1.本发明涉及一种二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐及包含其作为有效成分的用于抑制癌生长的药物组合物和试剂盒。2.本技术基于申请日为2020年01月23日、申请号为10-2020-0009445的韩国专利申请提出，并要求该韩国专利申请的优先权，该申请的说明书及附图中所公开的全部内容在此引入本技术作为参考。
背景技术：
：：3.癌细胞增加了有氧糖酵解、谷氨酰胺分解通量(glutaminolyticflux)、氨基酸及脂质代谢，以实现快速生长。癌细胞与邻近的正常细胞竞争有限的营养物质会消耗更多的葡萄糖。并且，癌细胞的缺氧肿瘤微环境通过诱导参与代谢、血管生成、转移及抗细胞凋亡的基因表达，使癌细胞恶性化。4.在缺氧条件下表达增加的转录因子-1(hypoxia-induciblefactor-1；hif-1)由hif-1α和hif-1β组成，是肿瘤缺氧的主要调节因子，在癌细胞的代谢重编程中起关键作用。在缺氧条件下，hif-1α增加葡萄糖转运蛋白(glucosetransporters；glut)及如己糖激酶(hexokinases；hk)及磷酸甘油酸激酶1(phosphoglyceratekinase1；pgk1)等乙醇酸酶的表达，导致糖酵解被激活。hif-1还增加丙酮酸脱氢酶激酶同工酶1(pyruvatedehydrogenasekinaseisozyme1；pdk1)的表达，该酶使丝氨酸残基磷酸化并抑制丙酮酸脱氢酶(pyruvatedehydrogenase；pdh)活性。pdk1的高表达阻止丙酮酸盐转化为乙酰辅酶a，从而通过线粒体中的三羧酸(tricarboxylicacid；tca)循环及氧化磷酸化抑制atp生成。实际上，缺氧癌细胞通过hif-1依赖性重编程显示出这些代谢特性。因此，抑制hif-1表达或功能可以通过抑制参与癌细胞代谢适应的基因表达来破坏癌症代谢并诱导细胞凋亡。5.几项研究试图开发hif-1抑制剂。例如，线粒体复合物i抑制剂bay87-2243可减少缺氧症诱导的hif-1α积累，并在h460癌细胞系异种移植模型中表现出显著的抗肿瘤效果。苯并吡喃类似物kcn-1通过干扰胶质瘤细胞中转录因子p300与hif-1α之间的相互作用来抑制hif-1活性。本发明人专注于开发靶向实体瘤中的hif-1α蛋白的小分子化合物，并发现(芳氧基乙酰氨基)苯甲酸类似物lw6(公开于韩国专利公开号10-2012-0041071)抑制缺氧症诱导的hif-1α蛋白积累，其直接靶点是苹果酸脱氢酶2(malatedehydrogenase2；mdh2)。临床候选药物idf-11774也被开发为靶向癌症代谢的hif-1α抑制剂。并且，据报道，桑辛素o(moracino)及其苯并呋喃类似物是hif-1α蛋白积累的强效抑制剂。然而，迄今为止，还没有一种药物被fda批准为hif-1抑制剂。6.肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，hcc)是一种复杂的异质性肿瘤类型，具有多种遗传和表观遗传修饰。索拉非尼(sorafenib)已被批准作为晚期hcc患者的一线治疗药物，但生存效果非常低。索拉非尼是一种口服多激酶抑制剂，通过靶向血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor；vegf)受体及血小板衍生生长因子受体来抑制血管生成及增殖，从而抑制肿瘤增殖。最近，瑞戈非尼(regorafenib)及纳武单抗(nivolumab)已被批准作为对索拉非尼无反应的患者的二线治疗剂，但迫切需要有效的肝癌治疗方法。技术实现要素：7.技术问题8.如上所述，靶向癌症代谢已成为一种重要的癌症治疗策略。因此，在本发明中，提供作为hif-1α抑制剂的二取代金刚烷基衍生物的合成结果及其生物学评估结果，hif-1α为可诱导缺氧症(hypoxia)的因素。9.更具体地，本发明人发现包含lw1564(化合物21-3)的二取代金刚烷基衍生物通过抑制电子传递链(electrontransportchain；etc)复合物i来抑制线粒体呼吸，从而减少atp的生成并刺激hcc细胞中的hif-1α降解。这种结果表明，包含lw1564(化合物21-3)的二取代金刚烷基衍生物通过抑制hif-1α积累及脂肪酸合成来破坏癌症代谢，从而抑制癌细胞在体内及体外的生长，本发明提供一种包含二取代金刚烷基衍生物及其药学上可接受的盐作为有效成分的用于抗癌的药物组合物。10.技术方案11.为了解决如上所述的问题，本发明提供一种由下述化学式1表示的二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐。12.化学式1：13.(在上述化学式1中，r1及r2如本文所定义。)14.并且，本发明提供一种包含由上述化学式1表示的二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于抗癌的药物组合物。15.并且，本发明涉及一种癌症治疗方法，包括：向需要抗癌治疗的患者给予治疗有效量的由上述化学式1表示的二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐的步骤。16.并且，本发明提供一种由上述化学式1表示的二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的制剂中的用途。17.并且，本发明提供一种由上述化学式1表示的二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐在治疗癌症中的用途。18.作为本发明一实例，上述药物组合物可以为针对实体癌的用于抗癌的药物组合物，但并不限定于此。19.作为本发明另一实例，实体癌可以选自由乳腺癌、宫颈癌、直肠癌、纤维肉瘤、胃癌、肝癌、肺癌及胰腺癌组成的组中。20.技术效果21.本发明的包含lw1564(化合物21-3)的二取代金刚烷基衍生物显著抑制hif-1α积累并抑制包括hepg2及a549在内的多种癌细胞系的生长。耗氧率(ocr)及atp生成率的测定结果表明，lw1564(化合物21-3)通过抑制线粒体呼吸来增加细胞内氧浓度，从而刺激hepg2细胞中的hif-1α降解。lw1564(化合物21-3)还通过增加线粒体电子传递链(etc)复合物i及amp/atp比率来抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mtor)信号传导，从而增加amp活化蛋白激酶(ampk)的磷酸化，大幅度降低总atp生成量。最终，lw1564(化合物21-3)通过促进乙酰辅酶a羧化酶的磷酸化来抑制脂质合成，并显著抑制hepg2小鼠异种移植模型中的肿瘤生长。综上所述，本发明的包含lw1564(化合物21-3)的二取代金刚烷基衍生物通过靶向线粒体etc复合物i并破坏癌细胞代谢来抑制hepg2细胞的增殖，因此可以有效用作强效的癌症治疗剂，该治疗剂依赖于用于在线粒体中生成atp的氧化磷酸化。附图说明22.图1a至图1c示出lw1564(化合物21-3)对癌细胞生长的效果，图1a示出lw1564(化合物21-3)的结构，图1b示出lw1564(化合物21-3)对多种癌细胞系的增殖抑制功效，图1c为示出利用观察活细胞成像(liveimaging)的incucytezoom系统研究lw1564(化合物21-3)的hepg2及a549细胞的增殖抑制功效的图。23.图2a至图2e示出lw1564(化合物21-3)在癌细胞中抑制hif-1α积累的效果。图2a示出lw1564(化合物21-3)对hepg2细胞中hre-荧光素酶活性的抑制效果。图2b为示出lw1564(化合物21-3)通过蛋白酶体依赖性降解抑制hif-1α积累的图。图2c示出hif-1α的mrna表达水平。图2d示出在缺氧条件下lw1564(化合物21-3)对多种癌细胞系中hif-1α积累的抑制效果。图2e示出通过qpcr的hif-1α靶基因、glut1、pdk1及vegfa的mrna表达水平。24.图3a至图3d为示出lw1564(化合物21-3)抑制hepg2细胞中的线粒体呼吸的图。图3a示出lw1564(化合物21-3)对降低hepg2细胞中耗氧率的效果。图3b示出在使用lw1564(化合物21-3)处理时在癌细胞中生成atp的速度的测定结果。图3c示出lw1564(化合物21-3)对降低细胞中atp总量的效果。图3d示出使用探测缺氧的探针mar检测lw1564(化合物21-3)对细胞内氧分压产生的变化。25.图4a至图4d为示出lw1564(化合物21-3)通过靶向etc内复合物i来抑制线粒体呼吸的图。在图4a，图4b中，向细胞中添加1μm的鱼藤酮(复合物i活性抑制剂)(图4a)或100μm的lw1564(化合物21-3)(图4b)。图4c示出lw1564(化合物21-3)对复合物ii/iii的效果。添加复合物ii底物琥珀酸盐后，向细胞中添加lw1564(化合物21-3)。图4d示出lw1564(化合物21-3)对复合物iv的效果。添加复合物iv底物tmpd及抗坏血酸盐后，向细胞中添加lw1564(化合物21-3)。26.图5a至图5d为示出lw1564(化合物21-3)通过激活hepg2细胞中ampk途径来抑制脂肪酸积累的图。图5a为示出通过lw1564(化合物21-3)激活ampk的图。图5b示出在lw1564(化合物21-3)存在下对脂肪酸积累的抑制。图5c示出lw1564(化合物21-3)及葡萄糖浓度对癌细胞的增殖的效果。使用lw1564(化合物21-3)处理在不同的葡萄糖浓度下培养的hepg2细胞。柱状图表示细胞增殖百分比。图5d示出2-dg(2-脱氧-d-葡萄糖)和lw1564(化合物21-3)在hepg2细胞中的组合指数(ci，combinationindex)。27.图6示出lw1564(化合物21-3)对hepg2异种移植小鼠模型中的肿瘤增殖抑制功效。图6中的左侧图示出对照组及使用lw1564(化合物21-3)处理的异种移植的肿瘤体积随时间的变化；**p≤0.01，图6中的中间图示出对照组及使用lw1564(化合物21-3)处理的异种移植的肿瘤的重量；**p≤0.01，图6中的右侧图为图6中的左侧图及中间图中示出的肿瘤的代表性图像。28.最优实施方式29.以下，详细说明本发明。30.本发明提供一种由下述化学式1表示的二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐。31.化学式1：32.在上述化学式1中，33.r1为-(x)-(ch2)n-r3或34.r2为-(y)-(ch3)m或-(y)-(ch2)m-r4，35.上述x为o、nh或36.上述y为nh、37.上述n为0、1或2，上述m为0或1，38.r3或r4各自独立地为c1至c6的直链或支链烷基、未取代或取代的c5至c10的芳基、或未取代或取代的c5至c9的杂芳基，39.其中，上述杂芳基为包含一个以上n或o杂原子的5元或6元的杂芳基，40.上述取代的芳基或取代的杂芳基能够被一个以上卤素、c1至c6的直链或支链烷基、c1至c6的直链或支链卤代烷基(卤代烷)、羟基、或c1至c6的直链或支链烷氧基取代，41.但是，在上述r2中，及可被排除。42.优选地，43.上述r1为-(x)-(ch2)n-r3或44.r2为-(y)-(ch3)m或-(y)-(ch2)m-r4，45.上述x为o、nh或46.上述y为nh、47.上述n为0、1或2，上述m为0或1，48.上述r3为甲基、取代或未取代的苯基、或未取代的c5至c9的杂芳基，其中，上述杂芳基为包含n或o杂原子的5元或6元的杂芳基，上述取代的苯基能够被一个以上卤素、c1至c6的直链或支链烷基、c1至c6的直链或支链卤代烷基、羟基、或c1至c6的直链或支链烷氧基取代，49.上述r4为取代的苯基、取代或未取代的c5至c9的杂芳基，其中，上述杂芳基为包含n或o杂原子的5元或6元的杂芳基，上述取代的苯基或杂芳基能够被c1至c6的直链或支链卤代烷基取代，50.但是，在上述r2中，及可被排除。51.更优选地，52.上述r1为53.r2为-(y)-(ch3)m或-(y)-(ch2)m-r4，54.上述y为nh、55.上述m为1，56.上述r4为取代的苯基，其中，上述取代的苯基能够被c1至c6的直链或支链卤代烷基取代，57.但是，在上述r2中，及可被排除。58.优选地，59.二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐的特征在于，二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐可以由下述化学式2表示：60.化学式2：61.在上述化学式2中，62.r1为-(x)-(ch2)n-r3或63.上述x为o、nh或64.上述n为0、1或2，65.r3各自独立地为c1至c6的直链或支链烷基、未取代或取代的c5至c10的芳基、或未取代或取代的c5至c9的杂芳基，66.其中，上述杂芳基为包含一个以上n或o杂原子的5元或6元的杂芳基，67.上述取代的芳基或取代的杂芳基能够被一个以上卤素、c1至c6的直链或支链烷基、c1至c6的直链或支链卤代烷基、羟基、或c1至c6的直链或支链烷氧基取代。68.更优选地，在上述化学式2中，69.二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐的特征在于，上述r1可以选自由以下组成的组中：[0070][0071]优选地，[0072]二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐的特征在于，二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐可以由下述化学式3表示：[0073]化学式3：[0074]在上述化学式3中，[0075]r2为-(y)-(ch3)m或-(y)-(ch2)m-r4，[0076]上述y为nh、[0077]上述m为0或1，[0078]r4各自独立地为c1至c6的直链或支链烷基、未取代或取代的c5至c10的芳基、或未取代或取代的c5至c9的杂芳基，[0079]其中，上述杂芳基为包含一个以上n或o杂原子的5元或6元的杂芳基，[0080]上述取代的芳基或取代的杂芳基能够被一个以上卤素、c1至c6的直链或支链烷基、c1至c6的直链或支链卤代烷基、羟基、或c1至c6的直链或支链烷氧基取代，[0081]但是，在上述r2中，及可被排除。[0082]更优选地，[0083]在上述化学式3中，[0084]二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐的特征在于，上述r2可以选自由以下组成的组中：[0085][0086]优选地，[0087]二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐的特征在于，二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐可以由下述化学式4表示：[0088]化学式4：[0089]在上述化学式4中，[0090]r1为-(x)-(ch2)n-r3或[0091]上述x为o、nh或[0092]上述n为0、1或2，[0093]r3各自独立地为c1至c6的直链或支链烷基、未取代或取代的c5至c10的芳基、或未取代或取代的c5至c9的杂芳基，[0094]其中，上述杂芳基为包含一个以上n或o杂原子的5元或6元的杂芳基，[0095]上述取代的芳基或取代的杂芳基能够被一个以上卤素、c1至c6的直链或支链烷基、c1至c6的直链或支链卤代烷基、羟基、或c1至c6的直链或支链烷氧基取代。[0096]更优选地，[0097]在上述化学式4中，[0098]二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐的特征在于，上述r1可以选自由以下组成的组中：[0099][0100]优选地，[0101]二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐的特征在于，二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐可以由下述化学式5表示：[0102]化学式5：[0103]在上述化学式5中，[0104]r2为-(y)-(ch3)m或-(y)-(ch2)m-r4，[0105]上述y为nh、[0106]上述m为0或1，[0107]r4各自独立地为c1至c6的直链或支链烷基、未取代或取代的c5至c10的芳基、或未取代或取代的c5至c9的杂芳基，[0108]其中，上述杂芳基为包含一个以上n或o杂原子的5元或6元的杂芳基，[0109]上述取代的芳基或取代的杂芳基能够被一个以上卤素、c1至c6的直链或支链烷基、c1至c6的直链或支链卤代烷基、羟基、或c1至c6的直链或支链烷氧基取代，[0110]但是，在上述r2中，及可被排除。[0111]更优选地，[0112]在上述化学式5中，[0113]二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐的特征在于，上述r2可以选自由以下组成的组中：[0114][0115]最优选地，[0116]本发明的二取代金刚烷基衍生物可以为下组中的一种以上：[0117]3-(2-(4-(3-((甲氧基)羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl-3-(2-(4-(3-((methoxy)carbonyl)adamantane-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10a)；[0118]3-(2-(4-(4-((4-甲氧基苄氧基)羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl-3-(2-(4-(4-((4-methoxybenzyloxy)carbonyl)adamantane-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10b)；[0119]3-(2-(4-(4-((3,4-二甲氧基苄氧基)羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl-3-(2-(4-(4-((3,4-dimethoxybenzyloxy)carbonyl)adamantane-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10c)；[0120]3-(2-(4-(2-((3,4-二甲氧基苯乙氧基)羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl3-(2-(4-(2-((3,4-dimethoxyphenethoxy)carbonyl)adamantane-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10d)；[0121]3-(2-(4-(3-((呋喃-2-基甲氧基)羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl-3-(2-(4-(3-((furan-2-ylmethoxy)carbonyl)adamantane-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10e)；[0122]3-(2-(4-(3-甲基氨基甲酰基-金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl3-(2-(4-(3-methylcarbamoyl-adamantan-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10f)；[0123]3-(2-(4-(3-苄基氨基甲酰基-金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl3-(2-(4-(3-benzylcarbamoyl-adamantan-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10g)；[0124]3-(2-(4-(3-(呋喃-2-基甲基氨基甲酰基)-金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl3-(2-(4-(3-(furan-2-ylmethylcarbamoyl)-adamantan-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10h)；[0125]3-(2-(4-(3-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl3-(2-(4-(3-(pyridin-2-ylcarbamoyl)-adamantan-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10i)；[0126]3-(2-(4-(3-(6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-羰基)-金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl3-(2-(4-(3-(6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-2-carbonyl)-adamantan-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10j)；[0127]3,4-二甲氧基苄基-2-(4-(2-氧代-2-(3-(三氟甲基)苯基氨基)乙氧基)苯基)金刚烷-1-基羧酸酯(3,4-dimethoxybenzyl-2-(4-(2-oxo-2-(3-(trifluoromethyl)phenylamino)ethoxy)phenyl)adamantane-1-ylcarboxylate)(14a)；[0128]3,4-二甲氧基苄基-2-(4-(2-氧代-2-(喹啉-8-基氨基)乙氧基)苯基)金刚烷-1-基羧酸酯(3,4-dimethoxybenzyl-2-(4-(2-oxo-2-(quinolin-8-ylamino)ethoxy)phenyl)adamantane-1-ylcarboxylate)(14b)；[0129]3,4-二甲氧基苄基-2-(4-(2-(呋喃-2-基甲基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)金刚烷-1-基羧酸酯(3,4-dimethoxybenzyl-2-(4-(2-(furan-2-ylmethylamino)-2-oxoethoxy)phenyl)adamantane-1-ylcarboxylate)(14c)；[0130]3,4-二甲氧基苄基-2-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)苯基)金刚烷-1-基羧酸酯(3,4-dimethoxybenzyl-2-(4-(2-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-oxoethoxy)phenyl)adamantane-1-ylcarboxylate)(14d)；[0131]n-(呋喃-2-基甲基)-5-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)苯基)金刚烷-1-基-甲酰胺(n-(furan-2-ylmethyl)-5-(4-(2-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-oxoethoxy)phenyl)adamantan-1-yl-carboxamide)(17a)；[0132]1-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(4-(5-(4-(4-(三氟甲基)苄基)哌嗪-1-羰基)金刚烷-1-基-)苯氧基)乙酮(1-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-(4-(5-(4-(4-(trifluoromethyl)benzyl)piperazine-1-carbonyl)adamantan-1-yl-)phenoxy)ethanone)(17b)；[0133]2-(4-(5-(4-(4-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(2-(4-(5-(4-(4-methoxybenzyl)piperazine-1-carbonyl)adamantan-1-yl)phenoxy)-1-(4-methylpiperazin-1-yl)ethanone)(17c)；[0134]2-(4-(3-(6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)-1-吗啉代乙酮(2-(4-(3-(6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-2-carbonyl)adamantan-1-yl)phenoxy)-1-morpholinoethanone)(21a)；[0135]2-(4-(3-(6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(2-(4-(3-(6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-2-carbonyl)adamantan-1-yl)phenoxy)-1-(4-methylpiperazin-1-yl)ethanone)(21b)；以及[0136]2-(4-(3-(6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)-1-(4-(4-(三氟甲基)苄基)哌嗪-1-基)乙酮(2-(4-(3-(6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-2-carbonyl)adamantan-1-yl)phenoxy)-1-(4-(4-(trifluoromethyl)benzyl)piperazin-1-yl)ethanone)(21c)(lw1564)。[0137]如本文所用，连接至取代基的符号“ca-b”或“ca至cb”是指取代基中包含的碳原子数为a至b。[0138]在本发明中，“c1至c6的直链或支链烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链饱和烃基。例如，甲基、乙基、丙基、丁基、1-甲基乙基、二乙基或二甲基等，但并不限定于此。[0139]在本发明中，“c1至c6的直链或支链烷氧基”是指r为c1-6烷基的or基。例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、1-甲基乙氧基、1,1-二甲基乙氧基等，但并不限定于此。[0140]在本发明中，“卤素”为氟、溴、氯或碘。[0141]在本发明中，“卤代烷基”是指被一个以上卤素原子取代的烷基。[0142]本发明的由化学式1表示的二取代金刚烷基衍生物能够以药学上可接受的盐的形式使用，在本发明中，术语“药学上可接受的”包括符合医学标准的化合物或组合物，其在没有构成不合理风险的毒性、刺激和其他问题或并发症的情况下，当与如人类等生物对象的组织接触时不会出现问题。在本发明中，作为盐，使用由药学上可接受的游离酸(freeacid)形成的酸加成盐。酸加成盐由无机酸，例如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚硝酸或亚磷酸；无毒有机酸，例如脂肪族单羧酸盐和二羧酸盐、苯基取代的链烷酸盐、羟基链烷酸盐及链烷二酸盐、芳香酸、脂肪族及芳香族磺酸；有机酸，例如乙酸、苯甲酸、柠檬酸、乳酸、马来酸、葡萄糖酸、甲磺酸、4-甲苯磺酸、酒石酸、富马酸获得。这种药学上无毒的盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己烷-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐，对苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、β-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐或扁桃酸盐。[0143]本发明的酸加成盐可以通过常规方法制备，例如，可以通过将化合物溶解于过量的酸水溶液中并使用如甲醇、乙醇、丙酮或乙腈等水混溶性有机溶剂沉淀该盐来制备。并且，可以通过对等摩尔量的化合物及水中的酸或醇进行加热后将上述混合物蒸发干燥或者通过抽滤析出的盐来制备。[0144]并且，可以使用碱制备药学上可接受的金属盐。衍生自合适碱的盐可包括如钠和钾等碱金属、如镁等碱土金属、以及铵等，但并不限定于此。碱金属盐或碱土金属盐例如可以通过将化合物溶解于过量的碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物溶液中，将未溶解的化合物盐过滤，然后将滤液蒸发干燥来获得。此时，作为金属盐，制备钠盐、钾盐或钙盐在药学上是合适的，并且，相应的银盐可以通过将碱金属盐或碱土金属盐与适当的银盐(例如，硝酸银)反应来获得。[0145]进而，本发明不仅包括上述化学式1的二取代金刚烷基衍生物及其药学上可接受的盐，而且还包括可由此制备的溶剂化物、水合物、异构体等。[0146]更具体地，本发明的化合物可包含非对称或手性中心并以立体异构体形式存在。如非对映异构体、对映异构体、外消旋混合物等本发明的化合物的所有立体异构体形式都被视为构成本发明的一部分。其中，多种异构体的混合物称为对映异构体，而且，将对映异构体以50：50的比例混合而成的混合物称为外消旋体。[0147]在本发明中，“非对映异构体”是指具有两个以上手性中心的立体异构体，其分子不是彼此的镜像。非对映异构体例如在熔点、沸点、光谱特性及反应性方面具有不同的物理特性。非对映异构体的混合物可以通过电泳和色谱等高分辨率分析工序进行分离。[0148]在本发明中，“对映异构体”是指化合物的两个立体异构体，它们是彼此不可重叠的镜像。[0149]并且，本发明提供一种二取代金刚烷基衍生物的制备方法，其特征在于，根据下述反应式制备由化学式1表示的化合物：[0150][0151](其中，r1及r2如本文所定义。)[0152]更具体地，提供一种二取代金刚烷基衍生物的制备方法，其特征在于，根据下述反应式制备由化学式2表示的化合物：[0153][0154](a)alcl3、溴、dcm；(b)苯甲醚、alcl3；(c)bbr3、dcm；(d)苄基溴、khco3、dmf；(e)氯乙酸乙酯、k2co3、dmf；(f)lioh、thf/h2o；(g)3-氨基苯甲酸甲酯、pybop、dmap、dmf；(h)h2、pd/c、thf；(i)利用edc、hobt、dipea、dmf合成10a-d、10f-g、10j；利用氯甲酸乙酯、tea、thf合成10e、10h；[0155](其中，r1如本文所定义。)[0156]更具体地，提供一种二取代金刚烷基衍生物的制备方法，其特征在于，根据下述反应式制备由化学式3表示的化合物：[0157][0158](a)3，4-二甲氧基苄基溴、k2co3、dmf；(b)氯乙酸乙酯、k2co3、dmf；(c)lioh、thf/h2o；(d)相应的胺、edc、hobt、dipea、dmf[0159](其中，r2如本文所定义。)[0160]更具体地，提供一种二取代金刚烷基衍生物的制备方法，其特征在于，根据下述反应式制备由化学式4表示的化合物：[0161][0162](a)1-甲基哌嗪、edc、hobt、dipea、dmf；(b)pd/c、甲醇；(c)相应的胺、edc、hobt、dipea、dmf[0163](其中，r1如本文所定义。)[0164]更具体地，提供一种二取代金刚烷基衍生物的制备方法，其特征在于，根据下述反应式制备由化学式5表示的化合物：[0165][0166](a)6，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氢异喹啉、edc、hobt、dipea、dmf；(b)氯乙酸乙酯、k2co3、dmf；(c)lioh、thf/h2o；(d)相应的胺、edc、hobt、dipea、dmf[0167](其中，r2如本文所定义。)[0168]本发明的二取代金刚烷基衍生物的制备方法不限于上述方法。并且，即使在根据上述反应式制备的情况下，除了上述试剂之外，还可以通过选择性地改变不影响反应的试剂来进行反应。[0169]并且，本发明提供一种包含上述二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于抗癌的药物组合物。[0170]在本发明中，上述药物组合物可以为针对实体癌的用于抗癌的药物组合物，[0171]上述实体癌例如包括大肠癌、肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、结肠癌、骨癌、胰腺癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、食道癌、小肠癌、肛周癌、结肠癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、前列腺癌、纤维肉瘤、膀胱癌、肾癌、输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤等，但并不限定于此。[0172]在本发明中，“用于抗癌”是指“预防或治疗癌症”，意味着抑制、延缓生物受试者(例如，人类或动物)中癌症的发作并进一步抑制或阻止癌症的进展、降低进展速度、改善或减轻症状等。[0173]并且，本发明提供一种包括向需要抗癌治疗的患者给予治疗有效量的由上述化学式1表示的二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐的步骤的癌症治疗方法。并且，提供一种由上述化学式1表示的二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的制剂中的用途。而且，提供一种由上述化学式1表示的二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐在治疗癌症中的用途。[0174]在本发明中，“有效量”是指用于治疗或预防特定疾病或病症，缓解、减弱或消除特定疾病或病症的症状，或者预防或延迟本文所述的特定疾病或病症的一种或多种症状的发作的本发明的化合物的量。在本发明中，药物的治疗有效量是指抑制肿瘤生长；抑制癌细胞的hif-1的激活及生长；抑制线粒体呼吸；缓解或治疗由癌症引起的并发症的症状；延迟和抑制(优选为改善)癌症的进展速度；预防癌症恶化等。有效量水平可能取决于患者的疾病类型、严重程度、药物活性、对药物的敏感性、给药时间、给药途径和排泄率、治疗持续时间、包括同时使用的药物在内的因素以及医学领域众所周知的其他因素。[0175]在本发明中，上述“患者”不受限制，优选为包括人类在内的哺乳动物。[0176]本发明的组合物中的上述化学式1的二取代金刚烷基衍生物或其药学上可接受的盐的含量可以根据疾病的症状、症状的进展程度、患者的状况等进行适当调整，例如，以总组合物重量为基准，可以为0.0001重量％至99.9重量％，或0.001重量％至50重量％，但并不限定于此。上述含量比是基于除去溶剂后的干燥量的值。[0177]本发明的药物组合物还可以包含通常用于制备药物组合物的合适的载体、赋形剂及稀释剂。上述赋形剂可以是例如选自由稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、吸附剂、保湿剂、薄膜包衣物质以及控释添加剂组成的组中的一种以上。[0178]本发明的药物组合物可以分别按照常规方法配制成散剂、颗粒剂、缓释颗粒剂、肠溶颗粒剂、液体剂、滴眼剂、酏剂、乳剂、混悬剂、酒精剂、锭剂、芳香剂、柠檬水、片剂、缓释片、肠溶片、舌下含片、硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、肠溶胶囊、丸剂、酊剂、软提取物、干提取物、液体提取物、注射剂、胶囊剂、灌洗液、硬膏剂、洗剂、糊剂、喷雾剂、吸入剂、贴剂、无菌注射溶液或气雾剂等外用制剂等形式来使用，上述外用制剂可以具有霜剂、凝胶剂、贴剂、喷雾剂、软膏剂、硬膏剂、洗剂、搽剂、糊剂或巴布剂等剂型。[0179]可包含在本发明的药物组合物中的载体、赋形剂及稀释剂可以为乳糖、右旋糖、蔗糖、寡糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、钙硅酸盐、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁及矿物油。[0180]配制时使用常用的稀释剂或赋形剂，如填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等。[0181]作为本发明的片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、锭剂的添加剂，可以使用赋形剂，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、小麦淀粉、乳糖、白糖、葡萄糖、果糖、d-甘露醇、沉淀碳酸钙、合成硅酸铝、磷酸一氢钙、硫酸钙、氯化钠、碳酸氢钠、纯化羊毛脂、微晶纤维素、糊精、海藻酸钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、高岭土、尿素、胶体硅胶、羟丙基淀粉、羟丙基甲基纤维素、1928、2208、2906、2910、丙二醇、酪蛋白、乳酸钙、羧甲基淀粉钠等；粘合剂，例如明胶、阿拉伯胶、乙醇、琼脂粉、邻苯二甲酸醋酸纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、葡萄糖、纯净水、酪蛋白酸钠、甘油、硬脂酸、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素钠、甲基纤维素、微晶纤维素、糊精、羟基纤维素、羟丙基淀粉、羟甲基纤维素、精制虫胶、淀粉糊、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如羟丙基甲基纤维素、玉米淀粉、琼脂粉、甲基纤维素、膨润土、羟丙基淀粉、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、羧甲基纤维素钙、柠檬酸钙、十二烷基硫酸钠、无水硅酸、1-羟丙基纤维素、葡聚糖、离子交换树脂、聚醋酸乙烯酯、甲醛处理的酪蛋白及明胶、海藻酸、直链淀粉、瓜尔豆胶(guargum)、碳酸氢钠、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸钙、凝胶淀粉、阿拉伯胶、支链淀粉、果胶、聚磷酸钠、乙基纤维素、白糖、硅酸铝镁、d-山梨醇溶液、轻质无水硅酸等；润滑剂，例如硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸、氢化植物油(hydrogenatedvegetableoil)、滑石粉、石松子、高岭土、凡士林、硬脂酸钠、可可油、水杨酸钠、水杨酸镁、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、液体石蜡、氢化大豆油(lubriwax)、硬脂酸铝、硬脂酸锌、十二烷基硫酸钠、氧化镁、聚乙二醇(macrogol)、合成硅酸铝、无水硅酸、高级脂肪酸、高级醇、硅油、石蜡油、聚乙二醇脂肪酸乙醚、淀粉、氯化钠、乙酸钠、油酸钠、dl-亮氨酸、轻质无水硅酸等。[0182]作为本发明的液体剂的添加剂，可以使用水、稀盐酸、稀硫酸、柠檬酸钠、单硬脂酸蔗糖、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯(吐温酯)、聚氧乙烯单烷基醚、羊毛脂醚、羊毛脂酯、乙酸、盐酸、氨水、碳酸铵、氢氧化钾、氢氧化钠、醇溶谷蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠等。[0183]作为本发明的糖浆剂，可以使用白糖的溶液、其他糖类或甜味剂等，根据需要可以使用芳香剂、着色剂、保存剂、稳定剂、悬浮剂、乳化剂、增稠剂等。[0184]作为本发明的保存剂乳剂，可以使用纯净水，根据需要可以使用乳化剂、保存剂、稳定剂、芳香剂等。[0185]作为本发明的悬浮剂，可以使用金合欢、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、海藻酸钠、羟丙基甲基纤维素、1828、2906、2910等悬浮剂，根据需要可以使用表面活性剂、保存剂、稳定剂、着色剂、芳香剂。[0186]本发明的注射剂可包含：溶剂，例如注射用蒸馏水、0.9％氯化钠注射液、林格注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖+氯化钠注射液、peg、乳酸钠林格注射液、乙醇、丙二醇、不挥发油-芝麻油、棉籽油、花生油,大豆油、玉米油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、苯甲酸苯酯；助溶剂，例如苯甲酸钠、水杨酸钠、乙酸钠、尿素、氨基甲酸乙酯、单乙基乙酰胺、苯丁唑啉、丙二醇、吐温、烟酸酰胺、六胺、二甲基乙酰胺；缓冲剂，例如弱酸及其盐(乙酸和乙酸钠)、弱碱及其盐(氨和乙酸铵)、有机化合物、蛋白质、白蛋白、蛋白胨、胶类；等渗剂，例如氯化钠；稳定剂，例如亚硫酸氢钠(nahso3)二氧化碳气体、焦亚硫酸钠(na2s2o5)、亚硫酸钠(na2so3)、氮气(n2)、乙二胺四乙酸；硫酸化剂，例如硫化氢钠0.1％、甲醛次硫酸氢钠、硫脲、乙二胺四乙酸二钠、丙酮合亚硫酸氢钠；镇痛剂，例如苯甲醇、氯丁醇、盐酸普鲁卡因、葡萄糖、葡萄糖酸钙；悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、吐温80、单硬脂酸铝。[0187]作为本发明的栓剂，可以使用基质，例如可可脂、羊毛脂、半合成脂肪酸酯、聚乙二醇、甘油明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸和油酸的混合物、subanal、棉籽油、花生油、椰子油、可可脂+胆固醇、卵磷脂、lanette蜡、单硬脂酸甘油酯、吐温或氨纶、imhausen、单烯(丙二醇单硬脂酸酯)、甘油、医药级混合脂肪酸甘油酯(adepssolidus)、buytyrumtego-g、cebespharma16、hexalide碱95、cotomar、hydrokotesp、s-70-xxa、s-70-xx75(s-70-xx95)、hydrokote25、hydrokote711、idropostal、massaestrarium(a、as、b、c、d、e、i、t)、masa-mf、masupol、masupol-15、neosuppostal-n、paramount-b、supposiro(osi、osix、a、b、c、d、h、l)、栓剂基质iv型(ab、b、a、bc、bbg、e、bgf、c、d、299)、suppostal(n、es)、wecoby(w、r、s、m、fs)、tegester甘油三酯物质(tg-95、ma、57)[0188]用于口服给药的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，并且，此类固体制剂通过将上述提取物与至少一种如淀粉、碳酸钙(calciumcarbonate)、蔗糖(sucrose)或乳糖(lactose)、明胶等赋形剂混合而配制。此外，除了简单的赋形剂之外，还使用硬脂酸镁和滑石粉等润滑剂。[0189]用于口服给药的液体制剂为悬浮剂、内用液剂、乳剂、糖浆剂等，并且这些液体制剂除了如水和液体石蜡等简单的常用稀释剂之外，还可以包括各种类型的赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、芳香剂、保存剂等。用于肠胃外给药的制剂包括无菌水溶液、非水溶剂、悬浮剂、乳剂、冻干制剂、栓剂。作为非水溶剂和悬浮剂，可以使用丙二醇(propyleneglycol)、聚乙二醇、如橄榄油等植物油、如油酸乙酯等可注射酯等。[0190]本发明的药物组合物可以作为单独的治疗剂或与其他治疗剂组合给药，可以与现有的治疗剂依次或同时给药，并且可以单次或多次给药。例如，本发明的药物组合物可以单独使用或与使用手术、放射疗法、激素疗法、化学疗法及生物反应调节剂的方法组合使用。考虑到所有上述因素，重要的是按可以获得最大效果而没有任何副作用的最小量给药该组合物，并且这可以由本领域普通技术人员容易地确定。[0191]本发明的药物组合物可以经由各种途径给药至个体。可以预测所有给药方式，例如，可以通过口服给药、皮下注射、腹腔内给药、静脉内注射、肌肉注射、脊髓周围空间(鞘内)注射、舌下给药、口腔粘膜给药、直肠内插入、阴道内插入、眼内给药、耳内给药、鼻内给药、吸入、经由口或鼻喷雾、透皮给药、经皮给药等方式给药。[0192]本发明的药物组合物根据作为活性成分的药物的类型，以及如要治疗的疾病、给药途径、患者的年龄、性别、体重及疾病的严重程度等各种相关因素来确定。[0193]在本发明中，给药量可能会根据患者的状况、年龄、体重、性别及体重、疾病的严重程度、药物形式、给药途径和时间而有所不同，可以根据普通的技术人员适当地选择，例如，按0.01mg/kg/天～200mg/kg/天的量，根据医生或药剂师的判断，可以将预定的时间间隔一天分成数次，优选一天1次～3次，通过口服或肠胃外给药途径给药。[0194]以下，通过制备例、实施例及实验例详细说明本发明。[0195]但是，以下制备例、实施例及实验例仅具体例示本发明，本发明的内容并不限定于制备例、实施例及实验例。[0196]制备例[0197]制备例：具有hif-1α抑制活性的化合物的合成[0198]作为本发明的hif-1α抑制剂，用作药物组合物的有效成分的非限制性化合物的例包括以下化合物、其异构体及其药学上可接受的盐。通过适当改变公知方法的反应物和/或起始物质来合成本发明的以下化合物。[0199]以下，具体说明。[0200]为了开发新型hif-1α抑制剂，在lw6的金刚烷基位点进行化学修饰制备了多种二取代金刚烷基衍生物。合成新型化合物的方法在反应式s1-4中进行了描述。通过1-金刚烷羧酸1与溴在乙酸中的溴化反应合成产物2，将该中间体2与苯甲醚(anisole)进行friedel-crafts烷基化反应得到醚产物3，收率良好。使用三溴化硼(borontribromide；bbr3)对产物3进行去甲基化并使用溴化苄对产物4进行化学选择性保护，从而在碱性条件下得到产物5，进一步用氯乙酸乙酯进行烷基化生成产物6，收率良好。将产物6用氢氧化锂(lithiumhydroxide；lioh)水解得到羧酸产物7，然后与3-氨基苯甲酸甲酯偶联生成酰胺衍生物产物8，收率良好。在钯(palladium)碳存在下，通过催化加氢除去产物8的苄基来使用于合成目标金刚烷基衍生物10a-j的前体再生。羧酸化合物9可与醇及胺反应分别提供酯(10a-e)及酰胺衍生物(10f-j)。使用作为偶联剂的羟基苯并三唑(hydroxybenzotriazole；hobt)和edc.hcl合成产物10a-10d、10f、10g及10j，而其他偶联的产物10e、10h使用氯甲酸乙酯及三乙胺(triethylamine；tea)合成(反应式s1)。如反应式s2所示，产物4在碳酸钾(potassiumcarbonate；k2co3)存在下用3,4-二甲氧基苄基溴处理，得到酚酯产物11，进一步用氯乙酸乙酯烷基化得到产物12，收率良好。然后，通过产物12的碱介导水解得到羧酸13。最后，通过多种市售胺与edc.hcl及hobt介导的偶联制备相应的酰胺14a-14d(反应式s2)。同样，在edc.hcl及hobt存在下将羧酸中间体7与1-甲基哌嗪反应得到酰胺衍生物15。在钯碳存在下，通过15的催化加氢制备相应的羧酸产物16。通过与多种胺结合来分别制备酰胺衍生物(17a-17c)(反应式s3)。基于14a-14d的合成概况，如反应式s4所示，用酰胺取代产物11的羧酸的酯部分来得到21a-21c。产物4在酰胺偶联条件下得到中间体18，然后用氯乙酸乙酯烷基化生成产物19，收率良好。用lioh水解产物19提供产物20，然后将其与多种市售胺偶联得到二取代金刚烷基衍生物21a-21c(反应式s4)。[0201]反应式s1.二取代金刚烷基衍生物10a-10ja的合成[0202][0203]a试剂和条件：(a)alcl3、溴、dcm；(b)苯甲醚、alcl3；(c)bbr3、dcm；(d)苄基溴、khco3、dmf；(e)氯乙酸乙酯、k2co3、dmf；(f)lioh、thf/h2o；(g)3-氨基苯甲酸甲酯、pybop、dmap、dmf；(h)h2、pd/c、thf；(i)利用edc、hobt、dipea、dmf合成10a-10d，10f-10g，10j；利用氯甲酸乙酯、tea、thf合成10e、10h；[0204]反应式s2.二取代金刚烷基衍生物14a-14da的合成[0205][0206]a试剂和条件：(a)3,4-二甲氧基苄基溴、k2co3、dmf；(b)氯乙酸乙酯、k2co3、dmf；(c)lioh、thf/h2o；(d)相应的胺、edc、hobt、dipea、dmf。[0207]反应式s3.二取代金刚烷基衍生物17a-17ca的合成[0208][0209]a试剂和条件：(a)1-甲基哌嗪、edc、hobt、dipea、dmf；(b)pd/c、甲醇；(c)相应的胺、edc、hobt、dipea、dmf。[0210]反应式s4.二取代金刚烷基衍生物21a-21ca的合成[0211][0212]a试剂和条件：(a)6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉、edc、hobt、dipea、dmf；(b)氯乙酸乙酯、k2co3、dmf；(c)lioh、thf/h2o；(d)相应的胺、edc、hobt、dipea、dmf。实施例[0213]实施例1.化合物2至化合物9的合成[0214]上述反应式中所使用的化合物2至化合物9的合成工序如下所述。[0215]化合物2：3-溴金刚烷-1-羧酸(3-bromoadamantane-1-carboxylicacid)(2)：[0216]将alcl3(4.80g，36.10mmol)加入配备有回流冷凝器和氩气的二口圆底烧瓶(two-neckedroundflask)中。将该烧瓶在低温反应器中搅拌。在-5℃下加入溴(17.10ml，33.29mmol)并搅拌15分钟。然后，将1-金刚烷羧酸(5.00g，27.70mmol)加入烧瓶中，在-5℃下搅拌1小时并在室温下搅拌48小时。将反应液用三氯甲烷稀释。用焦亚硫酸钠(sodiumpyrosulphite)处理过量的溴直至完全变色。将有机层用无水硫酸镁(anhydrousmgso4)干燥，过滤并浓缩。将残留物用己烷重结晶，得到白色固体(2)(6.67g，收率：93％)。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ(s，1h)，2.36(s，2h)，2.26-2.13(m，6h)，1.79(d，j＝2.8hz，4h)，1.68-1.60(m，2h)。[0217]化合物3：3-(4-甲氧基苯基)-金刚烷-1-羧酸(3-(4-methoxyphenyl)-adamantane-1-carboxylicacid)(3)：[0218]将氯化铝(5.14g，38.58mmol)悬浮于52ml的苯甲醚中，在-10℃下加入化合物2(5.00g，19.29mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24小时后，滴加冰和浓hcl(conc.hcl)。将混合物用ea萃取并分离。将有机层用无水mgso4干燥并减压浓缩。将上述浓缩液用己烷重结晶，得到白色固体(3)(5.20g，收率：94％)。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ(s，1h)，7.27-7.24(m，2h)，6.88-6.84(m，2h)，3.71(s，3h)，2.13(s，2h)，1.90-1.77(m，10h)，1.66(s，2h)。[0219]化合物4：3-(4-羟基苯基)-金刚烷-1-羧酸(3-(4-hydroxyphenyl)-adamantane-1-carboxylicacid)(4)：[0220]在-10℃下，在氩气下向化合物3(2.00g，6.98mmol)的dcm溶液中加入稀释在dcm中的1.0m的bbr3(17.40ml，17.45mmol)溶液。将反应溶液在室温下搅拌直至起始物质消失(用tlc监测)。将有机层用无水mgso4干燥并浓缩，得到白色固体(4)(1.80g，收率：94％)。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ1h)，9.11(s，1h)，7.13(d，j＝9.2hz，2h)，6.69(d，j＝8.8hz，2h)，2.12(s，2h)，1.83-1.75(m，10h)，1.65(s，2h)。[0221]化合物5：3-(4-羟基苯基)-金刚烷-1-羧酸苄酯(3-(4-hydroxyphenyl)-adamantane-1-carboxylicacidbenzylester)(5)：[0222]将溴化苄(1.12g，6.61mol)加入20ml的dmf中的化合物4(1.50g，5.50mmol)和khco3(0.66g，6.61mol)的混合物中。将反应混合物在40℃下加热4小时后，滴加饱和nahco3。将混合物用ea萃取并分离。将有机层用无水mgso4干燥并减压浓缩。将上述浓缩液通过硅胶柱层析纯化，得到白色固体(5)(1.75g，收率：87％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)δ7.35δj＝j＝10h，1.69(s，2h)。[0223]化合物6：3-(4-乙氧基羰基甲氧基苯基)-金刚烷-1-羧酸苄酯(3-(4-ethoxycarbonylmethoxyphenyl)-adamantane-1-carboxylicacidbenzylester)(6)：[0224]将氯乙酸乙酯(0.67g，5.50mmol)加入10ml的dmf中的化合物5(1.0g，2.75mmol)和碳酸钾(1.14g，8.27mmol)的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，滴加nahco3。将混合物用ea萃取并用无水mgso4干燥。将混合物过滤并减压浓缩。将上述浓缩液通过硅胶柱层析纯化，得到白色固体(6)(1.05g，收率：85％)。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)7.39-7.31(m，5h)，7.26(d，j＝8.4hz，2h)，6.84(d，j＝8.8hz，2h)，5.00(s，2h)，4.72(s，2h)，4.16(q，j＝7.1hz，2h)，2.15(s，2h)，1.90-1.79(m，10h)，1.67(s，2h)，1.21(t，j＝7.0hz，3h)。[0225]化合物7：3-(4-羧基甲氧基苯基)-金刚烷-1-羧酸苄酯(3-(4-carboxymethoxyphenyl)-adamantane-1-carboxylicacidbenzylester)(7)：[0226]将化合物6(0.70g，1.56mmol)溶解于7ml的thf/h2o(1：1)中。加入氢氧化锂(0.26g，6.24mmol)并在室温下搅拌90分钟后，滴加10％的hcl。将混合物用ea萃取并分离。将有机层用无水mgso4干燥，减压浓缩得到上述浓缩液后，通过硅胶柱层析纯化，得到白色固体(7)(0.60g，收率：92％)。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)12.93(s，1h)，7.37-7.31(m，5h)，7.26(d，j＝8.4hz，2h)，6.84(d，j＝8.8hz，2h)，5.09(s，2h)，4.61(s，2h)，2.15(s，2h)，1.98-1.75(m，10h)，1.67(s，2h)。[0227]化合物8：3-{4-[(3-甲氧基羰基苯基氨基甲酰基)-甲氧基]-苯基}-金刚烷-1-羧酸苄酯(3-{4-[(3-methoxycarbonylphenylcarbamoyl)-methoxy]-phenyl}-adamantane-1-carboxylicacidbenzylester)(8)：[0228]将化合物7(0.73g，1.74mmol)、3-氨基苯甲酸甲酯(0.52g，3.47mmol)、pybop(1.80g，3.47mmol)及dmap(0.42g，3.47mmol)的混合物溶解于20ml的dmf的溶剂中。将反应溶液在室温下搅拌过夜后，滴加10％的hcl。将混合物用ea萃取并分离。将有机层用无水mgso4干燥并浓缩。将上述浓缩液通过硅胶柱层析纯化，得到白色结晶(8)(0.68g，72.00％)。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ(s，1h)，8.33(s，1h)，7.90(d，j＝8.1hz，1h)，7.68(d，j＝8.1hz，1h)，7.48(t，j＝8.1hz，1h)，7.40-7.33(m，5h)，7.30(d，j＝8.7hz，2h)，6.94(d，j＝8.7hz，2h)，5.09(s，2h)，4.69(s，2h)，3.86(s，3h)，2.16(br，2h)，1.92(s，2h)，1.86(s，4h)，1.81(br，4h)，1.68(br，2h)。[0229]化合物9：3-{4-[(3-甲氧基羰基苯基氨基甲酰基)-甲氧基]-苯基}-金刚烷-1-羧酸(3-{4-[(3-methoxycarbonylphenylcarbamoyl)-methoxy]-phenyl}-adamantane-1-carboxylicacid)(9)：[0230]将化合物8(0.62g，1.12mmol)溶解于30ml的thf中，加入10％的pd/c。在室温下，在h2下将反应混合物搅拌2小时，通过硅藻土垫过滤。将溶液减压浓缩，得到0.78g的白色固体(9)。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ1h)，10.31(s，1h)，8.33(s，1h)，7.90(d，j＝8.1hz，1h)，7.67(d，j＝8.1hz，1h)，7.48(t，j＝8.1hz，1h)，7.30(d，j＝8.7hz，2h)，6.94(d，j＝8.7hz，2h)，4.69(s，2h)，3.85(s，3h)，2.14(br，2h)，1.87(s，2h)，1.80(br，8h)，1.66(br，2h)。[0231]实施例2.化合物10-1至化合物10-10的合成[0232]根据上述的反应式s1，以化合物1为起始物质，并以化合物2、3、4、5、6、7、8及9为中间体，合成化合物10-1至化合物10-10。[0233]化合物10-1：3-(2-(4-(3-((甲氧基)羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl-3-(2-(4-(3-((methoxy)carbonyl)adamantane-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10a)：[0234]将化合物9(0.31g，0.66mmol)、甲醇(0.03ml，0.99mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-水合物(0.13g，0.99mmol)、hobt(0.13g，0.99mmol)及dipea(0.17ml，0.99mmol)在室温下溶解于二甲基甲酰胺中，然后搅拌过夜。搅拌完成后，加入水终止反应后，用ea萃取。将萃取的有机层用无水mgso4干燥后，减压浓缩。将浓缩的反应物通过硅胶柱层析(dcm/ea)纯化，得到白色固体10a(0.37g，78％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)8.41(s，1h)，8.07(s，1h)，8.01(d，j＝8.4hz，1h)，7.83(d，j＝8.0hz，1h)，7.44(t，j＝8.0hz，1h)，7.34(d，j＝8.8hz，2h)，6.96(d，j＝8.8hz，2h)，4.61(s，2h)，3.92(s，3h)，3.67(s，3h)，2.23(s，2h)，2.01(s，2h)，1.92-1.86(m，8h)，1.73(s，2h)。[0235]化合物10-2：3-(2-(4-(4-((4-甲氧基苄氧基)羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl-3-(2-(4-(4-((4-methoxybenzyloxy)carbonyl)adamantane-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10b)：[0236]将化合物9(0.31g，0.66mmol)、4-甲氧基苯甲醇(0.12ml，0.99mmol)、edc.hcl(0.19g，0.99mmol)、hobt(0.13g，0.99mmol)及dipea(0.17ml，0.99mmol)在室温下溶解于二甲基甲酰胺中，然后搅拌过夜。搅拌完成后，加入水终止反应后，用ea萃取。将萃取的有机层用无水mgso4干燥后，减压浓缩。将浓缩的反应物通过硅胶柱层析(dcm/ea)纯化，得到白色固体的目标化合物10b(0.21g，54％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)8.49(s，1h)，8.10(s，1h)，7.99(d，j＝7.6hz，1h)，7.81(d，j＝7.2hz，1h)，7.41(t，j＝7.8hz，1h)，7.31-7.25(m，4h)，6.90(dd，j＝8.8，23.2hz，4h)，5.22(s，2h)，4.58(s，2h)，3.89(s，3h)，3.78(s，3h)，2.21(s，2h)，2.03-1.85(m，10h)，1.71(s，2h)。[0237]化合物10-3：3-(2-(4-(4-((3,4-二甲氧基苄氧基)羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl-3-(2-(4-(4-((3,4-dimethoxybenzyloxy)carbonyl)adamantane-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10c)：[0238]将化合物9(0.31g，0.66mmol)、3,4-二甲氧基苯甲醇(0.14ml，0.99mmol)、edc.hcl(0.19g，0.99mmol)、hobt(0.13g，0.99mmol)及dipea(0.17ml，0.99mmol)在室温下溶解于二甲基甲酰胺中，然后搅拌过夜。搅拌完成后，加入水终止反应后，用ea萃取。将萃取的有机层用无水mgso4干燥后，减压浓缩。将浓缩的反应物通过硅胶柱层析(dcm/ea)纯化，得到白色固体的目标化合物10c(0.25g，63％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)8.38(s，1h)，8.07(s，1h)，8.01(d，j＝8.4hz，1h)，7.83(d，j＝8.0hz，1h)，7.45(t，j＝7.8hz，1h)，7.33(d，j＝8.8hz，2h)，6.96-6.83(m，5h)，5.06(s，2h)，4.61(s，2h)，3.93(s，3h)，3.88-3.87(m，6h)，2.23(s，2h)，2.03-1.73(m，10h)，1.57(s，2h)。[0239]化合物10-4：3-(2-(4-(2-((3,4-二甲氧基苯乙氧基)羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl3-(2-(4-(2-((3,4-dimethoxyphenethoxy)carbonyl)adamantane-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10d)：[0240]将化合物9(0.31g，0.66mmol)、2-(3,4-二甲氧基苯基)乙醇(0.18g，0.99mmol)、edc.hcl(0.19g，0.99mmol)、hobt(0.13g，0.99mmol)及dipea(0.17ml，0.99mmol)在室温下溶解于dmf中，然后搅拌过夜。搅拌完成后，加入水终止反应后，用ea萃取。将萃取的有机层用无水mgso4干燥后，减压浓缩。将浓缩的反应物通过硅胶柱层析(dcm/ea)纯化，得到白色固体的目标化合物10d(0.36g，58％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)8.44(s，1h)，8.09(s，1h)，8.01(d，j＝8.4hz，1h)，7.82(d，j＝8.0hz，1h)，7.43(t，j＝8.0hz，1h)，7.31(d，j＝8.8hz，1h)，6.95(d，j＝8.8hz，2h)，6.81-6.74(m，3h)，4.60(s，2h)，4.26(t，j＝6.8hz，2h)，3.91(s，3h)，3.85-3.83(m，6h)，2.88(t，j＝7.0hz，2h)，2.22(s，2h)，1.97-1.80(m，10h)，1.72(s，2h)。[0241]化合物10-5：3-(2-(4-(3-((呋喃-2-基甲氧基)羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl-3-(2-(4-(3-((furan-2-ylmethoxy)carbonyl)adamantane-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10e)：[0242]将化合物9(60.0mg，0.13mmol)溶解于四氢呋喃(thf)中，将其冷却至-10℃。然后，将2-(溴甲基)呋喃(0.02ml，0.17mmol)、氯甲酸乙酯(0.02ml，15mmol)及三乙胺(0.02ml，0.15mmol)加载于柱中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟后，倒入水以终止反应。将反应物用ea萃取，将萃取的有机层用mgso4干燥后，减压浓缩。将浓缩的反应物通过硅胶柱层析(dcm/甲醇)纯化，得到白色固体的目标化合物10e(49.0mg，70％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)8.51(s，1h)，8.10(s，1h)，7.99(d，j＝8.0hz，1h)，7.81(d，j＝7.6hz，1h)，7.43-7.39(m，2h)，7.30(d，j＝8.8hz，2h)，6.93(d，j＝8.4hz，2h)，6.36(dd，j＝2.2，11.4hz，2h)，5.05(s，2h)，4.59(s，2h)，3.90(s，3h)，2.21(s，2h)，1.99-1.84(m，10h)，1.70(s，2h)。[0243]化合物10-6：3-(2-(4-(3-甲基氨基甲酰基-金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl3-(2-(4-(3-methylcarbamoyl-adamantan-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10f)：[0244]将edc.hcl(80mg，0.42mmol)、hobt(56mg，0.42mmol)及dipea(0.15ml，0.87mmol)加入dmf(5.0ml)中的化合物9(160mg，0.35mmol)及甲胺盐酸盐(0.02g，0.35mmol)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，并用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(己烷：ea＝6:4)纯化，得到白色固体10f(110mg，收率：66.1％)。1h-nmr(cdcl3，400mhz)8.40(s，1h)，8.07(s，1h)，8.00(dd，j＝8.2，1.4hz，1h)，7.83(d，j＝7.8hz，1h)，7.44(t，j＝8.0hz，1h)，7.34(d，j＝8.4hz，2h)，6.95(d，j＝9.2hz，2h)，5.67(s，1h)，4.61(s，2h)，3.92(s，3h)，2.81(d，j＝4.4hz，3h)，2.26(s，2h)，1.97-1.87(m，10h)，1.73(s，2h)。[0245]化合物10-7：3-(2-(4-(3-苄基氨基甲酰基-金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl3-(2-(4-(3-benzylcarbamoyl-adamantan-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10g)：[0246]将edc.hcl(80mg，0.42mmol)、hobt(56mg，0.42mmol)及dipea(0.15ml，0.87mmol)加入dmf(5.0ml)中的化合物9(160mg，0.35mmol)及苄胺(37mg，0.35mmol)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，并用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(己烷：ea＝6：4)纯化，得到白色固体10g(110mg，收率：56.9％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)8.38(s，1h)，8.07(s，1h)，8.01(d，j＝8.4hz，1h)，7.83(d，j＝8.0hz，1h)，7.45(t，j＝8.0hz，1h)，7.33(t，j＝7.6hz，4h)，7.29-7.26(m，5h)，5.89(s，1h)，4.61(s，2h)，4。45(d，j＝5.2hz，2h)，3.92(s，3h)，2.27(s，2h)，2.04-1.90(m，10h)，1.74(s，2h)。[0247]化合物10-8：3-(2-(4-(3-(呋喃-2-基甲基氨基甲酰基)-金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl3-(2-(4-(3-(furan-2-ylmethylcarbamoyl)-adamantan-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10h)：[0248]将三乙胺(0.022ml，0.155mmol)加入1ml的thf中的化合物9(60mg，0.129mmol)的溶液中，将混合物冷却至-10℃。然后，加入氯甲酸乙酯(0.016ml，0.168mmol)并在-10℃搅拌30分钟。之后，将糠胺(0.015ml，0.155mmol)加入溶液中并升温至室温。将反应溶液在室温下进一步搅拌30分钟，将溶剂减压蒸发。将残留物通过制备型tlc纯化，得到黄色固体10h(49mg，收率：70％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)δ(s，1h)，8.07(s，1h)，8.01(dd，j＝1.2-8.4hz，1h)，7.83(d，j＝8.0hz，1h)，7.45(t，j＝8.0hz，1h)，7.34(d，j＝8.8hz，3h)，6.96(d，j＝9.2hz，2h)，6.32(t，j＝2.4hz，1h)，6.21(d，j＝3.2hz，1h)，4.61(s，2h)，4.44(d，j＝5.2hz，2h)，3.92(s，3h)，2.26(s，2h)，1.98(s，2h)，1.90-1.88(m，8h)，1.73(s，2h)，1.55(s，2h)。[0249]化合物10-9：3-(2-(4-(3-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl3-(2-(4-(3-(pyridin-2-ylcarbamoyl)-adamantan-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10i)：[0250]将dmf(0.5ml)加入化合物9(50mg，0.11mmol)、2-氨基吡啶(20mg，0.21mmol)、pybop(110mg、0.21mmol)及dmap(26mg，0.216mmol)的混合物中。然后，将反应溶液在室温下搅拌过夜后，滴加10％的hcl。将混合物用ea萃取，将合并的有机层用无水mgso4干燥。将滤液减压浓缩，将残留物通过制备型tlc(正己烷：ea＝1:1)纯化，得到黄色固体10i(30mg，收率：52％)。1h-nmr(300mhz，dmso-d6)δ1h)，9.78(s，1h)，8.33(d，j＝2.1hz，1h)，8.31(s，1h)，8.06(d，j＝8.7hz，1h)，7.90(d，j＝7.8hz，1h)，7.56(t，j＝7.5hz，1h)，7.67(d，j＝7.2hz，1h)，7.48(t，j＝8.1hz，1h)，7.36(d，j＝9hz，2h)，7.09(t，j＝7.5hz，1h)，6.96(d，j＝9hz，2h)，4.69(s，2h)，3.85(s，3h)，2.18(br，2h)，2.04(s，2h)，1.94(s，3h)，1.89-1.69(m，7h)。[0251]化合物10-10：3-(2-(4-(3-(6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-羰基)-金刚烷-1-基)苯氧基)乙酰氨基)苯甲酸甲酯(methyl3-(2-(4-(3-(6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-2-carbonyl)-adamantan-1-yl)phenoxy)acetamido)benzoate)(10j)：[0252]将edc.hcl(80mg，0.42mmol)、hobt(56mg，0.42mmol)及dipea(0.15ml，0.87mmol)加入dmf(5.0ml)中的化合物20(100mg，0.35mmol)及3-氨基苯甲酸甲酯(53mg，0.35mmol)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，并用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(己烷：ea＝6:4)纯化，得到白色固体10j(107mg，收率：48％)。1h-nmr(cdcl3，400mhz)8.39(s，1h)，8.07(s，1h)，8.02(d，j＝8.0hz，1h)，7.83(d，j＝7.6hz，1h)，7.45(t，j＝7.8hz，1h)，7.36(d，j＝8.8hz，1h)，6.97(d，j＝8.4hz，2h)，6.60(d，j＝5.2hz，2h)，4.71(s，2h)，4.61(s，2h)，3.92(s，5h)，3.85(s，6h)，2.81(s，2h)，2.28(s，2h)，2.15-2.07(m，6h)，1.91(s，4h)，1.77(s，4h)。[0253]实施例3.化合物14-1至化合物14-4的合成[0254]根据上述的反应式s2，以化合物4为起始物质，并以化合物11、12及13为中间体，合成化合物14-1至化合物14-4。[0255]化合物14-1：化合物3,4-二甲氧基苄基-2-(4-(2-氧代-2-(3-(三氟甲基)苯基氨基)乙氧基)苯基)金刚烷-1-基羧酸酯(3,4-dimethoxybenzyl-2-(4-(2-oxo-2-(3-(trifluoromethyl)phenylamino)ethoxy)phenyl)adamantane-1-ylcarboxylate)(14a)：[0256]将edc.hcl(42mg，0.22mmol)、hobt(29mg，0.22mmol)及dipea(0.080ml，0.47mmol)加入dmf(5.0ml)中的化合物13(90mg，0.19mmol)及3-(三氟甲基)苯胺(33mg，0.20mmol)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，并用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(己烷：ea＝6:4)纯化，得到白色固体14a(64mg，收率：54％)。1h-nmr(cdcl3，400mhz)8.39(s，1h)，7.87(s，1h)，7.82(d，j＝8.4hz，1h)，7.48(t，j＝7.8hz，1h)，7.41(d，j＝8.0hz，1h)，7.33(d，j＝8.8hz，2h)，6.95(d，j＝9.2hz，2h)，6.91(dd，j＝8.4，2.0hz，1h)，6.85(s，1h)，6.84(d，j＝10.8hz，1h)，5.05(s，2h)，4.61(s，2h)，3.88(s，3h)，3.87(s，3.87)，2.23(s，2h)2.02-1.86(m，10h)，1.72(s，2h)。[0257]化合物14-2：3,4-二甲氧基苄基-2-(4-(2-氧代-2-(喹啉-8-基氨基)乙氧基)苯基)金刚烷-1-基羧酸酯(3,4-dimethoxybenzyl-2-(4-(2-oxo-2-(quinolin-8-ylamino)ethoxy)phenyl)adamantane-1-ylcarboxylate)(14b)：[0258]将edc.hcl(42mg，0.22mmol)、hobt(29mg，0.22mmol)及dipea(0.080ml，0.47mmol)加入dmf(5.0ml)中的化合物13(90mg，0.19mmol)及喹啉-8-胺(29mg，0.20mmol)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(己烷：ea＝6:4)纯化，得到白色固体14b(79mg，收率：61％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)10.97(s，1h)，8.86(dd，j＝1.4-4.2hz，1h)，7.56(d，j＝1.6hz，1h)，7.55(s，1h)，7.47(q，j＝4.1hz，1h)，7.33(d，j＝8.4hz，2h)，7.08(d，j＝8.4hz，2h)，6.91(d，j＝10.0hz，1h)，6.84(d，j＝8.0hz，2h)，5.05(s，2h)，4.73(s，2h)，3.88(s，6h)，2.23(s，2h)，2.04-1.87(m，10h)，1.72(s，2h)；13c-nmr(100mhz，cdcl3)177.1，167.0，155.5，148.9，148.8，143.9，143.9，138.8，136.2，133.8，128.9，128.0，127.2，126.2，122.2，121.7，120.7，116.8，114.9，111.3，111.0，68.4，66.0，55.9，55.8，44.3，42.2，41.9，38.1，36.0，35.6，28.7。[0259]化合物14-3：3,4-二甲氧基苄基-2-(4-(2-(呋喃-2-基甲基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)金刚烷-1-基羧酸酯(3,4-dimethoxybenzyl-2-(4-(2-(furan-2-ylmethylamino)-2-oxoethoxy)phenyl)adamantane-1-ylcarboxylate)(14c)：[0260]将edc.hcl(42mg，0.22mmol)、hobt(29mg，0.22mmol)及dipea(0.080ml，0.47mmol)加入dmf(5.0ml)中的化合物13(90mg，0.19mmol)及呋喃-2-基甲胺(20mg，0.20mmol)中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(己烷：ea＝6:4)纯化，得到白色固体14c(57mg，收率：54％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)7.35(s，1h)，7.29(d，j＝1.6hz，2h)，6.91-6.82(m，5h)，6.32(q，j＝1.6hz，1h)，6.22(d，j＝3.2hz，1h)，5.05(s，2h)，4.53(d，j＝6.0hz，2h)，4.49(s，2h)，3.87(d，j＝2.4hz，6h)，2.22(s，2h)，2.00(s，2h)，1.97-1.88(m，4h)，1.85(d，j＝1.6hz，2h)，1.71(s，2h)。[0261]化合物14-4：3,4-二甲氧基苄基-2-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)苯基)金刚烷-1-基羧酸酯(3,4-dimethoxybenzyl-2-(4-(2-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-oxoethoxy)phenyl)adamantane-1-ylcarboxylate)(14d)：[0262]将edc.hcl(42mg，0.22mmol)、hobt(29mg，0.22mmol)及dipea(0.080ml，0.47mmol)加入dmf(5.0ml)中的化合物13(90mg，0.19mmol)及1-甲基哌嗪(20mg，0.20mmol)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(己烷：ea＝6:4)纯化，得到白色固体14d(50mg，收率：47％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)7.26(d，j＝8.8hz，2h)，6.89-6.83(m，5h)，5.05(s，2h)，4.65(s，2h)，3.87(s，6h)，3.61(d，j＝23.2hz，4h)，2.39(s，4h)，2.29(s，3h)，2.21(s，2h)，2.01-1.85(m，10h)，1.71(s，2h)。[0263]实施例4.化合物17-1至化合物17-3的合成[0264]根据上述的反应式s3，以化合物7为起始物质，并以化合物15及16为中间体，合成化合物17-1至化合物17-3。[0265]化合物17-1：n-(呋喃-2-基甲基)-5-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)苯基)金刚烷-1-基-甲酰胺(n-(furan-2-ylmethyl)-5-(4-(2-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-oxoethoxy)phenyl)adamantan-1-yl-carboxamide)(17a)：[0266]将edc.hcl(50mg，0.26mmol)、hobt(35mg，0.26mmol)及dipea(0.90ml，0.52mmol)加入dmf(3.0ml)中的化合物16(90mg，0.21mmol)及呋喃-2-基甲胺(25mg，0.26mmol)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(dcm：meoh＝1:9)纯化，得到白色固体17a(0.30mg，收率：29％)。1h-nmr(cdcl3，400mhz)7.33(s，1h)，7.29(s，1h)，7.25(s，1h)，6.87(d，j＝3.7hz，2h)，6.31-6.29(m，1h)，6.19(d，j＝3.6hz，1h)，5.96(s，1h)，4.64(s，2h)，4.42(d，j＝5.2hz，2h)，3.63(t，j＝4.8hz，2h)，3.57(t，j＝5.0hz，2h)，2.38-2.36(m，4h)，2.28(s，3h)，2.23(s，2h)，1.95(s，2h)，1.88-1.85(m，8h)，1.71(s，2h)。[0267]化合物17-2：1-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(4-(5-(4-(4-(三氟甲基)苄基)哌嗪-1-羰基)金刚烷-1-基-)苯氧基)乙酮(1-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-(4-(5-(4-(4-(trifluoromethyl)benzyl)piperazine-1-carbonyl)adamantan-1-yl-)phenoxy)ethanone)(17b)：[0268]将edc.hcl(50mg，0.26mmol)、hobt(35mg，0.26mmol)及dipea(0.90ml，0.52mmol)加入dmf(3.0ml)中的化合物16(90mg，0.21mmol)及1-(4-(三氟甲基)苄基)哌嗪(49mg，0.35mmol)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(dcm：meoh＝1:9)纯化，得到白色固体17b(25mg，收率：19％)。1h-nmr(cdcl3，400mhz)7.57(d，j＝8.0hz，2h)，7.45(d，j＝8.4hz，2h)，7.26(d，j＝8.8hz，2h)，4.67(s，2h)，3.70-3.54(m，10h)，2.43-2.37(m，j＝3.3hz，8h)，2.29(s，3h)，2.23(s，2h)，2.06-2.00(m，6h)，1.85(s，4h)，1.71(s，2h)。[0269]化合物17-3：2-(4-(5-(4-(4-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(2-(4-(5-(4-(4-methoxybenzyl)piperazine-1-carbonyl)adamantan-1-yl)phenoxy)-1-(4-methylpiperazin-1-yl)ethanone)(17c)：[0270]将edc.hcl(50mg，0.26mmol)、hobt(35mg，0.26mmol)及dipea(0.90ml，0.52mmol)加入dmf(3.0ml)中的化合物16(90mg，0.21mmol)及1-(4-甲氧基苄基)哌嗪(53mg，0.26mmol)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(dcm：meoh＝1:9)纯化，得到白色固体17c(37mg，收率：30％)。1h-nmr(cdcl3，400mhz)7.26(d，j＝8.0hz，2h)，7.23(d，j＝8.8hz，2h)，6.90(d，j＝8.4hz，2h)，6.86(d，j＝8.8hz，2h)，4.66(s，2h)，3.80(s，3h)，3.70-3.66(m，6h)，3.61(t，j＝4.8hz，2h)，3.46(s，2h)，2.42(s，8h)，2.31(s，3h)，2.23(s，2h)，2.06-1.99(m，6h)，1.85(s，4h)，1.71(s，2h)。[0271]实施例5.化合物19及20的合成[0272]上述反应式中所使用的化合物19及化合物20的合成工序如下所述。[0273]化合物19：{4-[3-(6,7-二甲氧基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-羰基)-金刚烷-1-基]-苯氧基}-乙酸乙酯({4-[3-(6,7-dimethoxy-3,4-dihydro-1h-isoquinoline-2-carbonyl)-adamantan-1-yl]-phenoxy}-aceticacidethylester)(19)：[0274]将化合物15(2.26g，6.30mmol)溶解于乙腈中，在室温下加入三乙胺(2.25g，0.02mol)及50％的ppaa(4.81g，7.57mmol)。将混合物搅拌30分钟，并加入6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐(1.74g，7.57mmol)。然后，将反应溶液在室温下搅拌过夜，减压蒸发。将反应混合物通过硅胶柱层析纯化，得到白色固体的化合物19(2.21g，收率：66％)。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ(d，j＝8.7hz，2h)，6.84(d，j＝9hz，2h)，6.83(s，1h)，6.70(s，1h)，4.73(s，2h)，4.64(s，2h)，4.16(q，j＝6.3hz，2h)，3.81(q，j＝5.7hz，2h)，3.71(s，3h)，3.70(s，3h))，2.69(q，j＝5.1hz，2h)，2.17(br，2h)，1.95-1.86(m，7h)，1.78～1.67(m，5h)，1.21(t，j＝7.5hz，3h)。[0275]化合物20：{4-[3-(6,7-二甲氧基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-羰基)-金刚烷-1-基]-苯氧基}-乙酸({4-[3-(6,7-dimethoxy-3,4-dihydro-1h-isoquinoline-2-carbonyl)-adamantan-1-yl]-phenoxy}-aceticacid)(20)：[0276]向thf和h2o的溶液中溶解化合物19(2.21g，4.14mmol)，在室温下加入氢氧化锂(0.26g，6.21mmol)并搅拌1小时后，滴加10％的hcl。将滤液减压蒸发，将固体用正己烷洗涤，得到白色固体的产物20(2.07g)。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)7.29(d，j＝8.7hz，2h)，6.83(d，j＝8.1hz，2h)，6.81(s，1h)，6.70(s，1h)，4.64(s，2h)，4.62(s，2h)，3.81(q，j＝5.1hz，2h)，3.71(s，3h)，3.70(s，3h)，2.69(q，j＝5.7hz，2h))，2.17(br，2h)，1.99-1.88(m，8h)，1.78-1.66(m，4h)。[0277]实施例6.化合物21-1至化合物21-3的合成[0278]根据上述的反应式s1，以化合物7为起始物质，并以化合物15及16为中间体，合成化合物21-1至化合物21-3。[0279]化合物21-1：2-(4-(3-(6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)-1-吗啉代乙酮(2-(4-(3-(6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-2-carbonyl)adamantan-1-yl)phenoxy)-1-morpholinoethanone)(21a)：[0280]将edc.hcl(191mg，0.35mmol)、hobt(135mg，0.35mmol)及dipea(0.129ml，0.60mmol)加入dmf(5.0ml)中的化合物20(150mg，0.29mmol)及吗啉(313mg，0.35mmol)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(dcm：meoh＝1:9)纯化，得到白色固体21a(81mg，收率：48％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)δ(d，j＝2.4hz，2h)，7.28(d，j＝3.2hz，2h)，6.60(d，j＝6.4hz，2h)，4.71(s，2h)，4.67(s，2h)，3.92-3.88(m，2h)，3.85(s，4h)，3.67-3.60(m，9h)，2.80(t，j＝6.4hz，2h)，2.26(s，2h)，2.13-2.02(m，6h)，1.89-1.86(m，4h)，1.75(s，2h)。[0281]化合物21-2：2-(4-(3-(6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(2-(4-(3-(6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-2-carbonyl)adamantan-1-yl)phenoxy)-1-(4-methylpiperazin-1-yl)ethanone)(21b)：[0282]将edc.hcl(191mg，0.35mmol)、hobt(135mg，0.35mmol)及dipea(0.129ml，0.60mmol)加入dmf(5.0ml)中的化合物20(150mg，0.29mmol)及1-甲基哌嗪(100mg，0.35mmol)中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(dcm：meoh＝1:9)纯化，得到白色固体21b(80mg，收率：45％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)δ(d，j＝6.8hz，2h)，6.90(d，j＝8.8hz，2h)，6.60(d，j＝6.2hz，2h)，4.71(s，2h)，4.66(s，2h)，3.89(s，2h)，3.85(s，6h)，3.62(d，j＝22.4hz，4h)，2.80(s，2h)，2.40(s，4h)，2.29(s，3h)，2.26(s，2h)，2.13-2.02(m，6h)，1.89(s，4h)，1.75(s，2h)。[0283]化合物21-3：2-(4-(3-(6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-羰基)金刚烷-1-基)苯氧基)-1-(4-(4-(三氟甲基)苄基)哌嗪-1-基)乙酮(2-(4-(3-(6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-2-carbonyl)adamantan-1-yl)phenoxy)-1-(4-(4-(trifluoromethyl)benzyl)piperazin-1-yl)ethanone)(21c)(lw1564)：[0284]将edc.hcl(191mg，0.35mmol)、hobt(135mg，0.35mmol)及dipea(0.129ml，0.60mmol)加入dmf(5.0ml)中的化合物20(150mg，0.29mmol)及1-(4-(三氟甲基)苄基)哌嗪(71mg，0.29mmol)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将得到的混合物用etoac稀释，用水和盐水(brine)洗涤。分离有机层，用无水mgso4干燥，过滤并真空浓缩。将生成的残留物通过硅胶柱层析(dcm：meoh＝1:9)纯化，得到白色固体lw1564(21c)(0.123mg，收率：57％)。1h-nmr(400mhz，cdcl3)δ(d，j＝8.0hz，2h)，7.44(d，j＝8.0hz，2h)，7.29(d，j＝8.8hz，2h)，6.89(d，j＝8.4hz，2h)，6.60(d，j＝6.0hz，2h)，4.71(s，2h)，4.66(s，2h)，3.90(t，j＝5.8hz，2h)，3.85(d，j＝2.0hz，6h)，3.64(s，2h)，3.59(t，j＝4.8hz，2h)，3.55(s，2h)，2.80(t，j＝5.4hz，2h)，2.44(s，4h))，2.26(s，2h)，2.13-2.05(m，6h)，1.89(d，j＝2.4hz，4h)，1.76(s，2h)。[0285]实验例[0286]通过hre-荧光素酶分析筛选hif-1抑制剂。[0287]在测定荧光素酶活性之间，在缺氧条件下，使用上述实施例中制备的二取代金刚烷基衍生物处理稳定表达hre-依赖性荧光素酶报告基因的hct116细胞12小时。[0288]通过hre-荧光素酶分析在使用二取代金刚烷基衍生物处理hct116细胞中研究荧光素酶活性。使用荧光素酶分析系统(普洛麦格公司(promega)，麦迪逊市(madison)，威斯康星州(wi)，美国(usa))并根据制造商的说明以之前所描述的方法(naik,r.etal.synthesisandstructure-activityrelationshipof(e)phenoxyacrylicamidederivativesashypoxia-induciblefactor(hif)1αinhibitors.j.med.chem.55,10564-1057(2012))进行hre-荧光素酶报告基因分析。使用victorx发光阅读器(victorxlightluminescencereader)(珀金埃尔默公司(perkinelmer)，波士顿市(boston)，马塞诸塞州(ma)，美国)测定荧光素酶活性。[0289]其结果，二取代金刚烷基衍生物所呈现的活性如下表1所示。[0290]表1[0291][0292]lw1564(化合物21-3)抑制癌细胞的hif-1的激活及增殖。[0293]在新合成的金刚烷基化合物中，评估了化合物21c(lw1564(化合物21-3)，图1a)如何影响多种癌细胞的增殖抑制。人乳腺癌细胞(mcf7)、人宫颈癌细胞(hela)、人结肠直肠癌细胞(hct116、hct15、lovo、sw480、sw620及widr)、人纤维肉瘤细胞(ht1080)、人胃癌细胞(nci-n87、nugc3及snu484)、人肝癌细胞(hepg2、ht17、huh7、shj1及sk-hep1)、人肺癌细胞(a549及h1299)、人胰腺癌细胞(aspc1及mia-paca2)及正常肺成纤维细胞(ccd-34lu及wi-38)购自美国典型菌种保藏中心(americantypeculturecollection，美国弗吉尼亚州马纳萨斯市)或kribb细胞系库(大田)。为了培养细胞，在补充有5％(v/v)的胎牛血清(welgene公司，大邱(daegu)，韩国(korea))、100u/ml的青霉素及100μg/ml的链霉素(吉布科公司(gibco))的dmem培养基(吉布科公司，美国纽约州格兰德岛)中培养细胞。将细胞在5％co2的加湿培养箱中保持37℃，并将缺氧及多气体培养箱(三洋(sanyo)，大阪(osaka)，日本(japan))调整为1％o2，94％n2及5％co2。通过如“chou,t.c.theoreticalbasis,experimentaldesign,andcomputerizedsimulationofsynergismandantagonismindrugcombinationstudies.pharmacol.rev.58,621-681(2006)”所记载的亚甲蓝比色法(methylenebluecolorimetricassay)确定细胞存活率。使用lw1564(化合物21-3)处理后，使用4％的甲醛(sigma-aldrich)固定细胞，并用pbs洗涤3次。使用亚甲蓝(sigma-aldrich)进行染色后用水洗涤。使用0.1％的hcl(v/v)洗脱染料，并在moleculardevicesemax(moleculardevices，加利福尼亚州(ca)，美国)上在600nm处进行定量。发现lw1564(化合物21-3)抑制多种癌细胞的增殖(gi50＝0.4-4.6μm)，并确认到并不影响ccd-34lu及wi-38(gi50＞20μm)的生长(图1b)。然后，使用活细胞成像系统incucytezoom(essenbioscience公司，安娜堡市(annarbor)，密歇根州(mi)，美国)研究lw1564(化合物21-3)对细胞增殖的效果。lw1564(化合物21-3)以剂量依赖性方式抑制hepg2及a549细胞的增殖抑制(图1c)。[0294]lw1564(化合物21-3)在癌细胞中抑制hif-1α积累。[0295]当hif-1α的氧依赖性降解(oxygen-dependentdegradation；odd)结构域的脯氨酸残基在氧存在下被脯氨酰羟化酶(prolylhydroxylase；phd)羟基化时，结合与诱导蛋白水解的vcb-cul2e3连接酶相关的希佩尔-林道综合征(vonhippel-lindausyndrome，vhl)促进hif-1α降解。在缺氧条件下，脯氨酸不会发生羟基化，因此hif-1α蛋白的量增加。首先，通过hre-荧光素酶分析在使用lw1564(化合物21-3)处理的hepg2细胞中研究hif-1α活性。使用荧光素酶分析系统(普洛麦格公司，麦迪逊市，威斯康星州，美国)并根据制造商的说明以之前所描述的方法(naik,r.etal.synthesisandstructure-activityrelationshipof(e)phenoxyacrylicamidederivativesashypoxia-induciblefactor(hif)1αinhibitors.j.med.chem.55,10564-1057(2012))进行hre-荧光素酶报告基因分析。使用victorx发光阅读器(victorxlightluminescencereader)(珀金埃尔默公司，波士顿市，马塞诸塞州，美国)测定荧光素酶活性。lw1564(化合物21-3)抑制hepg2细胞中的hif-1α活性，ic50为1.2μm(图2a)。并且，发现lw1564(化合物21-3)在缺氧条件下以浓度依赖性方式抑制hif-1α积累(图2b)。显然，lw1564(化合物21-3)在氯化钴存在下不影响hif-1α蛋白的量，因此，通过蛋白印迹实验确认了lw1564通过抑制脯氨酰羟化酶的活性增加hif-1α的积累(图2b)。[0296]并且，通过qpcr方法研究使用lw1564处理的细胞中的hif-1αmrna的量。使用trizol试剂(英杰公司(invitrogen))分离整个rna，并使用topscripttmdrymix(enzynomics公司，首尔(seoul)，韩国)合成cdna。hif1a引物序列为fwd5'-ctgaccctgcactcaatcaag-3'及rev5'-tgggactattaggctcaggtg-3。观察到hif-1αmrna的量没有变化，从而确认到lw1564(化合物21-3)在蛋白酶体降解过程而非转录过程中抑制缺氧症介导的hif-1α积累(图2c)。然后，研究了lw1564(化合物21-3)是否对其他癌细胞系中的hif-1降解具有类似的影响。lw1564(化合物21-3)显著降低了包括a549、widr、mia-caca2及hct116在内的多种癌细胞系中在缺氧状态下增加的hif-1α蛋白积累(图2d)。[0297]接着，测定hif-1靶基因glut1、pdk1及vegf的mrna水平。对于glut1，引物序列为fwd5'-tttggctacaacactggagtc-3'(序列1)及rev5'-catgcccccaacagaaaagat-3'(序列2)；对于pdk1，引物序列为fwd5'-caggacagccaatacaagtgg-3'(序列3)及rev5'-cattacccagcgtgacatgaa-3'(序列4)；对于vegfa，引物序列为fwd5'-ccttgctgctctacctccac-3'(序列5)及rev5'-atgattctgccctcctcctt-3'(序列6)；对于rpl13a，引物序列为fwd5'-cataggaagctgggagcaag-3'(序列7)及rev5'-gccctccaatcagtcttctg-3'(序列8)。lw1564(化合物21-3)降低了hepg2细胞中在缺氧状态下增加的glut1、pdk1及vegf的mrna的量(图2e)。综上所述，lw1564(化合物21-3)通过被刺激的蛋白酶体降解抑制hif-1α积累，从而降低靶基因的mrna表达。[0298]lw1564(化合物21-3)通过抑制线粒体呼吸降低耗氧量。[0299]抑制线粒体呼吸的化合物通过增加细胞的氧含量来促进hif-1α的降解。因此，通过测定耗氧率(oxygenconsumptionrate；ocr)来研究lw1564(化合物21-3)是否影响线粒体呼吸。使用oxythermclark型电极系统(汉莎科技(hansatech)，诺福克(norfolk)，英国(uk))测定耗氧量(chou,t.c.theoreticalbasis,experimentaldesign,andcomputerizedsimulationofsynergismandantagonismindrugcombinationstudies.pharmacol.rev.58,621-681(2006).)。将hepg2细胞(2×107)与2μm的lw1564(化合物21-3)一起培养6小时后回收，然后，使用控温式循环系统(thermoregulatedcontrolledcirculatingsystem)在37℃下对ocr进行测定5分钟。为了流行病学研究，在包含2ml的呼吸缓冲剂(0.25m的蔗糖(sucrose)、2mm的kh2po4、5mm的mgcl2、1mm的edta、1mm的adp、20mm的mops，ph7.4)的检测装置上读取洋地黄皂苷透化(digitonin-permeabilised)hepg2细胞(2×107)。然后，添加了为etc中的成分提供电子的如下底物：5mm的丙酮酸钠、5mm的苹果酸钠、5mm的琥珀酸钠、5mm的l-抗坏血酸及0.2mm的n,n,n',n'-四甲基对苯二胺(tmpd)。添加复合物i、iii及iv抑制剂(分别为鱼藤酮、抗霉素a及kcn)至终浓度为1μm。[0300]lw1564(化合物21-3)在抑制hif-1积累的浓度下显著抑制ocr(图3a)，这表明抑制线粒体呼吸。然后，通过比较在lw1564(化合物21-3)存在下由糖酵解和线粒体呼吸生成的atp的量来评估线粒体呼吸对由氧化磷酸化引起的atp生成的效果。通过如“chou,t.c.theoreticalbasis,experimentaldesign,andcomputerizedsimulationofsynergismandantagonismindrugcombinationstudies.pharmacol.rev.58,621-681(2006).”所记载的方法确定atp含量。接种hepg2细胞并将其与lw1564(化合物21-3)一起培养6小时后，根据制造商的说明使用atp分析试剂盒(普洛麦格公司，麦迪逊市，威斯康星州，美国)测定atp含量。在常氧(normoxic)条件下，hepg2细胞通过线粒体呼吸获得atp的47％，通过糖酵解获得53％。正如预期的那样，在使用lw1564(化合物21-3)处理的细胞中，线粒体衍生的atp生成显著降低(16％)，而糖酵解衍生的atp生成增加(图3b)。响应于氧化磷酸化抑制的这种降解的补偿性上调是由高amp/atp比率诱导的ampk激活发生的。calceinam)测定细胞存活率。通过结果确认，lw1564(化合物21-3)以浓度依赖性方式降低脂质积累(图5b)。综上所述，lw1564(化合物21-3)通过调节ampk/mtor信号通路及脂质合成来促进hepg2细胞中的抗癌效果。[0306]lw1564(化合物21-3)抑制葡萄糖依赖性癌症代谢。[0307]糖酵解功能在许多癌细胞中被激活。因此，研究了，lw1564(化合物21-3)是否根据葡萄糖浓度影响癌细胞增殖。lw1564(化合物21-3)在具有低葡萄糖浓度的培养基(3mm)中的细胞中显示出比在具有高葡萄糖浓度的培养基(25mm)中更强的细胞增殖抑制功效(图5c)。然后，为了研究lw1564(化合物21-3)与2-脱氧-d-葡萄糖(2-deoxy-d-glucose，2dg)对hepg2细胞增殖的组合效果，进行了组合指数(combinationindex；ci)及等效线图(isobologram)分析，2-脱氧-d-葡萄糖既是葡萄糖类似物也是竞争性糖酵解抑制剂。组合指数(combinationindex；ci)值通过表示细胞增殖抑制浓度的gi50分析定量表示两种药物之间的相互关系，协同作用、添加剂和拮抗效果定义为ci＜1、ci＝1及ci＞1。分析结果表明，lw1564(化合物21-3)及2-dg在抑制hepg2细胞增殖方面具有协同作用(0.4≤ci≤0.92)(图5d)。因此，表明lw1564(化合物21-3)和糖酵解抑制剂的联合治疗在肝癌中比单独的lw1564(化合物21-3)可发挥更好的抗癌功效。[0308]lw1564(化合物21-3)抑制hepg2异种移植小鼠模型中的肿瘤生长[0309]本发明人发现lw1564(化合物21-3)抑制hepg2细胞的生长但不影响正常细胞的生长(图1)，研究了lw1564(化合物21-3)对hepg2异种移植小鼠模型中的肿瘤增殖的功效。所有动物实验均按照韩国生命工学研究院(韩国大田)的机构动物护理和使用委员会的指导方针批准和进行。将hepg2细胞(1×107)皮下接种到没有特定病原体的雌性裸鼠(6周龄)的右侧。当肿瘤体积达到100-150mm3时，将小鼠随机分配到对照组(vehicle)和lw1564(化合物21-3)处理组(n＝6)。将lw1564(化合物21-3)(10mg/kg)每天腹腔内给药2周。使用千分尺(microcalliper)测量肿瘤大小，并使用标准体积(长×宽2×0.5)计算肿瘤体积。通过学生t检验(student'st-test)确定两组之间的显著差异。[0310]与对照组相比，lw1564(化合物21-3)在腹腔内注射(10mg/kg)lw1564(化合物21-3)的小鼠中肿瘤大小减少了67％(图6中的左侧图)并且，经确认，从给药lw1564(化合物21-3)的小鼠中取出的肿瘤的重量(图6中的中间图)和大小(图6中的右侧图)减少。这些结果表明，lw1564(化合物21-3)可以开发为用于肝癌患者的强效治疗剂。[0311]表2[0312]g克ma毫克mmol毫摩尔ml毫升h小时min分钟z全部(一起)e相对(相反)fig.图片conc.浓度dil.稀释sat.饱和aq.水溶液℃摄氏温度％百分比r.t/r.t室温expt.实验temp.温度o邻位m间位p对位psi磅每平方英寸cat.催化剂atm.在......气氛下etal等等(以及其他)tlc薄层色谱法calcd.计算[0313]表3[0314][0315]产业上的可利用性[0316]本发明的二取代金刚烷基衍生物有望可以有效用作强效的癌症治疗剂，该治疗剂依赖于用于在线粒体中生成atp的氧化磷酸化。当前第1页12当前第1页12