人源化cldn18.2抗体
背景技术：
：：1.紧密连接物是多蛋白复合物，其连接相邻上皮或内皮细胞以形成屏障，阻止分子在细胞之间通过，并有助于维持细胞和组织的极性。紧密连接物由三种主要的跨膜蛋白组成：密封蛋白(claudin)和闭合蛋白(occludin)、细胞质斑块蛋白，以及扣带蛋白(cingulin)。它们还含有细胞骨架蛋白和信号传导蛋白，例如肌动蛋白、肌球蛋白ii和pkcζ。这些蛋白质相互作用以维持紧密连接结构(yuandturner2008)。2.密封蛋白形成23种蛋白质的家族(hewitt,agarwal,andmorin2006)。密封蛋白18是由cldn18基因编码的人蛋白，它在上皮细胞中形成紧密连接链。人cldn18可以与两个可变第一外显子可变剪接，产生两种蛋白同等型，cldn18.1(或密封蛋白18.1)和cldn18.2(或密封蛋白18.2)。cldn18.2在wo2000/015659中首次公开为zsig28蛋白。这两种同等型在涵盖第一胞外环的n端69个氨基酸上不同。第一胞外域跨越氨基酸28至氨基酸80。在此范围内，cldn18.1和cldn18.2之间存在8个氨基酸差异。这两种不同的同等型在不同的组织中表达，cldn18.1主要在肺组织中表达，而cldn18.2表现为胃特异性(niimietal.2001)。正常胃中cldn18.2的表达仅限于胃上皮的分化的短寿命细胞。已经在多种肿瘤组织中鉴定cldn18.2的表达。例如，已经发现cldn18.2在胰腺、食管、卵巢和肺肿瘤中表达，与不同的组织学亚型相关(sahinetal.2008)。3.鉴于cldn18.2在正常组织中的限制性表达模式，以及其在人癌症中的异位表达，cldn18.2是上皮性肿瘤抗体疗法的一个有吸引力的泛癌症靶标。针对这种抗体疗法进行了许多研究。wo2004/047863鉴定了cldn18的剪接变体，并筛选了针对衍生自cldn18.2的以下不同肽的抗体：肽dqwstqdlyn(seqidno:68)，cldn18.2的n端胞外，不依赖于糖基化；肽nnpvtavfnyq(seqidno:69)，cldn18.2的n端胞外，主要为未糖基化；和肽stqdlynnpvtavf(seqidno:70)，cldn18.2的n端胞外域，未糖基化。它还公开了用在cldn18.1和cldn18.2同等型共同的c端胞外域的泛cldn18肽tnfwmstanmytg(seqidno:71)筛选的多克隆兔抗体。wo2005/113587公开了针对由以下肽序列定义的cldn18.2上特异性表位的抗体：almivgivlgaigllv(seqidno:72)和rigsmedsakanmtltsgimfivs(seqidno:73)。wo200/7059997公开了通过用肽metdtlllwwvlllwvpgstgdaaqparrarrtklgtelgstpvwwnsadgrmdqwstqdlynnpvtavfnyqglwrscressgftecrgyftllglpamlqavraaiqhsggrsrartkthlrrgse(seqidno:74)(包括具有n端和c端延伸的cldn18.2的第一胞外域)免疫获得的cldn18.2特异性单克隆抗体。通过该免疫获得的抗体通过补体依赖性细胞毒性(cdc)和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)介导细胞杀伤。抗体imab362，也称为claudiximab或唑倍妥昔单抗(zolbetuximab)，公开于wo2007/059997和wo2016/165762。imab362是一种衍生自小鼠单克隆抗体的igg1抗体，并且经嵌合以展示人igg1恒定区，供临床使用。wo2008/145338还公开了与第一胞外域内的重叠肽(mdqwstqdlynnpvt(seqidno:75)、lynnpvtavfnyqgl(seqidno:76)、vfnyqglwrscvress(seqidno:77)、qglwrscvt(seqidno:78)和rscvressgftecrg(seqidno:79))结合的抗体。为了生产靶向cldn18.2的c端部分的抗体用于诊断目的以检测癌症组织切片的细胞中的cldn18.2表达，wo2013/167259公开了与cldn18.2的c端表位结合的抗体。两个表位的序列为tedevqsypskhdyv(seqidno:80)和evqsypskhdyv(seqidno:81)。wo2013/174509提出了抗cldn18.2抗体与稳定γδt细胞的药剂或与稳定或增加cldn18.2表达的药剂的组合。抗体可以与治疗部分，诸如细胞毒素、药物(例如免疫抑制剂)或放射性同位素缀合。wo2014075788公开了一种使用结合cldn18.2和cd3的双特异性抗体治疗癌症疾病的方法。wo2014/127906公开了稳定或增加cldn18.2表达的组合药剂。wo2016/166122公开了抗cldn18.2单克隆抗体，其可以在结合cldn18.2时高效内化，因此适用于抗体-药物缀合物(adc)的开发。此外，还公开了分别使用可切割spdb或缬氨酸-瓜氨酸接头将这些抗体与药物dm4和mmae缀合。然而，尽管专利申请中公开了所有抗体，但目前只有wo2007/059997和wo2016/165762中公开的嵌合imab362在临床试验中测试。除了这些抗体和adc，wo2018/006882公开了基于抗cldn18.2单克隆抗体的嵌合抗原受体(car)。wo2018/006882的抗体已经人源化，并且其序列在与jiangetal.(2018)相关的补充材料部分中公开。基于人源化抗体的cart细胞目前在患有晚期胃腺癌和胰腺腺癌的患者的i期临床试验(clinicaltrials.gov标识符：nct03159819)中进行测试。cn109762067公开了通过cdc和adcc介导细胞杀伤的其它抗cldn18.2单克隆抗体。wo2019/173420公开了具有adcc活性的抗cldn18.2人源化单克隆抗体。wo2019/175617公开了与imab362不同的表位结合的抗cldn18.2单克隆抗体。wo2019/219089公开了与cldn18.2的突变体结合的单克隆抗体。4.嵌合抗体具有接枝到人恒定结构域上的小鼠可变区，其通常仍然具有免疫原性并且这可能导致抗体的清除增强和其他安全影响(sauerborn2014)。因此，需要对抗体序列进行进一步的修饰，以降低患者免疫应答，并提高其治疗活性。人源化是对异种抗体序列进行修饰以降低这种免疫原性的过程(sauerborn2014)。然而，抗体的人源化通常也导致亲和力的丧失。imab362，目前临床上最先进的抗cldn18.2抗体，是一种嵌合抗体。因此，仍需要更好的抗cldn18.2抗体。本发明旨在通过公开人源化的imab362抗体来解决这些和其他需要，其具有惊人地高于imab362的对cldn18.2的亲和力。技术实现要素：5.定义[0006]“抗体(antibodies)”或“抗体(antibody)”，也称为“免疫球蛋白”(ig)，通常包含四条多肽链，两条重(h)链和两条轻(l)链，并因此是多聚体蛋白质，或包含其等同ig同系物(例如，包含仅重链的骆驼抗体、单域抗体(sdab)或衍生自重链或轻链的纳米抗体)。术语“抗体”包括基于抗体的结合蛋白，保留其靶结合能力的修饰抗体形式。术语“抗体”还包括保留ig分子的基本表位结合特征的全长功能突变体、变体或其衍生物(包括但不限于鼠抗体、嵌合抗体、人源化抗体和完全人抗体)，并且包括双重特异性、双特异性、多特异性和双可变结构域ig。ig分子可以是任何类别(例如，igg、ige、igm、igd、iga和igy)、或亚类(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)和同种异型。ig分子也可能发生突变，例如增强或降低对fcγ受体或新生儿fc受体(fcrn)的亲和力。[0007]如本文所用，“抗体片段”涉及包含至少一个多肽链的分子，该多肽链衍生自不是全长的抗体，并表现出靶结合，包括但不限于(i)fab片段，其是由可变轻(vl)、可变重(vh)、恒定轻(cl)和恒定重1(ch1)结构域组成的单价片段；(ii)f(ab’)2片段，其是包含在铰链区通过二硫桥连接的两个fab片段的二价片段(f(ab’)2片段的还原导致具有游离巯基的两个fab’片段)；(iii)fab(fa)片段的重链部分，其由vh和ch1结构域组成；(iv)可变片段(fv)片段，其由抗体单个臂的vl和vh结构域组成；(v)结构域抗体(dab)片段，其包含单个可变结构域；(vi)分离的互补决定区(cdr)；(vii)单链fv片段(scfv)；(viii)双抗体(diabody)，其是二价双特异性抗体，其中vh和vl结构域在单个多肽链上表达，但使用的接头太短而不允许在同一链上的两个结构域之间配对，从而迫使该结构域与另一链的互补结构域配对，并产生两个抗原结合位点；(ix)线性抗体，其包括一对串联fv片段(vh-ch1-vh-ch1)，与互补轻链多肽一起形成一对抗原结合区；(x)双可变结构域免疫球蛋白(xi)单独或以任何组合的免疫球蛋白重链和/或轻链的其他非全长部分，或突变体、变体，或其衍生物。[0008]如本文所用，“基于抗体的结合蛋白”可以表示在其他非免疫球蛋白或非抗体衍生组分的背景中包含至少一个抗体衍生的vh、vl或ch免疫球蛋白结构域的任何蛋白质。这种基于抗体的蛋白质包括但不限于(i)结合蛋白的fc-融合蛋白，包括具有免疫球蛋白ch结构域的全部或部分的受体或受体组分，(ii)结合蛋白，其中vh和或vl结构域与可变分子支架偶联，或(iii)分子，其中免疫球蛋白vh和/或vl和/或ch结构域以通常不在天然存在的抗体或抗体片段中发现的方式组合和/或组装。[0009]如本文所用，术语“修饰抗体形式”包括聚环氧烷修饰的scfv、单抗体、双抗体、骆驼抗体、结构域抗体、双特异性或三特异性抗体、iga或由j链和分泌组分连接的两个igg结构、鲨鱼抗体、新大陆灵长类框架和非新大陆灵长类cdr、除去铰链区的igg4抗体、具有工程化改造至ch3结构域中的两个附加结合位点的igg、具有改变的fc区以增强或降低对fcγ受体的亲和力的抗体、包含ch3、vl和vh的二聚化构建体等。[0010]kabat编号方案(martinandallemn2014)已应用于所公开的抗体。[0011]本文所述术语“选择性结合至cldn18.2”或“与cldn18.2的选择性结合”是指显示出与cldn18.2结合，而显示出不与cldn18.1(特异性)结合的抗体。因此，选择性结合cldn18.2的抗体不表现出与cldn18.1的交叉反应性。[0012]在本说明书和权利要求中使用术语“包括”时，它并不排除其他元素。为了本发明的目的，术语“由……组成”被认为是术语“包括”的优选实施方案。如果下文将组定义为包括至少一定数量的实施方案，则这也应理解为公开了优选地仅由这些实施方案组成的组。[0013]当不定冠词或定冠词用于指单数名词时，例如“一”、“一个”或“该”，这包括该名词的复数，除非另有具体说明。[0014]专业术语是根据他们的常识使用的。如果特定的含义被传达给某些术语，术语的定义将在下面使用术语的上下文中给出。[0015]描述[0016]发明人惊人地鉴定出新的抗cldn18.2抗体，如以下实施方案中进一步描述的。这些抗体以高于imab362抗体的亲和力与cldn18.2结合。[0017]因此，在一个实施方案中，本发明提供了与cldn18.2结合的抗体或其片段，其包括分别为seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3的重链互补决定区(hcdr)hcdr1、hcdr2和hcr3共有序列，以及分别为seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6的轻链互补区(lcdr)lcdr1、lcdr2和lcdr3共有序列。各自的共有序列可以在表1中找到。应理解，基于衍生自共有序列的cdr的任何组合并与cldn18.2结合的任何抗体或其片段是本发明的一部分。[0018]在优选实施方案中，分离的抗体或其功能片段与cldn18.2结合，但不与cldn18.1结合。因此，所提供的抗体特异性结合cldn18.2。[0019]表1：分离的抗体cdr共有序列[0020][0021][0022]抗体结合或结合亲和力通常用平衡缔合或解离常数(分别为ka或kd)来表示，平衡缔合或解离常数依次为解离速率常数和缔合速率常数(分别为koff和kon)的倒数比。因此，只要速率常数的比率保持不变，等同的亲和力可能对应于不同的速率常数。结合亲和力和/或速率常数可以使用本领域公知或本文描述的技术，诸如elisa、流式细胞术(fc)滴定法、等温滴定量热法(itc)、biacore(spr)、生物层干涉法(biolayerinferometry)或荧光偏振(fluorescentpolarization)来测定。在某些情况下，由于抗原的性质，抗体的ka或kd可能难以测量。对于完整膜蛋白诸如密封蛋白尤其如此(hashimotoetal.2018)。在这种情况下，完整膜蛋白可以表达为蛋白脂质体或脂质颗粒(lipoparticle)。这种脂质颗粒可以固定化在塑料上，并用于elisa测定，以确定抗体与固定抗原的结合亲和力。代替ka或kd值，可以为每个测试抗体或其功能片段计算半最大有效浓度(ec50)值，反映其与抗原的结合亲和力。下面的实施例3和图2例示了抗体与表1的共有序列中包含的cdr的elisa测定结合亲和力曲线。因此，可以按照实施例4确定结合，其中结合使用ec50值(实施例4中的表4)和上曲线值(图4)进行量化。ec50值和上曲线值(maxmfi)惊人地显示，本发明的人源化抗体具有更高的结合亲和力，即与imab362抗体相比，它们表现出增强的对cldn18.2的结合。最大平均荧光强度(maxmfi)也可以用来定量抗体的结合。当比较与同一靶标结合的两个抗体时，较高的maxmfi指示较高的亲和力和/或较低的解离速率。当用fc在表达cldn18.2的hek293t细胞或pa-tu-8988s-高细胞上测量结合时，可以如实施例4所示确定maxmfi，并且本发明抗体的maxmfi值如表4所示。[0023]因此，优选本发明的抗体或其片段以比imab362抗体更高的亲和力结合cldn18.2。反过来，图1d显示所有测试的抗体不与表达cldn18.1的hek293t细胞结合，并且相应地，所有测试的抗体选择性地与cldn18.2结合。此外，在优选实施方案中，此类抗体或其片段是人源化的。[0024]在另一个实施方案中，本发明提供结合cldn18.2的抗体或其片段，其包含：[0025]a.分别为seqidno:7、seqidno:9和seqidno:18的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:25、seqidno:5和seqidno:29的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0026]b.分别为seqidno:7、seqidno:10和seqidno:19的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:25、seqidno:5和seqidno:29的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0027]c.分别为seqidno:7、seqidno:10和seqidno:20的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:25、seqidno:5和seqidno:30的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0028]d.分别为seqidno:7、seqidno:12和seqidno:21的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:26、seqidno:5和seqidno:30的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0029]e.分别为seqidno:7、seqidno:13和seqidno:18的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:25、seqidno:5和seqidno:31的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0030]f.分别为seqidno:8、seqidno:14和seqidno:22的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:25、seqidno:5和seqidno:29的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0031]g.分别为seqidno:7、seqidno:15和seqidno:23的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:27、seqidno:5和seqidno:29的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0032]h.分别为seqidno:7、seqidno:16和seqidno:23的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:25、seqidno:5和seqidno:29的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；或[0033]i.分别为seqidno:8、seqidno:17和seqidno:24的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:28、seqidno:5和seqidno:31的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列。[0034]在优选实施方案中，抗体是人源化的。如上所述，这些新的人源化抗体以比imab362抗体更高的亲和力与cldn18.2的结合，例如如ec50和maxmfi值所示。此外，所提供的抗体选择性地结合cldn18.2。[0035]在另一个实施方案中，本发明提供结合cldn18.2的抗体或其片段，其包含：[0036]a.seqidno:32的vh序列；[0037]b.seqidno:34的vh序列；[0038]c.seqidno:35的vh序列；[0039]d.seqidno:37的vh序列；[0040]e.seqidno:39的vh序列；[0041]f.seqidno:41的vh序列；[0042]g.seqidno:42的vh序列；[0043]h.seqidno:44的vh序列；或[0044]i.seqidno:45的vh序列；[0045]和[0046]j.seqidno:33的vl序列；[0047]k.seqidno:36的vl序列；[0048]l.seqidno:38的vl序列；[0049]m.seqidno:40的vl序列；[0050]n.seqidno:43的vl序列；或[0051]o.seqidno:46的vl序列。[0052]在优选实施方案中，抗体是人源化的。如上所述，这些新的人源化抗体以比imab362抗体更高的亲和力与cldn18.2的结合，例如如ec50和maxmfi值所示。此外，所提供的抗体选择性地结合cldn18.2。应理解，基于vh和vl区的任何组合并结合cldn18.2的任何分离抗体或其片段是本发明的一部分。在优选实施方案中，抗体或其功能片段结合cldn18.2，但不结合cldn18.1。[0053]在另一个实施方案中，本发明涉及结合cldn18.2的抗体或其片段，其包含：[0054]a.seqidno:32的vh序列和seqidno:33的vl序列；[0055]b.seqidno:34的vh序列和seqidno:33的vl序列；[0056]c.seqidno:35的vh序列和seqidno:36的vl序列[0057]d.seqidno:37的vh序列和seqidno:38的vl序列；[0058]e.seqidno:39的vh序列和seqidno:40的vl序列；[0059]f.seqidno:41的vh序列和seqidno:33的vl序列；[0060]g.seqidno:42的vh序列和seqidno:43的vl序列；[0061]h.seqidno:44的vh序列和seqidno:33的vl序列；或[0062]i.seqidno:45的vh序列和seqidno:46的vl序列。[0063]在优选实施方案中，抗体是人源化的。同样，如上所述，这些新的人源化抗体以比imab362抗体更高的亲和力与cldn18.2结合，例如如ec50和maxmfi值所示。此外，所提供的抗体选择性地结合cldn18.2。[0064]在另一个实施方案中，本发明提供结合cldn18.2的抗体或其片段，其由以下组成：[0065]a.seqidno:49的重链序列和seqidno:50的轻链序列；[0066]b.seqidno:51的重链序列和seqidno:50的轻链序列；[0067]c.seqidno:52的重链序列和seqidno:53的轻链序列；[0068]d.seqidno:54的重链序列和seqidno:55的轻链序列；[0069]e.seqidno:56的重链序列和seqidno:57的轻链序列；[0070]f.seqidno:58的重链序列和seqidno:50的轻链序列；[0071]g.seqidno:59的重链序列和seqidno:60的轻链序列；[0072]h.seqidno:61的重链序列和seqidno:50的轻链序列；或[0073]i.seqidno:62的重链序列和seqidno:63的轻链序列。[0074]在优选实施方案中，抗体是人源化的。同样，如上所述，这些新的人源化抗体以比imab362抗体更高的亲和力与cldn18.2结合，例如如ec50和maxmfi值所示。此外，所提供的抗体选择性地结合cldn18.2。[0075]在另一个实施方案中，本发明提供结合cldn18.2的抗体或其片段，其中抗体或其片段是人源化的。单克隆抗体的人源化已经得到很好的证实。《治疗性抗体手册》第二版提供了关于单克隆抗体人源化(saldanha2014)、用于分析此类抗体的生物信息学工具(martinandallemn2014)或治疗性抗体的开发和制造(jacobietal.2014)的充分信息。当用作人治疗剂时，与嵌合抗体相比，人源化抗体具有较低的诱导抗药物抗体的风险，这将限制本发明抗体的治疗效益并增加副作用的风险，尤其是在重复施用后。[0076]在另一个实施方案中，本发明提供了与cldn18.2结合的分离抗体或其功能片段。[0077]在一个实施方案中，本发明的抗体不结合cldn18.1。因此，它不表现出交叉反应性。[0078]在另一个实施方案中，本发明提供了结合cldn18.2的抗体或其功能片段，由seqidno:58的重链序列和seqidno:50的轻链序列组成。[0079]在另一个实施方案中，本发明涉及一种抗体，该抗体具有与本文所述抗体的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％同一性的氨基酸序列。优选地，与imab362抗体相比，抗体以更高的亲和力与cldn18.2结合，例如如ec50和maxmfi值所示，和/或选择性地与cldn18.2结合。在一个实施方案中，抗体是人源化的。[0080]在一个实施方案中，本发明提供了与cldn18.2结合的抗体或其片段，该抗体或其片段与本文所述的抗体或其片段竞争结合。在优选实施方案中，抗体或其片段与由seqidno:58的重链序列和seqidno:50的轻链序列组成的抗体竞争结合。在一个实施方案中，抗体是人源化的。在进一步的优选实施方案中，抗体表现出与imab362的结合亲和力相同或增加的结合亲和力。在另一优选实施方案中，抗体表现出与由seqidno:58的重链序列和seqidno:50的轻链序列组成的抗体的结合亲和力相同或增加的结合亲和力。结合亲和力可以通过任何合适的方法来测量。例如，抗体的结合可以通过表达cldn18.2的hek295t细胞或pa-tu-8988-高细胞上的流式细胞术滴定的ec50值或maxmfi来测量。[0081]在另一个实施方案中，抗体(或抗体片段，当存在时)的fc结构域可以包括修饰或突变，例如下面表2中列出的修饰或突变。这种修饰或突变可以被引入以调节抗体fc结构域的效应物活性。抗体的修饰还可以包括添加到抗体hc和/或lc链c端的肽标签。这种标签可以用于例如蛋白质纯化或蛋白质缀合。[0082]在另一个实施方案中，本发明提供结合cldn18.2的分离的人源化抗体或其片段，所述抗体的形式选自iga1、iga2、igd、ige、igg1、igg2、igg3、igg4、合成igg、igm、f(ab)2、fv、scfv、iggach2、f(ab’)2、scfvch3、fab、vl、vh、scfv4、scfv3、scfv2、dsfv、fv、scfv-fc、(scfv)2、非消减igg、双抗体、二价抗体或其fc工程化改造型式。[0083]在优选实施方案中，抗体是igg1型抗体。免疫球蛋白的fc区与多种fcγ受体(fcγr)和补体蛋白(如c1q)相互作用，介导免疫效应物功能，诸如通过抗体依赖性细胞毒性(adcc)、抗体依赖性细胞吞噬(adcp)或补体依赖性细胞毒性(cdc)消除靶向细胞。对于治疗方法，增强或沉默fc相关效应物功能可能是有益的。免疫球蛋白(iga、igd、ige、igg、igm)的类型可以根据与fc结构域相关的抗体的期望效应物功能来选择，鉴于它们的已知活性。还可以使用合成免疫球蛋白，诸如具有igg2氨基酸118至260和igg4氨基酸261至447的免疫球蛋白或具有来自igg4的点突变(例如，h268q/v309l/a30s/p331s)的igg2变体。这种合成的免疫球蛋白降低抗体的效应物功能。fc工程化免疫球蛋白也可以用于调节抗体效应物功能。表2显示了此类fc工程化的实例。在岩藻糖基化改变的生产细胞系中的表达也可能影响fcγr结合，从而调节抗体的药代动力学。[0084]表2：调节抗体效应物功能的修饰的实例。除非另有说明，否则突变在igg1亚类上(wang,mathieu,andbrezski2018)。[0085][0086][0087][0088]抗体的体内半衰期也可以受调节。fc结构域在抗体的稳定性和血清半衰期中起着核心作用。对于治疗方法，抗体半衰期可以通过使用缺失fc结构域或具有截短的fc结构域的抗体片段来降低，例如f(ab)2、fv、scfv、iggach2、f(ab’)2、scfvch3、fab、vl、vh、scfv4、scfv3、scfv2、dsfv、fv、scfv-fc或(scfv)2。抗体也可以是双抗体或二价抗体的形式。可以使用双抗体或二价抗体以增加对靶标的亲和力，以允许降低剂量。缺失fc结构域或具有截短的fc结构域的功能片段也可以用于其他治疗方法，诸如嵌合抗原受体t细胞(cart细胞)或双特异性t细胞基因(bite)的开发。在car构建体中，一个vh和一个vl结构域通常通过短肽接头连接以形成单链可变片段(scfv)，并且该scfv片段进一步连接到跨膜结构域和基于胞浆内t细胞免疫受体酪氨酸的激活基序(来自例如cd3ζ)，以及共刺激分子(来自例如cd28，4-1bb(cd127)或ox40)的其他结构域(changandchen2017)。scfv片段中使用的vh和vl结构域可能是表3中列出的抗体。bite通常由两种不同抗体的两个scfv融合组成。一个scfv结构域可以是与表3中列出的cldn18.2结合的分离抗体，而另一个scfv结构域来自例如与cd3、cd16、nkg2d、nkp46、cd2、cd28或cd25结合的抗体。在diegoellerman(2019)的综述中，可以找到关于用于t细胞重定向的bite抗体形式和其他双抗体形式的充分指导。[0089]在另一个实施方案中，本发明提供结合cldn18.2的人源化抗体或其片段，该抗体具有seqidno:65的恒定轻链区(cl)以及优选地seqidno:66的恒定重链区ch1和fc区，其具有减少的fcγr结合，在恒定重链区ch2中具有l234a/l235a突变。更优选地，本发明提供一种抗体，该抗体具有seqidno:67的恒定重链区ch1和fc区，其在恒定重链区ch1和fc区中具有l234a/l235a/p329g突变，甚至进一步降低了fcγr结合。[0090]在另一个实施方案中，本发明提供分离的人源化抗体或其片段，其结合cldn18.2，具有与seqidno:66的恒定重链区ch1和fc区缔合的seqidno:41的vh序列，以及与具有seqidno:65的恒定轻链区(cl)缔合的seqidno:33的vl序列。[0091]在另一个实施方案中，本发明提供了与cldn18.2结合的抗体或其片段，其中抗体或其片段不与cldn18.1结合。因此，抗体不显示与cldn18.1的交叉反应性或交叉结合。抗体与靶蛋白的结合可以通过流式细胞术在表达靶蛋白的细胞上测试。测试抗体与其靶蛋白的特异性结合可以在直方图上显示出来。当抗体特异性结合表达的靶蛋白时，这种图导致具有高荧光信号的峰，而当抗体不结合表达的靶蛋白或仅非常弱地结合表达的靶蛋白时，这种图导致具有低荧光信号的峰。这种直方图可以在图1中看到，显示了本发明抗体与在hek293t细胞中表达的cldn18.2的结合，而不是与cldn18.1的结合。结合程度也可以用条形图表示，该条形图显示流式细胞术测量的最大平均荧光强度(maxmfi)，高maxmfi反映强结合，低/无maxmfi反映无结合。这种结合测定的实例可在实施例4中找到。[0092]在另一个实施方案中，本发明提供了与cldn18.2结合的抗体或其片段，抗体与另一部分结合。这部分可能包括放射性同位素、荧光标签、组织学标志物、细胞毒素或细胞因子。该部分的结合可以通过本领域已知的接头来促进。[0093]在另一个实施方案中，本发明提供了与cldn18.2结合的抗体或片段，其中抗体或其片段显示出比抗体imab362更强的与cldn18.2的结合。优选地，本发明提供与cldn18.2结合的抗体或片段，其中抗体或其片段以比imab362抗体更高的亲和力与cldn18.2结合。结合亲和力和/或速率常数可以使用本领域公知或本文描述的技术，诸如elisa、流式细胞术滴定法、等温滴定量热法(itc)、biacore(spr)、生物层干涉法或荧光偏振来测定。本发明人通过如实施例3所示的elisa或如实施例4所示的fc滴定实验来测定抗体对cldn18.2的亲和力。在对含cldn18.2的脂质颗粒的elisa中，所有人源化抗体hgba-1～hgba-9的最大结合值(以mfi表示)均高于imab362。在过表达cldn18.2的hek293t细胞或内源性表达cldn18.2的pa-tu-8988s细胞的fc滴定实验中，所有人源化抗体hgba-1至hgba-9比抗体imab362具有更高的最大结合值(以mfi单位表示)和更低的ec50值(以μg/ml表示)，这表明本发明的人源化抗体对cldn18.2的亲和力比抗体imab362更高。在一个实施方案中，本发明提供的抗体的测量ec50值比抗体imab362的测量ec50值低至少10％、低至少20％、低至少40％、低至少50％或低至少75％。在一个实施方案中，所提供的抗体具有比针对抗体imab362测量的maxmfi值高至少10％、高至少20％、高至少40％、高至少50％或高至少75％的测量maxmfi值。[0094]imab362抗体的重链和轻链序列例如在本文中提供为seqidno:47和seqidno:48。[0095]根据一个实施方案，本发明提供编码与cldn18.2结合的抗体或其片段的核酸序列。核酸序列可以编码单独的cdr，编码vh和vl区，或者编码抗体的整个重链和轻链。这些核酸序列可以在表3中找到。该核酸序列还可以编码f(ab)2、fv、scfv、iggach2、f(ab’)2、scfvch3、fab、vl、vh、scfv4、scfv3、scfv2、dsfv、fv、scfv-fc、(scfv)2、非消减igg、双抗体、二价抗体或其fc工程化改造型式。编码的免疫球蛋白可以是iga1、iga2、igd、ige、igg1、idg2、igg3、igg4、合成igg、igm或其突变和fc工程化改造型式。[0096]在另一个实施方案中，本发明提供了结合cldn18.2的基于抗体的结合蛋白，例如，包含至少所公开抗体的cldn18.2结合结构域和与抗体无关的另一蛋白质结构域的蛋白质。本发明还提供了与cldn18.2结合的修饰的人源化抗体形式。在优选实施方案中，基于抗体的结合蛋白不与cldn18.1结合。[0097]在另一个实施方案中，本发明提供编码抗体或其片段的核酸。这样的核酸序列可以进一步编码其他元件，并且可以是结合cldn18.2的嵌合抗原受体(car)的一部分。在chang和chen(2017)或june和sadelain(2018)中可以找到关于构建cart细胞的充分指导。在一个实施方案中，本发明提供了已经基因工程化改造以产生人工t细胞受体的t细胞，其中人工t细胞受体包括与cldn18.2结合的本发明的抗体或其功能片段。在优选实施方案中，car构建体不与cldn18.1结合。[0098]本发明还提供包含这种核酸的表达载体。表达载体可以是针对哺乳动物细胞、细菌、真菌或昆虫细胞表达的表达载体，并且选择用于携带包含编码抗体或其功能片段的核酸的表达载体的宿主细胞类型。在green和sambrook(greenandsambrook2012)中可以找到构建此类载体的充分指导。优选用于哺乳动物细胞，特别是cho细胞的表达载体。[0099]在另一个实施方案中，本发明提供包括编码与cldn18.2结合的抗体或其片段的表达载体或将编码与cldn18.2结合的抗体或其片段的核酸整合到其基因组中的宿主细胞。宿主细胞可以是哺乳动物细胞或细胞系、细菌、真菌或昆虫细胞。优选哺乳动物细胞，尤其是cho细胞。[0100]在另一个实施方案中，本发明涉及与cldn18.2结合的抗体或其片段、编码抗体或其片段的核酸、包含核酸的载体，或包括核酸或包含核酸的载体的宿主细胞，如本文所述，用于治疗患有赘生性疾病或有发展赘生性疾病风险的受试者，和/或用于治疗被诊断为赘生性疾病的受试者。所公开的抗体或其片段可以用作单一疗法，或优选与赘生性疾病的既定护理标准用作组合疗法。[0101]在另一个实施方案中，本发明提供了如本文所提供的与cldn18.2结合的抗体或其片段在制备用于治疗赘生性疾病的药物中的用途。[0102]赘生性疾病可以是选自胰腺癌、胃癌、食管癌、卵巢癌和肺癌的至少一种疾病。据了解，待治疗的赘生性疾病以cldn18.2的过表达为特征。[0103]本发明的另一个实施方案提供了用如本文所提供的与cldn18.2结合的分离的人源化抗体或其片段治疗赘生性疾病的方法，所述赘生性疾病包括胰腺癌、胃癌、食管癌、卵巢癌或肺癌，其中所述方法包括施用治疗有效量的所述抗体或其片段。治疗方法可以是单一疗法，或者优选与赘生性疾病的既定护理标准的组合疗法。[0104]还提供了一种药物组合物，包括与cldn18.2结合的抗体或其片段、编码抗体或其片段的核酸、包含核酸的载体，或包括核酸或包含核酸的载体的宿主细胞和药学上可接受的载体。[0105]优选地，患有胰腺癌、胃癌、食管癌、卵巢癌或肺癌的患者可以用分离的与cldn18.2结合的人源化抗体或其片段治疗，如本文所提供的。附图说明[0106]图1：人源化抗体与imab362的facs结合测定。在稳定表达hucldn18.2或hucldn18.1的hek293t细胞中检测所选抗体与hucldn1.2和hucldn18.1的结合。不表达靶蛋白的亲代hek293t细胞用作阴性对照。1a：a：imab362，b：hgba-1，c：hgba-2，d：hgba-3，e：hgba-4，f：hgba-5，g：hgba-6，h：hgba-7，i：hgba-8，j：gba-9，k：单独的二抗，l：泛cldn18抗体；1b：条形图，其显示了在亲代hek293t细胞和表达hucldn18.2或hucldn18.1的hek293t细胞上，与imab362相比每个人源化抗体的facs结合数据的平均荧光强度(mfi)。[0107]图2：2a-d:与imab362相比，人源化抗体的elisa结合测定。对携带cldn18.2的脂质颗粒或不含cldn18.2的空脂质颗粒进行elisa结合测定。[0108]图3：针对cldn18.2表达水平对pa-tu-8988s细胞进行的分选。3a：imab362染色的pa-tu-9888s的facs概况。3b：针对cldn18.2的中和高表达通过facs分选的pa-tu-8988s细胞的facs概况。[0109]图4：对pa-tu-8988s-高细胞(4a-d)和表达hucldn18.2的hek-293t(4e-h)的fc滴定测定。实施例[0110]实施例1：fab片段的人源化[0111]人源化单克隆抗体的技术已经建立已久。《治疗性抗体手册》第二版提供了关于单克隆抗体人源化(saldanha2014)、用于分析此类抗体的生物信息学工具(martin和allemn2014)或治疗性抗体的开发和制造(jacobietal.2014)的充分信息。简单地说，分析了亲本imab362抗体的可变结构域序列，以揭示最接近的人种系。接下来，对imab362的可变区进行结构分析以揭示最佳拟合的fv模型，然后通过在计算机中建模对cdr移植进行结构分析。基于在计算机中建模，设计了人源化的vh和vl结构域。克隆人源化的vh和vl结构域的组合并生产为fab和igg1抗体，并通过elisa和alphalisatm针对它们与表达cldn18.2的脂质颗粒的结合，以及通过流式细胞术针对它们与表达cldn18.1和cldn18.2的前b细胞l11(waldmeieretal.2016)和hek293t(atcccrl-3216)细胞系的结合对其进行筛选。在测试并与imab362比较后，选择了一个vh和vl的组合并以scfv形式设计文库，进行包括cdr的进一步人源化。通过elisa和alphalisatm针对表达cldn18.2的脂质颗粒以及通过流式细胞术用表达cldn18.1和cldn18.2的前b细胞l11细胞系筛选scfv文库。因此，imab362的人源化产生了人源化抗体hgba-1、hgba-2、hgba-3、hgba-4、hgba-5、hgba-6、hgba-7、hgba-8和hgba-9抗体(见表3)，本文统称为hgba抗体。[0112]表3：所选抗体的核酸和氨基酸序列[0113][0114][0115][0116][0117][0118][0119][0120][0121][0122]在进一步的实施例2至4中描述的抗体经修饰以在hc的c末端含有rlpxtgg标签(seqidno:143)和/或在lc的c末端含有ggggslpxtgg标签(seqidno:144)，其中x是20种天然氨基酸中的任何一种。在这种情况下，hc上的c端赖氨酸(k)被标签的精氨酸(r)替换。标签的加入不改变抗体对cldn18.2的亲和力和选择性。[0123]实施例2：人源化mab的facs结合分析[0124]hek293t(atcccrl-3216)细胞系不内源性表达cldn18.1或cldn18.2。因此，为了检测抗体结合活性，cldn18.1和cldn18.2在hek293t细胞系中过表达。用转座酶表达构建体(pcdna3.1-hy-mpb)、携带可转座全长hucldn18.1(ppb-puro-hucldn18.1)或hucldn18.2(ppb-puro-hucldn18.2)及嘌呤霉素表达盒的构建体和作为转染对照的携带egfp构建体(pegfp-n3)通过电穿孔共转染细胞。转染后，使细胞在生长培养基中于37℃，5％的co2气氛中，在潮湿的培养箱中恢复两天。通过对egfp表达的fc分析验证了转染。然后通过将嘌呤霉素以1μg/ml添加到培养物中来选择表达hucldn18.1或hucldn18.2的细胞，并进一步扩增，以允许在具有10％dmso的fcs中生成冷冻储备物。通过facs分析转染hek293t细胞中hucldn18.2的表达。简而言之，将hek293t细胞胰蛋白酶化并通过离心收集，在pbs/2％fcs中重悬浮，并使用imab362作为一抗以2μg/ml冰上针对hucldn18.2染色30min，并且在pbs/2％fcs中清洗后，用pe标记的抗人fcγ-特异性igg山羊抗体(ebioscience)作为二抗在冰上染色30min。在进一步清洗后，使用facscaliburtm仪器分析在冰冷facs缓冲液中重悬浮的染色细胞(见图1a)。不表达cldn18.2的未转染亲代细胞用作阴性对照。以类似的方式，使用识别cldn18.1和cldn18.2的专有的泛cldn18抗体分析cldn18.1的表达。任何可用于流式细胞术测量的泛cldn18抗体也是足够的，诸如origenetechnologies提供的抗密封蛋白-18/cldn18(c-term)(目录号ap50944pu-n)、来自mybiosource的cldn18(c-term)兔pab(目录号mbs8555451)或来自prosci的cldn18抗体(目录号63-847)。[0125]结果使用稳定表达hucldn18.1和hucldn18.2的hek293t细胞检测人源化抗体hgba-1、hgba-2、hgba-3、hgba-4、hgba-5、hgba-6、hgba-7、hgba-8和hgba-9与cldn18.2并且不与cldn18.1的结合特异性。使用2μg/ml的抗体在冰上染色细胞30min，并在facs缓冲液(pbs/2％fcs)中清洗后，用pe标记的抗人fcγ-特异性igg山羊抗体(ebioscience)作为二抗在冰上染色30min。用泛cldn18抗体验证了稳定表达hucldn18.1的hek293t细胞中cldn18.1的表达(见图1，小图l)，并用imab362验证了稳定表达hucldn18.2的hek293t细胞中cldn18.2的表达(见图1，小图a)。图1显示所有人源化抗体与由hek293t细胞表达的hucldn18.2特异性结合，并且不与hucldn18.1特异性结合。此外，所有人源化抗体与hucldn18.2的结合比亲本抗体imab362更强。[0126]实施例3：人源化mab的elisa结合分析[0127]以携带cldn18.2的脂质颗粒作为抗原来源，在elisa测定中测试了人源化抗体(hgba)与cldn18.2的结合亲和力。使用cldn18.2-脂质颗粒和空脂质颗粒(无抗原作为阴性对照)以10u/ml的终浓度包被96孔板。在用pbs/0.05％tween-20(pbs-t)清洗并用pbs-t/3％bsa在37℃下封闭至少1小时后，将在pbs-t/1％bsa中的hgba和imab362抗体的1:3连续稀释物以2μg/ml的起始浓度添加到包被孔，并在37℃下温育至少1小时。通过在pbs-t/1％bsa中稀释的hrp-山羊抗人二抗的结合，用sigma-fastopd作为过氧化物酶底物进行显影，并且通过添加2mh2so4停止反应，然后在elisa读板器上读取490nm处的od揭示了结合抗体的存在。具有代表性的结合曲线如图2所示。令人惊讶的是，图2中的结合曲线显示，所有人源化抗体(hgba-1至hgba-9)以高于imab362的亲和力与cldn18.2-脂质颗粒结合，表现为更高的最大结合值。[0128]实施例4：hek293t和pa-tu-8988高细胞上的fc滴定[0129]通过facs选择了表达高水平cldn18.2的pa-tu-8988s细胞(creativebioarray，目录号csc-c0326)。本文中，这些细胞被指定为pa-tu-8988s-高细胞。基于imab362的facs染色，pa-tu-8988s细胞群表达不同水平的cldn18.2，有高表达和中表达水平(见图3a)。为了获得更同质的细胞群，通过facs对细胞进行分选，只选择cldn18.2表达较高的细胞。简而言之，将悬浮于facs缓冲液(pbs，2％fcs)中的pa-tu-8988s细胞用2μg/ml的imab362在冰上温育30min。在facs缓冲液中清洗后，细胞用pe标记的fcγ特异性igg山羊抗人二抗(ebioscience)在冰上温育30min。清洗后，染色细胞在facs缓冲液中重悬浮，用facsariatm仪器进行分析和分选，将中表达细胞(图3b)与高表达细胞(图3b)分离。分选后，将收集的pa-tu-8988s-高细胞重悬浮于生长培养基中，在生长培养基中扩增，并将冷冻的等分部分保存在液体n2中。[0130]为了定量抗体对cldn18.2的亲和力，将过表达cldn18.2的hek293t细胞或pa-tu-8988-高细胞以250x103个细胞/孔接种在96孔板的fc缓冲液(pbs/2％fcs)中，并通过离心使其沉淀。将待测的imab362和hgba抗体以4μg/ml稀释，然后以1:4连续稀释，与铺板的细胞在4℃下温育30分钟。用facs缓冲液清洗后，将pe偶联的抗人igg二抗添加到细胞中，在4℃下持续额外的30min，然后用fc缓冲液进一步清洗。然后将细胞重悬浮在100μlfc缓冲液中，并用facscaliburtm细胞分析仪(bdbiosciencies，usa)进行测量。fc分析(见图4和表4)显示，在两种细胞系中，所有hgba抗体比imab362具有更强的对cldn18.2的结合亲和力(反映在所有测试的新抗体的maxmfi更高，见表4)。所有hgba抗体的结合亲和力彼此之间相似，但显著高于亲本抗体imab362。[0131]表4：在过表达cldn18.2的hek293t细胞系和pa-tu-8988s-高细胞系上的所有hgba和imab362抗体上测得的最大mfi和ec50(μg/ml)。[0132][0133]本发明还通过以下实施方案进行描述：[0134]1.结合cldn18.2的抗体或其片段，其包含：[0135]分别为seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3的hcdr1、hcdr2和hcr3序列以及分别为seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列。[0136]2.根据实施方案1的抗体或其片段，其包含：[0137]a.分别为seqidno:7、seqidno:9和seqidno:18的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:25、seqidno:5和seqidno:29的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0138]b.分别为seqidno:7、seqidno:10和seqidno:19的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:25、seqidno:5和seqidno:29的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0139]c.分别为seqidno:7、seqidno:10和seqidno:20的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:25、seqidno:5和seqidno:30的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0140]d.分别为seqidno:7、seqidno:12和seqidno:21的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:26、seqidno:5和seqidno:30的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0141]e.分别为seqidno:7、seqidno:13和seqidno:18的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:25、seqidno:5和seqidno:31的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0142]f.分别为seqidno:8、seqidno:14和seqidno:22的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:25、seqidno:5和seqidno:29的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0143]g.分别为seqidno:7、seqidno:15和seqidno:23的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:27、seqidno:5和seqidno:29的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；[0144]h.分别为seqidno:7、seqidno:16和seqidno:23的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:25、seqidno:5和seqidno:29的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列；或[0145]i.分别为seqidno:8、seqidno:17和seqidno:24的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及分别为seqidno:28、seqidno:5和seqidno:31的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列。[0146]3.根据实施方案1和2的抗体或其片段，其包含：[0147]a.与seqidno:32的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vh序列；[0148]b.与seqidno:34的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vh序列；[0149]c.与seqidno:35的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vh序列；[0150]d.与seqidno:37的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vh序列；[0151]e.与seqidno:39的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vh序列；[0152]f.与seqidno:41的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vh序列；[0153]g.与seqidno:42的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vh序列；[0154]h.与seqidno:44的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vh序列，或[0155]i.与seqidno:45的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vh序列；[0156]以及[0157]j.与seqidno:33的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vl序列；[0158]k.与seqidno:36的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vl序列；[0159]l.与seqidno:38的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vl序列；[0160]m.与seqidno:40的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vl序列；[0161]n.与seqidno:43的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vl序列；或[0162]o.与seqidno:46的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性的vl序列。[0163]4.根据实施方案1至3中任一项的抗体或其片段，其包含：[0164]a.seqidno:32的vh序列；[0165]b.seqidno:34的vh序列；[0166]c.seqidno:35的vh序列；[0167]d.seqidno:37的vh序列；[0168]e.seqidno:39的vh序列；[0169]f.seqidno:41的vh序列；[0170]g.seqidno:42的vh序列；[0171]h.seqidno:44的vh序列；或[0172]i.seqidno:45的vh序列；[0173]以及[0174]j.seqidno:33的vl序列；[0175]k.seqidno:36的vl序列；[0176]l.seqidno:38的vl序列；[0177]m.seqidno:40的vl序列；[0178]n.seqidno:43的vl序列；或[0179]o.seqidno:46的vl序列。[0180]5.根据实施方案1至4中任一项的抗体或其片段，其包含：[0181]a.seqidno:32的vh序列和seqidno:33的vl序列；[0182]b.seqidno:34的vh序列和seqidno:33的vl序列；[0183]c.seqidno:35的vh序列和seqidno:36的vl序列；[0184]d.seqidno:37的vh序列和seqidno:38的vl序列；[0185]e.seqidno:39的vh序列和seqidno:40的vl序列；[0186]f.seqidno:41的vh序列和seqidno:33的vl序列；[0187]g.seqidno:42的vh序列和seqidno:43的vl序列；[0188]h.seqidno:44的vh序列和seqidno:33的vl序列；或[0189]i.seqidno:45的vh序列和seqidno:46的vl序列。[0190]6.根据实施方案1至5中任一项的抗体或其片段，其由以下组成：[0191]a.重链序列，其与seqidno:49的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性，以及轻链序列，其与seqidno:50的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性；[0192]b.重链序列，其与seqidno:51的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性，以及轻链序列，其与seqidno:50的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性；[0193]c.重链序列，其与seqidno:52的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性，以及轻链序列，其与seqidno:53的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性；[0194]d.重链序列，其与seqidno:54的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性，以及轻链序列，其与seqidno:55的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性；[0195]e.重链序列，其与seqidno:56的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性，以及轻链序列，其与seqidno:57的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性；[0196]f.重链序列，其与seqidno:58的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性，以及轻链序列，其与seqidno:50的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性；[0197]g.重链序列，其与seqidno:59的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性，以及轻链序列，其与seqidno:60的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性；[0198]h.重链序列，其与seqidno:61的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性，以及轻链序列，其与seqidno:50的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性；或[0199]i.重链序列，其与seqidno:62的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性，以及轻链序列，其与seqidno:63的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的序列同一性。[0200]7.根据实施方案1至6中任一项的抗体或其片段，其由以下组成：[0201]a.seqidno:49的重链序列和seqidno:50的轻链序列；[0202]b.seqidno:51的重链序列和seqidno:50的轻链序列；[0203]c.seqidno:52的重链序列和seqidno:53的轻链序列；[0204]d.seqidno:54的重链序列和seqidno:55的轻链序列；[0205]e.seqidno:56的重链序列和seqidno:57的轻链序列；[0206]f.seqidno:58的重链序列和seqidno:50的轻链序列；[0207]g.seqidno:59的重链序列和seqidno:60的轻链序列；[0208]h.seqidno:61的重链序列和seqidno:50的轻链序列；或[0209]i.seqidno:62的重链序列和seqidno:63的轻链序列。[0210]8.抗体或其片段，其与实施方案1至7中任一项的抗体或其片段竞争结合。[0211]9.根据实施方案1至8中任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的形式选自由以下各项组成的组：iga1、iga2、igd、ige、igg1、igg2、igg3、igg4、合成igg、igm、f(ab)2、fv、scfv、iggach2、f(ab’)2、scfvch3、fab、vl、vh、scfv4、scfv3、scfv2、dsfv、fv、scfv-fc、(scfv)2、非消减igg、双抗体和二价抗体，或其fc工程化改造型式。[0212]10.根据实施方案1至9中任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是人源化的。[0213]11.根据实施方案1至10中任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是分离的。[0214]12.根据实施方案1至11中任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段不与cldn18.1结合。[0215]13.根据实施方案1至12中任一项的抗体或其片段，其中与抗体imab362相比，所述抗体或其片段显示出增强的与cldn18.2的结合。[0216]14.根据实施方案13的抗体或片段，其中增强的结合通过在表达cldn18.2的细胞上的流式细胞术滴定测量为ec50值和/或maxmfi值，优选其中所述细胞是hek293t细胞或pa-tu-8988-高细胞。[0217]15.根据实施方案14的抗体或片段，其中所测得的抗体的ec50值比抗体imab362的ec50值低至少10％、低至少20％、低至少40％、低至少50％或低至少75％。[0218]16.根据实施方案14的抗体或片段，其中所测得的抗体的maxmfi值比抗体imab362的maxmfi值高至少10％、高至少20％、高至少40％、高至少50％或高至少75％。[0219]17.核酸，其编码实施方案1至16中任一项的抗体或其片段。[0220]18.载体，其包含实施方案17的核酸。[0221]19.宿主细胞，其包含实施方案17的核酸或实施方案18的载体。[0222]20.根据实施方案1至16中任一项的抗体或其片段、实施方案17的核酸、实施方案18的载体或实施方案19的宿主细胞，其用于治疗以下受试者：[0223]a.患有赘生性疾病，[0224]b.有发展赘生性疾病的风险，和/或[0225]c.被诊断为患有赘生性疾病。[0226]21.实施方案20使用的抗体或其片段，其中所述赘生性疾病选自由以下各项组成的组：胰腺癌、胃癌、食管癌、卵巢癌和肺癌。[0227]序列[0228]seqidno:1gyxftsywig第3位的x为t或s[0229]seqidno:2gxiypxxxxtxyx第2位的x为n或i；第6位的x为s或g；第7位的x为a、e或d；第8位的x为a或s；第9位的x为y或d；第11位的x为n或r；最后一个位置的x为a或s[0230]seqidno:3xrxwrgnsfdx第1位的x为a或t；第3位的x为l、m、i或q；最后一个位置的x为a或y[0231]seqidno:4kssqsxlnsgnqknylx第6位的x为l或v；最后一个位置的x为t或a[0232]seqidno:5wastres[0233]seqidno:6qxdysypxt第2位的x为n或q；l或f中的x[0234]seqidno:7gysftsywig[0235]seqidno:8gytftsywig[0236]seqidno:9gniypgasdtrya[0237]seqidno:10gniypgdadtrya[0238]seqidno:11giiypgasdtnya[0239]seqidno:12giiypgdaytrys[0240]seqidno:13giiypgaaytrya[0241]seqidno:14gniypgasytrys[0242]seqidno:15gniypgeaytrys[0243]seqidno:16gniypsesytnya[0244]seqidno:17giiypsaaytrya[0245]seqidno:18arlwrgnsfdy[0246]seqidno:19armwrgnsfdy[0247]seqidno:20ariwrgnsfdy[0248]seqidno:21trlwrgnsfda[0249]seqidno:22trqwrgnsfdy[0250]seqidno:23trlwrgnsfdy[0251]seqidno:24trmwrgnsfdy[0252]seqidno:25kssqsllnsgnqknyla[0253]seqidno:26kssqsllnsgnqknylt[0254]seqidno:27kssqsvlnsgnqknylt[0255]seqidno:28kssqsvlnsgnqknyla[0256]seqidno:29qndysypft[0257]seqidno:30qndysyplt[0258]seqidno:31qqdysypft[0259]seqidno:32hgba-1hc可变区[0260]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgniypgasdtryapsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyycarlwrgnsfdywgqgtlvtvss[0261]seqidno:33hgba-1,hgba-2,hgba-6,hgba-8lc可变区[0262]divmtqspdslavslgeratinckssqsllnsgnqknylawyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqndysypftfgqgtkveik[0263]seqidno:34hgba-2hc可变区[0264]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgniypgdadtryapsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyycarmwrgnsfdywgqgtlvtvss[0265]seqidno:35hgba-3hc可变区[0266]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgiiypgasdtnyapsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyycariwrgnsfdywgqgtlvtvss[0267]seqidno:36hgba-3lc可变区[0268]divmtqspdslavslgeratinckssqsllnsgnqknylawyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqndysypltfgqgtkveik[0269]seqidno:37hgba-4hc可变区[0270]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgiiypgdaytryspsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyyctrlwrgnsfdawgqgtlvtvss[0271]seqidno:38hgba-4lc可变区[0272]divmtqspdslavslgeratinckssqsllnsgnqknyltwyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqndysypltfgqgtkveik[0273]seqidno:39hgba-5hc可变区[0274]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgiiypgaaytryapsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyycarlwrgnsfdywgqgtlvtvss[0275]seqidno:40hgba-5lc可变区[0276]divmtqspdslavslgeratinckssqsllnsgnqknylawyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqdysypftfgqgtkveik[0277]seqidno:41hgba-6hc可变区[0278]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgytftsywigwvrqmpgkglewmgniypgasytryspsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyyctrqwrgnsfdywgqgtlvtvss[0279]seqidno:42hgba-7hc可变区[0280]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgniypgeaytryspsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyyctrlwrgnsfdywgqgtlvtvss[0281]seqidno:43hgba-7lc可变区[0282]divmtqspdslavslgeratinckssqsvlnsgnqknyltwyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqndysypftfgqgtkveik[0283]seqidno:44hgba-8hc可变区[0284]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgniypsesytnyapsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyyctrlwrgnsfdywgqgtlvtvss[0285]seqidno:45hgba-9hc可变区[0286]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgytftsywigwvrqmpgkglewmgiiypsaaytryapsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyyctrmwrgnsfdywgqgtlvtvss[0287]seqidno:46hgba-9lc可变区[0288]divmtqspdslavslgeratinckssqsvlnsgnqknylawyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqdysypftfgqgtkveik[0289]seqidno:47imab362hc全[0290]qvqlqqpgaelvrpgasvklsckasgytftsywinwvkqrpgqglewigniypsdsytnynqkfkdkatltvdkssstaymqlssptsedsavyyctrswrgnsfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0291]seqidno:48imab362lc全[0292]divmtqspssltvtagekvtmsckssqsllnsgnqknyltwyqqkpgqppklliywastresgvpdrftgsgsgtdftltissvqaedlavyycqndysypftfgsgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec[0293]seqidno:49hgba-1hc全[0294]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgniypgasdtryapsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyycarlwrgnsfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0295]seqidno:50hgba-1,hgba-2,hgba-6,hgba-8lc全[0296]divmtqspdslavslgeratinckssqsllnsgnqknylawyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqndysypftfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec[0297]seqidno:51hgba-2hc全[0298]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgniypgdadtryapsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyycarmwrgnsfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0299]seqidno:52hgba-3hc全[0300]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgiiypgasdtnyapsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyycariwrgnsfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0301]seqidno:53hgba-3lc全[0302]divmtqspdslavslgeratinckssqsllnsgnqknylawyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqndysypltfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec[0303]seqidno:54hgba-4hc全[0304]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgiiypgdaytryspsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyyctrlwrgnsfdawgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0305]seqidno:55hgba-4lc全[0306]divmtqspdslavslgeratinckssqsllnsgnqknyltwyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqndysypltfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec[0307]seqidno:56hgba-5hc全[0308]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgiiypgaaytryapsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyycarlwrgnsfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0309]seqidno:57hgba-5lc全[0310]divmtqspdslavslgeratinckssqsllnsgnqknylawyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqdysypftfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec[0311]seqidno:58hgba-6hc全[0312]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgytftsywigwvrqmpgkglewmgniypgasytryspsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyyctrqwrgnsfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0313]seqidno:59hgba-7hc全[0314]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgniypgeaytryspsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyyctrlwrgnsfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0315]seqidno:60hgba-7lc全[0316]divmtqspdslavslgeratinckssqsvlnsgnqknyltwyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqndysypftfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec[0317]seqidno:61hgba-8hc全[0318]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywigwvrqmpgkglewmgniypsesytnyapsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyyctrlwrgnsfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0319]seqidno:62hgba-9hc全[0320]evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgytftsywigwvrqmpgkglewmgiiypsaaytryapsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyyctrmwrgnsfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0321]seqidno:63hgba-9,lc全[0322]divmtqspdslavslgeratinckssqsvlnsgnqknylawyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqdysypftfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec[0323]seqidno:64恒定重链-ch1+fc结构域[0324]astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0325]seqidno:65[0326]rtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec[0327]seqidno:66[0328]astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0329]seqidno:67[0330]astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalgapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk[0331]seqidno:68dqwstqdlyn[0332]seqidno:69nnpvtavfnyq[0333]seqidno:70stqdlynnpvtavf[0334]seqidno:71tnfwmstanmytg[0335]seqidno:72almivgivlgaigllv[0336]seqidno:73rigsmedsakanmtltsgimfivs[0337]seqidno:74[0338]metdtlllwvlllwvpgstgdaaqparrarrtklgtelgstpvwwnsadgrmdqwstqdlynnpvtavfnyqglwrscvressgftecrgyftllglpamlqavraaiqhsggrsrrartkthlrrgse[0339]seqidno:75mdqwstqdlynnpvt[0340]seqidno:76lynnpvtavfnyqgl[0341]seqidno:77vfnyqglwrscvres[0342]seqidno:78qglwrscvressgft[0343]seqidno:79rscvressgftecrg[0344]seqidno:80tedevqsypskhdyv[0345]seqidno:81evqsypskhdyv[0346]seqidno:82共有，包括imab362hccdr1[0347]gyxftsywix第三位的x为t或s，最后一位的x为g或n[0348]seqidno:83共有，包括imab362hccdr2[0349]gxiypxxxxtxyx第2位的x为n或i；第6位的x为s或g；第7位的x为a、e或d；第8位的x为a或s；第9位的x为y或d；第11位的x为n或r；最后一个位置的x为a、n或s[0350]seqidno:84共有，包括imab362hccdr3[0351]xrxwrgnsfdx第1位的x为a或t；第3位的x为l、m、i、s或q；最后一个位置的x为a或y[0352]seqidno:85ggctatagctttacatcatattggattgga[0353]seqidno:86gggaacatttaccctggggcatcggatacgcgatacgca[0354]seqidno:87gcgagactttggcgggggaatagcttcgactac[0355]seqidno:88aaaagctcccaaagcctattgaactcgggaaaccaaaagaattacttggca[0356]seqidno:89tgggcaagcacccgagagagc[0357]seqidno:90caaaacgactattcatacccattcaca[0358]seqidno:91ggatattcatttacaagctactggatcgga[0359]seqidno:92ggaaatatataccccggagacgcggacacgagatacgca[0360]seqidno:93gcgcggatgtggcgcggcaatagctttgactac[0361]seqidno:94gggatcatctatccgggggcatccgataccaactatgcg[0362]seqidno:95gctaggatttggcgaggaaatagctttgattat[0363]seqidno:96aagagctcgcaaagtttgctgaactccgggaaccaaaagaattacctggca[0364]seqidno:97tgggcatcaacgcgggaaagc[0365]seqidno:98caaaacgactactcctatccgctgacc[0366]seqidno:99ggatactcatttacatcatactggatagga[0367]seqidno:100gggattatataccccggcgacgcttacactcgatattcg[0368]seqidno:101acgaggctatggagggggaatagctttgatgcc[0369]seqidno:102aagagctcccaaagcctattgaactcgggaaatcaaaagaattatctgaca[0370]seqidno:103tgggcctcgacaagggagagc[0371]seqidno:104caaaatgactactcatacccgctgaca[0372]seqidno:105ggatatagctttacgagctactggatcgga[0373]seqidno:106gggataatataccccggagcggcatacacgagatatgcg[0374]seqidno:107gcgagactatggcgcgggaactcatttgattac[0375]seqidno:108aaatcatcgcaatcattgctaaattcggggaaccaaaagaattatttggca[0376]seqidno:109tgggcatccacgagagaatcg[0377]seqidno:110caacaagattattcatacccatttaca[0378]seqidno:111ggatatacatttacatcttactggatcgga[0379]seqidno:112gggaacatttatcctggcgcgagctatacgcgctat[0380]seqidno:113acccggcaatggaggggcaatagctttgactac[0381]seqidno:114ggatattcctttacatcatactggatcggc[0382]seqidno:115gggaacatatatcccggagaagcctatacgagatactcg[0383]seqidno:116acgcgactatggaggggaaatagctttgactat[0384]seqidno:117aagagctcccaatcagtcctgaactctgggaatcaaaagaattacctgaca[0385]seqidno:118tgggcgagcacgagggagagc[0386]seqidno:119caaaatgattattcataccccttcaca[0387]seqidno:120ggatactcctttacatcatattggatcgga[0388]seqidno:121ggaaacatatatccgagcgaatcatatacgaactacgcg[0389]seqidno:122acgaggctatggagggggaatagcttcgactat[0390]seqidno:123ggatatacattcacgagctactggatagga[0391]seqidno:124ggaatcatatatccttccgcggcatatacgcgatatgcg[0392]seqidno:125acgcggatgtggaggggaaatagctttgattac[0393]seqidno:126aagagctcgcaatcggtcctgaatagcgggaaccaaaagaattatctggcc[0394]seqidno:127caacaagactactcatacccatttaca[0395]seqidno:128[0396]gaagtccaactggtccaatccggcgcggaggttaagaagcccggagaatcgctgaagatctcatgcaaagggagcggctatagctttacatcatattggattggatgggtcaggcaaatgccggggaaggggctggaatggatggggaacatttaccctggggcatcggatacgcgatacgcacctagctttcaagggcaagtcacaatttcggcggacaagagcatctcaacggcatacctgcaatggtcgagcttgaaggcatctgatactgcaatgtactactgcgcgagactttggcgggggaatagcttcgactactgggggcagggtaccctggttacggtctcgagc[0397]seqidno:129[0398]gacattgtgatgacgcaaagccccgattcgctggctgtatcgctaggggagcgcgctacgatcaattgcaaaagctcccaaagcctattgaactcgggaaaccaaaagaattacttggcatggtatcaacaaaaaccggggcaaccgccgaagctgctgatctattgggcaagcacccgagagagcggtgtcccggaccgatttagcgggagcggatcgggcaccgacttcacgctgacaataagctcattgcaagccgaggatgtggcggtctattattgccaaaacgactattcatacccattcacattcgggcaaggtaccaaggtcgagatcaag[0399]seqidno:130[0400]gaagtccaactggtccaatctggagcggaagtcaagaagcctggggagagcctgaaaatttcatgcaaggggagcggatattcatttacaagctactggatcggatgggtccggcaaatgccggggaagggcttggaatggatgggaaatatataccccggagacgcggacacgagatacgcaccgagctttcaagggcaggtcaccattagcgctgataaatcgatttcaaccgcatatctgcaatggtcatcgctgaaggcctccgacaccgcgatgtactattgcgcgcggatgtggcgcggcaatagctttgactactgggggcagggtaccctcgtcacggtctcgagc[0401]seqidno:131[0402]gaggtccaactggtccaaagcggcgcggaggtcaagaagccgggagaatccctgaagattagctgcaaaggctccggctatagctttacatcatattggatcggatgggtcagacaaatgccgggaaagggacttgaatggatggggatcatctatccgggggcatccgataccaactatgcgccgagcttccaagggcaggtcacgatatccgcggataaatcgattagcaccgcatatctgcaatggagctcgctgaaggcatccgacaccgcgatgtactactgcgctaggatttggcgaggaaatagctttgattattgggggcagggtacccttgtcacggtctcgagc[0403]seqidno:132[0404]gacattgtcatgacgcaaagccccgactcgctggccgtctcactgggggagcgggcgacaatcaactgcaagagctcgcaaagtttgctgaactccgggaaccaaaagaattacctggcatggtatcaacaaaagccggggcaacccccgaagctgctgatatattgggcatcaacgcgggaaagcggagtcccggatagatttagcggatctggatcggggaccgacttcacgctgacgatatctagccttcaagccgaggatgtggctgtatattattgccaaaacgactactcctatccgctgaccttcgggcaaggtaccaaggtcgagatcaag[0405]seqidno:133[0406]gaagtccaactagtccaaagcggagccgaagtcaagaaaccgggggagagccttaagatctcatgcaaggggagcggatactcatttacatcatactggataggatgggtcagacaaatgcccggcaaggggctggaatggatggggattatataccccggcgacgcttacactcgatattcgccatcattccaagggcaggtcacgatatcggccgataaatcgatatccacggcatacctgcaatggagctcactgaaagcatctgatacggcaatgtattattgcacgaggctatggagggggaatagctttgatgcctgggggcagggtaccctggtcacggtctcgagc[0407]seqidno:134[0408]gacatagttatgacacaatcgccggatagcctcgcggtcagccttggagagcgggcgacgatcaactgcaagagctcccaaagcctattgaactcgggaaatcaaaagaattatctgacatggtatcaacaaaagccggggcaaccaccgaaactgctgatctattgggcctcgacaagggagagcggagtcccggaccgcttctctggatcgggaagcgggactgacttcacgctgaccataagctcgctgcaagccgaggacgtcgccgtctattattgccaaaatgactactcatacccgctgacatttggccaaggtaccaaggtcgagatcaag[0409]seqidno:135[0410]gaggtgcaactggtacaatccggggcggaagtgaagaagccgggggaatcgctgaagataagctgcaaaggctctggatatagctttacgagctactggatcggatgggtcaggcaaatgccggggaagggactggaatggatggggataatataccccggagcggcatacacgagatatgcgccgagcttccaagggcaagtgacaataagcgcggacaaatcgattagcacggcatatctgcaatggtcctcgctgaaggcgagcgataccgcaatgtactattgcgcgagactatggcgcgggaactcatttgattactgggggcagggtaccctagtgacggtctcgagc[0411]seqidno:136[0412]gacattgtcatgacgcaaagcccggatagcctggctgtatcgctgggggagagagcgacgatcaactgcaaatcatcgcaatcattgctaaattcggggaaccaaaagaattatttggcatggtatcaacaaaagccggggcaaccgccgaaactgctgatttactgggcatccacgagagaatcgggagtcccggaccgatttagcggatctgggagcgggaccgatttcacgctgaccattagctcgctgcaagcggaggatgtggcggtctattactgccaacaagattattcatacccatttacatttgggcaaggtaccaaggtcgagatcaag[0413]seqidno:137[0414]gaagtacaattggttcaatcgggggccgaagtcaagaagccgggggaatcgctgaagatatcctgcaaggggagcggatatacatttacatcttactggatcggatgggtcagacaaatgcccggaaaggggcttgaatggatggggaacatttatcctggcgcgagctatacgcgctatagcccgagcttccaagggcaggtcacgattagcgccgacaagagcatttcgacggcatacctgcaatggagctcgctgaaagcatcggatacggcaatgtattactgcacccggcaatggaggggcaatagctttgactactgggggcagggtaccctagtcacggtctcgagc[0415]seqidno:138[0416]gaagttcaattggtccaatctggagccgaagtcaagaagcccggagaatcgctgaagattagctgcaaggggagcggatattcctttacatcatactggatcggctgggtcagacaaatgcccggaaagggactggaatggatggggaacatatatcccggagaagcctatacgagatactcgccatcatttcaaggacaggtcaccataagcgcggacaagagcataagcaccgcatacctgcaatggagctcgctgaaggcatcggacaccgccatgtattactgcacgcgactatggaggggaaatagctttgactattgggggcagggtaccttagtcacggtctcgagc[0417]seqidno:139[0418]gatatagtaatgactcaatcacccgatagcttggctgtgagcctgggagaaagagctacaatcaactgcaagagctcccaatcagtcctgaactctgggaatcaaaagaattacctgacatggtatcaacaaaagcccggacaaccgccgaagctgctgatctactgggcgagcacgagggagagcggagtcccggatcgattttctggctccgggagcggaaccgacttcacactgactattagctcgctgcaagcggaggacgtcgccgtctactattgccaaaatgattattcataccccttcacatttgggcaaggtaccaaggtcgagatcaag[0419]seqidno:140[0420]gaggtgcaactagtgcaatcgggggccgaagtgaagaaacctggggaatcgctgaagatatcatgcaaggggagcggatactcctttacatcatattggatcggatgggtcaggcaaatgccggggaaggggctggaatggatgggaaacatatatccgagcgaatcatatacgaactacgcgccgagctttcaaggacaagtcacgatatccgcggataaatcgatatcgaccgcatacctgcaatggagctcgctgaaggcttccgacactgcgatgtattactgcacgaggctatggagggggaatagcttcgactattgggggcagggtaccctggtgacggtctcgagc[0421]seqidno:141[0422]gaagtccaattagtccaatcgggggccgaggtcaagaagccgggggaatcgctcaagataagctgcaagggatcgggatatacattcacgagctactggataggatgggtcaggcaaatgccggggaaggggctggaatggatgggaatcatatatccttccgcggcatatacgcgatatgcgccatcatttcaaggacaggtcacgataagcgccgacaagagcattagcaccgcatacctgcaatggtcgagccttaaggcatcggacaccgcgatgtactactgcacgcggatgtggaggggaaatagctttgattactgggggcagggtaccctagtcacggtctcgagc[0423]seqidno:142[0424]gacatcgtcatgacgcaaagcccggactcgctggcggtctcgctgggggagcgggccacaataaattgcaagagctcgcaatcggtcctgaatagcgggaaccaaaagaattatctggcctggtatcaacaaaagccggggcaaccaccgaagctgctaatctattgggcgagcacgagggagagcggagtccccgatcgatttagcggatcgggaagcgggaccgatttcacgctgacgatttcgagcctacaagccgaggatgtggcggtctattactgccaacaagactactcatacccatttacatttggacaaggtaccaaggtcgagatcaag[0425]seqidno:143分选酶标签[0426]rlpxtgg[0427]x是20种天然氨基酸中的任何一种[0428]seqidno:144分选酶标签[0429]ggggslpxtgg[0430]x是20种天然氨基酸中的任何一种[0431]参考文献[0432]alegre,m.l.,a.m.collins,v.l.pulito,r.a.brosius,w.c.olson,r.a.zivin,r.knowles,j.r.thistlethwaite,l.k.jolliffe,andj.a.bluestone.1992.‘effectofasingleaminoacidmutationontheactivatingandimmunosuppressivepropertiesofa"humanized"okt3monoclonalantibody’,jimmunol,148:3461-8.[0433]an,z.,g.forrest,r.moore,m.cukan,p.haytko,l.huang,s.vitelli,j.z.zhao,p.lu,j.hua,c.r.gibson,b.r.harvey,d.montgomery,d.zaller,f.wang,andw.strohl.2009.‘igg2m4,anengineeredantibodyisotypewithreducedfcfunction’,mabs,1:572-9.[0434]bolt,s.,e.routledge,i.lloyd,l.chatenoud,h.pope,s.d.gorman,m.clark,andh.waldmann.1993.‘thegenerationofahumanized,non-mitogeniccd3monoclonalantibodywhichretainsinvitroimmunosuppressiveproperties’,eurjimmunol,23:403-11.[0435]chang,z.l.,andy.y.chen.2017.‘cars:syntheticimmunoreceptorsforcancertherapyandbeyond’,trendsmolmed,23:430-50.[0436]chu,s.y.,i.vostiar,s.karki,g.l.moore,g.a.lazar,e.pong,p.f.joyce,d.e.szymkowski,andj.r.desjarlais.2008.‘inhibitionofbcellreceptor-mediatedactivationofprimaryhumanbcellsbycoengagementofcd19andfcgammariibwithfc-engineeredantibodies’,molimmunol,45:3926-33.[0437]dall’acqua,w.f.,r.m.woods,e.s.ward,s.r.palaszynski,n.k.patel,y.a.brewah,h.wu,p.a.kiener,ands.langermann.2002.‘increasingtheaffinityofahumanigg1fortheneonatalfcreceptor:biologicalconsequences’,jimmunol,169:5171-80.[0438]diebolder,c.a.,f.j.beurskens,r.n.dejong,r.i.koning,k.strumane,m.a.lindorfer,m.voorhorst,d.ugurlar,s.rosati,a.j.heck,j.g.vandewinkel,i.a.wilson,a.j.koster,r.p.taylor,e.o.saphire,d.r.burton,j.schuurman,p.gros,andp.w.parren.2014.‘complementisactivatedbyigghexamersassembledatthecellsurface’,science,343:1260-3.[0439]ellerman,d.2019.‘bispecifict-cellengagers:towardsunderstandingvariablesinfluencingtheinvitropotencyandtumorselectivityandtheirmodulationtoenhancetheirefficacyandsafety’,methods,154:102-17.[0440]green,m.r.,andj.sambrook.2012.molecularcloning:alaboratorymanual(fourthedition)(coldspringharborlaboratorypress).[0441]hashimoto,y.,w.zhou,k.hamauchi,k.shirakura,t.doi,k.yagi,t.sawasaki,y.okada,m.kondoh,andh.takeda.2018.‘engineeredmembraneproteinantigenssuccessfullyinduceantibodiesagainstextracellularregionsofclaudin-5’,scirep,8:8383.[0442]hewitt,k.j.,r.agarwal,andp.j.morin.2006.‘theclaudingenefamily:expressioninnormalandneoplastictissues’,bmccancer,6:186.[0443]idusogie,e.e.,p.y.wong,l.g.presta,h.gazzano-santoro,k.totpal,m.ultsch,andm.g.mulkerrin.2001.‘engineeredantibodieswithincreasedactivitytorecruitcomplement’,jimmunol,166:2571-5.[0444]jacobi,a.,b.enenkel,p.garidel,c.eckermann,m.knappenberger,i.presser,andh.kaufmann.2014.‘processdevelopmentandmanufacturingoftherapeuticantibodies.’ins.duebelandj.m.reichert(eds.),handbookoftherapeuticantibodies,secondedition(wiley-vchverlaggmbh&co.kgaa.).[0445]jiang,h.,z.shi,p.wang,c.wang,l.yang,g.du,h.zhang,b.shi,j.jia,q.li,h.wang,andz.li.2018.‘claudin18.2-specificchimericantigenreceptorengineeredtcellsforthetreatmentofgastriccancer’,jnatlcancerinst.[0446]june,c.h.,andm.sadelain.2018.‘chimericantigenreceptortherapy’,nengljmed,379:64-73.[0447]lazar,g.a.,w.dang,s.karki,o.vafa,j.s.peng,l.hyun,c.chan,h.s.chung,a.eivazi,s.c.yoder,j.vielmetter,d.f.carmichael,r.j.hayes,andb.i.dahiyat.2006.‘engineeredantibodyfcvariantswithenhancedeffectorfunction’,procnatlacadsciusa,103:4005-10.[0448]leabman,m.k.,y.g.meng,r.f.kelley,l.e.deforge,k.j.cowan,ands.iyer.2013.‘effectsofalteredfcgammarbindingonantibodypharmacokineticsincynomolgusmonkeys’,mabs,5:896-903.[0449]lo,m.,h.s.kim,r.k.tong,t.w.bainbridge,j.m.vernes,y.zhang,y.l.lin,s.chung,m.s.dennis,y.j.zuchero,r.j.watts,j.a.couch,y.g.meng,j.k.atwal,r.j.brezski,c.spiess,andj.a.ernst.2017.‘effector-attenuatingsubstitutionsthatmaintainantibodystabilityandreducetoxicityinmice’,jbiolchem,292:3900-08.[0450]martin,a.c.r.,andj.allemn.2014.‘bioinformaticstoolsforanalysisofantibodies.’in,hanbookoftherapeuticantibodies,secondedition(wiley-vchverlaggmbh&co.kgaa.).[0451]mimoto,f.,t.igawa,t.kuramochi,h.katada,s.kadono,t.kamikawa,m.shida-kawazoe,andk.hattori.2013.‘novelasymmetricallyengineeredantibodyfcvariantwithsuperiorfcgammarbindingaffinityandspecificitycomparedwithafucosylatedfcvariant’,mabs,5:229-36.[0452]moore,g.l.,h.chen,s.karki,andg.a.lazar.2010.‘engineeredfcvariantantibodieswithenhancedabilitytorecruitcomplementandmediateeffectorfunctions’,mabs,2:181-9.[0453]natsume,a.,m.in,h.takamura,t.nakagawa,y.shimizu,k.kitajima,m.wakitani,s.ohta,m.satoh,k.shitara,andr.niwa.2008.‘engineeredantibodiesofigg1/igg3mixedisotypewithenhancedcytotoxicactivities’,cancerres,68:3863-72.[0454]niimi,t.,k.nagashima,j.m.ward,p.minoo,d.b.zimonjic,n.c.popescu,ands.kimura.2001.‘claudin-18,anoveldownstreamtargetgeneforthet/ebp/nkx2.1homeodomaintranscriptionfactor,encodeslung-andstomach-specificisoformsthroughalternativesplicing’,molcellbiol,21:7380-90.[0455]richards,j.o.,s.karki,g.a.lazar,h.chen,w.dang,andj.r.desjarlais.2008.‘optimizationofantibodybindingtofcgammariiaenhancesmacrophagephagocytosisoftumorcells’,molcancerther,7:2517-27.[0456]rother,r.p.,s.a.rollins,c.f.mojcik,r.a.brodsky,andl.bell.2007.‘discoveryanddevelopmentofthecomplementinhibitoreculizumabforthetreatmentofparoxysmalnocturnalhemoglobinuria’,natbiotechnol,25:1256-64.[0457]sahin,u.,m.koslowski,k.dhaene,d.usener,g.brandenburg,g.seitz,c.huber,ando.tureci.2008.‘claudin-18splicevariant2isapan-cancertargetsuitablefortherapeuticantibodydevelopment’,clincancerres,14:7624-34.[0458]saldanha,j.w.2014.‘humanizationstrategies.’ins.duebelandj.m.reichert(eds.),handbookoftherapeuticantibodies,secondedition(wiley-vchverlaggmbh&co.kgaa.).[0459]sauerborn,m.2014.‘theimmunogenicityoftherapeuticantibodies.’ins.duebelandj.m.reichert(eds.),handbookoftherapeuticantibodies,secondedition(wiley-vchverlaggmbh&co.kgaa.).[0460]shang,l.,b.daubeuf,m.triantafilou,r.olden,f.depis,a.c.raby,s.herren,a.dossantos,p.malinge,i.dunn-siegrist,s.benmkaddem,a.geinoz,g.magistrelli,f.rousseau,v.buatois,s.salgado-pires,w.reith,r.monteiro,j.pugin,o.leger,w.ferlin,m.kosco-vilbois,k.triantafilou,andg.elson.2014.‘selectiveantibodyinterventionoftoll-likereceptor4activationthroughfcgammareceptortethering’,jbiolchem,289:15309-18.[0461]shields,r.l.,a.k.namenuk,k.hong,y.g.meng,j.rae,j.briggs,d.xie,j.lai,a.stadlen,b.li,j.a.fox,andl.g.presta.2001.‘highresolutionmappingofthebindingsiteonhumanigg1forfcgammari,fcgammarii,fcgammariii,andfcrnanddesignofigg1variantswithimprovedbindingtothefcgammar’,jbiolchem,276:6591-604.[0462]stavenhagen,j.b.,s.gorlatov,n.tuaillon,c.t.rankin,h.li,s.burke,l.huang,s.vijh,s.johnson,e.bonvini,ands.koenig.2007.‘fcoptimizationoftherapeuticantibodiesenhancestheirabilitytokilltumorcellsinvitroandcontrolstumorexpansioninvivovialow-affinityactivatingfcgammareceptors’,cancerres,67:8882-90.[0463]tao,m.h.,ands.l.morrison.1989.‘studiesofaglycosylatedchimericmouse-humanigg.roleofcarbohydrateinthestructureandeffectorfunctionsmediatedbythehumaniggconstantregion’,jimmunol,143:2595-601.[0464]vafa,o.,g.l.gilliland,r.j.brezski,b.strake,t.wilkinson,e.r.lacy,b.scallon,a.teplyakov,t.j.malia,andw.r.strohl.2014.‘anengineeredfcvariantofaniggeliminatesallimmuneeffectorfunctionsviastructuralperturbations’,methods,65:114-26.[0465]waldmeier,l.,i.hellmann,c.k.gutknecht,f.i.wolter,s.c.cook,s.t.reddy,u.grawunder,andr.r.beerli.2016.‘transpo-mabdisplay:transposition-mediatedbcelldisplayandfunctionalscreeningoffull-lengthiggantibodylibraries’,mabs,8:726-40.[0466]walker,m.r.,j.lund,k.m.thompson,andr.jefferis.1989.‘aglycosylationofhumanigg1andigg3monoclonalantibodiescaneliminaterecognitionbyhumancellsexpressingfcgammariand/orfcgammariireceptors’,biochemj,259:347-53.[0467]wang,x.,m.mathieu,andr.j.brezski.2018.‘iggfcengineeringtomodulateantibodyeffectorfunctions’,proteincell,9:63-73.[0468]xu,d.,m.l.alegre,s.s.varga,a.l.rothermel,a.m.collins,v.l.pulito,l.s.hanna,k.p.dolan,p.w.parren,j.a.bluestone,l.k.jolliffe,andr.a.zivin.2000.‘invitrocharacterizationoffivehumanizedokt3effectorfunctionvariantantibodies’,cellimmunol,200:16-26.[0469]yu,d.,andj.r.turner.2008.‘stimulus-inducedreorganizationoftightjunctionstructure:theroleofmembranetraffic’,biochimbiophysacta,1778:709-16.[0470]zalevsky,j.,a.k.chamberlain,h.m.horton,s.karki,i.w.leung,t.j.sproule,g.a.lazar,d.c.roopenian,andj.r.desjarlais.2010.‘enhancedantibodyhalf-lifeimprovesinvivoactivity’,natbiotechnol,28:157-9.[0471]cn109762067[0472]wo2000/015659[0473]wo2004/047863[0474]wo2005/113587[0475]wo2007/059997[0476]wo2008/145338[0477]wo2013/167259[0478]wo2013/174509[0479]wo2014/075788[0480]wo2014/127906[0481]wo2016/166122[0482]wo2018/006882[0483]wo2019/175617[0484]wo2019/219089当前第1页12当前第1页12