技术特征：
1.一种用于修饰和纯化肽的方法，包括以下步骤-提供粗接头标记的肽l-p，其中粗肽与接头分子l共价结合，-在固定步骤中，将所述接头标记的肽l-p偶联到固体载体上，产生固定的接头标记的肽s-l-p，-在修饰步骤中，用一种或多种有机分子修饰所述固定的接头标记的肽s-l-p，产生固定的接头标记的肽s-l-mp，-在释放步骤中，添加还原剂产生还原的中间体ri，并且随后分解所述还原的中间体ri，产生经修饰的肽mp，其中所述接头l是式1的化合物，x-t
b-v
a-u-y-(1)，其中-x选自式2、2a、3、3a或4的部分，特别是式2、2a、3或3a的部分，更特别是式2或2a的部分，其中，-每个r1和r2彼此独立地选自h或b，其中至少r1或r2是b，-r3选自h或b，-r4选自h、c
1-c
12-烷基或芳基，其中醛或酮基基团可被酸不稳定的保护基团保护，-b是酸不稳定的胺保护基团，-t是直链或支链间隔基，其中b是0或1，-v是吸电子部分，其中a是0或1，其中a和b之和为1或2，-u是苯基或五元或六元杂芳基部分，其与部分v、w
q
和e
n
中的至少一个结合并且可以任选地被c
1-6-烷基取代，其中-w选自-n3、-no2、-s(＝o)-r8、-s-s-r8、-o-ch
2-n3、-o-c(＝o)-o-ch
2-n3、-n＝n-苯基、-n＝n-r8、其中r8是吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、-c
1-c
6-烷基或-(ch2)
p-nme2，其中q是0、1、2、3或4，特别地其中q是1、2、3或4，-e是酸性条件下的吸电子基团，其中n是0、1、2、3或4，在u是苯基部分且y是-(ch2)
m-o-c(＝o)-的情况下，在酸性条件下v、w、e的哈米特常数之和大于0.45，并且其中
‑
w相对于y在邻位或对位，y是-(ch2)
m-c(＝o)-或-(ch2)
m-o-c(＝o)-，其中m是1、2或3。2.根据权利要求1所述的方法，其中，通过以下提供所述接头标记的肽l-p-将已经在合成载体sr上合成的粗肽p与游离接头l
f
通过释放吸电子离去基团z连接，产生接头标记的、负载的粗肽l-p-sr，其中l
f
是接头x-t
b-v
a-u-y-z，其中x、t、b、v、a、u和y如权利要求1所定义，并且z是吸电子离去基团，-从所述合成载体sr上裂解接头标记的肽l-p，产生所述接头标记的肽l-p。3.根据权利要求2所述的方法，其中，在酸性条件下，特别是通过tfa、hbr、hcl或乙酸来实现所述接头标记的肽l-p-的裂解。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述固体载体是醛修饰的，特别地所述固体载体是醛修饰的并且选自琼脂糖、羟基化聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸缩水甘油酯)、聚(甲基丙烯酸缩水甘油酯)、聚赖氨酸、聚乙二醇、聚酰胺、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯和它们的共聚物，更特别地，所述固体载体是醛修饰的并且选自琼脂糖和羟基化聚(丙烯酸甲酯)珠。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述固定步骤在ph＜5，特别是在ph 3-4下进行。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述释放步骤中的所述还原剂选自三苯基膦、二硫苏糖醇(dtt)、二硫赤藓糖醇(dte)、三甲基膦、三乙基膦或三(2-羧乙基)膦，特别是二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇或三苯基膦。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述还原的中间体ri通过ph改变而分解，特别是通过改变ph至低于所述接头还原期间使用的ph的ph。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述肽包含在氨基酸侧链中包含至少一个亲核胺的氨基酸，其中特别地所述氨基酸选自赖氨酸、鸟氨酸、α-氨基甘氨酸、α,γ-二氨基丁酸、α,β-二氨基丙酸、2,6-二氨基-4己炔酸、β-(1-哌嗪基)丙氨酸、4,5-脱氢赖氨酸和d-羟基赖氨酸，特别是选自赖氨酸和鸟氨酸，或所述亲核胺是所述肽的n-末端。9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述有机分子是式5a、5b、5c或5d，特别是5a或5c的化合物，fa
x-sp
n-a(5a),fa
x-sp
n-oh(5b),fa-a(5c),或fa-oh(5d),其中-fa是
–
c(＝o)-c
1-24-烷基或
–
c(＝o)-c
2-24-烯基，特别是
–
c(＝o)-c
5-17-烷基或
–
c(＝o)-c
5-17-烯基，更特别是
–
c(＝o)-c
5-17-烷基，其中烷基或烯基部分可以未被取代或被一个或多个独立地选自-f和
–
cooh的取代基取代，-sp是包含2至50个原子长度、任选的末端-c(＝o)-部分和x个独立地选自-nh-、-o-、-s-的连接部分的间隔基，其中所述间隔基经由所述连接部分连接到fa，-x是1和5之间的整数，特别是1和3之间的整数，-n是1和10之间的整数，特别是1和4之间的整数，更特别是1和2，-a选自：-f、-cl、-br、-i、-n3、-o(c＝o)ch2(c＝o)oh、-sr
14
、-ocf3、-och2cf3、-oso2cf3、-so2c6h4ch3、-so2cf3、-so2ch3，
特别地，-cl、-br、-i、更特别地，-cl、-br、-i，-其中r
14
是c
1-c
6-烷基-、芳基-或苄基取代基。10.根据权利要求9所述的方法，其中，sp独立地选自-被1至5个，特别是1至3个连接部分取代的直链或支链烷基，
‑‑
nh-[c
r-烷基-o]
s-c
t-烷基-c(＝o)-，其中r独立地选自1、2和3，s是1和10之间的整数，特别是1、2、3或4，并且t是1、2或3，以及-氨基酸，其可以是保护的或未保护的，其中n-末端和/或侧链中的胺被-nh-替换并且c-末端和/或侧链中的羧酸部分被-c(＝o)-替换，特别地，sp独立地选自被1至x个连接部分取代的直链烷基、2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙酸丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、glu-tbu、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸或缬氨酸，更特别地，sp独立地选自-o-乙基-、2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙酸、半胱氨酸、谷氨酸或glu-tbu。
11.根据权利要求8至10中任一项所述的方法，其中，在所述修饰步骤中，在活化反应物的存在下，特别是在选自以下的活化反应物的存在下，将式5b或5d的有机分子偶联至所述至少一个亲核胺：四甲基脲鎓四氟硼酸盐(tbtu)、(3-(二乙氧基-磷酰氧基)-1,2,3-苯并[d]三嗪-4(3h)-酮)(depbt)、(2-(6-氯-1h-苯并三唑-1-基)-n,n,n
′
,n
’‑
四甲基脲鎓六氟磷酸盐)(hctu)、四甲基脲鎓六氟磷酸盐(hatu)、(n-(3-二甲氨基丙基)-n'-乙基碳二亚胺(edc)、二环己基碳二亚胺(dcc)、2-氰基-2-(羟亚氨基)乙酸乙酯(oxyma)、1-羟基苯并三唑(hobt)、1-羟基-7-氮杂-1h-苯并三唑(hoat)、nhs和二异丙基碳二亚胺(dic)。12.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肽包含至少两个包含亲核硫醇的氨基酸，特别是至少两个独立地选自半胱氨酸、高半胱氨酸或青霉胺的氨基酸。13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述有机分子是包含具有至少两个亲电子中心的支架的有机支架分子，其中特别地，所述亲电子中心由卤素取代基和/或迈克尔受体形成，特别地由至少两个苄基卤素取代基、至少两个丙烯酰胺或至少两个丙烯酸酯形成，更特别地由至少两个丙烯酰胺或至少两个苄基卤素取代基形成，特别地所述有机支架分子选自：1,4-双(溴甲基)苯、间二溴苄(mdbx)、1,3,5-三(溴甲基)苯(tbmb)、n,n
′‑
双(氯乙酰基)-1,2-乙二胺、n,n
′‑
双(氯乙酰基)-1,3-丙二胺、n,n
′‑
((乙烷-1,2-二基双(氧基))双(乙烷-2,1-二基))双(2-氯乙酰胺)、n,n
′‑
双(溴乙酰基)-1,2-乙二胺、n,n
′‑
双(溴乙酰基)-1,3-丙二胺、n,n
′‑
((乙烷-1,2-二基双(氧基))双(乙烷-2,1-二基))双(2-溴乙酰胺)、1,3,5-三丙烯酰基-1,3,5-三嗪烷(tata)、1,1',1
”‑
(1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三(2-溴乙酮)(tatb),n,n
′
,n
″‑
(苯-1,3,5-三基)-三(2-溴乙酰胺)(tbab)、n,n
′
,n
″‑
苯-1,3,5-三基三丙-2-烯酰胺(taab)、2,4,6-三(溴甲基)-s-三嗪(tbmt)、n,n
′
,n
″‑
(次氮基三(乙烷-2,1-二基))三丙烯酰胺、n,n
′
,n
″‑
(次氮基三(乙烷-2,1-二基))三(2-氯乙酰胺)、n,n
′
,n
″‑
(次氮基三(乙烷-2,1-二基))三(2-溴乙酰胺)、n,n
′
,n
″‑
(次氮基三(乙烷-2,1-二基))三亚乙基磺酰胺、n,n
′
,n
″‑
((1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三(2-氧亚基乙烷-2,1-二基))三丙烯酰胺、n,n
′
,n
″‑
((1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三(2-氧亚基乙烷-2,1-二基))三(2-氯乙酰氨)、n,n
′
,n
″‑
((1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三(2-氧亚基乙烷-2,1-二基))三亚乙基磺酰胺、n,n
′
,n
″‑
(苯-1,3,5-三基三(亚甲基))三丙烯酰胺、n,n
′
,n
″‑
(苯-1,3,5-三基三(亚甲基))三(2-氯乙酰胺)、n,n
′
,n
″‑
(苯-1,3,5-三基三(亚甲基))三亚乙基磺酰胺、三丙烯酸三(2-羟乙基)异氰脲酸酯、1,3,5-三(环氧乙烷-2-基甲基)-1,3,5-三嗪烷-2,4,6-三酮。14.根据权利要求12或13中任一项所述的方法，其中，所述修饰步骤包括还原步骤，然后是环化步骤，其中-在所述还原步骤中，用还原剂，特别是dtt或tcep处理所述固定的接头标记的肽s-l-p，并且-在所述环化步骤中，在碱性条件下将所述有机支架分子与所述至少两个亲核硫醇偶联。15.根据权利要求12所述的方法，其中，亲核硫醇的数目是偶数，并且在所述修饰步骤中所述亲核硫醇被ph>7的碱性水溶液氧化以产生大环桥连肽。16.根据权利要求12或15中任一项所述的方法，其中，亲核硫醇的数目是偶数，并且在所述修饰步骤中所述亲核硫醇在以下条件下被氧化以产生大环桥连肽：-在空气存在下，特别是在氧气存在下，和/或
‑
在氧化添加剂的存在下，特别是选自以下的氧化添加剂：dmso、碘、n-氯代琥珀酰亚胺、tl(oac)3、tl(cf3coo)3、ch3sicl
3-ph(so)ph、[pt(乙二胺)2cl2]cl2、2,2'-二硫双(5-硝基吡啶)、5,5'-二硫双-(2-硝基苯甲酸)、反式-[pt-(cn)4cl2]
2-、谷胱甘肽-二硫化谷胱甘肽、k3fe(cn)6。17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中-x选自式2、2a、3、3a或4的部分，特别是式2、2a、3或3a的部分，更特别是式2或2a的部分，分，其中-每个r1和r2彼此独立地选自h或b，其中至少r1或r2是b，-r3选自h或b，-r4选自h、c
1-c
12-烷基或芳基，其中醛或酮基基团可被酸不稳定的保护基团保护，-b是酸不稳定的胺保护基团，-t是直链或支链间隔基，其包含以下部分中的至少一个，特别是1至5个：-c
1-12-烷基-、(-c2h4o-)
1-12
、-c(＝o)-、-c(＝o)-jr
9-、-jr
9-c(＝o)-、-jr
9-、苯基、5元或6元杂芳基，其中j是c或n，特别是n，特别地，t是选自以下的间隔基：-c
1-c
12-烷基-，特别是c
1-6-烷基，更特别是c
1-3-烷基，-r
5-c(＝o)-、-r
5-c(＝o)-nr
9-r
6-、-r
5-c(＝o)-nr
9-、-c(＝o)-nr
9-r
6-、-r
5-nr
9-c(＝o)-r
6-、-r
5-nr
9-r5’-nr9’
c(＝o)-r
6-、-r
5-c(＝o)-nr
9-r5’-nr9’-c(＝o)-r
6-、-r
5-nr
9-、-r
5-nr
9-r
6-、-r
5-nr
9-r5’-nr9’-r
6-、-r
5-c(＝o)-nr
9-r5’-nr9’-r
6-、-r
5-c(＝o)-o-r
6-、-c(＝o)-o-r
6-、-r
5-苯基-r
6-、-r
5-苯基-、-苯基-r
6-、-苯基-、-r
5-吡咯基、-r
5-吡唑基、-r
5-咪唑基、r
5-哌嗪基-、-r
5-吡啶基、-r
5-嘧啶基、-r
5-吡嗪基、-r
5-哒嗪基、-r
5-吡咯基-r
6-、-r
5-吡唑基-r
6-、-r
5-咪唑基-r
6-、-r
5-哌嗪基-r
6-、-r
5-吡啶基-r
6-、-r
5-嘧啶基-r
6-、-r
5-吡嗪基-r
6-、-r
5-哒嗪基-r
6-、吡咯基-r
6-、吡唑基-r
6-、咪唑基-r
6-哌嗪基-r
6-、吡啶基-r
6-、嘧啶基-r
6-、吡嗪基-r
6-、哒嗪基-r
6-、吡咯基、吡唑基、咪唑基、哌嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基和哒嗪基，其中r5、r5’
和r6彼此独立地选自c
1-c
12-烷基或(-c2h4o-)
1-12
，特别是c
1-c6烷基，特别是c
1-c3烷基，并且其中r9和r9’
彼此独立地选自h、c
1-4-烷基、-c
1-6-烷基-nh2、-c
1-6-烷基-nhb、-c
1-6-烷基-nb2、-r
15
、-c
1-6-烷基-r
15
、-c
1-6-烷基-nh-r
15
，特别地选自h和c
1-2-烷基，更特别地r9是h，其中
b是独立选择的酸不稳定的胺保护基团，r
15
是能与醛部分反应的封闭剂，特别地r
15
选自半胱氨酰基、苏氨酰基、2-巯基乙醇、半胱胺、乙二硫醇、羟胺、o-甲基羟胺、n-甲基羟胺、二硫苏糖醇、肼，特别是半胱氨酰基和n-甲基羟胺，更特别是半胱氨酰基，其中所述封闭剂的胺和/或硫醇部分可以被独立选择的酸不稳定的胺保护基团b，特别是boc，和/或酸不稳定的硫醇保护基团，特别是三苯甲基保护，-b是0或1，特别是1，-v是吸电子部分，其选自-nr
11-c(＝o)-、-c(＝o)-nr
11-、-s(＝o)-、-nr
12-(ch2)
p-、-哌嗪基-(ch2)
p-、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、-c(＝o)-、-c(＝o)-o-，特别是-nr
11-c(＝o)-、-c(＝o)-nr
11-、-s(＝o)-、
‑‑
nr
12-(ch2)
p-、-哌嗪基-(ch2)
p-、-吡啶基-、嘧啶基，更特别地选自-nh-c(＝o)-、-c(＝o)-nh-、-n-(ch3)-、-哌嗪基-(ch2)
p-、-吡啶基-、嘧啶基，其中r
11
选自h和c
1-4-烷基，特别地选自h和c
1-2-烷基，更特别地r
11
是h，r
12
选自h和c
1-4-烷基，特别地选自h和c
1-2-烷基，更特别地r
12
是甲基，p是0、1或2，特别是0或1，-a是0或1，其中a与b之和是1或2，-u是苯基或五元或六元杂芳基部分，特别是苯基或六元杂芳基部分，更特别是苯基，其与部分v、w
q
和e
n
中的至少一个结合并且可以任选地被c
1-6-烷基，特别是c
1-3-烷基取代，其中v如上所述定义，w选自-n3、-no2、-s(＝o)-r8、-s-s-r8、-o-ch
2-n3、-o-c(＝o)-o-ch
2-n3、-n＝n-苯基、-n＝n-r8、、特别是-n3、-n＝n-r8、-o-ch
2-n3、-s-s-r8，其中r8是吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、-c
1-c
6-烷基或-(ch2)
p-nme2，特别是吡啶基或-c
1-c
6-烷基，其中p是1、2、3或4，e是酸性条件下的吸电子基团，n是0和4之间的整数，特别是0和2之间的整数，更特别是0或1，并且q是0和4之间的整数，特别是0和2之间的整数，更特别是0和1，其中n和q之和等于或小于4，并且其中在u是苯基部分且y是-(ch2)
m-o-c(＝o)-的情况下，在酸性条件下v、w、e的哈米特常数之和大于0.45，并且其中w相对于y在邻位或对位，-y是-(ch2)
m-c(＝o)-或-(ch2)
m-o-c(＝o)-，其中m是1、2或3，特别是1或2，更特别是1，-z是吸电子离去基团。18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，e选自哌啶基、哌嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、-n(c2h4)2nh2、-n(c2h4)2n-b、-n＝n-苯基、-n＝n-r8、-(ch2)
r-nh-c
1-6-烷基、-(ch2)
r-n(c
1-6-烷基)
2-、-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-n3、-cf3、-so3h、-co2h、-c(＝o)
nh2、-so2me、-some、-so2et、-soet，特别是吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、-n＝n-苯基、-n＝n-r8、-f、-cl、-br、-i、-cn、-no2、-n3、-cf3、-so3h、-co2h，更特别是吡啶基、嘧啶基、哒嗪基或-br，其中r8是吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、-c
1-c
6-烷基或-(ch2)
p-nme2，特别是吡啶基或-c
1-c
6-烷基，其中p是1、2、3或4b是酸不稳定的胺保护基团，并且r是0、1、2、3或4，特别是0、1或2。
技术总结
本发明涉及用于修饰和纯化肽的方法，包括固定步骤、修饰步骤和释放步骤。在固定步骤中，将粗接头标记的肽L-P偶联到固体载体上，产生固定的接头标记的肽S-L-P。随后，用一种或多种有机分子修饰固定的接头标记的肽S-L-P，产生固定的接头标记的肽S-L-mP。最后，通过还原的中间体RI释放经修饰的肽。接头分子是式1的化合物，X-T
技术研发人员：罗伯特
受保护的技术使用者：贝兰迪克有限责任公司
技术研发日：2020.08.07
技术公布日：2022/3/18