]
实例10：体内体温过低
[0434]
在对化合物34和67进行静脉注射后，与盐水处理相比，在较高的注射剂量(分别为150μg/kg和209nmol/kg)下没有观察到体温的明显变化(分别为图9a
‑
b和表iv)。相反，nts1激动剂pd149163在低5倍的剂量(30μg/kg)下，体温明显下降。这些结果证实，低体温不是由nts2受体介导的。
[0435]
实例11：体内低血压
[0436]
静脉注射0.01至1mg/kg的化合物34和1mg/kg的化合物67后，监测动脉血压没有显示明显的低血压(图10a
‑
b和表iv)。然而，以0.01μg/kg静脉注射的nt(8
‑
13)产生了急剧的血压下降，其特点是三相反应。第一阶段是短暂的下降(约
‑
25mmhg)，随后迅速恢复到基线水平(第二阶段)，然后是持续下降(第三阶段)。这些观察结果证明，低血压是由nts1的激活引发的。
[0437]
实例12：体外回肠松弛
[0438]
与nt(8
‑
13)相比，化合物34在回肠自发收缩活性方面的任何变化，nt(8
‑
13)剂量依赖性地松弛回肠，ic50为3.9nm，表明回肠松弛是通过nts1受体介导的。化合物34不影响肠道运动(图11和表iv)。
[0439]
实施例9
‑
12的结果总结在下表iv中。
[0440]
表iv：本发明化合物对疼痛、体温过低、低血压和回肠松弛的体内作用。
[0441][0442]
权利要求的范围不应受实施例中阐述的优选实施例的限制，而应给予与描述一致的最广泛的解释。