用于治疗骨髓纤维化和骨髓增生异常综合征的抗TIM-3抗体MBG453和抗TGF-β抗体NIS793与或不与地西他滨或抗PD-1抗体斯巴达珠单抗的组合的制作方法

用于治疗骨髓纤维化和骨髓增生异常综合征的抗tim-3抗体mbg453和抗tgf-β
抗体nis793与或不与地西他滨或抗pd-1抗体斯巴达珠单抗的组合
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2019年12月20日提交的美国临时申请第62/951,632号、2020年2月18日提交的美国临时申请第62/978,267号、2020年7月22日提交的美国临时申请第63/055,230号、2020年10月11日提交的美国临时申请第63/090,259号、2020年10月11日提交的美国临时申请第63/090,264号和2020年11月23日提交的美国临时申请第63/117,206号的权益。上述申请的内容通过引用整体并入本文。
3.序列表
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5.背景
6.骨髓纤维化(mf)是一种费城染色体阴性骨髓增生性肿瘤(mpn)，其特征在于存在巨核细胞增殖和非典型性，通常伴有网状蛋白和/或胶原蛋白纤维化(tefferi和vardiman(2008)leukemia 22(1):14-22)、脾肿大(由于髓外造血)、贫血(由于骨髓衰竭和脾隔离)和衰弱性体质症状(由于炎性细胞因子的过表达)，所述体质症状包括疲劳、体重减轻、瘙痒、盗汗、发烧和骨、肌肉或腹部(mesa等人(2007)cancer 109(1)：68-76；abdel wahab和levine(2009)annu rev med.60:233-45；naymagon等人(2017)hemasphere 1(1)：第1页)。
7.mf被国立卫生研究院(nih)定义为“罕见疾病”，患病率为每100000人0.3至1.5例，诊断时的中位年龄为65岁(mehta等人(2014)leuk lymphoma 55(3):595-600；rollison等人(2008)blood 112(1):45-52)。
8.mf可以作为原发性血液恶性肿瘤、原发性骨髓纤维化(pmf)重新发展或由预先存在的骨髓增生性肿瘤的进展引起，即：真性红细胞增多症(pv)，pv后的mf(ppv-mf)和原发性血小板增多症(et)，et后的mf(pet-mf))(mesa等人(2007)leuk res.31(6)737-40；naymagon等人(2017)hemasphere 1(1):p e1)。
9.mf的唯一潜在治愈性治疗是同种异体造血干细胞移植(asct)，但绝大多数患者对其不合格。因此，治疗选择仍然主要是姑息性的，并且旨在控制疾病症状、并发症和改善患者的生活质量(qol)。随着60％的pmf或pet-mf患者和95％的ppv-mf患者中存在的janus激酶jak2基因的v617f突变的发现，mf的治疗前景已经改变，触发了对mf的分子靶向疗法的开发(cervantes(2014)blood 124(17):2635-2642)。jak在细胞因子和生长因子与其受体结合后的信号转导中起重要作用。jaks的异常活化与恶性细胞增殖和存活增加有关(valentino和pierre(2006)biochempharmacol.71(6):713-721)。jak激活许多涉及恶性细胞增殖和存活的下游信号传导途径，包括转录因子的信号转导和转录激活因子(stat)家族的成员。开发了jak抑制剂以靶向jak2，从而抑制jak信号传导。
10.jak抑制剂之后的当前治疗选择在其功效、耐久性和耐受性方面受到限制。目前正
在进行多种努力以改善jak抑制剂后mf患者的结果，鉴定新的药剂或组合，例如靶向细胞代谢和凋亡途径、细胞周期和免疫疗法的那些。需要改善mf的治疗。
11.骨髓增生异常综合征(mds)对应于与骨髓功能受损、无效造血、升高的骨髓母细胞和持续性外周血血细胞减少相关的血液恶性肿瘤的异质组。贫血是mds最常见的症状之一，因此，大多数mds患者经历至少一次红细胞输注。mds还可以进展为急性髓性白血病(amf)(heaney和golde(1999)n.engl,j.med.340(21):1649-60)。尽管进展为amf可导致mds患者死亡，但mds相关的死亡也可由在不存在白血病转化的情况下的血细胞减少和骨髓衰竭引起。mds的预后通常使用修订的国际预后评分系统(ipss-r)确定，其考虑骨髓母细胞的百分比、血细胞减少的数量和骨髓细胞遗传学。将未经治疗的mds的患者分为五个ipss-r预后风险类别：极低、低、中等、高和极高(greenberg等人(2012)blood 108(11):2623)。极低、低和中等风险mds构成较低风险mds。高风险和极高风险mds被称为高风险mds。
12.有极低和低风险mds的患者用支持性护理治疗以控制由血细胞减少引起的症状。低风险mds可进展为骨髓衰竭。在中等、高或极高风险mds中，预后差且预期寿命短。目前的护理标准是使用低甲基化剂、化学疗法和/或造血干细胞移植(hsct)。hsct是唯一的治疗选择。然而，只有少数mds患者是hsct和强化化疗的候选者(steensma(2018)blood cancer j 8(5):47；platzbecker(2019)blood 133(10):1096-1107；itzykson等人(2018)hemasphere 2(6):150)。仅在少数单独用阿扎胞苷治疗的患者中报告了完全缓解，并且这种药物的临床益处通常是短暂的。当治疗失败时，额外的治疗选择是有限的。尽管单一药剂的低甲基化剂可用于治疗mds患者，但仍需要替代的治疗策略。
13.概述
14.本文至少部分地公开了包含t细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3(tim-3)的抑制剂的组合。在一些实施方案中，组合包含以高亲和力和特异性结合tim-3的抗体分子(例如，人源化抗体分子)。在一些实施方案中，所述组合还包含tgf-β抑制剂。在一些实施方案中，所述组合还包含低甲基化剂和/或pd-1抑制剂或il-1β抑制剂。还提供了与本文所述的组合相关的药物组合物和剂量制剂。本文所述的组合可用于治疗或预防病症，诸如骨髓纤维化(例如，原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))或骨髓增生异常综合征(mds)(例如，较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))。因此，本文公开了使用所述组合治疗各种病症的方法，包括剂量方案。
15.因此，在一个方面，本公开的特征在于一种治疗受试者的骨髓纤维化或骨髓增生异常综合征(mds)的方法，其包括向受试者施用tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂的组合。
16.在一些实施方案中，tim-3抑制剂包括抗-tim-3抗体分子。在一些实施方案中，tim-3抑制剂包括mbg453、tsr-022、ly3321367、sym023、bgb-a425、incagn-2390、mbs-986258、ro-7121661、bc-3402、shr-1702或ly-3415244。在一些实施方案中，tim-3抑制剂包括mbg453。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约400mg至约1200mg的剂量每两周一次、每三周一次、每四周一次、每六周一次或每八周一次施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约700mg至约900mg的剂量施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约800mg的剂量施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约300mg至约500mg的剂量施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约400mg的剂量施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂每八周施用一次。在一些实施
方案中，tim-3抑制剂每四周施用一次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约700mg至约900mg(例如，约800mg)的剂量每八周一次施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约700mg至约900mg(例如，约800mg)的剂量每四周施用一次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每八周一次施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每四周施用一次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约500mg至约700mg的剂量施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约600mg的剂量施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂每三周施用一次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂每六周施用一次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂每四周施用一次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约500mg至约700mg(例如约600mg)的剂量每三周一次施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂每四周施用一次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂以约500mg至约700mg(例如约600mg)的剂量每六周一次施用。在一些实施方案中，静脉内施用tim-3抑制剂。在一些实施方案中，历经约20分钟至约40分钟的时间静脉内施用tim-3抑制剂。在一些实施方案中，历经约30分钟的时间静脉内施用tim-3抑制剂。
17.在一些实施方案中，tgf-β抑制剂是抗tgf-β抗体分子。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂包括nis793、夫苏木单抗、pf-06952229或avid200。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂包含nis793。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以约1200mg至约2200mg的剂量施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以约600mg至约2200mg的剂量施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以约1400mg至约2100mg的剂量施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以约600mg至约800mg的剂量施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以约700mg的剂量施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂每三周施用一次。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以约600mg至约2200mg(例如，约1200mg至约2200mg、约1400mg至约2100mg、或约600mg至约800mg(例如，约700mg))的剂量每三周一次施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以约1300mg至约1500mg的剂量施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以约1400mg的剂量施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂每两周施用一次。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂每三周施用一次。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂每六周施用一次。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以约1300mg至约1500mg(例如，约1400mg)的剂量每两周一次、每三周一次或每六周一次施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以约2000mg至约2200mg的剂量施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以约2100mg的剂量施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂每三周施用一次。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以约2000mg至约2200mg(例如约2100mg)的剂量每三周一次施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂以固定剂量(flat dose)施用。在一些实施方案中，根据剂量递增方案施用tgf-β抑制剂。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂在约20至约40分钟的时间内施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂在约30分钟的时间内施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂与tim-3抑制剂在同一天施用。在一些实施方案中，在开始施用tim-3抑制剂之后施用tgf-β抑制剂。
18.在一些实施方案中，所述组合还包含pd-1抑制剂。在一些实施方案中，pd-1抑制剂包括斯巴达珠单抗、纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、medi0680、regn2810、tsr-042、pf-06801591、bgb-a317、bgb-108、incshr1210或amp-224。在一些实施方案中，pd-1抑制剂包括斯巴达珠单抗。在一些实施方案中，pd-1抑制剂以每三周或四周约200mg至约400mg的剂量施用。在一些实施方案中，pd-1抑制剂以约300mg至约500mg的剂量施用。在一些实施方案
中，pd-1抑制剂以约400mg的剂量施用。在一些实施方案中，pd-1抑制剂每四周施用一次。在一些实施方案中，pd-1抑制剂以约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量每四周施用一次。在一些实施方案中，pd-1抑制剂以约200mg至约400mg的剂量施用。在一些实施方案中，pd-1抑制剂以约300mg的剂量施用。在一些实施方案中，pd-1抑制剂每三周施用一次。在一些实施方案中，pd-1抑制剂以约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量每三周一次施用。在一些实施方案中，静脉内施用pd-1抑制剂。在一些实施方案中，pd-1抑制剂经约20至约40分钟的时间期限施用。在一些实施方案中，pd-1抑制剂经约30分钟的时间期限施用。
19.在一些实施方案中，所述组合还包含白介素-1β(il-1β)抑制剂。在一些实施方案中，il-1β抑制剂是卡那单抗或吉沃单抗。在一些实施方案中，il-1β抑制剂是卡那单抗。在一些实施方案中，il-1β抑制剂以约300mg至约500mg的剂量施用。在一些实施方案中，以约200mg的剂量施用il-1β抑制剂。在一些实施方案中，以约250mg的剂量施用il-1β抑制剂。在一些实施方案中，il-1β抑制剂每三周一次、每四周一次或每八周一次施用。在一些实施方案中，il-1β抑制剂每三周施用一次。在一些实施方案中，il-1β抑制剂每四周施用一次。在一些实施方案中，il-1β抑制剂每八周施用一次。在一些实施方案中，il-1β抑制剂以约300mg至约500mg(例如，约200mg或约250mg)的剂量每三周一次、每四周一次或每八周一次施用。在一些实施方案中，静脉内施用il-1β抑制剂。在一些实施方案中，皮下施用il-1β抑制剂。
20.在一些实施方案中，所述组合还包含低甲基化药物。在一些实施方案中，低甲基化药物包括地西他滨、阿扎胞苷、cc-486或astx727。在一些实施方案中，低甲基化药物包括地西他滨或阿扎胞苷。在一些实施方案中，低甲基化药物包括地西他滨。在一些实施方案中，以约2mg/m2至约25mg/m2的剂量施用低甲基化药物。在某些情况下在一些实施方案中，低甲基化药物以约2.5mg/m2、约5mg/m2、约10mg/m2或约20mg/m2的剂量施用。在一些实施方案中，低甲基化药物以约5mg/m2的起始剂量施用并逐步升高至20mg/m2。在一些实施方案中，所述低甲基化药物每天施用一次。在一些实施方案中，以约2mg/m2至约25mg/m2(例如，约2.5mg/m2、约5mg/m2、约10mg/m2或约20mg/m2)的剂量每天一次施用低甲基化药物。在一些实施方案中，施用低甲基化药物连续2-7天，例如连续3或5天。在一些实施方案中，施用低甲基化药物连续5天。在一些实施方案中，根据3天方案每6周施用低甲基化药物。在一些实施方案中，根据5天方案每6周施用低甲基化药物。在一些实施方案中，根据3天方案每4周施用低甲基化药物。在一些实施方案中，在28天周期的第1、2、3、4和5天施用低甲基化药物。在一些实施方案中，在约0.5小时至约1.5小时的时间期限内施用低甲基化药物。在一些实施方案中，在约1小时的时间期限内施用低甲基化药物。在一些实施方案中，以约2mg/m2至约20mg/m2的剂量施用低甲基化药物。在一些实施方案中，低甲基化药物以约2.5mg/m2、约5mg/m2、约7.5mg/m2、约15mg/m2或约20mg/m2的剂量施用。在一些实施方案中，所述低甲基化药物每八小时施用一次。在一些实施方案中，低甲基化药物以约2mg/m2至约20mg/m2(例如，约2.5mg/m2、约5mg/m2、约7.5mg/m2、约15mg/m2或约20mg/m2)的剂量每八小时施用一次。在一些实施方案中，施用低甲基化药物连续3天。在一些实施方案中，施用低甲基化药物连续5天。在一些实施方案中，在约2小时至约4小时的时间期限内施用低甲基化药物。在一些实施方案中，在约3小时的时间期限内施用低甲基化药物。在一些实施方案中，皮下或静脉内施用低甲基化药物。
21.在一些实施方案中，所述组合还包含cd47抑制剂、cd70抑制剂、nedd8抑制剂、cdk9抑制剂、flt3抑制剂、kit抑制剂或p53激活剂，或其任何组合，例如cd47抑制剂、cd70抑制剂、nedd8抑制剂、cdk9抑制剂、flt3抑制剂、kit抑制剂或p53激活剂，全部如本文所述。
22.在一些实施方案中，骨髓纤维化是原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)或真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf)。在一些实施方案中，骨髓纤维化是原发性骨髓纤维化(pmf)。
23.在一些实施方案中，骨髓增生异常综合征(mds)是较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中间mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds)。在一些实施方案中，mds是较低风险的mds。
24.另一方面，本公开的特征在于一种治疗受试者的骨髓纤维化的方法，其包括向受试者施用tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂的组合。
25.另一方面，本公开的特征在于一种治疗受试者的骨髓纤维化的方法，其包括向受试者施用tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂和低甲基化药物的组合。
26.另一方面，本公开的特征在于一种治疗受试者的骨髓纤维化的方法，其包括向受试者施用tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂和pd-1抑制剂以及任选的低甲基化药物的组合。
27.另一方面，本公开的特征在于一种治疗受试者的骨髓纤维化的方法，其包括向受试者施用tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂和il-1β抑制剂以及任选的低甲基化药物的组合。
28.另一方面，本公开的特征在于包含mbg453和nis793的组合，其用于治疗受试者的骨髓纤维化，任选地其中所述组合还包含地西他滨，并且任选地其中所述组合还包含pdr001，并且任选地其中mgb453以500mg至700mg(例如600mg)的剂量每三周一次施用，nis793以2000mg至2200mg(例如2100mg)的剂量每三周一次施用，pdr001以200mg至400mg(例如300mg)的剂量每三周一次施用，和/或地西他滨在42天周期的第1、2和3天以约5mg/m2至约20mg/m2的剂量施用。
29.另一方面，本公开的特征在于一种治疗受试者的骨髓纤维化的方法，其包括向受试者施用mbg453和nis793的组合，任选地其中所述组合还包含地西他滨，并且任选地其中所述组合还包含pdr001，并且任选地其中mgb453以500mg至700mg(例如600mg)的剂量每三周一次施用，nis793以2000mg至2200mg(例如2100mg)的剂量每三周一次施用，pdr001以200mg至400mg(例如300mg)的剂量每三周一次施用，和/或地西他滨在42天周期的第1、2和3天以约5mg/m2至约20mg/m2的剂量施用。
30.另一方面，本公开的特征在于一种治疗受试者的骨髓纤维化的方法，其包括向受试者施用mbg453和nis793的组合，任选地其中所述组合还包含地西他滨，并且任选地其中所述组合还包含卡那单抗，并且任选地其中mgb453以500mg至700mg(例如，600mg)的剂量每三周一次施用，nis793以2000mg至2200mg(例如，2100mg)的剂量每三周一次施用，并且卡那单抗以150mg至250mg(例如，200mg)的剂量每三周一次施用，并且地西他滨在42天周期的第1、2和3天以约5mg/m2至约20mg/m2的剂量施用。
31.另一方面，本公开的特征在于包含mbg453和nis793的组合，其用于治疗受试者的骨髓纤维化，任选地其中所述组合还包含地西他滨，并且任选地其中所述组合还包含卡那单抗，并且任选地其中mgb453以500mg至700mg(例如600mg)的剂量每三周一次施用，nis793以2000mg至2200mg(例如2100mg)的剂量每三周一次施用，并且卡那单抗以150mg至250mg
(例如200mg)的剂量每三周一次施用，并且地西他滨在42天周期的第1、2和3天以约5mg/m2至约20mg/m2的剂量施用。
32.另一方面，本公开的特征在于一种治疗受试者的骨髓纤维化的方法，其包括向受试者施用mbg453和nis793的组合，任选地其中所述组合还包含地西他滨，并且任选地其中所述组合还包含卡那单抗，并且任选地其中mgb453以700mg至900mg(例如800mg)的剂量每四周施用一次，nis793以1300mg至1500mg(例如1400mg)的剂量每两周一次施用，并且卡那单抗以200mg至300mg(例如250mg)的剂量每四周施用一次，并且地西他滨在42天周期的第1、2和3天以约5mg/m2至约20mg/m2的剂量施用。
33.另一方面，本公开的特征在于包含mbg453和nis793的组合，其用于治疗受试者的骨髓纤维化，任选地其中所述组合还包含地西他滨，并且任选地其中所述组合还包含卡那单抗，并且任选地其中mgb453以700mg至900mg(例如800mg)的剂量每四周施用一次，nis793以1300mg至1500mg(例如1400mg)的剂量每两周一次施用，并且卡那单抗以200mg至300mg(例如250mg)的剂量每四周施用一次，并且地西他滨在42天周期的第1、2和3天以约5mg/m2至约20mg/m2的剂量施用。
34.在另一方面，本公开的特征在于降低癌细胞(例如血液癌细胞)的活性(例如，生长、存活或活力或全部)的方法。该方法包括使细胞与本文所述的组合接触。该方法可以在受试者中进行，例如作为治疗方案的一部分。血液癌细胞可以是，例如，来自本文所述的血液癌细胞的细胞，例如骨髓增生性肿瘤(mpn)，例如骨髓纤维化(例如，原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))或骨髓增生异常综合征(mds)(例如，较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))。
35.在本文公开的方法的某些实施方案中，该方法还包括确定受试者中肿瘤浸润淋巴细胞(tils)中tim-3表达的水平。在其他实施方案中，在从受试者获取的样品(例如，液体活检)中测定tim-3表达的水平(例如，使用免疫组织化学)。在某些实施方案中，响应于受试者中可检测水平或升高水平的tim-3，施用所述组合。检测步骤也可用于例如监测本文所述的治疗剂的有效性。例如，检测步骤可用于监测组合的有效性。
36.在另一个方面，本公开的特征在于组合物(例如，一种或多种组合物或剂型)，其包括tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂，任选地还包含低甲基化药物，并且任选地还包含pd-1抑制剂或il-1β抑制剂，如本文所述。本文还描述了包含tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂，任选地还包含低甲基化药物，并且任选地还包含pd-1抑制剂或il-1β抑制剂的制剂(例如剂量制剂)和试剂盒(例如治疗试剂盒)。在某些实施方案中，所述组合物或制剂用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))。
37.在另一个方面，本公开的特征在于组合物(例如，一种或多种组合物或剂型)，其包括tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂。本文还描述了包含tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂的制剂(例如剂量制剂)和试剂盒(例如治疗试剂盒)。在某些实施方案中，所述组合物或制剂用于治疗骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))。
38.在另一个方面，本公开的特征在于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如
较低风险mds)的方法，包含向该受试者施用tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂的组合。
39.在另一个方面，本公开的特征在于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)的方法，包含向该受试者施用tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂和il-1β抑制剂的组合。
40.在另一个方面，本公开的特征在于包含mbg453和nis793的组合，用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)，任选地，其中以700mg-900mg(例如800mg)的剂量施用mgb453，每4周1次，并且以2000mg-2200mg(例如2100mg)的剂量施用nis793，每3周1次。
41.在另一个方面，本公开的特征在于包含mbg453和nis793的组合，其用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)，任选地，其中以500mg-700mg(例如600mg)的剂量施用mgb453，每3周1次，并且以2000mg-2200mg(例如2100mg)的剂量施用nis793，每3周1次。
42.在另一个方面，本公开的特征在于包含mbg453、nis793和卡那单抗的组合，其用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)，任选地，其中以500mg-700mg(例如600mg)的剂量施用mgb453，每3周1次，以2000mg-2200mg(例如2100mg)的剂量施用nis793，每3周1次，并且以200mg-300mg(例如250mg)的剂量施用卡那单抗，每4周1次。
43.在另一个方面，本公开的特征在于包含mbg453、nis793和卡那单抗的组合，其用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)，任选地，其中以700mg-900mg(例如800mg)的剂量施用mgb453，每4周1次，以2000mg-2200mg(例如2100mg)的剂量施用nis793，每3周1次，并且以200mg-300mg(例如250mg)的剂量施用卡那单抗，每4周1次。
44.在另一个方面，本公开的特征在于包含mbg453、nis793和卡那单抗的组合，其用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)，任选地，其中以700mg-900mg(例如800mg)的剂量施用mgb453，每4周1次，以1300mg-1500mg(例如1400mg)的剂量施用nis793，每3周1次，并且以200mg-300mg(例如250mg)的剂量施用卡那单抗，每4周1次。
45.在另一个方面，本公开的特征在于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)的方法，包含向该受试者施用mbg453和nis793的组合，任选地，其中以500mg-700mg(例如600mg)的剂量施用mgb453，每3周1次，并且以2000mg-2200mg(例如2100mg)的剂量施用nis793，每3周1次。
46.在另一个方面，本公开的特征在于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)的方法，包含向该受试者施用mbg453、nis793和卡那单抗的组合，任选地，其中以500mg-700mg(例如600mg)的剂量施用mgb453，每3周1次，以2000mg-2200mg(例如2100mg)的剂量施用nis793，每3周1次，并且以200mg-300mg(例如250mg)的剂量施用卡那单抗，每4周1次。
47.在另一个方面，本公开的特征在于包含mbg453和nis793的组合，其用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)，任选地，其中以700mg-900mg(例如800mg)的剂量施用mgb453，每4周1次，并且以2000mg-2200mg(例如2100mg)的剂量施用nis793，每3周1次。
48.在另一个方面，本公开的特征在于包含mbg453、nis793和卡那单抗的组合，其用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)，任选地，其中以700mg-900mg
(例如800mg)的剂量施用mgb453，每4周1次，以2000mg-2200mg(例如2100mg)的剂量施用nis793，每3周1次，并且以200mg-300mg(例如250mg)的剂量施用卡那单抗，每4周1次。
49.在另一个方面，本公开的特征在于包含mbg453、nis793和卡那单抗的组合，其用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)，任选地，其中以700mg-900mg(例如800mg)的剂量施用mgb453，每4周1次，以1300mg-1500mg(例如1400mg)的剂量施用nis793，每3周1次，并且以200mg-300mg(例如250mg)的剂量施用卡那单抗，每4周1次。
50.在另一个方面，本公开的特征在于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)的方法，包含向该受试者施用mbg453和nis793的组合，任选地，其中以700mg-900mg(例如800mg)的剂量施用mgb453，每4周1次，并且以2000mg-2200mg(例如2100mg)的剂量施用nis793，每3周1次。
51.在另一个方面，本公开的特征在于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)的方法，包含向该受试者施用mbg453和nis793的组合，任选地，其中以500mg-700mg(例如600mg)的剂量施用mgb453，每3周1次，并且以2000mg-2200mg(例如2100mg)的剂量施用nis793，每3周1次。
52.在另一个方面，本公开的特征在于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)的方法，包含向该受试者施用mbg453、nis793和卡那单抗的组合，任选地，其中以500mg-700mg(例如600mg)的剂量施用mgb453，每3周1次，以2000mg-2200mg(例如2100mg)的剂量施用nis793，每3周1次，并且以200mg-300mg(例如250mg)的剂量施用卡那单抗，每4周1次。
53.在另一个方面，本公开的特征在于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)的方法，包含向该受试者施用mbg453、nis793和卡那单抗的组合，任选地，其中以700mg-900mg(例如800mg)的剂量施用mgb453，每4周1次，以2000mg-2200mg(例如2100mg)的剂量施用nis793，每3周1次，并且以200mg-300mg(例如250mg)的剂量施用卡那单抗，每4周1次。
54.在另一个方面，本公开的特征在于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds)的方法，包含向该受试者施用mbg453、nis793和卡那单抗的组合，任选地，其中以700mg-900mg(例如800mg)的剂量施用mgb453，每4周1次，以1300mg-1500mg(例如1400mg)的剂量施用nis793，每3周1次，并且以200mg-300mg(例如250mg)的剂量施用卡那单抗，每4周1次。
55.本文所述的方法、用途、组合物、剂量制剂和试剂盒的其他特征或实施方案包括以下的一个或多个。
56.tim-3抑制剂
57.在一些实施方案中，本文所述的组合包含tim-3抑制剂，例如，抗tim-3抗体。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个互补决定区(或总体上全部cdr序列)，重链可变区和轻链可变区包含表1中所示(例如，来自表1中公开的abtim3-hum11或abtim3-hum03的重链可变区序列和轻链可变区序列)的氨基酸序列或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方案中，根据kabat定义限定cdr(例如，如表1中所述)。在一些实施方案中，根据chothia定义限定cdr(例如，如表1中所述)。在一个实施方案中，相对于表1中所示的或由表1中所示核苷
酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个cdr(或总体上全部cdr)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸取代(例如保守性氨基酸取代)或缺失。
58.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，所述重链可变区包含seq id no:801的vhcdr1氨基酸序列、seq id no:802的vhcdr2氨基酸序列和seq id no:803的vhcdr3氨基酸序列；所述轻链可变区包含seq id no:810的vlcdr1氨基酸序列、seq id no:811的vlcdr2氨基酸序列和seq id no:812的vlcdr3氨基酸序列，其各自在表1中公开。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，所述重链可变区包含seq id no:801的vhcdr1氨基酸序列、seq id no:820的vhcdr2氨基酸序列和seq id no:803的vhcdr3氨基酸序列；所述轻链可变区包含seq id no:810的vlcdr1氨基酸序列、seq id no:811的vlcdr2氨基酸序列和seq id no:812的vlcdr3氨基酸序列，其各自在表1中公开。
59.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含vh，所述vh包含seq id no:806的氨基酸序列或与seq id no:806具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含vl，所述vl包含seq id no:816的氨基酸序列或与seq id no:816具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含vh，所述vh包含seq id no:822的氨基酸序列或与seq id no:822具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含vl，所述vl包含seq id no:826的氨基酸序列或与seq id no:826具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含vh和vl，所述vh包含seq id no:806的氨基酸序列，所述vl包含seq id no:816的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含vh和vl，所述vh包含seq id no:822的氨基酸序列，所述vl包含seq id no:826的氨基酸序列。
60.在一个实施方案中，抗体分子包含vh，所述vh由seq id no:807的核苷酸序列或与seq id no:807具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含vl，所述vl由seq id no:817的核苷酸序列或与seq id no:817具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含vh，所述vh由seq id no:823的核苷酸序列或与seq id no:823具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含vl，所述vl由seq id no:827的核苷酸序列或与seq id no:827具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:807的核苷酸序列编码的vh和由seq id no:817的核苷酸序列编码的vl。在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:823的核苷酸序列编码的vh和由seq id no:827的核苷酸序列编码的vl。
61.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含重链，所述重链包含seq id no:808的氨基酸序列或与seq id no:808具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含轻链，所述轻链包含seq id no:818的氨基酸序列或与seq id no:818具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含重链，所述重链包含seq id no:824的氨基酸序列或与seq id no:824具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个
实施方案中，抗tim-3抗体分子包含轻链，所述轻链包含seq id no:828的氨基酸序列或与seq id no:828具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含seq id no:808的氨基酸序列，所述轻链包含seq id no:818的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含seq id no:824的氨基酸序列，所述轻链包含seq id no:828的氨基酸序列。
62.在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由seq id no:809的核苷酸序列或与seq id no:809具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由seq id no:819的核苷酸序列或与seq id no:819具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由seq id no:825的核苷酸序列或与seq id no:825具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由seq id no:829的核苷酸序列或与seq id no:829具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:809的核苷酸序列编码的重链和由seq id no:819的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:825的核苷酸序列编码的重链和由seq id no:829的核苷酸序列编码的轻链。
63.在一些实施方案中，所述抗tim3抗体为mbg453。
64.其他示例性tim-3抑制剂
65.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子是tsr-022(anaptysbio/tesaro)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含tsr-022的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含ape5137或ape5121的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者，例如，如表2中公开。wo 2016/161270中公开了ape5137、ape5121和其他抗tim-3抗体，其通过引用整体并入。
66.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子是抗体克隆f38-2e2。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含f38-2e2的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
67.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为ly3321367(eli lilly)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含ly3321367的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
68.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为sym023(symphogen)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含sym023的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
69.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为bgb-a425(beigene)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含bgb-a425的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
70.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为incagn-2390(agenus/incyte)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含incagn-2390的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或
轻链可变区序列或重链序列或轻链序列中一者或多者。
71.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为mbs-986258(bms/five prime)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含mbs-986258的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
72.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为ro-7121661(roche)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含ro-7121661的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
73.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为ly-3415244(eli lilly)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含ly-3415244的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
74.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为bc-3402(wuxi zhikanghongyi biotechnology)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含bc-3402的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
75.在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为shr-1702(medicine co ltd.)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含shr-1702的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。例如，在国际公开号wo 2020/038355中公开了shr-1702，其通过引用整体并入。
76.其他已知的抗tim-3抗体包括例如在wo 2016/111947、wo 2016/071448、wo2016/144803、us 8,552,156、us 8,841,418和us 9,163,087中描述的那些，其通过引用整体并入。
77.在一个实施方案中，抗tim-3抗体是与本文描述的抗tim-3抗体之一竞争结合和/或结合tim-3上相同表位的抗体。
78.tgf-β抑制剂
79.在一些实施方案中，本文所述的组合包含转化生长因子β(也称作tgf-β、tgfβ、tgfb或tgf-β，在本文中可以互换使用)抑制剂(例如抗-tgf-β抗体分子)。在本文所述的一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如抗-tgf-β抗体分子)与tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)联用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如抗-tgf-β抗体分子)与tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体)和pd-1抑制剂(例如抗-pd-1抗体)联用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如抗-tgf-β抗体分子)与tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体)和低甲基化药物联用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如抗-tgf-β抗体分子)与tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体)、pd-1抑制剂(例如抗-pd-1抗体)和低甲基化药物联用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如抗-tgf-β抗体分子)与tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体)、任选地进一步与低甲基化药物组合和任选地进一步与pd-1抑制剂(例如抗-pd-1抗体)或il-1β抑制剂(例如抗-il-1β抗体分子)组合用于治疗骨髓纤维化。在一些实施方案中，骨髓纤维化为原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)或真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf)。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂为nis793、夫苏木单抗、pf-06952229或avid200。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂为nis793。在某些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)与抗-tim-3抗体分子(例如mbg453)、任选地进一步与低甲基化药物(例如地西他滨)和任选地进一步与pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)或il-1β抑制剂(例如卡那单抗)组
合用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如抗-tgf-β抗体分子)与tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体)组合用于治疗骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds)。在某些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)与抗-tim-3抗体(例如mbg453)组合用于治疗骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))。在某些实施方案中，将tgf-β抑制剂(例如nis793)与抗-tim-3抗体分子(例如mbg453)在同一天施用。在某些实施方案中，在开始施用抗-tim-3抗体(例如mbg453)之后施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在完成施用抗-tim-3抗体(例如mbg453)之后施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在完成施用抗-tim-3抗体(例如mbg453)之后约30分钟至约4小时(例如约1小时)施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。
80.低甲基化药物
81.在一些实施方案中，本文所述的组合包含低甲基化药物。在一些实施方案中，低甲基化药物与tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)和tgf-β抑制剂联用。在一些实施方案中，低甲基化药物与tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)和tgf-β抑制剂(例如抗-tgf-β抗体分子)组合用于治疗骨髓纤维化。在一些实施方案中，低甲基化药物与tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)和tgf-β抑制剂、任选地进一步与pd-1抑制剂(例如抗-pd-1抗体)或il-1β抑制剂(例如抗-il-1β抗体分子)组合用于治疗骨髓纤维化。在某些实施方案中，骨髓纤维化为原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf)。在一些实施方案中，低甲基化药物为地西他滨、阿扎胞苷、cc-486或astx727。在一些实施方案中，低甲基化药物为地西他滨。在某些实施方案中，低甲基化药物(例如地西他滨)与抗-tim-3抗体分子(例如mbg453)和tgf-β抑制剂(例如nis793)组合用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、et后(pet-mf)骨髓纤维化或pv后骨髓纤维化(ppv-mf))。在某些实施方案中，低甲基化药物(例如地西他滨)与抗-tim-3抗体分子(例如mbg453)、tgf-β抑制剂(例如nis793)、任选地进一步与pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)或il-1β抑制剂(例如卡那单抗)组合用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、et后(pet-mf)骨髓纤维化或pv后骨髓纤维化(ppv-mf))。
82.pd-1抑制剂
83.在一些实施方案中，本文所述的组合包含pd-1抑制剂。在一些实施方案中，pd-1抑制剂和tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)和tgf-β抑制剂联用。在一些实施方案中，pd-1抑制剂和tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)和tgf-β抑制剂(例如抗-tgf-β抗体分子)组合用于治疗骨髓纤维化。在一些实施方案中，pd-1抑制剂和tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)、tgf-β抑制剂和低甲基化药物组合用于治疗骨髓纤维化。在某些实施方案中，骨髓纤维化为原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf)。在一些实施方案中，pd-1抑制剂为斯巴达珠单抗(也称作pdr001)、纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、medi0680、regn2810、tsr-042、pf-06801591、bgb-a317、bgb-108、incshr1210或amp-224。在一些实施方案中，pd-1抑制剂为斯巴达珠单抗。在某些实施方案中，抗-pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)与抗-tim-3抗体分子
(例如mbg453)和tgf-β抑制剂(例如nis793)组合用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、et后(pet-mf)骨髓纤维化或pv后骨髓纤维化(ppv-mf))。在某些实施方案中，抗-pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)与抗-tim-3抗体分子(例如mbg453)、tgf-β抑制剂(例如nis793)和低甲基化药物(例如地西他滨)组合用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、et后(pet-mf)骨髓纤维化或pv后骨髓纤维化(ppv-mf))。
84.il-1β抑制剂
85.在一些实施方案中，本文所述的组合包含il-1β抑制剂。在一些实施方案中，il-1β抑制剂和tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)和tgf-β抑制剂联用。在一些实施方案中，il-1β抑制剂和tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)和tgf-β抑制剂(例如抗-tgf-β抗体分子)组合用于治疗骨髓纤维化。在一些实施方案中，il-1β抑制剂和tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)、tgf-β抑制剂和低甲基化药物组合用于治疗骨髓纤维化。在某些实施方案中，骨髓纤维化为原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf)。在一些实施方案中，il-1β抑制剂为卡那单抗(也称作acz885或)、吉伏组单抗(gevokizumab)、阿那白滞素(anakinra)、双醋瑞因(diacerein)、il-1亲和体(sobi 006,z-fc(swedish orphan biovitrum/affibody))、利纳西普(rilonacept)、鲁吉珠单抗(lutikizumab)(abt-981)、cdp-484、ly-2189102和pbf509(nir178)。在一些实施方案中，il-1β抑制剂为卡那单抗。在某些实施方案中，il-1β抑制剂(例如卡那单抗)与抗-tim-3抗体分子(例如mbg453)和tgf-β抑制剂(例如nis793)组合用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、et后(pet-mf)骨髓纤维化或pv后骨髓纤维化(ppv-mf))。在某些实施方案中，il-1β抑制剂(例如卡那单抗)与抗-tim-3抗体分子(例如mbg453)、tgf-β抑制剂(例如nis793)和低甲基化药物(例如地西他滨)组合用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、et后(pet-mf)骨髓纤维化或pv后骨髓纤维化(ppv-mf))。在某些实施方案中，il-1β抑制剂(例如卡那单抗)与抗-tim-3抗体分子(例如mbg453)和tgf-β抑制剂(例如nis793)组合用于治疗骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))。
86.治疗用途
87.在不希望受理论约束的情况下，在一些实施方案中，认为本文所述的组合可抑制、减少或中和tim-3、tgf-β、pd-1、il-1β或dna甲基转移酶的一种或多种活性，从而产生例如一种或多种免疫检查点抑制、程序性细胞死亡、低甲基化或细胞毒性。因此，本文所述的组合可在需要增强受试者的免疫应答的情况下用于障碍(例如癌症)的治疗或预防。
88.因此，在另一方面，提供了一种调节受试者免疫应答的方法。该方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的组合，例如，根据本文所述的剂量方案，从而调节受试者的免疫应答。在一个实施方案中，所述组合增强、刺激或增加受试者的免疫应答。受试者可以是哺乳动物，例如灵长类动物，优选高级灵长类动物，例如人类(例如，患有或有可能患有本文所述障碍的风险的患者)。在一个实施方案中，受试者需要增强免疫应答。在一个实施方案中，受试者患有或有可能患有本文所述的障碍，例如本文所述的癌症。在某些实施方案中，受试者处于或有可能处于免疫损害状态。例如，受试者正在或已经接受化疗和/或放射治疗。或者，受试者因感染而免疫功能低下，或有免疫功能低下的风险。在某些实施方案中，受
试者不适合进行化疗，例如，强化诱导化疗。
89.在一个方面，提供了受试者中癌症的治疗方法(例如，减少、抑制或延迟进展的一种或多种)。所述该方法包括例如根据本文所述的剂量方案向受试者施用治疗有效量的本文公开的组合，从而治疗受试者中的癌症。
90.在某些实施方案中，用所述组合治疗的癌症包括但不限于血液癌(例如骨髓增生性肿瘤、白血病、淋巴瘤或骨髓瘤)、实体瘤和转移性病变。在一个实施方案中，所述癌症为血液癌症。血液癌的实例包括例如骨髓增生性肿瘤(例如骨髓纤维化、真性红细胞增多症(pv)或原发性血小板增多症(et))、骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))、白血病(例如急性髓性白血病(aml)或慢性淋巴细胞白血病(cll)、淋巴瘤(例如小淋巴细胞淋巴瘤(sll))和骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤(mm))。所述癌症可以为早期、中期、晚期或转移性癌症。
91.在某些实施方案中，用所述组合治疗的癌症包括但不限于骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))。在某些实施方案中，用所述组合治疗的癌症为原发性骨髓纤维化(mf)。
92.在某些实施方案中，用所述组合治疗的癌症包括但不限于骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))。在某些实施方案中，用所述组合治疗的癌症为较低风险mds。
93.在某些实施方案中，所述癌症为msi-高癌症。在一些实施方案中，所述癌症为转移癌。在其他实施方案中，所述癌症为晚期癌症。在其他实施方案中，所述癌症为复发性或难治性癌症。
94.在其他实施方案中，受试者具有或经鉴定为具有肿瘤浸润性淋巴细胞(til)中的tim-3表达。在一个实施方案中，癌微环境具有升高的tim-3表达水平。在一个实施方案中，癌微环境具有升高的pd-l1表达水平。可选地或组合地，癌微环境可以具有增加的ifnγ和/或cd8表达。
95.在一些实施方案中，受试者具有或经鉴定具有肿瘤，所述肿瘤具有以下一种或多种情况：高pd-l1水平或表达，或为具有肿瘤浸润型淋巴细胞(til)+(例如，具有数目增加的til)或前述两种情况。在某些实施方案中，受试者患有或被鉴定为患有高pd-l1水平或表达并且呈til+的肿瘤。在一些实施方案中，本文所述的方法进一步包括基于患有下述肿瘤鉴定受试者，其中所述肿瘤具有以下一种或多种情况：高pd-l1水平或表达，或呈til+或前述两种情况。在某些实施方案中，本文所述的方法进一步包括基于患有高pd-l1水平或表达的肿瘤且呈til+鉴定受试者。在一些实施方案中，til+的肿瘤为cd8和ifnγ阳性。在一些实施方案中，受试者具有或被鉴定为具有高百分数的对pd-l1、cd8和/或ifnγ中一者、两者或更多者为阳性的细胞。在某些实施方案中，受试者具有或被鉴定为具有高百分数的对pd-l1、cd8和ifnγ均为阳性的细胞。
96.在一些实施方案中，本文所述的方法还包括基于具有或被鉴定为高百分数的对pd-l1、cd8和/或ifnγ中一者、两者或更多者为阳性的细胞。在某些实施方案中，本文所述的方法还包括基于具有或被鉴定为高百分数的对pd-l1、cd8和ifnγ全部为阳性的细胞。在
一些实施方案中，受试者具有或经鉴定为具有pd-l1、cd8和/或ifnγ中一者、两者或更多者，并且患有或经鉴定患有以下一种或多种血液学癌：例如白血病(例如aml或cll)、淋巴瘤(例如sll)和/或骨髓瘤(例如mm)。在某些实施方案中，本文描述的方法进一步描述了基于具有pd-l1、cd8和/或ifnγ中的一者、两者或多者，以及白血病(例如aml或cll)、淋巴瘤(例如sll)和/或骨髓瘤(例如mm)中的一者或多者来鉴定受试者。
97.本文公开的方法、组合物和制剂可用于治疗与前述癌症相关的转移性病变。
98.此外，本发明提供了增强受试者对抗原的免疫应答的方法，包括根据本文所述的剂量方案向受试者施用：(i)抗原；和(ii)本文所述的组合，以增强受试者对抗原的免疫应答。所述抗原可以是例如肿瘤抗原、病毒抗原、细菌抗原或来自病原体的抗原。
99.本文所述的组合可全身(例如，口服、肠外、皮下、静脉内、直肠、肌肉内、腹腔内、鼻内、经皮、或通过吸入或腔内安装)、施用或局部施用于粘膜，例如鼻、喉和支气管。在某些实施方案中，抗-tim-3抗体分子、抗-tgf-β抗体分子、抗-il-1β抗体分子或抗-pd-1抗体分子以本文所述的固定剂量经静脉内施用。
100.免疫调节剂
101.本文所述的组合(例如，包含治疗有效量的本文所述抗-tim-3抗体分子和本文所述的抗-tgf-β抗体分子的组合)可进一步与一种或多种免疫调节剂组合使用。
102.在某些实施方案中，免疫调节剂为免疫检查点分子的抑制剂。在一个实施方案中，免疫调节剂为pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla-4、lag-3、ceacam(例如ceacam-1、-3和/或-5)、vista、btla、tigit、lair1或cd160或2b4的抑制剂。在一个实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂抑制pd-1、pd-l1、lag-3、ceacam(例如ceacam-1、-3和/或-5),ctla-4或其任意组合。
103.可以在dna、rna或蛋白质水平进行对抑制性分子的抑制。在实施方案中，抑制性核酸(例如，dsrna、sirna或shrna)可以用来抑制抑制性分子的表达。在其他实施方案中，抑制性信号的抑制剂是与抑制性分子结合的多肽(例如，可溶性配体)(例如，pd-1-ig或ctla-4ig)或抗体分子；例如，与pd-1、pd-l1、pd-l2、ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)、ctla-4、lag-3、vista、btla、tigit、lair1、cd160或2b4或其组合结合的抗体分子。
104.在某些实施方案中，抗tim-3抗体分子处于双特异性或多特异性抗体分子形式。在一个实施方案中，双特异性抗体分子具有针对tim-3的第一结合特异性和第二结合特异性，例如，针对pd-1、pd-l1、ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)、lag-3或pd-l2的第二结合特异性。在一个实施方案中，双特异性抗体分子与(i)pd-1或pd-l1(ii)和tim-3结合。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子与tim-3和lag-3结合。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子与tim-3和ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)结合。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子与tim-3和ceacam-1结合。在又一个实施方案中，双特异性抗体分子与tim-3和ceacam-3结合。在又一个实施方案中，双特异性抗体分子与tim-3和ceacam-5结合。
105.在其他实施方案中，所述组合进一步包含双特异性或多特异性抗体分子。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子与pd-1或pd-l1结合。在又一个实施方案中，双特异性抗体分子与pd-1和pd-l2结合。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子与ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)和lag-3结合。
106.可以在多特异性抗体分子(例如，三特异性抗体)中产生前述分子的任何组合，所述三特异性抗体包含针对tim-3的第一结合特异性和针对以下两者或多者的第二及第三结
合特异性：pd-1、pd-l1、ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)、lag-3或pd-l2。
107.在某些实施方案中，免疫调节剂是pd-1(例如，人pd-1)的抑制剂。在另一个实施方案中，免疫调节剂是pd-l1(例如，人pd-l1)的抑制剂。在一个实施方案中，pd-1或pd-l1的抑制剂是针对pd-1或pd-l1的抗体分子(例如，如本文所述的抗pd-1或抗pd-l1抗体分子)。
108.pd-1或pd-l1抑制剂与抗tim-3抗体分子的组合还可以包含一种或多种附加的免疫调节剂，例如，与lag-3、ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)或ctla-4的抑制剂组合。在一个实施方案中，pd-1或pd-l1的抑制剂(例如，抗pd-1或pd-l1抗体分子)与抗tim-3抗体分子和lag-3抑制剂(例如，抗lag-3抗体分子)组合施用。在另一个实施方案中，pd-1或pd-l1的抑制剂(例如，抗pd-1或pd-l1抗体分子)与抗tim-3抗体分子和ceacam抑制剂(例如，ceacam-1、-3和/或-5抑制剂)(例如，抗ceacam抗体分子)组合施用。在另一个实施方案中，pd-1或pd-l1的抑制剂(例如，抗pd-1或pd-l1抗体分子)与抗tim-3抗体分子和ceacam-1抑制剂(例如，抗ceacam-1抗体分子)组合施用。在另一个实施方案中，pd-1或pd-l1的抑制剂(例如，抗pd-1或pd-l1抗体分子)与抗tim-3抗体分子和ceacam-5抑制剂(例如，抗ceacam-5抗体分子)组合施用。在另外的其他实施方案中，pd-1或pd-l1的抑制剂(例如，抗pd-1或pd-l1抗体分子)与抗tim-3抗体分子、lag-3抑制剂(例如，抗lag-3抗体分子)和tim-3抑制剂(例如，抗tim-3抗体分子)组合施用。免疫调节剂与抗tim-3抗体分子和pd-1抑制剂(例如，pd-l2、ctla-4、lag-3、ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)、vista、btla、tigit、lair1、cd160、2b4和/或tgfβ中一者或多者)的其他组合也属于本发明范围。本领域已知的或本文公开的任何抗体分子可以用于与检查点分子的抑制剂的前述组合中。
109.在其他实施方案中，免疫调节剂是ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)(例如，人ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5))的抑制剂。在一个实施方案中，免疫调节剂是ceacam-1(例如，人ceacam-1)的抑制剂。在另一个实施方案中，免疫调节剂是ceacam-3(例如，人ceacam-3)的抑制剂。在另一个实施方案中，免疫调节剂是ceacam-5(例如，人ceacam-5)的抑制剂。在一个实施方案中，ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)的抑制剂是针对ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)的抗体分子。ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)抑制剂和抗tim-3抗体分子的组合还可以包含一种或多种附加的免疫调节剂，例如与lag-3、pd-1、pd-l1或ctla-4的抑制剂组合。
110.在其他实施方案中，免疫调节剂是lag-3(例如，人lag-3)的抑制剂。在一个实施方案中，lag-3的抑制剂是针对lag-3的抗体分子。lag-3抑制剂和抗tim-3抗体分子的组合还可以包含一种或多种附加的免疫调节剂，例如与ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)、pd-1、pd-l1或ctla-4的抑制剂组合。
111.在某些实施方案中，本文公开的组合中所用的免疫调节剂(例如，与选自抗原呈递组合的治疗药组合)是共刺激分子的激活剂或激动剂。在一个实施方案中，共刺激分子的激动物选自以下的激动剂(例如，激动性抗体或其抗原结合片段，或可溶性融合物)：ox40、cd2、cd27、cd28、cds、icam-1、lfa-1(cd11a/cd18)、icos(cd278)、4-1bb(cd137)、gitr、cd30、cd40、baffr、hvem、cd7、light、nkg2c、slamf7、nkp80、cd160、b7-h3或cd83配体。
112.在其他实施方案中，免疫调节剂是gitr激动剂。在一个实施方案中，gitr激动剂是针对gitr的抗体分子。抗gitr抗体分子和抗tim-3抗体分子可以处于独立的抗体组合物形式，或作为双特异性抗体分子。gitr激动剂与抗tim-3抗体分子的组合还可以包含一种或多
种附加的免疫调节剂，例如，与pd-1、pd-l1、ctla-4、ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)或lag-3的抑制剂组合。在一些实施方案中，抗gitr抗体分子是与gitr和pd-1、pd-l1、ctla-4、ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)或lag-3结合的双特异性抗体。在其他实施方案中，gitr激动剂可以与共刺激分子的一种或多种附加激活物，例如，ox40、cd2、cd27、cd28、cds、icam-1、lfa-1(cd11a/cd18)、icos(cd278)、4-1bb(cd137)、cd30、cd40、baffr、hvem、cd7、light、nkg2c、slamf7、nkp80、cd160、b7-h3或cd83配体的激动剂组合施用。
113.在其他实施方案中，免疫调节剂是ox40激动剂。在一个实施方案中，ox40激动剂是针对ox40的抗体分子。ox40抗体分子和抗tim-3抗体分子可以处于独立的抗体组合物形式，或作为双特异性抗体分子。ox40激动剂与抗tim-3抗体分子的组合还可以包含一种或多种附加的免疫调节剂，例如，与pd-1、pd-l1、ctla-4、ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)或lag-3的抑制剂组合。在一些实施方案中，抗ox40抗体分子是与ox40和pd-1、pd-l1、ctla-4、ceacam(例如，ceacam-1、-3和/或-5)或lag-3结合的双特异性抗体。在其他实施方案中，ox40激动剂可以与其他共刺激分子，例如，gitr、cd2、cd27、cd28、cds、icam-1、lfa-1(cd11a/cd18)、icos(cd278)、4-1bb(cd137)、cd30、cd40、baffr、hvem、cd7、light、nkg2c、slamf7、nkp80、cd160、b7-h3或cd83配体的激动剂组合施用。
114.在其它实施方案中，免疫调节剂是il-1β的抑制剂。在一些实施方案中，il-1β抑制剂是针对il-1β的抗体分子。tgf-β抑制剂和抗-tim-3抗体分子和抗tgf-β抗体分子的组合可以进一步包括一种或多种另外的免疫调节剂。
115.应当注意，本文仅提供了检查点抑制蛋白的抑制剂或共刺激分子的激动剂的示例性组合。这些活性剂的其他组合处于本发明的范围内。
116.生物标志物
117.在某些实施方案中，本文所公开的任何方法或用途还包括在受试者(例如，患有癌症(例如本文所述癌症)的受试者)中评估或监测本文所述的疗法(例如，组合疗法)的有效性。该方法包括采集疗法有效性的值，其中所述值表示疗法的有效性。
118.在实施方案中，疗法有效性的值包括以下一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者或更多者(例如，全体)的量值：
119.(i)肿瘤浸润性淋巴细胞(til)表型的参数；
120.(ii)髓样细胞群体的参数；
121.(iii)表面表达标志物的参数；
122.(iv)免疫应答的生物标志物的参数；
123.(v)全身性细胞因子调节作用的参数；
124.(vi)循环型游离dna(cfdna)的参数；
125.(vii)全身性免疫-调节作用的参数；
126.(viii)微生物屏障(microbiome)的参数；
127.(ix)循环型免疫细胞中活化标记物的参数；
128.(x)循环型细胞因子的参数；或
129.(xi)rna表达的参数。
130.在一些实施方案中，til表型的参数包括受试者中(例如，来自受试者的样品(例如肿瘤样品、血液样品或骨髓样品)中)的以下一者、二者、三者、四者或更多者(例如，全体)的
水平或活性：用于til计数的苏木精和伊红(h&e)染色、cd8、foxp3、cd4或cd3。
131.在一些实施方案中，髓样细胞群体的参数包括受试者中(例如，来自受试者的样品(例如，肿瘤样品)中)cd68或cd163的一或两者的水平或活性。
132.在一些实施方案中，表面表达标志物的参数包括受试者中(例如，来自受试者的样品(例如肿瘤样品或骨髓样品)中)以下一者、二者、三者或更多者(例如，全体)的水平或活性：tim-3、pd-1、pd-l1或lag-3。在某些实施方案中，通过免疫组织化学(ihc)法测定tim-3、pd-1、pd-l1或lag-3的水平。在某些实施方案中，测定tim-3的水平。
133.在一些实施方案中，免疫应答的生物标志物的参数包括受试者中例如，来自受试者的样品(例如肿瘤样品或骨髓样品)中一个或多个基于核酸的标志物的水平或序列。
134.在一些实施方案中，全身性细胞因子调节作用的参数包括受试者中例如，来自受试者的样品(例如，血液样品，例如，血浆样品)中以下一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者或更多者(例如，全体)的水平或活性：il-2、il-8、il-18、ifn-γ、itac(cxcl11)、il-6、il-10、il-4、il-17、il-15、mip1α、mcp1、tnf-α、ip-10或tgf-β。
135.在一些实施方案中，cfdna的参数包括受试者中例如，来自受试者的样品(例如，血液样品，例如，血浆样品)中一种或多种循环型肿瘤dna(cfdna)分子的序列或水平。
136.在一些实施方案中，全身性免疫调节作用的参数包括受试者中例如，来自受试者的样品(例如，血液样品，例如，pbmc样品)中已活化免疫细胞例如，表达cd3的细胞、表达cd8的细胞或这两者的表型表征。
137.在一些实施方案中，微生物屏障的参数包括受试者中例如，来自受试者的样品(例如，粪便样品)中微生物屏障中一个或多个基因的序列或表达水平。
138.在一些实施方案中，循环型免疫细胞中活化标记物的参数包括样品(例如，血液样品，例如，血浆样品)中以下一者、二者、三者、四者、五者或更多者(例如，全体)的水平或活性：循环型cd8+、hla-dr+ki67+、t细胞、ifn-γ、il-18或表达cxcl11(ifn-γ诱导的cck)的细胞。
139.在一些实施方案中，循环型细胞因子的参数包括受试者中例如，来自受试者的样品(例如，血液样品，例如，血浆样品)中)il-6的水平或活性。
140.在一些实施方案中，rna表达的参数包含受试者中，例如来自受试者的样品(例如肿瘤样品、骨髓样品或血液样品，例如血浆样品)中免疫和/或癌症相关基因，例如mf相关基因和/或mds相关基因的水平或序列。在一些实施方案中，mds相关基因包括dnmt3、asxl1、tet2、runx1、tp53或其任意组合。
141.在本文所公开的任何方法的一些实施方案中，疗法包括本文所述的抗tim-3抗体分子和免疫检查点分子的第二抑制剂例如，pd-1的抑制剂(例如，抗pd-1抗体分子)或pd-l1的抑制剂(例如，抗pd-l1抗体分子)的组合。
142.在本文所公开的任何方法的一些实施方案中，从获自受试者的样品获得(i)-(xi)中一者或多者的量值。在一些实施方案中，样品选自肿瘤样品、血液样品(例如，血浆样品或pbmc样品)或粪便样品。
143.在本文所公开的任何方法的一些实施方案中，在接受治疗之前、其期间或其之后评估受试者。
144.在本文所公开的任何方法的一些实施方案中，(i)-(xi)中一者或多者的量值评估
了基因表达、流式细胞术或蛋白质表达中一者或多者的概况。
145.在本文所公开的任何方法的一些实施方案中，在受试者或样品中存在循环型cd8+、hla-dr+ki67+、t细胞、ifn-γ、il-18或表达cxcl11(ifn-γ诱导的cck)的细胞中一者、二者、三者、四者、五者或更多者(例如，全体)升高的水平或活性，和/或存在降低的il-6水平或活性，是疗法有效性的正向预测指标。
146.或者，或与本文公开的方法组合，响应于所述值，执行以下一者、二者、三者、四者或更多者(例如，全体)：
147.(i)向受试者施用该疗法；
148.(ii)施用该疗法的改变的剂量；
149.(iii)改变该疗法的安排或时间过程；
150.(iv)向受试者施用与该疗法组合的附加活性剂(例如，本文所述的治疗药)；或
151.(v)向受试者施用替代疗法。
152.其他实施方案
153.在某些实施方案中，本文所公开的任何方法还包括在受试者或样品(例如，包含癌细胞和/或免疫细胞如til的受试者样品)中鉴定tim-3的存在，因而提供tim-3的值。该方法还可以包括将tim-3值与参比值(例如，对照值)比较。如果tim-3值大于参比值(例如，对照值)，则向受试者施用治疗有效量的包含本文所述抗tim-3抗体分子的本文所述组合，并且任选地与第二治疗剂(例如tgf-β抑制剂，例如nis793)和/或另外的治疗剂(例如pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)和/低甲基化药物(例如地西他滨)和/或il-1β抑制剂(例如卡那单抗)或本文所述的方法或方式组合，因而治疗癌症。
154.在其他实施方案中，本文所公开的任何方法还包括在受试者或样品(例如，包含癌细胞和/或免疫细胞如til的受试者样品)中鉴定pd-l1的存在，因而提供pd-l1的值。该方法还可以包括将pd-l1值与参比值如对照值比较。如果pd-l1值大于参比值如对照值，则向受试者施用治疗有效量的本文所述的抗tim-3抗体分子，并且任选地，与本文所述的第二治疗药物、程序或模式联用，因而治疗癌症。
155.在其他实施方案中，本文所公开的任何方法还包括在受试者或样品(例如，包含癌细胞和任选地免疫细胞如til的受试者样品)中鉴定pd-l1、cd8或ifn-γ中一者、两者或全体的存在，因而提供pd-l1、cd8和ifn-γ中一者、两者或全体的值。该方法还可以包括将pd-l1、cd8和/或ifn-γ值与参比值如对照值比较。如果pd-l1、cd8和/或ifn-γ值大于参比值，如对照值，则向受试者施用治疗有效量的本文所述的抗tim-3抗体分子，并且任选地，与本文所述的第二治疗药物、程序或模式联用，因而治疗癌症。
156.受试者可患有本文所述的癌，例如血液癌或实体瘤，例如骨髓增生性肿瘤(例如骨髓纤维化、原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))、白血病(例如急性髓系白血病(aml)，例如复发性或难治性aml或新发aml)、淋巴瘤、骨髓瘤、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌(sclc)或非小细胞肺癌(nsclc))、间皮瘤，皮肤癌(如默克尔细胞癌(mcc)或黑色素瘤)、肾癌(如肾细胞癌)、膀胱癌、软组织肉瘤(如血管外皮细胞瘤(hpc))、骨癌(如骨肉瘤)、结直肠癌、胰腺癌、鼻咽癌、乳腺癌、十二指肠癌、子宫内膜癌、腺癌(未知腺癌)、肝癌(如肝细胞癌)、胆管癌、肉瘤、骨髓增生异常综合征(mds)(例如高风险mds)。受试者可患有骨髓纤维化，例如原发性骨髓纤维化
(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf)。
157.本文所提及的全部出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用的方式完整地并入。
158.本发明的其他特征、目的和优点将从本描述及附图并且从权利要求书中显而易见。
159.附图简述
160.图1显示了mbg453对tim-3和半乳糖凝集素-9之间相互作用的影响。以抗体阻断对tim-3受体的gal9-sulfotag信号的能力作为指标评估竞争作用，示于y轴上。抗体浓度示于x轴上。
161.图2显示了mbg453介导适度抗体依赖性细胞吞噬(adcp)。在mbg453、利妥昔单抗和对照higg4单克隆抗体(mab)的不同测试浓度下，对吞噬百分率进行量化。
162.图3是显示通过荧光素酶活性测定的fcγr1a的mbg453结合图。mbg453或抗cd20mabthera对照品与fcγria结合诱导的nfat依赖性报告基因表达的激活通过在不同的受试抗体测试浓度下荧光素酶活性进行量化。
163.图4显示mbg453增强免疫介导的地西他滨预处理aml细胞的杀伤作用。
164.图5是在aml患者来源的异种移植(pdx)模型hamlx21432中，mbg453加和不加地西他滨的抗白血病活性曲线图。mbg453以10mg/kg的剂量进行腹腔注射，每周一次(从给药的第6天开始)，作为单一药物或与地西他滨以1mg/kg的剂量进行组合，每天一次，共5剂(从给药开始)。初始群体规模：4只动物。在植入后第27天开始的21天给药期间，每周记录体重(aml pdx模型#21432 2x106细胞/动物)。在第56天记录所有最终数据。通过facs分析，以外周血中人类cd45+细胞的百分比来测量白血病负荷。
165.图6是在aml患者来源的异种移植物(pdx)模型hamlx5343中，mbg453在含和不含地西他滨的情况下的抗白血病活性曲线图。治疗从植入后第32天开始(200万个细胞/动物)。mbg453以10mg/kg的剂量进行腹腔注射，每周一次(从给药的第6天开始)，作为单一药物或与地西他滨以1mg/kg的剂量进行组合，每天一次，共5剂(从给药开始)。初始群体规模：4只动物。在21天给药期间每周记录体重。在第56天记录所有最终数据。通过facs分析，以外周血中cd45+细胞的百分比来测量白血病负荷。
166.图7为mbg453增强thp-1aml细胞杀伤的图表，该细胞被设计为相对于亲代对照thp-1细胞过度表达tim-3。计算表达tim-3的thp-1细胞与亲代thp-1细胞之间的比率(图中y轴的“倍数”)并将其标准化为无抗cd3/抗cd28珠刺激的条件。图形的x轴表示刺激量，即每个细胞的珠数。数据代表两个独立试验中的一个。
167.图8描绘了由野生型对照细胞或过表达tim-3的细胞产生的il-1β的基线水平。
168.图9描绘了pdr001x2105的地西他滨+mbg453组合组中aml/mds患者的骨髓样品中基线(筛选)的il-1βmrna表达水平。将表达绘制为每百万的log2计数(cpm)。根据指示的最佳总体应答对患者进行分组。在患有进行性疾病的aml/mds患者中，基线时il-1βmrna表达倾向于更高。
169.图10a-10c描绘了il-1βmrna表达水平的log2倍数变化，显示计算为c3d1除以配对患者骨髓样品的筛选。图10a描绘了显示在地西他滨+mbg453组合群组中对比响应者(cr/
pr)与无响应者(sd/pd)的治疗后差异基因表达的火山图。显示了使用limma包计算的基因表达的log2倍数变化(c3d1/筛选)(x-轴)和未调整的p值(y-轴)。il-1β被突出显示，因为它是两个响应组之间在治疗后最重要的差异表达的基因之一。图10b描绘了对于每个响应组(cr、pr、sd和pd)，显示具有配对时间点的患者在筛选和c3d1时il-1βmrna的表达水平。图10c描绘了针对母细胞中的最佳百分比变化绘制的il-1βmrna(c3d1/筛选)的log2倍数变化。
170.详细描述
171.含t细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域3(tim-3；也称作甲型肝炎病毒细胞受体2)在免疫系统调节中具有广泛和复杂的作用，其中在适应性免疫应答(cd4+和cd8+t效应细胞、调节性t细胞)和先天免疫应答(巨噬细胞、树突细胞、nk细胞)中均具有公开的作用。tim-3在肿瘤诱导的免疫抑制中具有重要作用，因为它在实体和血液恶性肿瘤的动物模型中标记了最受抑制或功能障碍的cd8+t细胞群体(sakuishi等人(2010)j exp med.207(10):2187-94；zhou等人(2011)blood 117(17):4501-10；yang等人(2012)j clin invest.122(4):1271-82)，并且在foxp3+调节性t细胞(tregs)上表达，其与许多癌症适应症中的疾病严重程度相关(gao等人(2012)plos one 7(2):e30676；yan等人(2013)plos one 8(3):e58006)。tim-3在癌症中的耗竭或功能障碍的t细胞上表达，并且来自黑素瘤患者的tim-3+ny-eso-1+t细胞的离体tim-3阻断恢复了ifn-γ和tnf-α产生以及响应于抗原刺激的增殖(fourcade等人(2010)j exp med.207(10):2175-86)。阻断巨噬细胞和抗原交叉呈递树突细胞上的tim-3增强了活化和炎性细胞因子/趋化因子产生(zhang等人(2011)j.immunol 186(5):3096-103；zhang等人(2012)j.leukoc biol 91(2):189-96；chiba等人(2012)nat immunol.13(9):832-42；de mingo pulido等人(2018)cancer cell 33(1):60-74)，最终导致增强的效应t细胞反应。此外，在骨髓纤维化祖细胞上也观察到tim-3的表达增加(未发表，存档数据)。
172.在骨髓纤维化患者中，主要在单核细胞、巨核细胞和血小板中的组成型jak2/stat3/stat5活化可能通过减少t细胞活化、代谢活性和细胞周期进展而引起tim-3介导的免疫逃逸(可能类似于prestipino等人(2018)sci tranl med.10(429):eaam7729描述的pd-l1介导的免疫逃逸)。因此，抗-tim-3抗体在骨髓纤维化患者中有希望帮助建立针对骨髓纤维化祖细胞的免疫应答，以减少疾病负担和进行性疾病。
173.nis793为完全人igg2、人/小鼠交叉反应性、tgfβ中和抗体。在患有原发性骨髓纤维化(pmf)的患者中，已经显示血清和骨髓中tgfβ1水平的增加与骨髓纤维化和白血病细胞浸润的程度相关，并且来自临床前模型的数据已经确定tgf-β在疾病进展中的重要作用。特别地，tgf-β1与i、iii和iv型胶原蛋白以及其他细胞外基质蛋白如纤连蛋白和腱糖蛋白的合成增加有关，它们为在患有pmf的患者的骨髓中活跃沉积和积累的元件，从而使tgf-β参与骨髓纤维化的发病机制(tefferi(2005)j clin oncol.23(33):8520-30)。因此，在促血小板生成素高的小鼠中，缺乏tgf-β1显示防止骨髓纤维化发生，但骨髓增生综合征发展(chagraoui等人(2002)blood 100(10):3495-503)。在pmf的另一种鼠模型，低gata1小鼠中报道了类似的相关性，其中显示tgf-β受体激酶活性的药理学抑制减少骨髓中的纤维化和骨生成(zingariello等人(2013)blood 121(17):3345-3363)。此外，tgf-β抑制显著减少jak2 v617f+和mf小鼠模型中的纤维化(agarwal等人(2016)stem cell investig.3:5；
zingariello等人(2013)blood 121(17):3345-3363)。鉴于tgf-β的有效免疫调节和促纤维化性质，nis793可证明用于逆转患有pmf的患者的骨髓纤维化，并且可以与针对限制疾病负荷的疗法(包括tim-3阻断)结合以提供显著的治疗益处。
174.低甲基化药物诱导广泛的表观遗传效应，例如下调参与细胞周期、细胞分裂和有丝分裂的基因，以及上调参与细胞分化的基因。这些抗白血病作用伴随着tim-3以及pd-1、pd-l1、pd-l2和ctla4的表达增加，可能下调免疫介导的抗白血病作用(yang等人,(2014)leukemia,28(6):1280-8；等人(2015)oncotarget,6(11):9612
–
9626)。不希望受理论束缚，据信在一些实施方案中，本文所述的组合(例如，包含本文所述的抗-tim-3抗体分子的组合)可用于降低免疫抑制性肿瘤微环境。
175.mpn克隆分泌的il-1β已显示在鼠疾病模型中重建干细胞微环境(stem cell niche)并支持恶性克隆的生长。在小鼠疾病模型中，显示使用重组il-1受体拮抗剂(il-1ra)阿那白滞素阻断il-1信号传导减少了血小板计数并增加了bm msc频率(arranz等人nature.2014年8月7日；512(7512):78-81)。
176.尽管体外mf衍生的hspc的突变状态和行为可以通过炎症微环境中各种促炎因子之间的协作上调，但在mf患者中il-1β的水平和循环cd34+细胞的平均数量显示出增加，这可能是在选择恶性克隆(sollazzo等人oncotarget.2016；7:43974-43988)。不希望受到理论束缚，认为在一些实施方案中，包含tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂、任选地进一步包含低甲基化药物和任选地进一步包含pd-1抑制剂或il-1β抑制剂的组合可以安全地施用，其中tim-3抑制剂贡献的重叠毒性很小，并且tim-3抑制剂可以改善tgf-β抑制剂、pd-1抑制剂、低甲基化药物和/或il-1β抑制剂在治疗mf中的功效。患有骨髓增生异常综合征(mds)的患者过表达tim-3，这抑制细胞毒性t细胞的免疫识别(kikushige等人cell stem cell.2010；7(6):708-717)，并且随着mds进展到晚期，mds母细胞上的tim-3表达水平增加。已经观察到，通过使用抗-tim-3抗体阻断tim-3来抑制tim-3和mds母细胞的增殖(asayama等人oncotarget 2017；8(51):88904-17)。
177.升高的tgf-β信号传导水平可有助于mds的发病机制，如通过升高的tgfβ血浆水平tgfβ(zorat等人br j haematol 2001；115(4):881-94；allampallam等人int j hematol 2002；75(3):289-97)和smad2/3在从mds收集的骨髓样品中组成型活化的事实所证明的。类似地，来自mds患者的骨髓间质的rnaseq分析证明tgf-β作为主要细胞因子信号的上调(geyh等人haematologica 2018；103:1462-1471)。tgf-β1也可引起功能缺陷。例如，升高的tgf-β1足以阻断红细胞系统成熟(gao等人blood 2016；128(23):2637-2641)并诱导骨髓间质中的功能缺陷(geyh等人haematologica 2018；103:1462-1471)。此外，施用了tgf-β超家族配体阱的贫血、较低风险mds患者亚组证明了血液学改善和对红细胞输注的需求减少(fenaux等人presented at:2019european hematology association congress 2018；摘要s837)。不希望受理论束缚，认为在一些实施方案中，包含tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂的组合可用于抑制涉及mds(例如较低风险mds)发病机理的异常免疫活化。
178.因此，本文至少部分地公开了可用于治疗或预防病症，例如癌性病症(例如骨髓纤维化或骨髓增生异常综合征(mds))的组合疗法。在某些实施方案中，所述组合包含tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂，以及任选的低甲基化药物。在一些实施方案中，tim-3抑制剂包含以高亲和力和特异性结合tim-3的抗体分子(例如人源化抗体分子)。在一些实施方案中，tgf-β
抑制剂包含以高亲和力和特异性结合tgf-β的抗体分子(例如人源化抗体分子)。在一些实施方案中，所述组合还包含低甲基化药物。在一些实施方案中，所述组合还包含pd-1抑制剂或il-1β抑制剂。在一些实施方案中，pd-1抑制剂包含以高亲和力和特异性结合pd-1的抗体分子(例如人源化抗体分子)。在一些实施方案中，il-1β抑制剂包含以高亲和力和特异性结合il-1β的抗体分子(例如人源化抗体分子)。本文所述的组合可以根据本文所述的剂量方案使用。还提供了与本文所述的组合相关的药物组合物和剂量制剂。
179.定义
180.下文和本技术通篇范围内定义额外的术语。
181.如本文所用，冠词“一个”和“一种”在本文中用来指该冠词的一个或多于一个(例如，至少一个)的语法对象。
182.除非内容明确提示，否则术语“或”在本文中用来意指术语“和/或”并且与其互换使用。
[0183]“约”和“大约”应当通常意指鉴于测量的性质或精度，所测量的量的可接受误差程度。示例性误差程度在所给出的值或值范围的20百分数(％)范围内，一般在其10％范围内和更一般在其5％范围内。
[0184]“组合”或“与
……
组合”不意在暗示疗法或治疗药必须在相同的时间施用和/或配制在一起以递送，不过这些递送方法处于本文所述的范围内。组合中的治疗药可以与一种或多种其它疗法或治疗剂同时施用，在其他疗法之前或之后施用。可以按任意顺序施用治疗药或治疗用方案。通常而言，每种药物将按确定用于该药物的剂量和/或按确定用于该药物的时间安排施用。将进一步领会，这种组合中所用的额外治疗药可以在单一组合物中一起施用或在不同组合物中分别施用。通常而言，预计以组合方式使用的额外治疗药应当按照不超过单独利用它们的水平利用。在一些实施方案中，以组合方式使用的水平将低于单独所用的那些水平。
[0185]
在实施方案中，按治疗剂量或次治疗剂量施用附加的治疗药。在某些实施方案中，当第二治疗药与第一治疗药(例如，抗tim-3抗体分子)组合施用时，实现抑制作用(例如，生长抑制)所要求的第二治疗药浓度比单独施用第二治疗药时低。在某些实施方案中，当第一治疗药与第二治疗药组合施用时，实现抑制作用(例如，生长抑制)所要求的第一治疗药浓度比单独施用第一治疗药时低。在某些实施方案中，在联合疗法中，实现抑制作用(例如，生长抑制)所要求的第二治疗药浓度比第二治疗药作为单药疗法的治疗性剂量低，例如，低10-20％、20-30％、30-40％、40-50％、50-60％、60-70％、70-80％或80-90％。在某些实施方案中，在联合疗法中，实现抑制作用(例如，生长抑制)所要求的第一治疗药浓度比第一治疗药作为单药疗法的治疗性剂量低，例如，低10-20％、20-30％、30-40％、40-50％、50-60％、60-70％、70-80％或80-90％。
[0186]
术语“抑制”、“抑制剂”或“拮抗剂”包括给定分子(例如，免疫检查点抑制蛋白)的某些参数(例如，活性)降低。例如，这个术语包括抑制至少5％、10％、20％、30％、40％或更多的活性如tim-3活性。因此，抑制不必是100％。
[0187]
术语“激活”、“激活剂”或“激动剂”包括给定分子(例如，刺激分子)的某些参数(例如，活性)升高。例如，这个术语包括升高至少5％、10％、25％、50％、75％或更多的活性，例如，共刺激活性。
[0188]
术语“抗癌作用”指可以通过多种手段展示的生物学效果，包括但不限于，例如，肿瘤体积减少、癌细胞数目减少、转移灶数目减少、预期寿命增加、癌细胞增殖减少、癌细胞存活减少或与癌状况相关的多种生理症状改善。“抗癌作用”也可以通过肽、多核苷酸、细胞和抗体预防癌在首发位置出现的能力展示。
[0189]
术语“抗肿瘤作用”指可以通过多种手段展示的生物学效果，包括但不限于，例如，肿瘤体积减少、肿瘤细胞数目减少、肿瘤细胞增殖减少或肿瘤细胞存活减少。
[0190]
术语“癌症”指以异常细胞快速且失控生长为特征的疾病。癌细胞可以局部地或通过血流和淋巴系统扩散到身体其他部分。本文中描述了各种癌的实例并且它们包括但不限于实体瘤、例如，肺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、皮肤癌、胰腺癌、结直肠癌、肾癌、肝癌及脑癌和血液学恶性病，例如，淋巴瘤和白血病等。术语“肿瘤”和“癌症”在本文中互换地使用，例如，两种术语涵盖实体瘤和液体肿瘤，例如，弥散型或循环型肿瘤。如本文所用，术语“癌症”或“肿瘤”包括恶变前以及恶性癌症和肿瘤。
[0191]
术语“抗原呈递细胞”或“apc”指在其表面上呈递与主要组织相容性复合体(mhc)复合的外来抗原的免疫系统细胞如附属细胞(例如，b细胞、树状细胞等)。t细胞可以使用其t细胞受体(tcr)识别这些复合物。apc加工抗原并将它们呈递至t细胞。
[0192]
术语“共刺激分子”指t细胞上与共刺激配体特异性结合，因而介导通过t细胞的共刺激反应(例如但不限于增殖)的同族结合配偶体。共刺激分子是有效免疫应答所需的除抗原受体或其配体的外的细胞表面分子。共刺激分子包括但不限于mhc i类分子、tnf受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整联蛋白、信号传导性淋巴细胞激活分子(slam蛋白)、nk细胞活化受体，btla、toll配体受体、ox40、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cds、icam-1、lfa-1(cd11a/cd18)、4-1bb(cd137)、b7-h3、cds、icam-1、(cd278)、gitr、baffr、light、hvem(lightr)、kirds2、slamf7、nkp80(klrf1)、nkp44、nkp30、nkp46、cd19、cd4、cd8α、cd8β、il2rβ、il2rγ、il7rα、itga4、vla1、cd49a、itga4、ia4、cd49d、itga6、vla-6、cd49f、itgad、cd11d、itgae、cd103、itgal、cd11a、lfa-1、itgam、cd11b、itgax、cd11c、itgb1、cd29、itgb2、cd18、lfa-1、itgb7、nkg2d、nkg2c、tnfr2、trance/rankl、dnam1(cd226)、slamf4(cd244、2b4)、cd84、cd96(触觉)、ceacam1、crtam、ly9(cd229)、cd160(by55)、psgl1、cd100(sema4d)、cd69、slamf6(ntb-a、ly108)、slam(slamf1、cd150、ipo-3)、blame(slamf8)、selplg(cd162)、ltbr、lat、gads、slp-76、pag/cbp、cd19a，和与cd83特异性结合的配体。
[0193]
如该术语在本文中所用那样，术语“免疫效应细胞”或“效应细胞”指涉及免疫应答，例如涉及促进免疫效应子反应的细胞。免疫效应细胞的实例包括t细胞，例如，α/βt细胞和γ/δt细胞、b细胞、自然杀伤(nk)细胞、自然杀伤t(nkt)细胞、肥大细胞和骨髓源性吞噬细胞。
[0194]
如该术语在本文中所用那样，“免疫效应子”或“效应子”、“功能”或“应答”例如指免疫效应细胞的增强或促进免疫攻击靶细胞的功能或应答。例如，免疫效应子功能或应答指促进杀伤靶细胞或抑制靶细胞生长或增殖的t细胞或nk细胞的特性。在t细胞的情况下，初级刺激和共刺激是免疫效应子功能或应答的例子。
[0195]
术语“效应子功能”指细胞的特化功能。t细胞的效应子功能例如可以是溶细胞活性或辅助活性，包括分泌细胞因子。
[0196]
如本文所用，术语“治疗”和“疗法”指因施用一种或多种疗法而产生减少或改善某
疾病(例如，增生性疾病)的进展、严重程度和/或持续时间，或改善该疾病的一个或多个症状(优选地，一个或多个可察觉症状)。在具体实施方案中，“治疗”和“疗法”指改善增生性疾病的并不必然由患者可察觉的至少一个可度量身体参数，如肿瘤生长。在其他实施方案中，“治疗”和“疗法”指在身体上(例如，通过稳定可察觉症状)、生理上(例如，通过稳定身体参数)或这两方抑制增生性疾病的进展。在其他实施方案中，“治疗”和“疗法”指肿瘤尺寸或癌细胞计数减少或稳定。
[0197]
本发明的组合物、制剂和方法涵盖这样的多肽和核酸，它们具有指定的序列或与其基本上相同或相似的序列，例如，与指定的序列至少85％、90％、95％或更高同一性的序列。在氨基酸序列的情况下，术语“基本上相同”在本文中用来指第一氨基酸序列，所述第一氨基酸序列含有足够或最少数目的i)与第二氨基酸序列中对齐的氨基酸残基相同或ii)作为其保守性取代的氨基酸残基，从而第一和第二氨基酸序列可以具有共同的结构域和/或共同的功能活性。例如，含有与参考序列(例如，本文中提供的序列)具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的共同结构域的氨基酸序列。
[0198]
在核苷酸序列的情况下，术语“基本上相同”在本文中用来指第一核苷酸序列，所述第一核苷酸序列含有足够或最少数目的与第二核苷酸序列中对齐的核苷酸相同的核苷酸，从而第一和第二核苷酸序列编码具有共同功能活性的多肽，或编码共同结构的多肽结构域或共同功能的多肽活性。例如，与参考序列(例如，本文中提供的序列)具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列。
[0199]
术语“功能性变体”指与天然存在序列具有基本上相同氨基酸序列或由基本上相同的核苷酸序列编码并能够具有天然存在序列的一种或多种活性的多肽。
[0200]
如下进行序列之间同源性或序列同一性(这些术语在本文中互换地使用)的计算。
[0201]
为确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分数，将所述序列出于最佳比较目的比对(例如，可以为最佳比对而在第一和第二氨基酸序列或核酸序列的一或二者中引入空位或可以为比较目的而抛弃非同源序列)。在一个优选实施方案中，为比较目的所比对的参考序列的长度是至少30％、优选地至少40％、更优选地至少50％、60％和甚至更优选地至少70％、80％、90％、100％的参考序列长度。随后比较在对应氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置由第二序列中对应位置处的相同氨基酸残基或核苷酸占据时，则所述分子在这个位置处是相同的(如本文所用，氨基酸或核酸“同一性”等同于氨基酸或核酸“同源性”)。
[0202]
考虑到为最佳比对这两个序列而需要引入的空位的数目和每个空位的长度，两个序列之间的同一性百分数随所述序列共有的相同位置变化而变化。
[0203]
可以利用数学算法实现两个序列间的序列比较和同一性百分数的计算。在一个优选实施方案中，使用已经集成至gcg软件包的gap程序中的needlema和wunsch((1970)j.mol.biol.48:444-453)算法(在gcg.com可获得)，使用blossum 62矩阵或pam250矩阵和空位权重16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6，确定两个氨基酸序列之间的同一性百分数。在又一个优选的实施方案中，使用gcg软件包中的gap程序(在gcg.com可获得)，使用nwsgapdna.cmp矩阵和空位权重40、50、60、70或80和长度权重1、2、3、4、5或6，确定两个核苷酸序列之间的同一性百分数。特别优选的参数集合(和除非另外说明否则应当使用的一个参数集合)是采用空位罚分12、空位延伸罚分4和移码空位罚分5的blossum 62评分矩
阵。
[0204]
还可以使用pam120加权余数表、空位长度罚分12，空位罚分4，利用已经并入align程序(2.0版)的e.meyers和w.miller算法,((1989)cabios,4:11-17)确定两个氨基酸序列或核苷酸序列之间的同一性百分数。
[0205]
可以进一步使用本文所述的核酸序列和蛋白质序列作为“查询序列”以针对公共数据库执行检索，以例如鉴定其他家族成员序列或相关序列。例如，可以使用altschul等人(1990)j.mol.biol.215:403-10的nblast及xblast程序(版本2.0)执行此类检索。blast核苷酸检索可以用nblast程序，评分＝100、字长度＝12执行，以获得与本发明核酸(seq id no:1)分子同源的核苷酸序列。blast蛋白质检索可以用xblast程序、评分＝50、字长度＝3执行，以获得与本发明蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了出于比较目的获得带空位的比对结果，可以如altschul等人,(1997)nucleic acids res.25:3389-3402中所述那样使用空位blast。当使用blast和空位blast程序时，可以使用相应程序(例如，xblast和nblast)的默认参数。参见ncbi.nlm.nih.gov。
[0206]
如本文所用，术语“在低严格性、中等严格性、高严格性或极高严格性条件下杂交”描述了杂交和洗涤条件。开展杂交反应的指导可以在通过引用方式并入的current protocols in molecular biology,john wiley&sons,n.y.(1989),6.3.1-6.3.6中找到。参考文献中描述了含水方法和非含水方法，并且可以使用任一方法。本文中提及的特异性杂交条件如下：1)低严格性杂交条件是在约45℃于6x氯化钠/柠檬酸钠(ssc)中，随后至少在50℃(对于低严格性条件，可以增加洗涤的温度至55℃)于0.2x ssc，0.1％sds中洗涤两次；2)中等严格性杂交条件是在约45℃于6x ssc中、随后在60℃在0.2x ssc、0.1％sds中洗涤一次或多次；3)高严格性杂交条件是在约45℃在6x ssc中、随后在65℃于0.2x ssc、0.1％sds中洗涤一次或多次；并且优选地4)极高严格性杂交条件是在65℃于0.5m磷酸钠、7％sds中、随后在65℃于0.2x ssc、1％sds中洗涤一次或多次。极高严格性条件(4)是优选的条件和除非另外说明，否则应当使用的一个条件。
[0207]
可以理解，本发明的分子可以具有额外的保守性或非必需氨基酸取代，这些取代对其功能没有明显影响。
[0208]
术语“氨基酸”意在包括包含氨基官能团和酸官能团并且能够纳入天然存在氨基酸的聚合物中的全部分子，无论是天然或合成的。示例性氨基酸包括天然存在的氨基酸；其类似物、衍生物和同类物；具有变异侧链的氨基酸类似物；和前述任一者的任一个的全部立体异构体。如本文所用，术语“氨基酸”包括d-光学异构体或l-光学异构体和肽模拟物。
[0209]“保守性氨基酸取代”是其中氨基酸残基以具有相似侧链的氨基酸残基替换的取代。已经在本领域中定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电的极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-分支的侧链的氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)，以及具有芳香族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
[0210]
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(如果为单链)在本文中互换地用来指任意长度的氨基酸聚合物。该聚合物可以是线形或分支的，它可以包含修饰的氨基酸，并且它可以由非氨
基酸隔断。该术语也包括已经被修饰(例如，二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作，如以标记组分缀合)的氨基酸聚合物。多肽可以从天然来源分离，可以通过重组技术从真核或原核宿主产生并且可以是合成方法的产物。
[0211]
术语“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”或“多核苷酸序列”和“多核苷酸”互换使用。它们指聚合物形式的任何长度的核苷酸(脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)或其类似物。多核苷酸可以是单链或双链，并且如果为单链，可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，如甲基化核苷酸及核苷酸类似物。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分打断。可以在聚合后进一步修饰多核苷酸，如通过与标记组分缀合。核酸可以是重组多核苷酸或在自然界中不存在或与另一个多核苷酸以非自然布局连接的基因组来源、cdna来源、半合成来源或合成来源的多核苷酸。
[0212]
如本文所用，术语“分离”指从其原始或原初环境(例如，如果它天然存在，天然环境)取出的物质。例如，活动物中存在的天然存在多核苷酸或多肽不是分离的，然而通过人工干预与该天然系统中一些或全部共存物质分开的相同多核苷酸或多肽是分离的。此类多核苷酸可能是载体的一部分和/或此类多核苷酸或多肽可能是组合物的一部分，并且仍是分离的，在于这种载体或组合物不是自然界中找到它的天然环境的一部分。
[0213]
下文进一步详细描述本发明的多个方面。在整个说明书中列出了其他定义。
[0214]
骨髓增生性肿瘤
[0215]
本文所述的组合可用于治疗骨髓增生性肿瘤。骨髓增生性肿瘤(mpn)典型地被认为是由个体骨髓中一种或多种造血细胞谱系的克隆和异常生长和增殖引起的一组血液癌症。常见的骨髓增生性肿瘤包括但不限于骨髓纤维化(mf)(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))、原发性血小板增多症(et)、真性红细胞增多症(pv)。在一些实施方案中，骨髓纤维化的特征在于骨髓中瘢痕组织的过度积聚(纤维化)，从而阻止骨髓产生新血细胞的能力。目前，骨髓纤维化的唯一潜在治愈性治疗是同种异体造血干细胞移植(asct)，绝大多数患者对其不合格。治疗选择仍然主要是治标性的，并且旨在控制疾病症状、并发症和改善患者的生活质量。因此，需要开发用于骨髓纤维化的新型治疗组合物和治疗组合。
[0216]
骨髓纤维化典型地被认为是费城染色体阴性的骨髓增生性肿瘤，其特征在于存在巨核细胞增殖和非典型性，通常伴有网状蛋白和/或胶原蛋白纤维化、脾肿大(例如，由于髓外造血)、贫血(例如，由于骨髓衰竭和脾隔离)和衰弱性体质症状(例如，由于炎性细胞因子的过表达)，包括疲劳、体重减轻、瘙痒、盗汗、发热和骨、肌肉或腹部疼痛。tgf-β是病理性纤维化的重要调节剂，通常在所有纤维化组织中过表达，并且它诱导培养的成纤维细胞中的胶原蛋白产生，而不管其来源如何(lafyatis,nat rev rheumatol.2014；10(12):706-719)。已经鉴定了越来越多的微环境组分，揭示了细胞和基质相互作用和信号传导途径的复杂网络，它们一起产生独特的微环境，其中tgf-β是该环境的组成部分。细胞-细胞和细胞-基质与骨髓的相互作用是潜在tgf-β激活过程的重要组成部分(arranz等人,nature.2014；512(7512):78-81)。tgf-β产生与纤维化疾病的进展相关，并且tgf-β抑制已显示在许多实验模型中减少纤维化过程(massagu
é
,febs lett.2012；586(14):1833)。骨髓微环境及其与tgf-β的相互作用可促进骨髓纤维化(blank和karlsson,blood.2015；125(23):3542-50)。在mpn患者的骨髓中，tgf-β被认为是由造血细胞产生的，并且坏死和活的
巨核细胞是储存在这些骨髓细胞的α-颗粒内的潜伏tgf-β的重要来源(lataillade等人,blood.2008；112(8):3026-35)。总之，这些数据表明tgf-β在骨髓纤维化的病理生理学中起作用，并且可以有益于用抑制剂或用组合疗法阻断tgf-β。
[0217]
在一些实施方案中，将本文所述的化合物和组合(例如tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂；tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂和低甲基化药物；tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂和pd-1抑制剂和任选的低甲基化药物或tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂和il-1β抑制剂和任选的低甲基化药物)施用于患有或被诊断为患有骨髓纤维化(mf)(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))的受试者，其中该受试者在先已经接受或正在接受janus激酶(jak)抑制剂。在一些实施方案中，在受试者接受组合疗法(例如本文所述的组合疗法)之前，施用jak抑制剂至少1个月至至少4个月(例如，至少1个月至至少4个月、至少1个月至至少3个月、至少1个月至至少2个月、至少2个月至至少4个月、至少2个月至至少3个月、至少3个月至至少4个月)。在一些实施方案中，在受试者接受组合疗法(例如本文所述的组合疗法)之前，施用jak抑制剂至少1个月、至少2个月、至少3个月或至少4个月。在一些实施方案中，在受试者接受组合疗法(例如本文所述的组合疗法)之前，施用jak抑制剂至少3个月。在一些实施方案中，在受试者接受组合疗法(例如本文所述的组合疗法)之前，施用jak抑制剂至少28天。
[0218]
不希望受理论束缚，认为在一些实施方案中，用本文所述的化合物和组合治疗可导致输血非依赖性受试者的血红蛋白(hb)的贫血改善≥2.0g/dl，或输血依赖性受试者的血红蛋白(hb)的改善≥1.5g/dl。在一些实施方案中，在治疗后测量脾体积和反应。
[0219]
骨髓增生异常综合征(mds)
[0220]
本文所述的组合可以用于治疗骨髓增生异常综合征(mds)。骨髓增生异常综合征(mds)通常被认为是一组血液学上的异质性疾病。以发育不良和无效造血为特征的恶性肿瘤，其临床表现以骨髓衰竭、外周血血细胞减少为标志。mds分为亚组，包括但不限于极低风险mds、低风险mds、中等风险mds、高风险mds或极高风险mds。在一些实施方案中，mds的特征在于细胞发生异常、骨髓母细胞和血细胞减少。
[0221]
在一些实施方案中，本文所述的组合，例如包含tim-3抑制剂和tgfβ抑制剂的组合用于治疗骨髓增生异常综合征(mds)，例如极低风险mds、低风险mds、中等风险mds、高风险mds或极高风险mds。在一些实施方案中，mds为较低风险mds，例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds。在一些实施方案中，本文所述的组合，例如包含tim-3抑制剂、tgfβ抑制剂和il-1β抑制剂的组合用于治疗骨髓增生异常综合征(mds)，例如极低风险mds、低风险mds、中等风险mds、高风险mds或极高风险mds。在一些实施方案中，mds为较低风险mds，例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds。在一些实施方案中，mds为较高风险mds，例如高风险mds或极高风险mds。在一些实施方案中，国际预后评分系统(ipss-r)上小于或等于1.5分的评分被分类为极低风险mds。在一些实施方案中，国际预后评分系统(ipss-r)上大于2但小于或等于3分的评分被分类为低风险mds。在一些实施方案中，国际预后评分系统(ipss-r)上大于3分但小于或等于4.5分的评分被分类为中等风险mds。在一些实施方案中，国际预后评分系统(ipss-r)上大于4.5但小于或等于6分的评分被分类为高风险mds。在一些实施方案中，国际预后评分系统(ipss-r)上大于6分的评分被分类为极高风险mds。
[0222]
在一些实施方案中，本文所述的组合和化合物可与输血、铁螯合疗法或抗生素或
抗真菌治疗组合使用以治疗mds，例如极低风险mds、低风险mds、中等风险mds、高风险mds或极高风险mds。在一些实施方案中，本文所述的组合和化合物可与红细胞系统刺激剂(esa)组合使用以治疗mds，例如极低风险mds、低风险mds、中等风险mds、高风险mds或极高风险mds。在一些实施方案中，用红细胞系统刺激剂(esa)治疗具有血清促红细胞生成素(epo)水平《500μ/l的患有或诊断患有mds(例如极低风险mds、低风险mds、中风险mds、高风险mds或极高风险mds)的受试者。在一些实施方案中，本文所述的组合和化合物可以与红细胞系统的来那度胺组合使用以治疗mds，例如极低风险mds、低风险mds、中等风险mds、高风险mds或极高风险mds。在一些实施例中，使用来那度胺治疗患有或诊断患有mds(例如极低风险mds、低风险mds、中等风险mds、高风险mds或极高风险mds)的受试者，所述受试者包含5号染色体长臂缺失[del(5q)]。
[0223]
tim-3抑制剂
[0224]
tim-3在aml中大多数cd34+cd38-白血病干细胞(lsc)和cd34+cd38+白血病祖细胞上表达，而不在cd34+cd38正常造血干细胞(hsc)中表达(kikushige等人cell stem cell.2010；7(6):708-717；jan等人proc natl acad sci u s a.2011；108(12):5009-5014)。通过在免疫缺陷鼠宿主中使用抑制人aml的移植物植入和发展的抗-tim-3抗体建立了tim-3在aml中的关键作用的功能证据(kikushige等人cell stem cell.2010；7(6):708-717)。tim-3的上调还与白血病前期的白血病转化相关，包括骨髓增生异常综合征(mds)和骨髓增生性肿瘤(mpn)如慢性髓性白血病(cml)(kikushige等人cell stem cell.2015；17(3):341-352)。还发现mds母细胞上的tim-3表达与疾病进展相关(asayama等人oncotarget.2017；8(51):88904-88917)。
[0225]
除了其对白血病前期和白血病干细胞的细胞自主作用之外，tim-3在免疫系统调节中具有广泛和复杂的作用，在适应性免疫应答(cd4+和cd8+t效应细胞、调节性t细胞)和先天性免疫应答(巨噬细胞、树突细胞、nk细胞)中起作用。tim-3在肿瘤诱导的免疫抑制中具有重要作用，因为它在实体瘤和血液恶性肿瘤的动物模型中标记了最受抑制的或功能失调的cd8+t细胞群体，并且在foxp3+调节性t细胞(treg)上表达，这与许多癌症适应症中的疾病严重程度相关(sakuishi等人j exp med.2010；207(10):2187-2194；zhou等人,blood.2011；117(17):4501-10；gao等人plos one.2012；7(2):e30676；yan等人plos one.2013；8(3):e58006)。tim-3在癌症中耗竭或功能障碍的t细胞上表达，并且来自黑素瘤患者的tim-3+ny-eso-1+t细胞的离体tim-3阻断恢复了ifn-γ和tnf-α的产生以及响应于抗原刺激的增殖(fourcade等人j exp med.2010；207(10):2175-2186)。阻断巨噬细胞和抗原交叉呈递树突细胞上的tim-3增强了活化和炎性细胞因子/趋化因子产生(zhang等人,plos one.2011；6(5):e19664；zhang等人j leukoc biol.2012；91(2):189-96,chiba等人,nat immunol.2012；13(9):832-842；de mingo pulido等人,cancer cell.2018；33(1):60-74.e6)，最终导致效应t细胞应答增强。
[0226]
不希望受理论束缚，据信在一些实施方案中，mf患者中(主要在单核细胞、巨核细胞和血小板中)的组成型jak2/stat3/stat5活化可以通过减少t细胞活化、代谢活性和细胞周期进展来引起tim-3介导的免疫逃逸(可能类似于pd-l1介导的免疫逃逸)。tim-3抑制剂，例如本文所述的抗-tim-3抗体分子，可用于产生针对mf祖细胞的免疫应答，以减少mf患者的疾病负担和进行性疾病。
[0227]
除了其免疫调节作用之外，tim-3在mds中的白血病干细胞上表达。不希望受理论束缚，认为在一些实施方案中，使用tim-3抑制剂(例如本文所述的抗-tim-3抗体)可以恢复患有mds的受试者中的抗肿瘤免疫应答并且靶向mds干细胞。tim-3抑制剂，例如本文所述的抗-tim-3抗体分子，可用于产生针对mds祖细胞的免疫应答，以减少mds患者的疾病负担和进行性疾病。
[0228]
在某些实施方案中，本文所述的组合包括tim-3抑制剂，例如，抗tim-3抗体分子。在一些实施方案中，所述抗tim-3抗体分子与哺乳动物(例如人类)tim-3结合。例如，所述抗体分子特异性地与例如tim-3上的线性或构象表位结合。
[0229]
如本文所用，术语“抗体分子”指包含至少一个免疫球蛋白可变结构域序列的蛋白质，例如，免疫球蛋白链或其片段。术语“抗体分子”例如包括单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白fc区的全长抗体)。在一个实施方案中，抗体分子包括全长抗体或全长免疫球蛋白链。在一个实施方案中，抗体分子包括全长抗体或全长免疫球蛋白链的抗原结合或功能性片段。在一个实施方案中，抗体分子是多特异性抗体分子，例如，它包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中多个免疫球蛋白可变结构域序列的第一免疫球蛋白可变结构域序列具有针对第一表位的结合特异性并且多个免疫球蛋白可变结构域序列的第二免疫球蛋白可变结构域序列具有针对第二表位的结合特异性。在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。
[0230]
在一个实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子并且结合单一表位。例如，单特异性抗体分子可以具有各自结合相同表位的多个免疫球蛋白可变结构域序列。
[0231]
在一个实施方案中，抗体分子是多特异性抗体分子，例如，它包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中多个免疫球蛋白可变结构域序列的第一免疫球蛋白可变结构域序列具有针对第一表位的结合特异性并且多个免疫球蛋白可变结构域序列的第二免疫球蛋白可变结构域序列具有针对第二表位的结合特异性。在一个实施方案中，第一和第二表位在相同抗原(例如，相同蛋白质(或多聚体蛋白的亚基))上。在一个实施方案中，第一和第二表位重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位不重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位在不同抗原(例如，不同蛋白质(或多聚体蛋白的不同亚基))上。在一个实施方案中，多特异性抗体分子包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变结构域。在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子或四特异性抗体分子。
[0232]
在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对不多于两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子以针对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列和针对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列为特征。在一个实施方案中，第一和第二表位在相同抗原(例如，相同蛋白质(或多聚体蛋白的亚基))上。在一个实施方案中，第一和第二表位重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位不重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位在不同抗原(例如，不同蛋白质(或多聚体蛋白的不同亚基))上。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含针对第一表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序以及针对第二表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含针对第一表位具有结合特异性的半部分抗体和针对第二表位具有结合特异性的半部分抗体。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含针对第一表位具有结合特异性的半部分抗
体或其片段和针对第二表位具有结合特异性的半部分抗体或其片段。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含针对第一表位具有结合特异性的scfv或其片段和针对第二表位具有结合特异性的scfv或其片段。在一个实施方案中，第一表位位于tim-3上并且第二表位位于pd-1、lag-3、ceacam(例如，ceacam-1和/或ceacam-5)、pd-l1或pd-l2上。
[0233]
产生多特异性(双特异性或三特异性)或异二聚抗体分子的方案是本领域已知的；包括但不限于，例如，“杵入臼”方案，例如在us 5,731,168中描述；静电导引fc配对，例如，如wo 09/089004、wo 06/106905和wo 2010/129304中所述；链交换工程化的结构域(seed)异二聚体形成，例如，如wo 07/110205中所述；fab臂交换，例如，如wo 08/119353、wo 2011/131746和wo 2013/060867中所述；双抗体缀合物，例如，使用具有胺反应基团和硫氢基反应基团的异双官能试剂，通过抗体交联以产生双特异性结构，例如，如us 4,433,059中所述；通过以下方式产生的双特异性抗体决定簇：借助两条重链之间二硫键的还原和氧化循环重组来自不同抗体的半部分抗体(重链-轻链对或fab)，例如，如us 4,444,878中所述；三功能抗体，例如，通过巯基反应基团交联的三个fab片段，例如，如us 5,273,743中所述；生物合成性结合蛋白，例如，通过c末端尾部、优选地通过二硫键或胺反应性化学交联作用交联的一对scfvs，例如，如us 5,534,254中所述；双功能抗体，例如，通过已经替换恒定结构域的亮氨酸拉链(例如，c-fos和c-jun)二聚化的具有不同结合特异性的fab片段，例如，如us 5,582,996中所述；双特异性和寡特异性单价和寡价受体，例如，经一种抗体的ch1区和另一种抗体的vh区(一般具有缔合的轻链)之间的多肽间隔团连接的两种抗体(两个fab片段)的vh-ch1区域，例如，如us 5,591,828中所述；双特异性dna-抗体缀合物，例如，通过双链dna片段交联抗体或fab片段，例如，如us 5,635,602所述；双特异性融合蛋白，例如，在两个scfv和完整恒定区域之间具有亲水螺旋肽接头的含有两个scfv的表达构建体，例如，如us 5,637,481中所述；多价和多特异性结合蛋白，例如，多肽的二聚体，所述多肽具有含有ig重链可变区的结合区的第一结构域和包含ig轻链可变区的结合区的第二结构域，总体上称作双体抗体(还公开了产生双特异性、三特异性或四特异性分子的高级结构)，例如，如us 5,837,242中所述；vl链和vh链连接的迷你抗体构建体，所述vl链和vh链还借助肽间隔团连接至抗体铰链区和ch3区，所述迷你抗体构建体可以二聚化以形成双特异性/多价分子，例如，如us 5,837,821中所述；在任一个方向用短肽接头(例如，5或10个氨基酸)连接或根本没有接头的vh结构域和vl结构域，所述vh结构域和vl结构域可以形成二聚体以形成双特异性双体抗体；三聚体和四聚体，例如，如us 5,844,094中所述；一系列通过肽键以可交联基团在c末端连接的vh结构域(或家族成员中的vl结构域)，所述结构域进一步与vl结构域缔合以形成一系列fv(或scfv)，例如，如us 5,864,019中所述；和将vh结构域和vl结构域均通过肽接头连接的单一链结合多肽借助非共价交联或化学交联并入多价结构以使用scfv或双体抗体类型样式，形成例如同源双价、异源双价、三价和四价结构，例如，如us 5,869,620中所述。例如，以下文献中找到其他的示例性多特异性和双特异性分子及其制造方法：例如，us5,910,573、us5,932,448、us5,959,083、us5,989,830、us6,005,079、us6,239,259、us6,294,353、us6,333,396、us6,476,198、us6,511,663、us6,670,453、us6,743,896、us6,809,185、us6,833,441、us7,129,330、us7,183,076、us7,521,056、us7,527,787、us7,534,866、us7,612,181、us2002/004587a1、us2002/076406a1、us2002/103345a1、us2003/207346a1、us2003/211078a1、us2004/219643a1、us2004/220388a1、us2004/242847a1、us2005/
003403a1、us2005/004352a1、us2005/069552a1、us2005/079170a1、us2005/100543a1、us2005/136049a1、us2005/136051a1、us2005/163782a1、us2005/266425a1、us2006/083747a1、us2006/120960a1、us2006/204493a1、us2006/263367a1、us2007/004909a1、us2007/087381a1、us2007/128150a1、us2007/141049a1、us2007/154901a1、us2007/274985a1、us2008/050370a1、us2008/069820a1、us2008/152645a1、us2008/171855a1、us2008/241884a1、us2008/254512a1、us2008/260738a1、us2009/130106a1、us2009/148905a1、us2009/155275a1、us2009/162359a1、us2009/162360a1、us2009/175851a1、us2009/175867a1、us2009/232811a1、us2009/234105a1、us2009/263392a1、us2009/274649a1、ep 346087a2、wo 00/06605a2、wo02/072635a2、wo04/081051a1、wo06/020258a2、wo2007/044887a2、wo2007/095338a2、wo2007/137760a2、wo2008/119353a1、wo2009/021754a2、wo2009/068630a1、wo91/03493a1、wo93/23537a1、wo94/09131a1、wo94/12625a2、wo95/09917a1、wo96/37621a2、wo99/64460a1。上述引用申请的内容全部通过引用并入本文。
[0234]
在其他实施方案中，抗tim-3抗体分子(例如，单特异性、双特异性或多特异性抗体分子)共价连接于(例如，融合于)另一个配偶体，例如，蛋白质，例如，一种、两种或更多种细胞因子，例如，作为融合分子，例如融合蛋白。在其他实施方案中，融合分子包含一种或多种蛋白质，例如，一种、两种或更多种细胞因子。在一个实施方案中，细胞因子是选自il-1、il-2、il-12、il-15或il-21中一者、两者、三者或更多者的白介素(il)。在一个实施方案中，双特异性抗体分子具有针对第一靶(例如，针对pd-1)的第一结合特异性、针对第二靶(例如，lag-3或tim-3)的第二结合特异性，并且是任选地与白介素(例如，il-12)结构域(例如，全长il-12或其部分)连接。
[0235]“融合蛋白”和“融合多肽”指具有共价连接在一起的至少两个部分的多肽，其中每个部分是具有不同特性的多肽。特性可以是生物学特性，如体外或体内活性。特性也可以是简单的化学特性或物理特性，如与靶分子结合、催化反应等。这两个部分可以通过单一肽键直接连接或通过肽接头连接，但是彼此符合可读框。
[0236]
在一个实施方案中，抗体分子包含双体抗体(diabody)和单链分子以及抗体的抗原结合片段(例如，fab、f(ab’)2和fv)。例如，抗体分子可以包括重链(h)可变结构域序列(本文中缩写为vh)和轻链(l)可变结构域序列(本文中缩写为vl)。在一个实施方案中，抗体分子包含一条重链和一条轻链或由其组成(在本文中称作半部分抗体)。在另一个例子中，抗体分子包含两个重链(h)可变结构域序列和两个轻链(l)可变结构域序列，因而形成两个抗原结合位点，如fab、fab’、f(ab’)2、fc、fd、fd’、fv、单链抗体(例如scfv)、单一可变域抗体、双体抗体(dab)(双价和双特异性)和嵌合(例如，人源化)抗体，它们可以通过修饰完整抗体产生，或使用重组dna技术从头合成的那些抗体分子。这些功能性抗体片段保留选择性地与其相应抗原或受体结合的能力。抗体和抗体片段可以来自任何抗体类别，包括但不限于igg、iga、igm、igd和ige并且来自任何抗体亚类(例如，igg1、igg2、igg3和igg4)。抗体分子制备物可以是单克隆或多克隆的。抗体分子也可以是人抗体、人源化抗体、cdr移植抗体或体外生成的抗体。抗体可以具有例如选自igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区。抗体还可以具有例如选自κ或λ的轻链。术语“免疫球蛋白”(ig)在本文中与术语“抗体”互换地使用。
[0237]
抗体分子的抗原结合片段实例包括：(i)fab片段，一种由vl、vh、cl和ch1结构域组成的单价片段；(ii)f(ab')2片段，一种包含由二硫键在铰链区连接的两个fab片段的双价片段；(iii)由vh和ch1结构域组成的fd片段；(iv)由抗体单臂的vl和vh结构域组成的fv片段；(v)由vh域组成的双体抗体(dab)片段；(vi)驼类或骆驼化可变结构域；(vii)单链fv(scfv)，参见，例如，bird等人(1988)science 242:423-426；和huston等人(1988)proc.natl.acad.sci.usa 85:5879-5883)；(viii)单结构域抗体。使用本领域技术人员已知的常规技术，获得这些抗体片段，并且按照与完整抗体相同的方式筛选所述片段的用途。
[0238]
术语“抗体”包括完整分子以及其功能性片段。可以改变(例如，突变)抗体的恒定区，旨在修饰抗体的特性(例如，旨在增加或下降以下一个或多个特性：fc受体结合作用、抗体糖基化、半胱氨酸残基数目、效应细胞功能或补体功能)。
[0239]
抗体分子也可以是单结构域抗体。单结构域抗体可以包括其互补决定区是单结构域多肽组成部分的抗体。例子包括但不限于重链抗体、天然缺少轻链的抗体、衍生自常规4-链抗体的单结构域抗体、工程化抗体和除衍生自抗体的那些支架的外的单结构域支架。单结构域抗体可以是现有技术的任何抗体，或将来的任何单结构域抗体。单结构域抗体可以衍生自任何物种，包括但不限于小鼠、人、骆驼、羊驼、鱼类、鲨鱼、山羊、兔和牛。根据本发明的另一个方面，单结构域抗体是天然存在的单结构域抗体，称作缺少轻链的重链抗体。这类单结构域抗体例如在wo 94/04678中公开。出于清晰原因，从天然缺少轻链的重链抗体衍生的这种可变结构域在本文中称作vhh或纳米体，以将它与四链免疫球蛋白的常规vh区分。这种vhh分子可以衍生自骆驼属(camelidae)物种(例如骆驼、羊驼、单峰驼、驼羊和原驼)中产生的抗体。除骆驼的外的其他物种可以产生天然缺少轻链的重链抗体；这类vhh处于本发明的范围内。
[0240]
vh区和vl区可以再划分为超变区，称作“互补性决定区”(cdr)，其间插有更保守的区域，称作“构架区”(fr或fw)。
[0241]
已经通过许多方法(参见，kabat,e.a.等人(1991)sequences of proteins of immunological interest,第5版,美国卫生和公众服务部,nih出版编号91-3242；chothia,c.等人(1987)j.mol.biol.196:901-917；和oxford molecular's abm抗体建模软件所使用的abm定义)精确地界定构架区和cdr的范围。通常参见，例如，protein sequence and structure analysis of antibody variable domains.引自：antibody engineering lab manual(duebel,s.和kontermann,r.编著,springer-verlag,heidelberg)。
[0242]
如本文所用，术语“互补决定区”和“cdr”指在抗体可变区内部赋予抗原特异性和结合亲和力的氨基酸序列。通常，在每个重链可变区中存在三个cdr(hcdr1、hcdr2和hcdr3)并且在每个轻链可变区中存在三个cdr(lcdr1、lcdr2和lcdr3)。
[0243]
可以使用多种熟知方案的任一者，确定给定cdr的精确氨基酸序列界限，所述的熟知方案包括由kabat等人(1991),“sequences of proteins of immunological interest”,第5版,public health service,national institutes of health,bethesda,md(“kabat”编号方案)；al-lazikani等人,(1997)jmb 273,927-948(“chothia”编号方案)描述的那些。如本文所用，“chothia”编号方案的cdr定义有时还称作“高变环”。
[0244]
例如，根据kabat，将重链可变结构域(vh)中的cdr氨基酸残基编号为31-35(hcdr1)、50-65(hcdr2)和95-102(hcdr3)；并且将在轻链可变结构域(vl)中的cdr氨基酸残
基编号为24-34(lcdr1)、50-56(lcdr2)和89-97(lcdr3)。根据chothia，将vh中的cdr氨基酸编号为26-32(hcdr1)、52-56(hcdr2)和95-102(hcdr3)；并且将vl中的氨基酸残基编号为26-32(lcdr1)、50-52(lcdr2)和91-96(lcdr3)。通过组合kabat和chothia二者的cdr定义，cdr由人vh中的氨基酸残基26-35(hcdr1)、50-65(hcdr2)和95-102(hcdr3)以及人vl中的氨基酸残基24-34(lcdr1)、50-56(lcdr2)和89-97(lcdr3)组成。
[0245]
通常，除非专门指出，否则抗tim-3抗体分子可包括一种或多种kabat cdr和/或chothia高变环(例如，表1中所述)的任何组合。在一个实施方案中，以下定义用于表1中所述的抗tim-3抗体分子：根据kabat和chothia的联合cdr定义的hcdr1，和根据kabat的cdr定义的hccdrs 2-3和lccdrs 1-3。根据全部定义，每个vh和vl一般包含按以下顺序从氨基端至羧基端排列的三个cdr和四个fr：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。
[0246]
如本文所用，“免疫球蛋白可变结构域序列”指可以形成免疫球蛋白可变结构域的结构的氨基酸序列。例如，该序列可以包括天然存在的可变结构域的全部或部分氨基酸序列。例如，该序列可以包括或可以不包括一个、两个或更多个n-或c端氨基酸或可以包括与蛋白质结构的形成相容的其他改变。
[0247]
术语“抗原结合位点”指包含决定簇的抗体分子组成部分，所述决定簇形成与tim-3多肽或其表位结合的界面。相对于蛋白质(或蛋白质模似物)而言，抗原结合位点一般包括形成与tim-3多肽结合的界面的一个或多个环(具有至少四个氨基酸或氨基酸模拟物)。一般，抗体分子的抗原结合位点包含至少一个或两个cdr和/或高变环或更一般地至少三、四、五或六个cdr和/或高变环。
[0248]
术语“竞争”或“交叉竞争”在本文中可互换地用来指抗体分子干扰抗tim-3抗体分子(例如，本文中提供的抗tim-3抗体分子)与靶(例如，人tim-3)结合的能力。对结合作用的干扰可以是直接或间接的(例如，通过抗体分子或靶的变构调节作用)。可以使用竞争结合测定法(例如，facs测定法、elisa或biacore测定法)确定抗体分子能够干扰另一种抗体分子与其靶结合的程度并且是否因此可以称它为竞争。在一些实施方案中，竞争结合测定法是定量性竞争测定法。在一些实施方案中，当第一抗tim-3抗体分子在竞争结合测定法(例如，本文所述的竞争测定法中)与靶的结合减少10％或更多，例如，20％或更多、30％或更多、40％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多、98％或更多、99％或更多时，将第一抗tim-3抗体分子称作与第二抗tim-3抗体分子竞争结合于靶。
[0249]
如本文所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”指具有单一分子组成的抗体分子的制备物。一种单克隆抗体组合物对特定表位显示单一结合特异性和亲和力。单克隆抗体可以通过杂交瘤技术或通过不使用杂交瘤技术的方法(例如，重组方法)产生。
[0250]“有效人源化(effectively human)”蛋白质是不激发中和抗体反应(例如，人抗鼠抗体例如(hama)反应)的蛋白质。例如，如果反复施用抗体分子(例如，在治疗慢性或复发性疾病状况下)，则hama可以在许多情景下棘手。hama反应可以令重复的抗体施用潜在地无效，原因是抗体从血清中的清除增加(参见，例如，saleh等人cancer immunol.immunother32:180-190(1990))并且还因为潜在过敏反应(参见，例如，lobuglio等人hybridoma,5:5117-5123(1986))。
[0251]
抗体分子可以是多克隆或单克隆抗体。在其他实施方案中，可以重组地产生抗体，
例如，通过噬菌体展示法或通过组合方法产生。
[0252]
产生抗体的噬菌体展示法和组合方法是本领域已知的(如以下文献中所述，例如，ladner等人美国专利号5,223,409；kang等人国际公开号wo 92/18619；dower等人国际公开号wo 91/17271；winter等人国际公开wo 92/20791；markland等人国际公开号wo 92/15679；breitling等人国际公开wo 93/01288；mccafferty等人国际公开号wo 92/01047；garrard等人国际公开号wo 92/09690；ladner等人国际公开号wo 90/02809；fuchs等人(1991)bio/technology 9:1370-1372；hay等人(1992)hum antibod hybridomas 3:81-85；huse等人(1989)science 246:1275-1281；griffths等人(1993)embo j 12:725-734；hawkins等人(1992)j mol biol 226:889-896；clackson等人(1991)nature 352:624-628；gram等人(1992)pnas 89:3576-3580；garrad等人(1991)bio/technology 9:1373-1377；hoogenboom等人(1991)nuc acid res 19:4133-4137；和barbas等人(1991)pnas 88:7978-7982，所述全部文献的内容均通过引用的方式并入本文)。
[0253]
在一个实施方案中，抗体是全人抗体(例如，在已经被基因工程化，以从人免疫球蛋白序列产生抗体的小鼠中产生的抗体)或非人类抗体，例如，啮齿类(小鼠或大鼠)抗体、山羊抗体、灵长类(例如，猴)抗体、骆驼抗体。优选地，非人类抗体是啮齿类(小鼠或大鼠)抗体。产生啮齿类抗体的方法是本领域已知的。
[0254]
可以使用携带人免疫球蛋白基因而非小鼠系统的转基因小鼠，产生人单克隆抗体。采用目的抗原免疫的这些转基因小鼠的脾细胞用来产生杂交瘤，所述杂交瘤分泌对来自人蛋白质的表位具有特异性亲和力的人mab(参见，例如，wood等人,国际申请wo 91/00906；kucherlapati等人,pct公开wo 91/10741；lonberg等人,国际申请wo 92/03918；kay等人,国际申请92/03917；lonberg,n.等人(1994)nature 368:856-859；green,l.l.等人1994nature genet.7:13-21；morrison,s.l.等人1994proc.natl.acad.sci.usa 81:6851-6855；bruggeman等人1993year immunol 7:33-40；tuaillon等人1993pnas 90:3720-3724；bruggeman等人1991eur j immunol 21:1323-1326)。
[0255]
抗体可以是其中可变区或其部分(例如，cdr)在非人类生物(例如，大鼠或小鼠)中生成的一种抗体。嵌合抗体、cdr移植抗体和人源化抗体处于本发明范围内。在非人类生物(例如，大鼠或小鼠)中生成并且随后在可变构架或恒定区中修饰以减少人类中抗原性的抗体处于本发明范围内。
[0256]
可以通过本领域已知的重组dna技术产生嵌合抗体(参见robinson等人，国际专利公布pct/us86/02269；akira等人，欧洲专利申请184,187；taniguchi.m.，欧洲专利申请171,496；morrison等人，欧洲专利申请173,494；neuberger等人，国际申请wo 86/01533；cabilly等人，美国专利号4,816,567；cabilly等人，欧洲专利申请125,023；better等人,(1988science 240:1041-1043)；liu等人(1987)pnas 84:3439-3443；liu等人(1987)j.immunol.139:3521-3526；sun等人(1987)pnas 84:214-218；nishimura等人(1987)canc.res.47:999-1005；wood等人(1985)nature 314:446-449；和shaw等人1988j.natl cancer inst.80:1553-1559)。
[0257]
人源化抗体或cdr移植抗体将使得至少一个或两个、但是通常全部三个(免疫球蛋白重链和或轻链的)受者cdr替换为供者cdr。抗体可以更换为非人类cdr的至少一部分或仅一些cdr可以更换为非人类cdr。仅需要更换人源化抗体与pd-1结合所需要的cdr数目。优选
地，供者将是啮齿类抗体，例如，大鼠或小鼠抗体，并且受者将是人类构架或人共有构架。一般，提供cdr的免疫球蛋白称作“供者”并且提供构架的免疫球蛋白称作“接纳体”。在一个实施方案中，供者免疫球蛋白是非人类(例如，啮齿类)的。接纳体构架是天然存在的(例如，人类构架或共有构架或与之约85％或更高、优选地90％、95％、99％或更高同一性的序列)。
[0258]
如本文所用，术语“共有性序列”指从相关序列家族中最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)中形成的序列(参见，例如，winnaker,from genes to clones(verlagsgesellschaft,weinheim,德国1987))。在蛋白家族中，共有序列中的每个位置由该家族中这个位置处出现最频繁的氨基酸占据。如果两个氨基酸以相同频率出现，则可以在共有序列中包括任一个。“共有性构架”指共有性免疫球蛋白序列中的构架区。
[0259]
抗体可以通过本领域已知的方法人源化(参见，例如，morrison,s.l.1985science 229:1202-1207；通过oi等人1986biotechniques 4:214并且通过queen等人us 5,585,089、us 5,693,761和us 5,693,762，所述全部文献的内容因而通过引用的方式并入)。
[0260]
可以通过cdr移植或cdr置换产生人源化抗体或cdr移植抗体，其中可以替换免疫球蛋白链一个、两个或全部cdr。参见，例如，美国专利5,225,539；jones等人1986nature 321:552-525；verhoeyan等人1988science 239:1534；beidler等人1988j.immunol.141:4053-4060；winter us 5,225,539，所述全部文献的内容因而明确地通过引用的方式并入。winter描述了一种可以用来制备本发明人源化抗体的cdr移植方法(1987年3月26日提交的英国专利申请gb 2188638a；winter us 5,225,539)，所述文献的内容明确地通过引用的方式并入。
[0261]
也处于本发明的范围内是其中已经取代、缺失或添加特定氨基酸的人源化抗体。从供者选择氨基酸的标准在us 5,585,089，例如，us 5,585,089的第12-16栏，例如，us 5,585,089的第12-16栏中描述，所述文献的内容因而通过引用的方式并入。1992年12月23日公开的padlan等人ep 519596a1中描述了使抗体人源化的其他技术。
[0262]
抗体分子可以是单链抗体。单链抗体(scfv)可以工程化(参见，例如，colcher,d.等人(1999)ann n y acad sci 880:263-80；和reiter,y.(1996)clin cancer res 2:245-52)。单链抗体可以二聚化或多聚化以产生对相同靶蛋白的不同表位具有特异性的多价抗体。
[0263]
在另外的其他实施方案中，抗体分子具有例如选自igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd和ige的重链恒定区中；特别地，例如选自igg1、igg2、igg3和igg4的(例如，人)重链恒定区中的重链恒定区。在另一个实施方案中，抗体分子具有例如选自κ或λ的(例如，人)轻链恒定区中的轻链恒定区。可以改变恒定区，旨在修饰抗体的特性(例如，旨在增加或下降以下一个或多个特性：fc受体结合作用、抗体糖基化、半胱氨酸残基数目、效应细胞功能和/或补体功能)。在一个实施方案中抗体具有：效应子功能；并且可以固定补体。在其他实施方案中抗体不；招募效应细胞；或不固定补体。在另一个实施方案中，抗体具有结合fc受体的减弱能力或没有这种能力。例如，它是不支持与fc受体结合的同种型或亚型、片段或其他突变体，例如，它具有诱变的或缺失的fc受体结合区域。
[0264]
用于改变抗体恒定区的方法是本领域已知的。可以通过将抗体恒定部分中的至少一个氨基酸残基替换为不同残基，产生功能改变(例如，对效应子配体(如细胞上的fcr或补体c1组分)的亲和力改变)的抗体(参见，例如，ep 388,151a1、美国专利号5,624,821和美国
专利号5,648,260，所述全部文献的内容因而通过引用的方式并入)。可以描述相似类型的改变，其中如果应用于鼠或其他物种免疫球蛋白，所述改变将减少或消除这些功能。
[0265]
抗体分子可以用另一种功能分子(例如，另一种肽或蛋白质)衍生化或与其连接。如本文所用，“衍生化的”抗体分子是已经被修饰的一种抗体分子。衍生化方法包括但不限于添加荧光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或亲和配体如生物素。因此，本发明的抗体分子意在包括衍生化和否则修饰形式的本文所述抗体，包括免疫黏附分子。例如，抗体分子可以功能性连接(通过化学偶联、遗传融合、非共价结合或其他方式)至一个或多个其他分子实体，如另一种抗体(例如，双特异性抗体或双体抗体)、可检测物质、细胞毒药物、药物活性剂和/或可以介导所述抗体或抗体部分与另一种分子结合的蛋白质或肽(如，链霉亲和素核心区或多组氨酸标签)。
[0266]
通过交联两种或更多种抗体(相同类型或不同类型，例如，以产生双特异性抗体)产生一个类型的衍生化抗体分子。合适的交联剂包括这些试剂，它们是异双官能的，具有由适宜间隔序列分隔的两个不同反应性基团(例如，间-马来酰亚胺基苯甲酰-n-羟基琥珀酰亚胺酯)，或同双官能的(例如，辛二酸二琥珀酰亚胺酯)。这类接头从pierce chemical company,rockford,ill可获得。
[0267]
可以用其衍生(或标记)化本发明的抗体分子的可用可检测物质包括荧光化合物、多种酶、辅基、发光物质、生物发光物质、发射荧光的金属原子，例如，铕(eu)和其他镧系元素和放射性物质(下文描述)。示例性荧光的可检测物质包括荧光素、荧光素异硫氰酸酯、罗丹明、5-二甲胺-1-萘磺酰氯、藻红蛋白等。抗体也可以用可检测的酶，如碱性磷酸酶、辣根过氧化酶、β-半乳糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖氧化酶等衍生化。当抗体用可检测的酶衍生化时，通过添加这种酶用来产生可检测反应产物的额外试剂而检测所述抗体。例如，当可检测物质辣根过氧化酶存在时，添加过氧化氢和二氨基联苯胺导致有色的反应产物，其是可检测的。抗体分子也可以用辅基(例如，链霉亲和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素)衍生化。例如，抗体可以用生物素衍生化并且通过间接测量抗生物素蛋白或链霉亲和素结合作用而检出。合适荧光物质的例子包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光物质的例子包括鲁米诺；和生物发光物质的例子包括萤光素酶、萤光素和水母发光蛋白。
[0268]
标记的抗体分子可以在多种背景下例如诊断性和/或实验性使用，所述背景包括(i)通过标准技术(如亲和色谱或免疫沉淀法)分离预定的抗原；(ii)检测(例如，细胞裂解物或细胞上清液中)的预定抗原，以评价蛋白质的丰度和表达模式；(iii)作为临床检验方法的组成部分，监测组织中的蛋白质水平，例如，以便确定给定治疗方案的功效。
[0269]
抗体分子可以缀合至另一个分子实体，一般为标记物或治疗药(例如，细胞毒或细胞抑制药物)或部分。放射性同位素可以用于诊断应用或治疗应用中。
[0270]
本发明提供放射标记的抗体分子和标记放射标记的抗体分子的方法。在一个实施方案中，公开了一种标记抗体分子的方法。该方法包括使抗体分子与螯合剂接触，因而产生缀合的抗体。
[0271]
如上文讨论，抗体分子可以缀合至治疗药。已经提到有治疗活性的放射性同位素。其他治疗药的例子包括紫杉酚、松胞菌素b、短杆菌肽d、溴化乙锭、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、多柔比星、佐柔比星、二羟基炭疽菌素二酮、
米托蒽醌、光神霉素、放线菌素d、1-脱氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔、嘌呤霉素、类美登素(maytansinoid)，例如，美登醇(例如，参见美国专利号5,208,020)、cc-1065(例如，参见美国专利号5,475,092、5,585,499、5,846,545)及其类似物或同源物。治疗药包括但不限于抗代谢物(例如，甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪)、烷基化剂(例如，氮芥、硫代苯丁酸氮芥、cc-1065、美法仑、卡莫司汀(bsnu)和罗莫司汀(ccnu)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、丝裂霉素c和顺-二氯二胺铂(ii)(ddp)顺铂)、蒽环类(例如，佐柔比星(以前柔红霉素)和多柔比星)、抗生素(例如，更生霉素(dactinomycin)(前称放线菌素d)、博来霉素、光神霉素和安曲霉素(amc))和抗有丝分裂剂(例如，长春新碱、长春碱、紫杉醇和类美登素)。
[0272]
在一个方面，本公开提供一种与本文公开的靶(例如，tim-3)特异性结合的靶结合性分子的方法。例如，靶结合性分子是抗体分子。该方法包括：提供包含非人类蛋白质的至少一部分的靶蛋白，所述部分与人类靶蛋白的相应部分同源(与其至少70％、75％、80％、85％、87％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％相同)，但是差异至少一个氨基酸(例如，至少一、二、三、四、五、六、七、八或九个氨基酸)；获得与抗原特异性结合的抗体分子；并且评价结合物调节靶蛋白活性的功效。该方法还可以包括施用结合物(例如，抗体分子)或衍生物(例如，人源化抗体分子)至人类受试者。
[0273]
本公开提供编码上述抗体分子的分离的核酸分子、其载体和宿主细胞。核酸分子包括但不限于rna、基因组dna和cdna。
[0274]
示例性tim-3抑制剂
[0275]
在某些实施方案中，本文所述的组合包含抗tim-3抗体分子。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子于2015年8月6日公开的名为“针对tim3的抗体分子及其用途”的us2015/0218274中公开，其整体通过引用并入。
[0276]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个互补决定区(或总体上全部cdr)，所述重链可变区和轻链可变区包含表1中所示(例如，来自表1中公开的abtim3-hum11或abtim3-hum03的重链可变区序列和轻链可变区序列)的氨基酸序列或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方案中，根据kabat定义(例如，如表1中所述)限定cdr。在一些实施方案中，根据chothia定义(例如，如表1中所述)限定cdr。在一个实施方案中，相对于表1中所示的或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个cdr(或总体上全部cdr)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸取代(例如，保守性氨基酸取代)或缺失。
[0277]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，所述重链可变区包含seq id no:801的vhcdr1氨基酸序列、seq id no:802的vhcdr2氨基酸序列和seq id no:803的vhcdr3氨基酸序列；所述轻链可变区包含seq id no:810的vlcdr1氨基酸序列、seq id no:811的vlcdr2氨基酸序列和seq id no:812的vlcdr3氨基酸序列，其各自在表1中公开。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，所述重链可变区包含seq id no:801的vhcdr1氨基酸序列、seq id no:820的vhcdr2氨基酸序列和seq id no:803的vhcdr3氨基酸序列；所述轻链可变区包含seq id no:810的vlcdr1氨基酸序列、seq id no:811的vlcdr2氨基酸序列和seq id no:812的
vlcdr3氨基酸序列，其各自在表1中公开。
[0278]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含vh，所述vh包含seq id no:806的氨基酸序列或与seq id no:806具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含vl，所述vl包含seq id no:816的氨基酸序列或与seq id no:816具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含vh，所述vh包含seq id no:822的氨基酸序列或与seq id no:822具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。
[0279]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含vl，所述vl包含seq id no:826的氨基酸序列或与seq id no:826具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含vh和vl，所述vh包含seq id no:806的氨基酸序列，所述vl包含seq id no:816的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含vh和vl，所述vh包含seq id no:822的氨基酸序列，所述vl包含seq id no:826的氨基酸序列。
[0280]
在一个实施方案中，抗体分子包含vh，所述vh由seq id no:807的核苷酸序列或与seq id no:807具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含vl，所述vl由seq id no:817的核苷酸序列或与seq id no:817具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含vh，所述vh由seq id no:823的核苷酸序列或与seq id no:823具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含vl，所述vl由seq id no:827的核苷酸序列或与seq id no:827具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:807的核苷酸序列编码的vh和由seq id no:817的核苷酸序列编码的vl。在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:823的核苷酸序列编码的vh和由seq id no:827的核苷酸序列编码的vl。
[0281]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含重链，所述重链包含seq id no:808的氨基酸序列或与seq id no:808具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含轻链，所述轻链包含seq id no:818的氨基酸序列或与seq id no:818具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含重链，所述重链包含seq id no:824的氨基酸序列或与seq id no:824具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含轻链，所述轻链包含seq id no:828的氨基酸序列或与seq id no:828具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含seq id no:808的氨基酸序列，所述轻链包含seq id no:818的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含seq id no:824的氨基酸序列，所述轻链包含seq id no:828的氨基酸序列。
[0282]
在一个实施方案中，抗体分子包含重链，所述重链由seq id no:809的核苷酸序列或与seq id no:809具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由seq id no:819的核苷酸序列或与seq id no:819具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案
中，抗体分子包含重链，所述重链由seq id no:825的核苷酸序列或与seq id no:825具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含轻链，所述轻链由seq id no:829的核苷酸序列或与seq id no:829具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:809的核苷酸序列编码的重链和由seq id no:819的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:825的核苷酸序列编码的重链和由seq id no:829的核苷酸序列编码的轻链。
[0283]
可以通过us 2015/0218274中描述的载体、宿主细胞和方法产生本文所述的抗体分子，其整体通过引用并入。
[0284]
表1.示例性抗tim-3抗体分子的氨基酸和核苷酸序列
[0285][0286]
[0287]
[0288]
[0289]
[0290]
hum02、abtim3-hum03、abtim3-hum04、abtim3-hum05、abtim3-hum06、abtim3-hum07、abtim3-hum08、abtim3-hum09、abtim3-hum10、abtim3-hum11、abtim3-hum12、abtim3-hum13、abtim3-hum14、abtim3-hum15、abtim3-hum16、abtim3-hum17、abtim3-hum18、abtim3-hum19、abtim3-hum20、abtim3-hum21、abtim3-hum22、abtim3-hum23中任一者的抗体)的重链可变区和/或轻链可变区；或如us 2015/0218274的表1-表4中所述；或由表1-表4中的核苷酸序列编码；或包括与前述任何序列基本相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。
[0294]
在又一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含来自重链可变区的至少一个、两个或三个cdr(或总体上全部cdr)，所述重链可变区包含在us 2015/0218274的表1-表4中显示或由表1-表4中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一个实施方案中，相对于表1-表4中显示或由表1-表4中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个cdr(或总体上全部cdr)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸取代或缺失。
[0295]
在又一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含来自轻链可变区的至少一个、两个或三个cdr(或总体上全部cdr)，所述轻链可变区包含在us 2015/0218274的表1-表4中显示或由表1-表4中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一个实施方案中，相对于表1-表4中显示或由表1-表4中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个cdr(或总体上全部cdr)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸取代或缺失。在某些实施方案中，抗tim-3抗体分子包括在轻链cdr中的置换，例如，在轻链的cdr1、cdr2和/或cdr3中的一个或多个置换。
[0296]
在另一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个五个或六个cdr(或总体上全部cdr)，所述重链可变区和轻链可变区包含在us 2015/0218274的表1-表4中显示或由表1-表4中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一个实施方案中，相对于表1-表4中显示或由表1-表4中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个cdr(或总体上全部cdr)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如，氨基酸取代或缺失。
[0297]
在另一个实施方案中，所述抗tim3抗体分子为mbg453，mbg453是一种高亲和力、阻断配体、人源化的抗tim-3igg4抗体，可阻断tim-3与磷脂酰丝氨酸(ptdser)的结合。mbg453也称作萨巴托利单抗(sabatolimab)。
[0298]
在一些实施方案中，以约300mg-约900mg,例如300mg-约800mg、约300mg-约700mg、约300mg-约600mg、约300mg-约500mg、约300mg-约400mg、约400mg-约900mg、约400mg-约800mg、约400mg-约700mg、约400mg-约600mg、约400mg-约500mg、约500mg-约900mg、约500mg-约800mg、约500mg-约700mg、约500mg-约600mg、约600mg-约900mg、约600mg-约800mg、约600mg-约700mg、约700mg-约900mg、约700mg-约800mg、或约800mg-约900mg的剂量施用tim-3抑制剂(例如mbg453)。在一些实施方案中，以约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg或约900mg的剂量施用tim-3抑制剂(例如mbg453)。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)每3周施用1次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)每4周施用1次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)每6周施用1次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)每8周施用1次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)以800mg的剂量每4周施用1次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如
mbg453)以800mg的剂量每8周施用1次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)以600mg的剂量每3周施用1次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)以600mg的剂量每6周施用1次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)以400mg的剂量每3周施用1次。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)以400mg的剂量每4周施用1次。
[0299]
其他示例性tim-3抑制剂
[0300]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子是tsr-022(anaptysbio/tesaro)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含tsr-022的cdr序列的一者或多者(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含ape5137或ape5121的cdr序列的一者或多者(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列，例如，如表2中公开。wo 2016/161270中公开了ape5137、ape5121和其他抗tim-3抗体，其整体通过引用并入。
[0301]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子是抗体克隆f38-2e2。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含f38-2e2的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0302]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为ly3321367(eli lilly)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含ly3321367的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0303]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为sym023(symphogen)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含sym023的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0304]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为bgb-a425(beigene)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含bgb-a425的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0305]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为incagn-2390(agenus/incyte)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含incagn-2390的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0306]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为mbs-986258(bms/five prime)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含mbs-986258的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0307]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为ly-3415244(eli lilly)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含ly-3415244的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0308]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为ro-7121661(roche)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含ro-7121661的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0309]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为bc-3402(wuxi zhikanghongyi biotechnology，无锡智康弘毅生物科技有限公司)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含bc-3402(的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0310]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子为shr-1702(medicine co ltd.，医药有限公司)。在一个实施方案中，抗tim-3抗体分子包含shr-1702的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。例如，在wo 2020/038355中公开了shr-1702，其内容通过引用整体并入本文。
[0311]
其他已知的抗tim-3抗体包括例如wo 2016/111947、wo 2016/071448、wo 2016/144803、us 8552156、us 8841418和us 9163087中所述抗体，其整体通过引用并入。
[0312]
在一个实施方案中，抗tim-3抗体是与本文所述的抗tim-3抗体之一竞争结合和/或结合tim-3上相同表位的抗体。
[0313]
表2.其他示例性抗tim-3抗体分子的氨基酸序列
[0314][0315]
制剂
[0316]
可以将本文所述的抗tim-3抗体分子配制成适于施用(例如，经静脉内施用)至如本文所述的受试者的制剂(例如，剂量制剂或剂型)。本文所述的制剂可以是液态制剂、冻干制剂或复配制剂。
[0317]
在某些实施方案中，制剂是液态制剂。在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含抗tim-3抗体分子(例如，本文所述的抗tim-3抗体分子)和缓冲剂。
[0318]
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含以25mg/ml至250mg/ml，例如，50mg/ml至200mg/ml、60mg/ml至180mg/ml、70mg/ml至150mg/ml、80mg/ml至120mg/ml、90mg/ml至110mg/ml、50mg/ml至150mg/ml、50mg/ml至100mg/ml、150mg/ml至200mg/ml或100mg/ml至200mg/ml，例如，50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、110mg/ml、120mg/ml、130mg/ml、140mg/ml或150mg/ml的浓度存在的抗tim-3抗体分子。在某些实施方案中，抗tim-3抗体分子以80mg/ml至120mg/ml，例如，100mg/ml的浓度存在。
[0319]
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含缓冲剂，所述缓冲剂包含组氨酸(例如，组氨酸缓冲剂)。在某些实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)以1mm至100mm，例如，2mm至50mm、5mm至40mm、10mm至30mm、15至25mm、5mm至40mm、5mm至30mm、5mm至20mm、5mm至10mm、40mm至50mm、30mm至50mm、20mm至50mm、10mm至50mm或5mm至50mm，例如，2mm、5mm、10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm或50mm的浓度存在。在一些实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)以15mm至25mm(例如，20mm)的浓度存在。在其他实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)具有4至7，例如，5至6，例如，5、5.5或6的ph。在一些实施方案中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲剂)具有5至6，例如，5.5的ph。在某些实施方案中，缓冲剂以15mm至
25mm(例如，20mm)的浓度包含组氨酸缓冲剂并且具有5至6(例如，5.5)的ph。在某些实施方案中，缓冲剂包括组氨酸和盐酸组氨酸。
[0320]
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含以80至120mg/ml(例如，100mg/ml)的浓度存在的抗tim-3抗体分子；和以15mm至25mm(例如，20mm)的浓度包含组氨酸缓冲液并且具有5至6(例如，5.5)的ph的缓冲剂。
[0321]
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)还包含碳水化合物。在某些实施方案中，碳水化合物是蔗糖。在一些实施方案中，碳水化合物(例如，蔗糖)以50mm至500mm，例如，100mm至400mm、150mm至300mm、180mm至250mm、200mm至240mm、210mm至230mm、100mm至300mm、100mm至250mm、100mm至200mm、100mm至150mm、300mm至400mm、200mm至400mm或100mm至400mm，例如，100mm、150mm、180mm、200mm、220mm、250mm、300mm、350mm或400mm的浓度存在。在一些实施方案中，制剂包含以200mm至250mm(例如，220mm)的浓度存在的碳水化合物或蔗糖。
[0322]
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含以80至120mg/ml(例如，100mg/ml)的浓度存在的抗tim-3抗体分子；以15mm至25mm(例如，20mm)的浓度包含组氨酸缓冲液并具有5至6(例如，5.5)的ph的缓冲剂；和以200mm至250mm(例如，220mm)的浓度存在的碳水化合物或蔗糖。
[0323]
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)还包含表面活性剂。在某些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20。在一些实施方案中，表面活性剂或聚山梨醇酯20以0.005％至0.1％(w/w)，例如，0.01％至0.08％、0.02％至0.06％、0.03％至0.05％、0.01％至0.06％、0.01％至0.05％、0.01％至0.03％、0.06％至0.08％、0.04％至0.08％或0.02％至0.08(％w/w))，例如，0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％(w/w)的浓度存在。在一些实施方案中，制剂包含以0.03％至0.05％(例如，0.04％)的浓度(w/w)存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
[0324]
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含以80至120mg/ml(例如，100mg/ml)的浓度存在的抗tim-3抗体分子；以15mm至25mm(例如，20mm)的浓度包含组氨酸缓冲液并且具有5至6(例如，5.5)的ph的缓冲剂；以200mm至250mm(例如，220mm)的浓度存在的碳水化合物或蔗糖，和以0.03％至0.05％(例如，0.04％(w/w))的浓度存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
[0325]
在一些实施方案中，制剂(例如，液态制剂)包含以100mg/ml的浓度存在的抗tim-3抗体分子；以20mm的浓度包含组氨酸缓冲剂(例如，组氨酸/盐酸组氨酸)并且具有5至6(例如，5.5)的ph的缓冲剂；以220mm的浓度存在的碳水化合物或蔗糖，和以0.04％(w/w)的浓度存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
[0326]
本文所述的制剂可以储存在容器中。用于本文所述的任何制剂的容器可以例如包括小瓶，和任选地，瓶塞、盖或这两者。在某些实施方案中，小瓶是玻璃小瓶，例如，6r白色玻璃小瓶。在其他实施方案中，瓶塞是橡胶瓶塞，例如，灰色橡胶瓶塞。在其他实施方案中，盖是钳口盖，例如，铝钳口盖。在一些实施方案中，容器包括6r白色玻璃小瓶、灰色橡胶瓶塞和铝钳口盖。在一些实施方案中，容器(例如，小瓶)是一次性使用容器。在某些实施方案中，25mg/ml至250mg/ml，例如，50mg/ml至200mg/ml、60mg/ml至180mg/ml、70mg/ml至150mg/ml、80mg/ml至120mg/ml、90mg/ml至110mg/ml、50mg/ml至150mg/ml、50mg/ml至100mg/ml、
150mg/ml至200mg/ml或100mg/ml至200mg/ml，例如，50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、110mg/ml、120mg/ml、130mg/ml、140mg/ml或150mg/ml的抗tim-3抗体分子存在于容器(例如，小瓶)中。
[0327]
在另一方面，本发明的特征在于包括本文所述的抗tim-3抗体分子、组合物或制剂的治疗药盒，以及例如根据本文所述的剂量方案的使用说明。
[0328]
tgf-β抑制剂
[0329]
在患有原发性骨髓纤维化(pmf)的患者中，已经证实血清和骨髓中tgf-β1的水平增加与骨髓纤维化和白细胞细胞浸润的程度相关，且来自临床前模型的数据建立了tgf-β在疾病进展中的重要作用。特别地，tgf-β1与i、iii和iv型胶原蛋白以及其他胞外基质蛋白例如纤连蛋白和腱糖蛋白的合成增加相关，所有元件均活动性沉积并且蓄积在患有pmf的患者的骨髓中，由此牵涉骨髓纤维化发病机理中的tgf-β(tefferi,j clin oncol.2005；23(33):8520-8530)。因此，在血小板生成素高的小鼠中，证实缺乏tgf-β1可以防止骨髓纤维化发生，但骨髓增生综合征发展(chagraoui等人,blood.2002；100(10):3495-3503)。在另一种pmf小鼠模型，gata1-低的小鼠中报道了类似的相关性，其中tgf-β受体激酶活性的药理学抑制被证明可以减少骨髓中的纤维化和骨发生(zingariello等人blood.2013；121(17):3345-3363)。此外。tgf-β抑制显著减少了jak2 v617f+和mf小鼠模型中的纤维化(agarwal等人,stem cell investig.2016；3:5；zingariello等人blood.2013；121(17):3345-3363)。基于这些观察结果，目前正在对患有严重级别pmf的患者进行针对tgf-β1和-β3的tgf-β阱的评估(clinicaltrials.gov identifier:nct03895112)。
[0330]
鉴于tgf-β的免疫调节特性，tgf-β抑制剂(例如本文所述的tgf-β抑制剂)可以用于逆转患有mf的患者的骨髓纤维化，并且可以与本文所述的旨在限制疾病负担的疗法，包括本文所述的tim-3阻断(例如本文所述的抗-tim-3抗体分子)联合提供显著的治疗益处。
[0331]
在患有骨髓增生异常综合征(mds)的患者中，升高水平的tgf-β牵涉mds的发病机理(zorat等人br j haematol 2001；115(4):881-94；allampallam等人int j hematol 2002；75(3):289-97)。此外，已经证实升高水平的tgf-β导致骨髓缺陷(geyh等人haematologica2018；103:1462-1471)。
[0332]
鉴于tgf-β的有效免疫调节特性，tgf-β抑制剂(例如本文所述的tgf-β抑制剂)可以用于逆转mds发病机理中牵涉的异常免疫活化，例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)，并且可以与本文所述的旨在限制疾病负担的疗法，包括本文所述的tim-3阻断(例如本文所述的抗-tim-3抗体分子)联合提供显著的治疗益处。
[0333]
在某些实施方案中，本文所述的组合包含转化生长因子(也称作tgf-β、tgfβ/tgfb或tgf-β，本文中可以互换使用)抑制剂。
[0334]
tgf-β属于结构相关的细胞因子大家族，包括，例如骨形态发生蛋白(bmp)、生长和分化因子、激活素和抑制素。在一些实施方案中，本文所述的tgf-β抑制剂可以结合和/或抑制tgf-β的一种或多种同种型(例如tgf-β1、tgf-β2或tgf-β3的一种、两种或所有种)。
[0335]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂和tim-3抑制剂组合使用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂和tim-3抑制剂和任选地低甲基化药物和任选地进一步与pd-1抑制剂或il-1β抑制剂组合。在一些实施方案中，所述组合用于治疗癌症(例如骨髓纤维化或骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险
mds(例如高风险mds或极高风险mds)))。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂选自nis793、夫苏木单抗、pf-06952229或avid200。
[0336]
示例性tgf-β抑制剂
[0337]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂包含nis973或国际申请公布号wo 2012/167143中公开的化合物，其通过引用整体并入。
[0338]
nis793也称作xoma 089或xpa.42.089。nis793为完整人单克隆抗体，其特异性结合并且中和tgf-β1和2配体。
[0339]
nis793的重链可变区具有如下的氨基酸序列：
[0340][0341]
(seq id no:240)(在wo 2012/167143中公开为seq id no:6)。
[0342]
nis793的轻链可变区具有如下的氨基酸序列：
[0343][0344]
(在wo 2012/167143中公开为seq id no:8)。
[0345]
nis793以高亲和力结合人tgf-β同种型。通常，nis793以高亲和力结合tgf-β1和tgf-β2并且以较低程度的亲和力结合tgf-β3。在biacore测定中，nis793对人tgf-β的kd对tgf-β1为14.6pm、对tgf-β2为67.3pm且对tgf-β3为948pm。鉴于与所有三种tgf-β同种型的高亲和力结合，在某些实施方案中，预期nis793以如本文所述的nis793的剂量与tgf-β1、2和3结合。nis793与啮齿动物和食蟹猴tgf-β交叉反应，并在体外和体内显示出功能活性，使得啮齿动物和食蟹猴成为毒理学研究的相关物种。
[0346]
在某些实施方案中，tgf-β与检查点抑制剂(例如本文所述的tim-3抑制剂)的联合抑制用于治疗癌症(例如骨髓纤维化或骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds)))。
[0347]
在一些实施方案中，以约500mg-约1000mg,例如约500mg-约900mg、约500mg-约800mg、约500mg-约700mg、约500mg-约600mg、约600mg-约1000mg、约600mg-约900mg、约600mg-约800mg、约600mg-约700mg、约700mg-约1000mg、约700mg-约900mg、约700mg-约800mg、约800mg-约1000mg、约800mg-约900mg、约900mg-约1000mg施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，以约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg或约1000mg的剂量施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，以700mg的剂量施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)每3周施用1次。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)每6周施用1次。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以约700mg的剂量每3周1次施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)通过静脉内施用。在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)在约20分钟至约40分钟(例如约30分钟)的期限内施用。
[0348]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以约1000mg-约1600mg,例如约1100mg-约1500mg、约1200-约1400mg、约1300mg-约1400mg、约1300mg-约1500mg、约1300mg-约1600mg、约1200mg-约1500mg、约1200mg-约1600mg、约1400mg-约1500mg、约1400mg-约
tim-3抗体)在同一天施用。在一些实施方案中，在施用tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体)开始后施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体)完成后1小时施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。
[0352]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以600mg-800mg(例如约700mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以700mg-900mg(例如约800mg)的剂量施用，例如每4周1次，例如通过静脉内输注。
[0353]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以600mg-800mg(例如约700mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以700mg-900mg(例如约800mg)的剂量施用，例如每8周1次，例如通过静脉内输注。
[0354]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以600mg-800mg(例如约700mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以500mg-700mg(例如约600mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注。
[0355]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以600mg-800mg(例如约700mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以500mg-700mg(例如约600mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注。
[0356]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以600mg-800mg(例如约700mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以300mg-500mg(例如约400mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注。
[0357]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以600mg-800mg(例如约700mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以300mg-500mg(例如约400mg)的剂量施用，例如每4周1次，例如通过静脉内输注。
[0358]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每2周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以700mg-900mg(例如800mg)的剂量施用，例如每4周1次，例如通过静脉内输注。
[0359]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以700mg-900mg(例如约800mg)的剂量施用，例如每4周1次，例如通过静脉内输注。
[0360]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以例如700mg-900mg(例如约800mg)的剂量施用，例如每8周1次，例如通过静脉内输注。
[0361]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以例如700mg-900mg(例如约800mg)的剂量施用，例如每8周1次，例如通过静脉内输注。
[0362]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以700mg-900mg(例如约800mg)的剂量施用，例如每4周1次，例如通过静脉内输注。
[0363]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每2周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以500mg-700mg(例如600mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注。
[0364]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以500mg-700mg(例如约600mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注。
[0365]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以500mg-700mg(例如约600mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注。
[0366]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以500mg-700mg(例如约600mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注。
[0367]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以500mg-700mg(例如约600mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注。
[0368]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以300mg-500mg(例如约400mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注。
[0369]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以300mg-500mg(例如约400mg)的剂量施用，例如每4周1次，例如通过静脉内输注。
[0370]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以300mg-500mg(例如约400mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注。
[0371]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以1300mg-1500mg(例如约1400mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以300mg-500mg(例如约400mg)的剂量施用，例如每4周1次，例如通过静脉内输注。
[0372]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以2000mg-2200mg(例如约2100mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以700mg-900mg(例如800mg)的剂量施用，例如每4周1次，例如通过静脉内输注。
[0373]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以2000mg-2200mg(例如约2100mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以700mg-900mg(例如约800mg)的剂量施用，例如每4周1次，例如通过静脉内输注。
[0374]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以2000mg-2200mg(例如约2100mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，并且例如，tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以700mg-900mg(例如约800mg)的剂量施用，例如每8周1次，例如通过静脉内输注。
[0375]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以2000mg-2200mg(例如约2100mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以700mg-900mg(例如约800mg)的剂量施用，例如每8周1次，例如通过静脉内输注。
[0376]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以2000mg-2200mg(例如约2100mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分
子)以500mg-700mg(例如600mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注。
[0377]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以2000mg-2200mg(例如约2100mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以500mg-700mg(例如约600mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注。
[0378]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以2000mg-2200mg(例如约2100mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以500mg-700mg(例如约600mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注。
[0379]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以2000mg-2200mg(例如约2100mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以500mg-700mg(例如约600mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注。
[0380]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以2000mg-2200mg(例如约2100mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以300mg-500mg(例如约400mg)的剂量施用，例如每4周1次，例如通过静脉内输注。
[0381]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以2000mg-2200mg(例如约2100mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以300mg-500mg(例如约400mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注。
[0382]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以2000mg-2200mg(例如约2100mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以300mg-500mg(例如约400mg)的剂量施用，例如每4周1次，例如通过静脉内输注。
[0383]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂(例如nis793)以2000mg-2200mg(例如约2100mg)的剂量施用，例如每6周1次，例如通过静脉内输注，且tim-3抑制剂(例如抗-tim-3抗体分子)以300mg-500mg(例如约400mg)的剂量施用，例如每3周1次，例如通过静脉内输注。
[0384]
其他示例性tgf-β抑制剂
[0385]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂包含夫苏木单抗(cas注册号:948564-73-6).夫苏木单抗也称作gc1008。夫苏木单抗为结合并且抑制tgf-β同种型1、2和3的人单克隆抗体。
[0386]
夫苏木单抗的重链具有如下氨基酸序列：
[0387][0388]
夫苏木单抗的轻链具有如下的氨基酸序列：
[0389]
[0390]
夫苏木单抗公开在例如国际申请公布号wo 2006/086469和美国专利号8,383,780和8,591,901中，其通过引用整体并入。
[0391]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂为pf-06952229。pf-06952229为tgf-βr1的抑制剂，其阻止通过该受体的信号传导和tgf-βr1-介导的免疫抑制，从而增强抗肿瘤免疫应答。pf-06952229公开在例如yano等人immunology 2019；157(3)232-47中。
[0392]
在一些实施方案中，tgf-β抑制剂为avid200。avid200为tgf-β受体胞外结构域-igg fc融合蛋白，其选择性地靶向并且中和tgf-β同种型1和3。avid200公开在例如o’connor-mccourt,md等人can.res.2018；78(13)中。
[0393]
低甲基化药物
[0394]
已经证实低甲基化药物(hma)，包括地西他滨(和阿扎胞苷、cc-486和astx727)改变实体瘤和血液恶性肿瘤中的免疫微环境。已经显示hma：(1)增加杀伤细胞免疫球蛋白样受体(kir)的表达，并且在某些情况下增加nk细胞的活性，其可能在抗肿瘤免疫中发挥作用；(2)增加主要组织相容性复合物(mhc)i类在肿瘤细胞上的表达；(3)增加内源性逆转录病毒元件(erv)的表达；和(4)增加检查点蛋白的表达，包括pd-1、pd-l1和细胞毒性t-淋巴细胞相关蛋白4(ctla-4)(综述在lindblad等人,expert rev hematol.2017；10(8):745-752中)。
[0395]
体外研究证实，低甲基化药物可以减少特发性骨髓纤维化中循环恶性祖细胞的数量(shi等人,cancer res.2007；67(13):6417-6424.2007)。一项34名患者接受5-氮杂胞苷的2期试验显示，所有患者均出现低甲基化，但仅8名患者中记录到临床改善，并且通常观察到骨髓抑制(quintas-cardama等人leukemia.2008；22(5):965-970)。类似地，在用地西滨治疗的21名患有骨髓纤维化的患者中，19名可评估患者中有7名出现了反应；没有报道脾脏体积减小。在该群组中95％和52％的患者中观察到3/4级中性粒细胞减少症和血小板减少症(odenike等人2008)。
[0396]
这些数据支持在骨髓纤维化中将刺激细胞毒性免疫反应并减少免疫抑制性骨髓表型的免疫调节剂(例如本文所述的低甲基化药物，例如地西他滨)与基于免疫的疗法(例如所述的tim-3抑制剂，例如本文所述的抗-tim-3抗体分子)进行组合。
[0397]
在某些实施方案中，本文所述的组合还包括低甲基化药物。低甲基化药物也称作hma或脱甲基化剂，其抑制dna甲基化。在某些实施方案中，低甲基化药物阻断dna甲基转移酶的活性。在某些实施方案中，低甲基化药物包含地西他滨、阿扎胞苷、cc-486(百时美施贵宝公司)或astx727(astex)。
[0398]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在42天周期的第8天和第29天在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在42天周期的第8天和第29天在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用；和本文所述的低甲基化药物(例如地西他滨)，在42天周期的第1、2和3天或在42天周期的第1、2、3、4和5天在1小时内以至少5mg/m2的剂量(例如约5mg/m
2-约20mg/m2的剂量)通过静脉内施用。在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))的组合包含：本文
所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在28天周期的第8天在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在28天周期的第8天和第22天在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用；和本文所述的低甲基化药物(例如地西他滨)，在42天周期的第1、2和3天或在42天周期的第1、2、3、4和5天在1小时内以至少的剂量5mg/m2(例如约5mg/m
2-约20mg/m2的剂量)通过静脉内施用。在一些实施方案中，首先施用低甲基化药物(例如地西他滨)，随后施用tim-3抑制剂(例如mbg453)和tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在同一天施用tim-3抑制剂(例如mbg453)和tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用tim-3抑制剂(例如mbg453)完成后施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用tim-3抑制剂(例如mbg453)完成后约30分钟至约4小时(例如约1小时)施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。
[0399]
示例性低甲基化药物
[0400]
在一些实施方案中，低甲基化药物包含地西他滨。地西他滨也称作5-氮杂-dcyd、脱氧氮杂胞苷、dezocitidine、5aza、dac、2'-脱氧-5-氮杂胞苷、4-氨基-1-(2-脱氧-β-d-赤式-呋喃戊糖基)-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、5-氮杂-2-脱氧胞苷、5-氮杂脱氧胞苷或或地西他滨具有如下结构式：
[0401]
或其药学上可接受的盐。
[0402]
地西他滨为具有潜在抗肿瘤活性的胞苷抗代谢物类似物。地西他滨掺入dna并抑制dna甲基转移酶，导致dna的低甲基化和dna复制的s期内停滞。
[0403]
在一些实施方案中，地西他滨以约2mg/m
2-约50mg/m2,例如约10mg/m
2-约40mg/m2、约20mg/m
2-约30mg/m2、约2mg/m
2-约40mg/m2、约2mg/m
2-约30mg/m2、约2mg/m
2-约20mg/m2、约2mg/m
2-约10mg/m2、约10mg/m
2-约50mg/m2、约20mg/m
2-约50mg/m2、约30mg/m
2-约50mg/m2、约40mg/m
2-约50mg/m2、约10mg/m
2-约20mg/m2、约15mg/m
2-约25mg/m2、约5mg/m2、约10mg/m2、约15mg/m2、约20mg/m2、约25mg/m2、约30mg/m2、约35mg/m2、约40mg/m2、约45mg/m2或约50mg/m2的剂量施用。在一些实施方案中，地西他滨以约2.5mg/m2、约5mg/m2、约7.5mg/m2约10mg/m2、约15mg/m2或约20mg/m2的剂量施用。在一些实施方案中，地西他滨以5mg/m2的起始剂量施用并且递增至至多20mg/m2的剂量。在一些实施方案中，地西他滨通过静脉内施用。在一些实施方案中，低甲基化药物通过皮下施用。在一些实施方案中，地西他滨根据三天方案施用，例如以约2mg/m
2-约20mg/m2(例如5mg/m2)的剂量通过连续静脉内输注(例如在约1小时内)每天3次施用(在42天周期中，例如每6周)。在一些实施方案中，地西他滨根据3天方案施用，例如以约2mg/m
2-约20mg/m2(例如5mg/m2)的剂量通过连续静脉内输注(例如在约1小时内)每天施用，持续3天(在28天周期中，例如每4周)。在一些实施方案中，地西他滨根据3天方案施用，例如以约2mg/m
2-约20mg/m2(例如5mg/m2)的剂量通过连续静脉内输注(例如在约1小时内)每天施用，持续5天(在42天周期内，例如每6周)。在某些实施方案中，地西他滨根据3天方案施用，例如以约2mg/m
2-约20mg/m2(例如5mg/m2)的剂量通过连续静脉内输注在约3小时
内施用，每8小时重复1次，持续3天(在42天周期内)。在其他实施方案中，地西他滨根据5天方案施用，例如以约2mg/m
2-约20mg/m2(例如5mg/m2)的剂量通过连续静脉内输注在约1小时内每天施用，持续5天(在28天周期内)。在一些实施方案中，地西他滨以固定剂量施用。在其他实施方案中，地西他滨的剂量在每个周期中在3天期限内递增，例如42天周期，以达到20mg/m2的剂量。在其他实施方案中，地西他滨的剂量在每个周期中在3天期限内递增，例如28天周期，以达到20mg/m2的剂量。在其他实施方案中，地西他滨的剂量在每个周期中在5天期限内递增，例如42天周期，以达到20mg/m2的剂量。在其他实施方案中，地西他滨的剂量在每个周期中在约3-约5天期限内递增，例如42天周期，以达到20mg/m2的剂量。例如，周期1的第1天、第2天和第3天和以后的剂量分别约为5mg/m2、约10mg/m2和约20mg/m2。
[0404]
其他示例性低甲基化药物
[0405]
在一些实施方案中，所述低甲基化药物包含阿扎胞苷、cc-486和astx727。在一些实施方案中，所述低甲基化药物包含阿扎胞苷。阿扎胞苷也被称为5-ac、5-阿扎胞苷、阿扎胞苷、拉达克霉素、5-azc、aza-cr、u-18496、4-氨基-1-β-d-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮、4-氨基-1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)氧杂环戊-2-基]-1,3,5-三嗪-2-酮或阿扎胞苷具有以下结构式：
[0406]
或其药学上可接受的盐。
[0407]
阿扎胞苷是胞苷的嘧啶核苷类似物，具有抗肿瘤活性。阿扎胞苷与dna结合，可逆地抑制dna甲基转移酶，从而阻止dna甲基化。阿扎胞苷对dna的低甲基化可以激活因高甲基化而沉默的抑癌基因，从而产生抗肿瘤作用。阿扎胞苷也可以掺入rna，从而破坏正常的rna功能，损害trna-胞嘧啶-5-甲基转移酶活性。
[0408]
在一些实施方案中，阿扎胞苷以下面的剂量施用：约25mg/m
2-约150mg/m2，例如约50mg/m
2-约100mg/m2，约70mg/m
2-约80mg/m2，约50mg/m
2-约75mg/m2，约75mg/m
2-约125mg/m2，约50mg/m2，约75mg/m2，约100mg/m2，约125mg/m2或约150mg/m2。在一些实施方案中，阿扎胞苷每天施用一次。在一些实施方案中，阿扎胞苷是经静脉内施用的。在其他实施方案中，阿扎胞苷是经皮下施用的。在一些实施方案中，以约50mg/m
2-约100mg/m2(例如，约75mg/m2)的剂量施用阿扎胞苷，例如连续约5-7天，例如以28天为周期。例如，阿扎胞苷可在28天周期的第1-7天以约75mg/m2的剂量连续施用七天。作为另一个实例，阿扎胞苷可在28天周期的第1-5天以约75mg/m2的剂量连续施用五天，之后休息两天，然后在第8-9天连续施用两天。作为又一个实例，阿扎胞苷可以在28-天周期的第1-6天以约75mg/m2的剂量连续施用6天，随后为1天休息，然后允许在第8天施用。
[0409]
在一些实施方案中，所述低甲基化药物包含口服阿扎胞苷(例如cc-486)。在一些
实施方案中，所述低甲基化药物包含cc-486。cc-486是阿扎胞苷的口服可生物利用制剂，阿扎胞苷是胞苷的嘧啶核苷类似物，具有抗肿瘤活性。口服施用后，细胞吸收阿扎胞苷并代谢为5-氮杂脱氧胞苷三磷酸。将5-氮杂脱氧胞苷三磷酸掺入dna可以可逆地抑制dna甲基转移酶，并阻断dna甲基化。阿扎胞苷对dna的低甲基化可以重新激活先前因高甲基化而沉默的肿瘤抑制基因，从而产生抗肿瘤作用。将5-阿扎胞苷三磷酸酯掺入rna会破坏正常的rna功能并损害trna(胞嘧啶-5)-甲基转移酶活性，从而抑制rna和蛋白质合成。cc-486在以下文献中有描述：laille等人的j clin pharmacol.，2014；54(6):630-639；mesia等人，european journal of cancer,2019 123:138-154。胞苷类似物的口服制剂也在pct出版物wo2009/139888和美国专利us 8846628中进行了描述。在一些实施方案中，经口施用cc-486。在一些实施方案中，cc-486每天施用一次。在一些实施方案中，以约200mg-约500mg(例如300mg)的剂量施用cc-486。在一些实施方案中，cc-486在例如21天或28天周期连续施用5-15天(例如，第1-14天)。在一些实施方案中，cc-486每天施用一次。
[0410]
在一些实施方案中，低甲基化药物包含cda抑制剂(例如，赛达苏定(cedazuridine)/地西他滨组合药物(例如，astx727))。在一些实施方案中，所述低甲基化药物包含astx727。astx727是一种口服组合药物，其包含胞苷脱氨酶(cda)抑制剂西达苏利定(也称为e7727)和胞苷抗代谢药物地西他滨，具有抗肿瘤活性。口服astx727后，cda抑制剂e7727结合并抑制cda，cda是一种主要存在于胃肠道和肝脏的酶，其催化胞苷和胞苷类似物的脱氨基作用。这样可以防止地西他滨的分解，提高其生物利用度和功效，同时降低因服用低剂量地西他滨而引起的胃肠道毒性。地西他滨通过将其三磷酸形式掺入dna来发挥其抗肿瘤活性，从而抑制了dna甲基转移酶并导致dna的低甲基化。进而干扰dna复制并减少肿瘤细胞的生长。astx727在例如montalaban bravo等人的current opinions in hematology,25(2)：146-153中公开。在一些实施方案中，astx727包含例如约50-150mg(例如约100mg)的赛达苏定和例如约300-400mg(例如345mg)的地西他滨。在一些实施方案中，经口施用astx727。在一些实施方案中，astx727在例如28天周期的连续5-15天(例如，第1-5天)施用。在一些实施方案中，astx727每天施用一次。
[0411]
阿糖胞苷
[0412]
在一些实施方案中，本文所述的组合包含阿糖胞苷。阿糖胞苷也称为阿糖胞苷或4-氨基-1-[(2r,3s,4s,5r)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)氧杂环戊-2-基]嘧啶-2-酮。阿糖胞苷具有以下结构式：或其药学上可接受的盐。
[0413]
阿糖胞苷是一种胞苷抗代谢类似物，具有修饰糖部分(阿拉伯糖代替核糖)。阿糖胞苷转化为三磷酸形式，与胞苷竞争以掺入dna。由于阿拉伯糖的存在，dna分子的旋转在空间上受到阻碍，dna复制停止。阿糖胞苷还干扰dna聚合酶。
[0414]
在一些实施方案中，阿糖胞苷以约5mg/m
2-约75mg/m2(例如30mg/m2)的剂量施用。在一些实施方案中，阿糖胞苷以约100mg/m
2-约400mg/m2，例如100mg/m2施用。在一些实施方
案中，阿糖胞苷经静脉内输注或注射、皮下或鞘内施用。在一些实施方案中，阿糖胞苷以100mg/m2/天的剂量通过连续静脉内输注或每12小时静脉内注射100mg/m2的剂量施用。在一些实施方案中，阿糖胞苷施用7天(例如，在第1至7天)。在一些实施方案中，阿糖胞苷以5-75mg/m2体表面积的剂量经鞘内施用。在一些实施方案中，阿糖胞苷从每4天一次鞘内给药至每天一次，持续4天。在一些实施方案中，阿糖胞苷以每4天30mg/m2的剂量施用。
[0415]
pd-1抑制剂
[0416]
在mf中tim-3(例如用本文所述的tim-3抑制剂(例如本文所述的抗-tim-3抗体分子)和pd-1(例如用本文所述的pd-1抑制剂(例如本文所述的抗-pd-1抗体分子)的共阻断至少部分地通过pd-1和tim-3共阻断中更高的抗肿瘤活性的组合能力以及mf中pd-1通路阻断的活性证据来支持。
[0417]
例如，临床前证据表明，同时阻断tim-3和pd-1比单独的任一疗法促进更高的t细胞活化，并且协同抑制实验癌症模型中的肿瘤生长(sakuishi等人exp med.2010；207(10):2187-2194,ngiow等人cancer res.2011；71(21):6567-6571；anderson,cancer immunol res.2014；2(5):393-398)。
[0418]
最近的证据表明，对于mf患者，致癌突变可以赋予免疫逃逸(prestipino等人,sci transl med.2018；10(429).pii:eaam7729)已经证实致癌jak2活性引起stat3和stat5磷酸化，这增强了jak2v617f-突变细胞中的pd-l1启动子活性和pd-l1蛋白表达，而jak2的阻断降低了骨髓jak2v617f-突变细胞中的pd-l1表达。与健康个体相比，从具有jak2v617f mpn的患者分离的原代细胞上的pd-l1表达更高，并且在jak2抑制时下降。jak2v617f突变负荷、pstat3和pd-l1表达在原代mpn患者来源的单核细胞、巨核细胞和血小板中最高。pd-1抑制延长了人mpn异种移植物和原代鼠mpn模型中的存活。这种作用依赖于t细胞。机制上，jak2v617f-突变细胞中的pd-l1表面表达影响t细胞的代谢和细胞周期进展(prestipino等人,sci transl med.2018；10(429).pii:eaam7729)。
[0419]
在某些实施方案中，将本文所述的组合进一步与pd-1抑制剂组合施用。在一些实施方案中，pd-1抑制剂选自斯巴达珠单抗(pdr001,novartis)、纳武单抗(bristol-myers squibb)、派姆单抗(merck&co)、匹地利珠单抗(curetech)、medi0680(medimmune)、regn2810(regeneron)、tsr-042(tesaro)、pf-06801591(pfizer)、bgb-a317(beigene)、bgb-108(beigene)、incshr1210(incyte)或amp-224(amplimmune)。
[0420]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在每个21天周期的第1天在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在每个21天周期的第1天在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用；和本文所述的pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)，在每个21天周期的第1天在30分钟内以300mg的剂量通过静脉内施用。在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在每个28天周期的第1天在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在每个28天周期的第1天和第15天在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用；和本文所述的pd-1抑制剂(例
如斯巴达珠单抗)，在每个28天周期的第1天在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)、tgf-β抑制剂(例如nis793)和pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)在同一天施用。在一些实施方案中，在施用tim3抑制剂(例如mbg453)完成后施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用抗-tim-3抗体(例如mbg453)完成后约30分钟至约4小时(例如约1小时)施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用tgf-β抑制剂(例如nis793)完成后施用pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)。在一些实施方案中，在施用tgf-β抑制剂(例如nis793)完成后约30分钟至约4小时(例如约1小时)施用pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)。
[0421]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在42天周期的第8天和第29天在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在42天周期的第8天和第29天在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用；pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)，在42天周期的第8天和第29天在30分钟内以300mg的剂量通过静脉内施用；和本文所述的低甲基化药物(例如地西他滨)，在42天周期的第1、2和3天和42天周期的第1、2、3、4和5天在1小时内以至少5mg/m2(例如从5mg/m2开始并且递增至20mg/m2)的剂量通过静脉内施用。在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在28天周期的第8天在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在28天周期的第8天和第22天在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用；本文所述的pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)，在每个28天周期的第8天在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用；和本文所述的低甲基化药物(例如地西他滨)，在42天周期的第1、2和3天和42天周期的第1、2、3、4和5天在1小时内以至少5mg/m2的剂量通过静脉内施用。在一些实施方案中，首先施用低甲基化药物(例如地西他滨)，随后施用tim-3抑制剂(例如mbg453)和tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)和tgf-β抑制剂(例如nis793)在同一天施用。在一些实施方案中，在施用tim-3抑制剂(例如mbg453)完成后施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用tim-3抑制剂(例如mbg453)完成后约30分钟至约4小时(例如约1小时)施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用tgf-β抑制剂(例如nis793)完成后施用pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)。在一些实施方案中，在施用tgf-β抑制剂(例如nis793)完成后约30分钟至约4小时(例如约1小时)施用pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)。
[0422]
示例性pd-1抑制剂
[0423]
在一个实施方案中，pd-1抑制剂为抗-pd-1抗体分子。在一个实施方案中，pd-1抑制剂为如us 2015/0210769中所述的抗-pd-1抗体分子，该文献于2015年7月30日公布，标题为“antibody molecules to pd-1and uses thereof”，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，抗-pd-1抑制剂为斯巴达珠单抗，也称作pdr001。
[0424]
在一个实施方案中，抗-pd-1抗体分子包含来自重链和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个互补决定区(cdr)(或统称全部cdr)，该重链和轻链可变区包含
表3中所示的氨基酸序列(例如，来自表3中公开的bap049-克隆-e或bap049-克隆-b的重链和轻链可变区序列)，或由表3中所示的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，cdr根据kabat定义(例如，如表3中所示)。在一些实施方案中，cdr根据chothia定义(例如，如表3中所示)。在一些实施方案中，cdr根据kabat和chothia两者的组合cdr定义(例如，如表3中所示)。在一个实施方案中，vh cdr1的kabat和chothia cdr的组合包含氨基酸序列gytfttywmh(seq id no:541)。在一个实施方案中，相对于表3中所示或由表3中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，cdr中的一个或多个(或统称所有cdr)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)或缺失。
[0425]
在一个实施方案中，抗-pd-1分子包含：重链可变区(vh)，其包含seq id no:501的vhcdr1氨基酸序列、seq id no:502的vhcdr2氨基酸序列和seq id no:503的vhcdr3氨基酸序列；和轻链可变区(vl)，其包含seq id no:510的vlcdr1氨基酸序列、seq id no:511的vlcdr2氨基酸序列和seq id no:512的vlcdr3氨基酸序列，其各自公开在表3中。
[0426]
在一个实施方案中，抗体分子包含vh，该vh包含由seq id no:524的核苷酸序列编码的vhcdr1、由seq id no:525的核苷酸序列编码的vhcdr2和由seq id no:526的核苷酸序列编码的vhcdr3；和vl，其包含由seq id no:529的核苷酸序列编码的vlcdr1、由seq id no:530的核苷酸序列编码的vlcdr2和由seq id no:531的核苷酸序列编码的vlcdr3，其各自公开于表3中。
[0427]
在一个实施方案中，抗-pd-1分子包含vh，该vh包含seq id no:506的氨基酸序列，或与seq id no:506具有至少85％、90％、95％、或99％的同一性或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子包含vl，该vl包含seq id no:520的氨基酸序列，或与seq id no:520具有至少85％、90％、95％、或99％同一性或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗-pd-1抗体分子包含vl，该vl包含seq id no:516的氨基酸序列，或与seq id no:516具有至少85％、90％、95％、或99％同一性或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗-pd-1抗体分子包含：包含seq id no:506的氨基酸序列的vh和包含seq id no:520的氨基酸序列的vl。在一个实施方案中，抗-pd-1分子包含：包含seq id no:506的氨基酸序列的vh和包含seq id no:516的氨基酸序列的vl。
[0428]
在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:507的核苷酸序列或与seq id no:507具有至少85％、90％、95％或99％同一性或更高同一性的核苷酸序列编码的vh。在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:521或517的核苷酸序列或与seq id no:521或517具有至少85％、90％、95％或99％同一性或更高同一性的核苷酸序列编码的vl。在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:507的核苷酸序列编码的vh和由seq id no:521或517的核苷酸序列编码的vl。
[0429]
在一个实施方案中，抗-pd-1抗体分子包含重链，该重链包含seq id no:508的氨基酸序列，或与seq id no:508具有至少85％、90％、95％、或99％同一性或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗-pd-1抗体分子包含轻链，该轻链包含seq id no:522的氨基酸序列，或与seq id no:522具有至少85％、90％、95％、或99％同一性或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子包含轻链，该轻链包含seq id no:518的氨基酸序列，或与seq id no:518具有至少85％、90％、95％、或99％同一性或更高同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗-pd-1抗体分子包含：包含seq id no:508的氨基酸序列的
重链和包含seq id no:522的氨基酸序列的轻链。在一个实施方案中，抗-pd-1抗体分子包含：包含seq id no:508的氨基酸序列的重链和包含seq id no:518的氨基酸序列的轻链。
[0430]
在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:509的核苷酸序列或与seq id no:509具有至少85％、90％、95％或99％同一性或更高同一性的核苷酸序列编码的重链。在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:523或519的核苷酸序列或与seq id no:523或519具有至少85％、90％、95％或99％同一性或更高同一性的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施方案中，抗体分子包含由seq id no:509的核苷酸序列编码的重链和由seq id no:523或519的核苷酸序列编码的轻链。
[0431]
本文所述的抗体分子可以通过us 2015/0210769中所述的载体、宿主细胞和方法制备，其通过引用整体并入。
[0432]
在某些实施方案中，检查点抑制剂(例如本文所述的tim-3抑制剂)与tgf-β抑制剂的组合抑制进一步与pd-1抑制剂组合并且用于治疗癌症(例如骨髓纤维化)。
[0433]
在一些实施方案中，pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)以约100mg-约600mg.例如约100mg-约500mg、约100mg-约400mg、约100mg-约300mg、约100mg-约200mg、约200mg-约600mg、约200mg-约500mg、约200mg-约400mg、约200mg-约300mg、约300mg-约600mg、约300mg-约500mg、约300mg-约400mg、约400mg-约600mg、约400mg-约500mg或约500mg-约600mg的剂量施用。在一些实施方案中，pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)以约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg或约600mg的剂量施用。在一些实施方案中，pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)每4周施用1次。在一些实施方案中，(例如斯巴达珠单抗)每3周施用1次。在一些实施方案中，(例如斯巴达珠单抗)通过静脉内施用。在一些实施方案中，(例如斯巴达珠单抗)在约20分钟-40分钟(例如约30分钟)的期限内施用。
[0434]
在一些实施方案中，pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)以约300mg-约500mg(例如约400mg)的剂量在约20分钟至约40分钟(例如约30分钟)期限内通过静脉内施用，每2周1次。在一些实施方案中，pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)以约200mg-约400mg(例如约300mg)的剂量在约20分钟至约40分钟(例如约30分钟)通过静脉内施用，每3周1次。
[0435]
在一些实施方案中，pd-1抑制剂(例如斯巴达珠单抗)与tim-3抑制剂(例如抗-tim3抗体)和tgf-β抑制剂(例如nis793)联合施用。
[0436]
表3.示例性抗-pd-1抗体分子的氨基酸和核苷酸序列
[0437]
[0438]
[0439]
[0440]
[0441]
[0442]
[0443][0444]
其他示例性pd-1抑制剂
[0445]
在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子为纳武单抗(bristol-myers squibb)，也称为mdx-1106、mdx-1106-04、ono-4538、bms-936558或纳武单抗(克隆5c4)和其他抗pd-1抗体在us 8008449和wo 2006/121168中公开，通过引用其整体并入本文。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子包含纳武单抗的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者，例如表4中所公开的序列。
[0446]
在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子为派姆单抗(merck&co)，也称为兰布罗利珠单抗(lambrolizumab)、mk-3475、mk03475、sch-900475或派姆单抗和其他抗pd-1抗体在hamid，o.等人(2013)new england journal of medicine，369(2)：134
–
44，us8354509和wo 2009/114335中公开，通过引用其整体并入。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子包含派姆单抗的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者，例如表4中所公开的序列。
[0447]
在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子为匹地利珠单抗(curetech)，也称为ct-011。匹地利珠单抗和其他抗pd-1抗体在rosenblatt,j.等人(2011)j immunotherapy 34(5)：409-18，us 7695715，us 7332582和us8686119中公开，通过引用其整体并入。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子包含匹地利珠单抗的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者，例如表4中所公开的序列。
[0448]
在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子为medi0680(medimune)，也称为amp-514。medi0680和其他抗pd-1抗体在us 9205148和wo 2012/145493中公开，通过引用其整体并入。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子包含medi0680的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0449]
在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子为regn2810(regeneron)。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子包含regn2810的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0450]
在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子为pf-06801591(pfizer)。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子包含pf-06801591的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0451]
在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子为bgb-a317或bgb-108(beigene)。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子包含bgb-a317或bgb-108的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0452]
在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子为incshr1210(incyte)，也称为incshr01210或shr-1210。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子包含incshr1210的cdr序列(或总体上全
部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0453]
在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子为tsr-042(tesaro)，也称为anb011。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子包含tsr-042的cdr序列(或总体上全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列中一者或多者。
[0454]
其他已知的抗pd-1抗体包括例如wo 2015/112800、wo 2016/092419、wo 2015/085847、wo 2014/179664、wo 2014/194302、wo 2014/209804、wo 2015/200119、us 8735553、us7488802、us 8927697、us 8993731和us 9102727中的所述抗体，它们通过引用整体并入。
[0455]
在一个实施方案中，抗pd-1抗体是与本文所述的抗pd-1抗体之一竞争结合和/或结合pd-1上相同表位的抗体。
[0456]
在一个实施方案中，pd-1抑制剂是抑制pd-1信号通路的肽，例如，如us 8907053所述，通过引用其整体并入。在一个实施方案中，pd-1抑制剂是免疫粘附素(例如，免疫粘附素，其包含pd-l1或pd-l2的细胞外或pd-1结合部分，融合到恒定区域(例如，免疫球蛋白序列的fc区域)。在一个实施方案中，pd-1抑制剂为amp-224(b7 dcig(amplimmune)，例如，wo 2010/027827和wo 2011/066342中公开的，其通过引用整体并入。
[0457]
表4.其他示例性抗-pd-1抗体分子的氨基酸序列
[0458]
[0459][0460]
il-1β抑制剂
[0461]
细胞因子的白介素-1(il-1)家族是一组分泌的多效细胞因子，其在炎症和免疫应答中具有中心作用。在包括癌症在内的多种临床环境中观察到il-1的增加(apte等人(2006)cancer metastasis rev.p.387-408；dinarello(2010)eur.j.immunol.p.599-606)。il-1家族特别包含il-1β(il-1β)和il-1α(il-1a)。
[0462]
在一些实施方案中，本文所述的组合包括白介素-1β(il-1β)抑制剂。在一些实施方案中，il-1β抑制剂选自卡那单抗(canakinumab)、吉伏组单抗(gevokizumab)、阿那白滞素(anakinra)或利纳西普(rilonacept)。在一些实施方案中，il-1β抑制剂为卡那单抗。
[0463]
在一些实施方案中，以约100mg-约600mg,例如约100mg-约500mg、约100mg-约
400mg、约100mg-约300mg、约100mg-约200mg、约200mg-约600mg、约200mg-约500mg、约200mg-约400mg、约200mg-约300mg、约300mg-约600mg、约300mg-约500mg、约300mg-约400mg、约400mg-约600mg、约400mg-约500mg或约500mg-约600mg的剂量施用il-1β抑制剂。在一些实施方案中，以约100mg、约125mg、约150mg、约175mg,200mg、约225mg、约250mg、约275mg或约300mg的剂量施用il-1β抑制剂。在一些实施方案中，il-1β抑制剂每4周施用1次。在一些实施方案中，il-1β抑制剂每8周施用1次。在一些实施方案中，il-1β抑制剂(例如卡那单抗)以250mg的剂量施用，每8周1次。在一些实施方案中，il-1β抑制剂(例如卡那单抗)以250mg的剂量施用，每4周1次。在一些实施方案中，il-1β抑制剂通过皮下施用。在一些实施方案中，il-1β抑制剂通过静脉内施用。
[0464]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在每个21天周期的第1天在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在每个21天周期的第1天在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，在每个21天周期的第1天在30分钟内以200mg的剂量通过静脉内施用。在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在每个28天周期的第1天在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在每个28天周期的第1天和第15天在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，在每个28天周期的第1天以250mg的剂量通过静脉内施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453),tgf-β抑制剂(例如nis793)和il-1β抑制剂(例如卡那单抗)在同一天施用。在一些实施方案中，在施用tim3抑制剂(例如mbg453)完成后施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用抗-tim-3抗体(例如mbg453)完成后约30分钟至约4小时(例如约1小时)施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用tgf-β抑制剂(例如nis793)完成后施用il-1β抑制剂(例如卡那单抗)。在一些实施方案中，在施用tgf-β抑制剂(例如nis793)完成后约30分钟至约4小时(例如约1小时)施用il-1β抑制剂(例如卡那单抗)。
[0465]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在42天周期的第8天和第29天在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在42天周期的第8天和第29天在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用；il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，在42天周期的第8天和第29天在30分钟内以200mg的剂量通过静脉内施用；和本文所述的低甲基化药物(例如地西他滨)，在42天周期的第1、2和第3天或42天周期的第1、2、3、4和5天在1小时内以至少5mg/m2的剂量通过静脉内施用。在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在每个28天周期的第8天在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用；本文
所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在每个28天周期的第8天和第22天在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用；il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，在每个28天周期的第8天在30分钟内以250mg的剂量通过静脉内施用；和本文所述的低甲基化药物(例如地西他滨)，在42天周期的第1、2和第3天或42天周期的第1、2、3、4和5天在1小时内以至少5mg/m2的剂量通过静脉内施用。在一些实施方案中，首先施用低甲基化药物(例如地西他滨)，随后使用tim-3抑制剂(例如mbg453)和tgf-β抑制剂(例如nis793)和il-1β抑制剂(例如卡那单抗)。在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)、tgf-β抑制剂(例如nis793)和il-1β抑制剂(例如卡那单抗)在同一天施用。在一些实施方案中，在施用tim-3抑制剂(例如mbg453)完成后施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用tim-3抑制剂(例如mbg453)完成后约30分钟至约4小时(例如约1小时)施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用tgf-β抑制剂(例如nis793)完成后施用il-1β抑制剂(例如卡那单抗)。在一些实施方案中，在施用tgf-β抑制剂(例如nis793)完成后约30分钟至约4小时(例如约1小时)施用il-1β抑制剂(例如卡那单抗)。
[0466]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0467]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0468]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0469]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0470]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险
mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0471]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每8周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0472]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0473]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每8周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0474]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以700mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0475]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每8周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以700mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0476]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量
通过皮下施用，每4周1次。
[0477]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0478]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0479]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0480]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0481]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0482]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0483]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险
mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0484]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以700mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0485]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以700mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0486]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0487]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0488]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0489]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量
通过皮下施用，每4周1次。
[0490]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0491]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0492]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0493]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0494]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以700mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0495]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以700mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每4周1次。
[0496]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险
mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0497]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0498]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0499]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0500]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0501]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每8周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0502]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量
通过皮下施用，每8周1次。
[0503]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每8周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0504]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以700mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0505]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以800mg的剂量通过静脉内施用，每8周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以700mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0506]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0507]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0508]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0509]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险
mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0510]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0511]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0512]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0513]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0514]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以700mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0515]
在一些实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以600mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以700mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通
过皮下施用，每8周1次。
[0516]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0517]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0518]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0519]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以2100mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0520]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0521]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0522]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险
mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0523]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以1400mg的剂量通过静脉内施用，每6周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0524]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以700mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0525]
在其他实施方案中，本文所述用于治疗骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))的组合包含：本文所述的tim3抑制剂(例如mbg453)，在30分钟内以400mg的剂量通过静脉内施用，每4周1次；本文所述的tgf-β抑制剂(例如nis793)，在30分钟内以700mg的剂量通过静脉内施用，每3周1次；和本文所述的il-1β抑制剂(例如卡那单抗)，以250mg的剂量通过皮下施用，每8周1次。
[0526]
在一些实施方案中，tim-3抑制剂(例如mbg453)、tgf-β抑制剂(例如nis793)和il-1β抑制剂(例如卡那单抗)在同一天施用。在一些实施方案中，在施用tim3抑制剂(例如mbg453)完成后施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用抗-tim-3抗体(例如mbg453)完成后约30分钟至约4小时(例如约1小时)施用tgf-β抑制剂(例如nis793)。在一些实施方案中，在施用tgf-β抑制剂(例如nis793)完成后施用il-1β抑制剂(例如卡那单抗)。在一些实施方案中，在施用tgf-β抑制剂(例如nis793)完成后约30分钟至约4小时(例如约1小时)施用il-1β抑制剂(例如卡那单抗)。
[0527]
示例性il-1β抑制剂
[0528]
在一些实施方案中，il-1β抑制剂为卡那单抗。卡那单抗也称作acz885或卡那单抗为人单克隆igg1/κ抗体，其中和人il-1β的生物活性。
[0529]
卡那单抗公开在例如wo 2002/16436、us 7,446,175和ep 1313769中。卡那单抗的重链可变区具有如下的氨基酸序列：
[0530][0531]
(在us 7,446,175中公开为seq id no:1)。
[0532]
卡那单抗的轻链可变区具有如下的氨基酸序列：
[0533][0534]
(seq id no:835)(在us 7,446,175中公开为seq id no:2)。
[0535]
在一些实施方案中，il-1β结合抗体为卡那单抗，其中将卡那单抗以约100mg-约400mg的范围，每次治疗约200mg施用于患有癌症(例如具有至少部分炎性基础的癌症)的患者。在一个实施方案中，患者约每2周、约每3周、约每4周(约每月)、约每6周、约每两个月(约每2个月)、约每9周或约每季度(约每3个月)接受每次治疗。在一个实施方案中，患者约每月或约每三周接受卡那单抗。在一个实施方案中，用于患者的卡那单抗剂量约为每3周200mg。在一些实施方案中，卡那单抗的剂量约为每个月200mg。当担心安全问题时，可以通过增加给药间隔来递减剂量，例如通过将给药间隔加倍或三倍。例如，约每月或约每3周约200mg的方案可以分别改变为约每2个月或约每6周或约每3个月或约每9周。在一个替代实施方案中，患者在递减阶段或在维持阶段以约每两个月或约每6周约200mg的剂量接受卡那单抗，独立于任何安全性问题或在整个治疗阶段。在一个替代实施方案中，患者在独立于任何安全性问题或在整个治疗阶段中的递减阶段或维持阶段中约每3个月或约每9周以约200mg的剂量接受卡那单抗。在一个替代实施方案中，所述患者以约150mg、约250mg或约300mg的剂量接受卡那单抗。在一个替代实施方案中，所述患者约每4周以约150mg的剂量接受卡那单抗。在一个替代实施方案中，所述患者约每4周以约250mg的剂量接受卡那单抗。在一个替代实施方案中，所述患者约每4周以约300mg的剂量接受卡那单抗。在一个实施方案中，所述患者以每3周约200mg的剂量或以每4周约250mg的剂量接受卡那单抗。
[0536]
其他示例性il-1β抑制剂
[0537]
在一些实施方案中，本文所述的组合包括白细胞介素-1β(il-1β)抑制剂，例如抗-il-1β抗体或其片段。
[0538]
如本文所用，il-1β抑制剂包括但不限于卡那单抗或其功能片段、吉伏组单抗或其功能片段、阿那白滞素、双醋瑞因、利纳西普、il-1亲和体(sobi 006,z-fc(swedish orphan biovitrum/affibody))和鲁吉珠单抗(abt-981)(abbott)、cdp-484(celltech)、ly-2189102(lilly)。
[0539]
在一些实施方案中，抗-il-1β抗体为卡那单抗。卡那单抗(acz885或)为针对白细胞介素-1β的igg1/κ的高亲和力、完全人的单克隆抗体，其被开发用于治疗il-1β驱动的炎性疾病。它被设计成与人il-1β结合，从而阻断该细胞因子与其受体的相互作用。
[0540]
在其他实施方案中，抗-il-1β抗体为吉伏组单抗。吉伏组单抗(xoma-052)为针对白细胞介素-1β的igg2同种型的高亲和力人源化单克隆抗体，其被开发用于治疗il-1β驱动的炎性疾病。吉伏组单抗调节il-1β与其信号传导受体的结合。
[0541]
在一些实施方案中，抗-il-1β抗体为ly-2189102，其为人源化的白细胞介素-1β(il-1β)单克隆抗体。
[0542]
在一些实施方案中，抗-il-1β抗体或其功能片段为cdp-484(celltech)，其为阻断il-1β的抗体片段。
[0543]
在一些实施方案中，抗-il-1β抗体或其功能片段为il-1亲和体(affibody)(sobi 006,z-fc(swedish orphan biovitrum/affibody))。
[0544]
在一些实施方案中，il-1β结合抗体为吉伏组单抗。吉伏组单抗也称作xoma 052。
吉伏组单抗(国际非专有名称(inn)号9310)公开在wo2007/002261中，其通过引用整体并入。吉伏组单抗为igg2同种型的人源化的单克隆抗人il-1β抗体，其被开发用于治疗il-1β驱动的炎性疾病。吉伏组单抗的完整重链序列为：
[0545][0546]
吉伏组单抗的完整轻链为：
[0547][0548]
在一个实施方案中，患者每3周或每月每次治疗约30mg至约120mg，每次治疗约20mg至约240mg，每次治疗约20mg至约180mg，每次治疗约30mg至约120mg，约30mg至约60mg，或约60mg至约120mg接受吉伏组单抗。在一个实施方案中，患者每次治疗接受约30mg-约120mg。在一个实施方案中，患者每次治疗接受约30mg-约60mg。在一个实施方案中，患者每次治疗接受约30mg、约60mg、约90mg、约120mg或约180mg。在一个实施方案中，患者约每2周、约每3周、约每月(约每4周)、约每6周、约每两个月(约每2个月)、约每9周或约每季度(约每3个月)接受每次治疗。在一个实施方案中，患者约每3周接受每次治疗。在一个实施方案中，患者约每4周接受每次治疗。当担心安全问题时，可以通过增加给药间隔递减剂量，例如通过将给药间隔加倍或三倍。例如，约每月或约每3周约60mg的方案可以分别加倍至约每2个月或约每6周，或者分别三倍至约每3个月或约每9周。在一个替代实施方案中，患者在递减阶段或维持阶段独立于任何安全性问题或在整个治疗期间约每2个月或约每6周以约30mg至约120mg的剂量接受吉伏组单抗。在一个替代实施方案中，患者在递减阶段或维持阶段独立于任何安全性问题或在整个治疗阶段中约每3个月或约每9周以约30mg至约120mg的剂量接受吉伏组单抗。
[0549]
进一步的组合
[0550]
本文所述的组合可以进一步包含一种或多种其他治疗剂、方法或方式。
[0551]
在一个实施方案中，本文所述的方法包括以有效治疗或预防本文所述的病症的量向受试者施用包含本文所述的tim-3抑制剂和本文所述的tgf-β抑制剂(任选地进一步包含低甲基化药物，任选地进一步包含如本文所述的pd-1抑制剂或il-1β抑制剂)与治疗剂、方法或方式的组合。在某些实施方案中，根据本文所述的剂量方案施用或使用组合。在其他实施方案中，组合作为本文所述的组合物或制剂施用或使用。
[0552]
tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂、pd-1抑制剂、低甲基化药物、il-1β抑制剂和治疗剂、方法或方式可以同时或以任何顺序依次施用或使用。可以使用tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂,
pd-1抑制剂、低甲基化药物、il-1β抑制剂和治疗剂、方法或方式(例如如本文所述)的任意组合和顺序。tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂、pd-1抑制剂、低甲基化药物、il-1β抑制剂和/或治疗剂、方法或方式可以在活动性病症期间或在缓解期或活动性较低的疾病期间施用或使用。tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂、pd-1抑制剂、il-1β抑制剂或低甲基化药物可以在用治疗剂、方法或方式治疗之前、同时或之后施用。
[0553]
在某些实施方案中，本文所述的组合可以与一种或多种其他抗体分子、化学疗法、其他抗癌疗法(例如，靶向抗癌疗法、基因疗法、病毒疗法、rna疗法、骨髓移植、纳米疗法或溶瘤药物)、细胞毒性剂、基于免疫的疗法(例如，细胞因子或基于细胞的免疫疗法)、外科手术(例如，乳房肿瘤切除术或乳房切除术)或放射方法，或任何前述的组合一起施用。另外的疗法可以是辅助或新辅助疗法的形式。在一些实施方案中，另外的疗法是酶抑制剂(例如，小分子酶抑制剂)或转移抑制剂。可以与之组合施用的示例性细胞毒性剂包括抗微管剂、拓扑异构酶抑制剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、烷化剂、蒽环类、长春花生物碱、嵌入剂、能够干扰信号转导途径的药剂、促进细胞凋亡的药剂、蛋白酶体抑制剂和辐射(例如，局部或全身辐射(例如，γ辐射))。在其他实施方案中，另外的疗法为手术或放射，或其组合。在其他实施方案中，另外的疗法为靶向pi3k/akt/mtor途径、hsp90抑制剂或微管蛋白抑制剂的一种或多种的疗法。
[0554]
或者或与上述组合组合，本文所述的组合可以与cd47、cd70、nedd8、cdk9、mdm2、flt3或kit抑制剂的一种或多种一起施用或使用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与cd47、cd70、nedd8、cdk9、mdm2、flt3或kit的抑制剂一起施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与tgf-β抑制剂，例如本文所述的tgf-β，进一步与cd47、cd70、nedd8、cdk9、mdm2、flt3或kit的抑制剂组合施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与tgf-β抑制剂，例如本文所述的tgf-β和低甲基化药物，例如本文所述的低甲基化药物，进一步与cd47、cd70、nedd8、cdk9、mdm2、flt3或kit的抑制剂组合施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与tgf-β抑制剂，例如本文所述的tgf-β和pd-1抑制剂，例如本文所述的pd-1抑制剂，进一步与cd47、cd70、nedd8、cdk9、mdm2、flt3或kit的抑制剂组合施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与tgf-β抑制剂，例如本文所述的tgf-β和il-1β抑制剂，例如本文所述的il-1β抑制剂，进一步与cd47、cd70、nedd8、cdk9、mdm2、flt3或kit的抑制剂组合施用。
[0555]
或者或与上述组合组合，可以与p53的活化剂一起施用或使用本文所述的组合。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与p53的活化剂一起施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂于tgf-β抑制剂，例如本文所述的tgf-β，进一步与p53的活化剂组合施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与tgf-β抑制剂，例如本文所述的tgf-β和低甲基化药物，例如本文所述的低甲基化药物，进一步与p53的活化剂组合施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与tgf-β抑制剂，例如本文所述的tgf-β和pd-1抑制剂，例如本文所述的pd-1抑制剂，进一步与p53的活化剂组合施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与tgf-β抑制剂，例如本文所述的tgf-β和il-1β抑制剂，例如本文所述的il-1β抑制剂，进一步与p53的活化剂组合施用。
[0556]
或者或与上述组合组合，可以与如下的一种或多种一起施用或使用本文所述的组合：cd47、cd70、nedd8、cdk9、mdm2、flt3或kit抑制剂。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与cd47、cd70、nedd8、cdk9、mdm2、flt3或kit的抑制剂一起施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与tgf-β抑制剂，例如本文所述的tgf-β，进一步与cd47、cd70、nedd8、cdk9、mdm2、flt3
或kit的抑制剂组合施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与tgf-β抑制剂，例如本文所述的tgf-β和il-1β抑制剂，例如本文所述的il-1β抑制剂，进一步与cd47、cd70、nedd8、cdk9、mdm2、flt3或kit的抑制剂组合施用。
[0557]
或者或与上述组合组合，可以与p53的活化剂一起施用或使用本文所述的组合。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与p53的活化剂一起施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与tgf-β抑制剂，例如本文所述的tgf-β，进一步与p53的活化剂组合施用。在一些实施方案中，tim-3抑制剂与tgf-β抑制剂，例如本文所述的tgf-β和il-1β抑制剂，例如本文所述的il-1β抑制剂，进一步与p53的活化剂组合施用。
[0558]
或者或与上述组合组合，可以与如下的一种或多种一起施用或使用本文所述的组合：免疫调节剂(例如共刺激分子的活化剂或抑制性分子的抑制剂，例如免疫检查点分子)；疫苗，例如治疗癌症的疫苗；或细胞免疫疗法的其他形式。
[0559]
在某些实施方案中，本文所述的组合与共刺激分子或抑制性分子，例如共抑制配体或受体的调节剂一起施用或使用。
[0560]
在一个实施方案中，本文所述的化合物和组合可以与调节剂一起施用或使用，例如共刺激分子的激动剂。在一个实施方案中，共刺激分子的激动剂选自ox40、cd2、cd27、cds、icam-1、lfa-1(cd11a/cd18)、icos(cd278)、4-1bb(cd137)、gitr、cd30、cd40、baffr、hvem、cd7、light、nkg2c、slamf7、nkp80、cd160、b7-h3或cd83配体的激动剂(例如激动剂抗体或其抗原结合片段或可溶性融合体)。
[0561]
在另一个实施方案中，本文所述的化合物和组合可以与gitr激动剂、例如抗-gitr抗体分子联合施用或使用。
[0562]
在一个实施方案中，本文所述的组合与抑制性(或免疫检查点)分子的抑制剂一起施用或使用，所述抑制性(或免疫检查点)分子选自pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla-4、tim-3、lag-3、ceacam(例如ceacam-1、ceacam-3和/或ceacam-5)、vista、btla、tigit、lair1、cd160、2b4和/或tgfβ。在一个实施方案中，所述抑制剂为可溶性配体(例如ctla-4-ig)或抗体或结合pd-1、lag-3、pd-l1、pd-l2或ctla-4的抗体片段。
[0563]
在另一个实施方案中，本文所述的化合物和组合与pd-1抑制剂，例如抗-pd-1抗体分子组合施用或使用。在另一个实施方案中，本文所述的组合与lag-3抑制剂，例如抗-lag-3抗体分子组合施用或使用。在另一个实施方案中，本文所述的组合与pd-l1抑制剂，例如抗-pd-l1抗体分子组合施用或使用。
[0564]
在另一个实施方案中，本文所述的化合物和组合与pd-1抑制剂(例如抗-pd-1抗体分子)和lag-3抑制剂(例如抗-lag-3抗体分子)组合施用或使用。在另一个实施方案中，本文所述的组合与pd-1抑制剂(例如抗-pd-1抗体分子)和pd-l1抑制剂(例如抗-pd-l1抗体分子)组合施用或使用。在另一个实施方案中，本文所述的组合与lag-3抑制剂(例如抗-lag-3抗体分子)和pd-l1抑制剂(例如抗-pd-l1抗体分子)组合施用或使用。
[0565]
在另一个实施方案中，本文所述的化合物和组合与ceacam抑制剂(例如ceacam-1、ceacam-3和/或ceacam-5抑制剂)，例如抗-ceacam抗体分子组合施用或使用。在另一个实施方案中，本文所述的组合与ceacam-1抑制剂，例如抗-ceacam-1抗体分子组合施用或使用。在另一个实施方案中，本文所述的组合与ceacam-3抑制剂，例如抗-ceacam-3抗体分子组合施用或使用。在另一个实施方案中，本文所述的组合与ceacam-5抑制剂，例如抗-ceacam-5
抗体分子组合施用或使用。
[0566]
本文公开的抗体分子的组合可以单独施用，例如作为单独的抗体分子，或连接例如为双特异性或三特异性抗体分子。在一个实施方案中，施用包括抗-tim-3抗体分子和抗-pd-1、抗-ceacam(例如抗-ceacam-1、ceacam-3和/或抗-ceacam-5)、抗-pd-l1或抗-lag-3抗体分子的双特异性抗体。在某些实施方案中，本文公开的抗体的组合用于治疗癌症，例如如本文所述的癌症(例如实体瘤或血液恶性肿瘤)。
[0567]
cd47抑制剂
[0568]
在某些实施方案中，本文所述的抗-tim3抗体分子，任选地与本文所述的低甲基化药物组合或任选地与本文所述的tgf-β抑制剂组合或任选地与如本文所述的低甲基化药物和tgf-β抑制剂组合进一步与cd47抑制剂联合施用。在一些实施方案中，cd47抑制剂为莫洛利单抗。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化(mf)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括mds(例如较低风险mds)。
[0569]
示例性cd47抑制剂
[0570]
在一些实施方案中，所述cd47抑制剂是抗cd47抗体分子。在一些实施方案中，所述抗cd47抗体包含莫洛利单抗。莫洛利单抗也被称为ono-7913、5f9或hu5f9-g4。莫洛利单抗选择性结合肿瘤细胞上表达的cd47，并阻断cd47与其配体信号调节吞噬细胞上表达的蛋白α(sirpa)的相互作用。这样通常会阻止cd47/sirpa介导的信号传导，通过钙网蛋白介导的促吞噬信号的诱导，允许巨噬细胞活化，钙网蛋白在肿瘤细胞表面特异性表达，并导致特定的肿瘤细胞吞噬。此外，阻断cd47信号通常会激活抗肿瘤t淋巴细胞免疫反应和t介导的细胞杀伤。莫洛利单抗在sallaman等人的blood，2019 134(增刊1)：569中公开，其通过引用整体并入。
[0571]
在一些实施方案中，莫洛利单抗经静脉施用。在一些实施方案中，莫洛利单抗在以下时间施用：第1周期的第1天、第4天、第8天、第11天、第15天和第22天(例如28天周期)、第2周期的第1天、第8天、第15天和第22天(例如28天周期)以及第3周期和后续周期的第1天和第15天(例如28天周期)。在一些实施方案中，莫洛利单抗每周至少施用两次，例如28天周期的每周。在一些实施方案中，莫洛利单抗以剂量递增方案施用。在一些实施方案中，莫洛利单抗以1-30mg/kg(例如，每周1-30mg/kg)的剂量施用。
[0572]
其他cd47抑制剂
[0573]
在一些实施方案中，所述cd47抑制剂为抑制剂b6h12.2、cc-90002、c47b157、c47b161、c47b222、srf231、alx148、w6/32、4n1k、4n1、tti-621、tti-622、pkhb1、sen177、mir-708或mir-155。在一些实施方案中，所述cd47抑制剂是双特异性抗体。cd47抑制剂is an抑制剂b6h12.2,cc-90002,c47b157,c47b161,c47b222,srf231,alx148,w6/32,4n1k,4n1,tti-621,tti-622,pkhb1,sen177,mir-708或mir-155。在一些实施方案中，cd47抑制剂为双特异性抗体。
[0574]
在一些实施方案中，所述cd47抑制剂为b6h12.2。b6h12.2在eladl等人journal of hematology&oncology 2020 13(96)https://doi.org/10.1186/s13045-020-00930-1中公开。b6h12.2是一种人源化抗cd74-igg4抗体，其与肿瘤细胞上表达的cd47结合，并阻断cd47与其配体信号调节蛋白α(sirpa)的相互作用。
hematology&oncology 2020 13(96)https://doi.org/10.1186/s13045-020-00930-1中公开，其通过引用整体并入。w6/32为靶向cd47-mhc-1的抗cd47抗体。
[0580]
在一些实施方案中，所述cd47抑制剂为4n1k或4n1。4n1k和4n1已在eladl等人journal of hematology&oncology 2020 13(96)https://doi.org/10.1186/s13045-020-00930-1中公开，其通过引用整体并入。4n1k和4n1为cd47-sirpα肽激动剂。
[0581]
在一些实施方案中，所述cd47抑制剂为tti-621。tti-621已在eladl等人journal of hematology&oncology 2020 13(96)https://doi.org/10.1186/s13045-020-00930-1中公开，其通过引用整体并入。tti-621也称作sirpα-igg1 fc。tti-621是可溶性重组抗体样融合蛋白，由与人免疫球蛋白g1(igg1)的fc结构域相连的人信号调节蛋白α(sirpa)的n端cd47结合域组成，其具有潜在的免疫检查点抑制和抗肿瘤活性。施用后，所述sirpa fc融合蛋白tti-621选择性靶向并结合肿瘤细胞上表达的cd47，并阻断cd47与内源性sirpa(巨噬细胞上表达的细胞表面蛋白)的相互作用。这可以阻止cd47/sirpa介导的信号传导，并消除cd47/sirpa介导的对巨噬细胞活化和癌细胞吞噬的抑制。会通过在肿瘤细胞表面特异性表达的钙网蛋白(crt)与在巨噬细胞上表达的低密度脂蛋白(ldl)受体相关蛋白-1(lrp-1)的结合，诱导促吞噬信号，并导致巨噬细胞活化和肿瘤细胞的特异性吞噬。在一些实施方案中，tti-621是通过肿瘤内施用。
[0582]
在一些实施方案中，所述cd47抑制剂为tti-622。tti-622已在eladl等人journal of hematology&oncology 2020 13(96)https://doi.org/10.1186/s13045-020-00930-1中公开，其通过引用整体并入。tti-622也称作sirpα-igg1 fc。tti-622是可溶性重组抗体样融合蛋白，由人信号调节蛋白α(sirpa；cd172a)的n端cd47结合域与来源于人类免疫球蛋白g亚型4(igg4)的fc域连接而成，具有潜在的免疫检查点抑制、吞噬诱导和抗肿瘤活性。施用后，sirpa-igg4-fc融合蛋白tti-622选择性靶向并结合肿瘤细胞上表达的cd47，并阻断cd47与内源性sirpa(巨噬细胞上表达的细胞表面蛋白)的相互作用。这可以阻止cd47/sirpa介导的信号传导，并消除cd47/sirpa介导的巨噬细胞活化抑制。这会通过在肿瘤细胞表面特异性表达的钙网蛋白(crt)与在巨噬细胞上表达的低密度脂蛋白(ldl)受体相关蛋白-1(lrp-1)的结合，诱导促吞噬信号，并导致巨噬细胞活化和肿瘤细胞的特异性吞噬。
[0583]
在一些实施方案中，所述cd47抑制剂为pkhb1。pkhb1已在eladl等人journal of hematology&oncology 2020 13(96)https://doi.org/10.1186/s13045-020-00930-1中公开，其通过引用整体并入。pkhb1为cd47肽激动剂，其可结合cd47并阻断与sirpα的相互作用。
[0584]
在一些实施方案中，所述cd47抑制剂为sen177。sen177已在eladl等人journal of hematology&oncology 2020 13(96)https://doi.org/10.1186/s13045-020-00930-1中公开，其通过引用整体并入。sen177为靶向cd47中qpctl的抗体。
[0585]
在一些实施方案中，所述cd47抑制剂为mir-708。mir-708已在eladl等人journal of hematology&oncology 2020 13(96)https://doi.org/10.1186/s13045-020-00930-1中公开，其通过引用整体并入。mir-708为靶向cd47并阻断与sirpα相互作用的mirna。
[0586]
在一些实施方案中，所述cd47抑制剂为mir-155。mir-155已在eladl等人journal of hematology&oncology 2020 13(96)https://doi.org/10.1186/s13045-020-00930-1中公开。mir-155为靶向cd47并阻断与sirpα相互作用的mirna。
[0587]
在一些实施方案中，所述cd47抑制剂为抗cd74、抗pd-l1双特异性抗体或抗cd47、抗cd20双特异性抗体，如eladl等人journal of hematology&oncology 2020 13(96)https://doi.org/10.1186/s13045-020-00930-1中公开的，其通过引用整体并入。
[0588]
在一些实施方案中，所述cd74抑制剂为licmab，例如ponce等人oncotarget20178(7):11284-11301所公开的，其通过引用整体并入。
[0589]
cd70抑制剂
[0590]
在某些实施方案中，任选地与本文所述的低甲基化药物组合或任选地与本文所述的tgf-β抑制剂组合或任选地与本文所述的低甲基化药物和tgf-β抑制剂组合的本文所述的抗-tim3抗体进一步与cd70抑制剂组合施用。在一些实施方案中，所述cd70抑制剂为库萨妥珠单抗。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液学适应症，包括骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化(mf)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液学适应症，包括mds(例如较低风险mds)。
[0591]
示例性cd70抑制剂
[0592]
在一些实施方案中，所述cd70抑制剂为抗-cd70抗体分子。在一些实施方案中，抗-cd70抗体包含库萨妥珠单抗。库萨妥珠单抗也称作argx-110或jnj-74494550。库萨妥珠单抗选择性结合并中和cd70的活性，这也可能诱导针对表达cd70的肿瘤细胞的抗体依赖性细胞毒性(adcc)反应。库萨妥珠单抗已在riether等人nature medicine 2020 26:1459-1467中公开，其通过引用整体并入。
[0593]
在一些实施方案中，库萨妥珠单抗经静脉施用。在一些实施方案中，库萨妥珠单抗经皮下施用。在一些实施方案中，库萨妥珠单抗以1-20mg/kg，例如1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，库萨妥珠单抗每两周施用一次。在一些实施方案中，库萨妥珠单抗每两周以10mg/kg的剂量施用一次。在一些实施方案中，库萨妥珠单抗每两周以20mg/kg的剂量施用一次。在一些实施方案中，库萨妥珠单抗在例如28天周期的第3天和第17天施用。
[0594]
p53激活剂
[0595]
在某些实施方案中，本文所述的抗-tim3抗体分子，任选地与本文所述的低甲基化药物组合或任选地与本文所述的tgf-β抑制剂组合或任选地与如本文所述的低甲基化药物和tgf-β抑制剂组合进一步与p53激活剂联合施用。在一些实施方案中，p53激活剂为apr-246。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文的血液适应症，包括骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化(mf)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括血液适应症，包括mds(例如较低风险mds)。
[0596]
示例性p53激活剂
[0597]
在一些实施方案中，所述p53激活剂为apr-246。apr-246是prima-1的甲基化衍生物和结构类似物(p53再激活和诱导大规模凋亡)。apr-246也称作eprenetapopt、prima-1met。apr-246通过巯基的烷基化，共价修饰突变形式的细胞肿瘤p53的核心结构域。这些修饰可以恢复突变型p53的野生型构象和功能，从而重建内源性p53活性，导致肿瘤细胞的细胞周期停滞和凋亡。apr-246在例如zhang等人cell death和disease 20189(439)中公开，其通过引用整体并入。
[0598]
在一些实施方案中，apr-246在例如28天周期的第1-4天施用，例如共12个周期。在一些实施方案中，apr-246以每天4-5g(例如4.5g)的剂量施用。
[0599]
nedd8抑制剂
[0600]
在某些实施方案中，将本文所述的抗-tim3抗体分子,任选地与本文所述的低甲基化药物组合或任选地与本文所述的tgf-β抑制剂组合或任选地与如本文所述的低甲基化药物和tgf-β抑制剂组合进一步与nedd8抑制剂联合施用。在一些实施方案中，nedd8抑制剂为nedd8活化酶(nae)的抑制剂。在一些实施方案中，nedd8抑制剂为为佩沃尼司他。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化(mf)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括mds(例如较低风险mds)。
[0601]
示例性nedd8抑制剂
[0602]
在一些实施方案中，所述nedd8抑制剂是小分子抑制剂。在一些实施方案中，所述nedd8抑制剂为培伏尼司他(pevonedistat)。培伏尼司他也被称为tak-924、nae抑制剂mln4924、nedd8激活酶抑制剂mln4924、mln4924或((1s,2s,4r)-4-(4-((1s)-2,3-二氢-1h-茚-1-基氨基)-7h吡咯并(2,3-d)嘧啶-7-基)-2-羟基环戊基)氨基磺酸甲酯。培伏尼司他可结合并抑制nae，从而抑制肿瘤细胞的增殖和存活。nae激活nedd8(神经前体细胞表达，发育下调8)，nedd8是泛素样(ubl)蛋白，其通过与泛素-蛋白酶体途径(upp)平行但不同的途径修饰细胞靶点。培伏尼司他例如在swords等人blood(2018)131(13)1415-1424，其通过引用整体并入。
[0603]
在一些实施方案中，培伏尼司他经静脉施用。在一些实施方案中，培伏尼司他以10-50mg/m2，例如10mg/m2、20mg/m2、25mg/m2、30mg/m2或50mg/m2的剂量施用。在一些实施方案中，培伏尼司他在例如28天周期的第1天、第3天和第5天施用，例如最多16个周期。在一些实施方案中，培伏尼司他以固定剂量施用。在一些实施方案中，培伏尼司他以递增给药时间表施用。在一些实施方案中，培伏尼司他例如每28天一个周期，在第1天以25mg/m2和第8天以50mg/m2的剂量施用。
[0604]
cdk9抑制剂
[0605]
在某些实施方案中，本文所述的抗-tim3抗体分子，任选地与本文所述的低甲基化药物组合或任选地与本文所述的tgf-β抑制剂组合或任选地与如本文所述的低甲基化药物和tgf-β抑制剂组合进一步与细胞周期依赖性激酶抑制剂联合施用。在一些实施方案中，本文所述的组合进一步与cdk9抑制剂联合施用。在一些实施方案中，cdk9抑制剂为阿伏西地或阿伏西地前药tp-1287。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化(mf)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括mds(例如较低风险mds)。
[0606]
示例性cdk9抑制剂
[0607]
在一些实施方案中，所述cdk9抑制剂为艾维昔布(alvocidib)。艾维昔布也被称为弗拉平度(flavopiridol)、flavo、hmr 1275、l-868275或(-)-2-(2-氯苯基)-5,7-二羟基-8-[(3r,4s)-3-羟基-1-甲基-4-哌啶基]-4h-1-苯并吡喃-4-酮盐酸盐。艾维昔布是一种合成的n-甲基哌啶基氯苯黄酮化合物。作为细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂，艾维昔布通
过阻止细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk)的磷酸化和下调细胞周期蛋白d1和d3的表达诱导细胞周期停滞，导致g1细胞周期停滞和凋亡。该药物也是三磷酸腺苷活性的竞争性抑制剂。艾维昔布在例如gupta等人cancer sensistizing agents for chemotherapy 2019:pp.125-149中公开，其通过引用整体并入。
[0608]
在一些实施方案中，艾维昔布经静脉施用。在一些实施方案中，艾维昔布在例如28天周期的第1、2和/或3天施用。在一些实施方案中，艾维昔布以固定剂量施用。在一些实施方案中，艾维昔布以递增给药计划施用。在一些实施方案中，艾维昔布施用4周，然后是2周的休息期，例如最多6个周期(例如28天周期)。在一些实施方案中，艾维昔布以30-50mg/m2(例如，30mg/m2或50mg/m2)施用。在一些实施方案中，以30mg/m2的剂量、30分钟的静脉(iv)输注方式施用，然后以30mg/m2的剂量连续输注4小时。在一些实施方案中，以30mg/m2剂量、在30分钟内施用，然后在4小时内以50mg/m2的剂量施用。在一些实施方案中，以30mg/m2的第一剂量、30分钟的静脉(iv)输注形式施用艾维昔布，然后以30mg/m2的剂量连续输注4小时，以及在30分钟内以30mg/m2的一个或多个后续剂量施用，然后在4小时内以50mg/m2的剂量施用。
[0609]
其他cdk9抑制剂
[0610]
在一些实施方案中，所述cdk9抑制剂为tp-1287。tp-1287也被称为磷酸艾维昔布tp-1287或磷酸艾维昔布。tp-1287是一种可口服生物利用、可溶性强的艾维昔布磷酸前药，是一种有效的细胞周期蛋白依赖性激酶-9(cdk9)抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。在施用磷酸盐前药tp-1287后，所述前药在肿瘤部位被酶切，活性部分艾维昔布被释放。艾维昔布靶向并结合cdk9，从而降低cdk9靶基因(如抗凋亡蛋白mcl-1)的表达，并在cdk9过表达的癌细胞中诱导g1细胞周期阻滞和凋亡。tp-1287在kim等人cancer research(2017)摘要5133；proceedings:aacr annual meeting 2017中公开，其通过引用整体并入。在一些实施方案中，tp-1287通过口服施用。
[0611]
mdm2抑制剂
[0612]
在某些实施方案中，将本文所述的抗-tim3抗体分子，任选地与本文所述的低甲基化药物组合或任选地与本文所述的tgf-β抑制剂组合或任选地与如本文所述的低甲基化药物和tgf-β抑制剂组合进一步与mdm2抑制剂联合施用。在一些实施方案中，mdm2抑制剂为依达奴林、krt-232、米兰美坦或apg-115。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化(mf)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括mds(例如较低风险mds)。
[0613]
示例性mdm2抑制剂
[0614]
在一些实施方案中，mdm2抑制剂为小分子抑制剂。在一些实施方案中，mdm2抑制剂为依达奴林(idasanutlin)。依达奴林也称作rg7388或ro 5503781。依达奴林为mdm2的口服可得到的小分子拮抗剂(小鼠双微体2；mdm2 p53结合蛋白同系物)，其具有潜在的抗肿瘤活性。依达奴林与mdm2结合，阻断mdm2蛋白与肿瘤抑制蛋白p53的转录激活结构域之间的相互作用。通过阻止mdm2-p53相互作用，p53不被酶促降解并且p53的转录活性被恢复，这可导致p53介导的肿瘤细胞凋亡的诱导。依达奴林公开在例如mascarenhas等人blood(2019)134(6):525-533中，其通过引用整体并入本文。一些实施方案中，依达奴林通过口服施用。在一
些实施方案中，依达奴林在例如28天周期的第1-5天施用。在一些实施方案中，依达奴林以400-500mg、例如300mg施用。在一些实施方案中，每天1次或2次施用依达奴林。在一些实施方案中，在周期1(例如，28天周期)中以300mg每天两次或在周期2和/或3(例如，28天周期)中每天一次施用依达奴林，每个治疗周期(例如，28天周期)持续例如5天。
[0615]
在一些实施方案中，mdm2抑制剂为krt-232。krt-232也称作(3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((1s)-2-甲基-1-(((1-甲基乙基)磺酰基)甲基)丙基)-2-氧代-3-哌啶乙酸或amg-232。krt-232为mdm2(鼠双微体2)的口服可利用抑制剂，其具有潜在的抗肿瘤活性。在口服施用时，mdm2抑制剂krt-232结合mdm2蛋白并阻止其结合肿瘤抑制蛋白p53的转录激活结构域。通过阻止这种mdm2-p53相互作用，恢复了p53的转录活性。krt-232公开在例如garcia-delgado等人blood(2019)134(增刊_1):2945中，其通过引用整体并入。在一些实施方案中，krt-232通过口服施用。在一些实施方案中，krt-232每天1次施用。在一些实施方案中，krt-232在周期、例如28天周期的第1-7天施用。在一些实施方案中，krt-232在例如28天周期的第4-10和18-24天施用，直至例如4个周期。
[0616]
在一些实施方案中，mdm2抑制剂为米兰美坦。米兰美坦也称作hdm2抑制剂ds-3032b或ds-3032b。米兰美坦为口服可利用的mdm2(鼠双微体2)拮抗剂，具有潜在的抗肿瘤活性。在口服施用后，甲苯磺酸米拉美坦与肿瘤抑制蛋白p53的转录激活结构域结合并阻止mdm2蛋白与肿瘤抑制蛋白p53的转录激活结构域的结合。通过阻止这种mdm2-p53相互作用，蛋白酶体介导的p53酶促降解被抑制，并且p53的转录活性被恢复。这导致p53信号传导的恢复并导致p53介导的肿瘤细胞凋亡的诱导。米拉地美坦公开在例如dinardo等人blood(2019)134(增刊_1):3932中，其通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，米拉美坦口服施用。在一些实施方案中，米拉美坦以5-200mg，例如5mg、20mg、30mg、80mg、100mg、90mg和/或200mg施用。在一些实施方案中，米拉美坦以单个胶囊或多个胶囊施用。在一些实施方案中，米拉美坦以固定剂量施用。在一些实施方案中，米拉美坦以剂量递增方案施用。在一些实施方案中，米拉地美坦与奎扎替尼(flt3的抑制剂)进一步组合施用。在一些实施方案中，米拉地美坦以5-200mg(例如，5mg、20mg、80mg或200mg)施用，并且奎扎替尼以20-30mg(例如20mg或30mg)施用。
[0617]
在一些实施方案中，mdm2抑制剂为apg-115。apg-115为人同源微体2(hdm2；小鼠双微体2同源物；mdm2)的口服可例用抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。在口服施用时，p53-hdm2蛋白-蛋白相互作用抑制剂apg-115与hdm2结合，阻止hdm2蛋白与肿瘤抑制蛋白p53的转录激活结构域结合。通过阻止这种hdm2-p53相互作用，蛋白酶体介导的p53的酶促降解被抑制，并且p53的转录活性被恢复。这可能导致p53信号传导的恢复并导致p53介导的肿瘤细胞凋亡的诱导。apg-115公开于例如fang等人journal for immunotherapy of cancer(2019)7(327)中，其以全文引用的方式并入本文中。在一些实施方案中，apg-115通过口服施用。在一些实施方案中，apg-115以100-250mg，例如100mg、150mg、200mg和/或250mg施用。在一些实施方案中，apg-115在例如28天周期的第1-5天施用。在一些实施方案中，apg-115在例如28天周期的第1-7天施用。在一些实施方案中，apg-115以固定剂量施用。在一些实施方案中，按剂量递增时间方案施用apg-115。在一些实施方案中，apg-115在28天周期的第1-5天以100mg/天施用。在一些实施方案中，apg-115在28天周期的第1-5天以150mg/天施用。在一些实施方案中，apg-115是在28天周期的第1-5天以200mg/天施用。在一些实施方案中，
apg-115在28天周期的第1-5天以250mg/天施用。
[0618]
flt3抑制剂
[0619]
在某些实施方案中，本文所述的抗-tim3抗体分子，任选地与本文所述的低甲基化药物组合或任选地与本文所述的tgf-β抑制剂组合或任选地与如本文所述的低甲基化药物和tgf-β抑制剂组合进一步与ftl3抑制剂联合施用。在一些实施方案中，flt3抑制剂为吉列替尼、奎扎替尼或克莱拉尼。在一些实施方案中，这些组合用于治疗公开本文的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化(mf)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗公开本文的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括mds(例如较低风险mds)。
[0620]
示例性flt3抑制剂
[0621]
在一些实施方案中，flt3抑制剂为吉列替尼。吉列替尼也称作asp2215。吉列替尼为受体酪氨酸激酶(rtk)fms-相关酪氨酸激酶3(flt3、stk1或flk2)、axl(ufo或jtk11)和间变型淋巴瘤激酶(alk或cd246)的口服可生物利用的抑制剂，其具有潜在的抗肿瘤活性。吉列替尼结合并抑制野生型和突变形式的flt3、axl和alk。这可能导致flt3、axl和alk介导的信号转导途径的抑制和过表达这些rtk的癌细胞类型中肿瘤细胞增殖的减少。吉列替尼公开在例如perl等人n engl j med(2019)381:1728-1740中，其通过引用整体并入。在一些实施方案中，吉列替尼通过口服施用。
[0622]
在一些实施方案中，flt3抑制剂为奎扎替尼。奎扎替尼也称作ac220或1-(5-叔丁基-1,2-噁唑-3-基)-3-[4-[6-(2-吗啉-4-基乙氧基)咪唑并[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基]脲。奎扎替尼公开在例如cortes等人the lancet(2019)20(7):984-997中。在一些实施方案中，奎扎替尼通过口服施用。在一些实施方案中，奎扎替尼以20-60mg，例如20mg、30mg、40mg和/或60mg施用。在一些实施方案中，奎扎替尼每天施用1次。在一些实施方案中，以固定剂量施用奎扎替尼。在一些实施方案中，以每天20mg施用奎扎替尼。在一些实施方案中，以每天30mg1次施用奎扎替尼。在一些实施方案中，以每天40mg 1次施用奎扎替尼。在一些实施方案中，以剂量递增方案施用奎扎替尼。在一些实施方案中，奎扎替尼在例如28天周期的第1-14天以每天30mg施用，并且在例如28天周期的第15-28天以每天60mg施用。在一些实施方案中，奎扎替尼在例如28天周期的第1-14天以每天20mg施用，并且在例如28天周期的第15-28天以每天30mg施用。
[0623]
在一些实施方案中，flt3抑制剂为克莱拉尼(crenolanib)。克莱拉尼为靶向血小板衍生生长因子受体(pdgfr)的口服可生物利用的小分子，其具有潜在的抗肿瘤活性。克莱拉尼结合并且抑制pdgfr，这导致pdgfr-相关信号转导途径抑制，且由此抑制肿瘤血管发生和肿瘤细胞增殖抑制。克莱拉尼也称作cp-868596。克莱拉尼公开在例如zimmerman等人blood(2013)122(22):3607-3615中，其通过引用整体并入。在一些实施方案中，克莱拉尼通过口服施用。在一些实施方案中，每天施用克莱拉尼。在一些实施方案中，克莱拉尼以100-200mg，例如100mg或200mg施用。在一些实施方案中，每天1次、每天2次或每天3次施用克莱拉尼。在一些实施方案中，克莱拉尼以每天200mg，分3次相同剂量，例如每8小时施用。
[0624]
kit抑制剂
[0625]
在某些实施方案中，本文所述的抗-tim3抗体分子，任选地与本文所述的低甲基化药物组合或任选地与本文所述的tgf-β抑制剂组合或任选地与如本文所述的低甲基化药物
和tgf-β抑制剂组合进一步与kit抑制剂联合施用。在一些实施方案中，kit抑制剂为瑞普替尼或阿瓦替尼。在一些实施方案中，这些组合用于治疗公开本文的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化(mf)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗公开本文的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括mds(例如较低风险mds)。
[0626]
示例性kit抑制剂
[0627]
在一些实施方案中，kit抑制剂为利普替尼(ripretinib)。利普替尼为肿瘤相关抗原(taa)肥大/干细胞因子受体(scfr)kit和血小板衍生生长因子受体α(pdgfr-α；pdgfrα)的野生型和突变形式的口服可生物利用的开关袋控制抑制剂，去具有潜在的抗肿瘤活性。口服施用时，利普替尼特异性地在kit和pdgfrα的开关口袋结合位点处靶向并结合kit和pdgfrα的野生型和突变形式，从而防止这些激酶从无活性构象转换为活性构象并使其野生型和突变形式失活。这消除了kit/pdgfrα介导的肿瘤细胞信号传导并阻止了kit/pdgfrα驱动的癌症的增殖。dcc-2618还抑制几种其它激酶，包括血管内皮生长因子受体2型(vegfr2；kdr)、血管形成素-1受体(tie2；tek)、pdgfr-β和巨噬细胞集落刺激因子1受体(fms；csf1r)，从而进一步抑制肿瘤细胞生长。利普替尼也称作dcc2618、qinlocktm(deciphera)或1-n'-[2,5-二氟-4-[2-(1-甲基吡唑-4-基)吡啶-4-基]氧基苯基]-1-n'-苯基环丙烷-1,1-二甲酰胺。在一些实施方案中，利普替尼通过口服施用。在一些实施方案中，利普替尼以100-200mg、例如150mg施用。在一些实施方案中，利普替尼以3片50mg片剂施用。在一些实施方案中，利普替尼以150mg每天1次施用。在一些实施方案中，以每天一次一起服用的三片50mg片剂施用利普替尼。
[0628]
在一些实施方案中，kit抑制剂为阿瓦替尼。阿瓦替尼也称作blu-285或ayvakittm(blueprint medicines)。阿瓦替尼为血小板衍生生长因子受体α(pdgfrα；pdgfra)和肥大/干细胞因子受体c-kit(scfr)的特异性突变形式的口服可生物利用的抑制剂，其具有潜在的抗肿瘤活性。在口服施用时，阿瓦替尼特异性结合并且抑制pdgfra和c-kit的特异性突变形式，包括pdgfra d842v突变体和不同kit外显子17突变体。这导致pdgfra-和c-kit-介导的信号转导途径抑制和表达这些pdgfra和c-kit突变体的肿瘤细胞增殖抑制。在一些实施方案中，阿瓦替尼通过口服施用。在一些实施方案中，每天施用阿瓦替尼。在一些实施方案中，阿瓦替尼以100-300mg，例如100mg、200mg、300mg施用。在一些实施方案中，阿瓦替尼每天施用1次。在一些实施方案中，阿瓦替尼以300mg每天施用1次。在一些实施方案中，阿瓦替尼以200mg每天施用1次。在一些实施方案中，阿瓦替尼以100mg每天施用1次。在一些实施方案中，阿瓦替尼在例如28天周期中连续施用。
[0629]
pd-l1抑制剂
[0630]
在某些实施方案中，本文所述的组合物和/或组合进一步与pd-l1抑制剂联合施用。在一些实施方案中，pd-l1抑制剂选自faz053(novartis)、阿特珠单抗(genentech/roche)、阿维单抗(merck serono和pfizer)、德瓦鲁单抗(medimmune/astrazeneca)或bms-936559(bristol-myers squibb)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化(mf)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括mds(例如较低风险mds)。
[0631]
示例性pd-l1抑制剂
[0632]
在一个实施方案中，pd-l1抑制剂为抗-pd-l1抗体分子。在一个实施方案中，pd-l1抑制剂为如us 2016/0108123中公开的抗-pd-l1抗体分子，该文献于2016年4月21日公布，标题为“antibody molecules to pd-l1 and uses thereof”，其通过引用整体并入。本文所述的抗体分子可以通过us 2016/0108123中所述的载体、宿主细胞和方法制备，其通过引用整体并入。
[0633]
其他示例性pd-l1抑制剂
[0634]
在一个实施方案中，抗-pd-l1抗体分子为阿特珠单抗(genentech/roche)，也称作mpdl3280a、rg7446、ro5541267、yw243.55.s70或tecentriqtm。阿特珠单抗和其他抗-pd-l1公开公开在us 8,217,149中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，抗-pd-l1抗体分子包含阿特珠单抗的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0635]
在一个实施方案中，抗-pd-l1抗体分子为阿维单抗(avelumab)(merck serono和pfizer)，也称作msb0010718c。阿维单抗和其他抗-pd-l1抗体公开在wo 2013/079174中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，抗-pd-l1抗体分子包含阿维单抗的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0636]
在一个实施方案中，抗-pd-l1抗体分子为德瓦鲁单抗(durvalumab)(medimmune/astrazeneca)，也称作medi4736。德瓦鲁单抗和其他抗-pd-l1抗体公开在us 8,779,108中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，抗-pd-l1抗体分子包含德瓦鲁单抗的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0637]
在一个实施方案中，抗-pd-l1抗体分子为bms-936559(bristol-myers squibb)，也称作mdx-1105或12a4。bms-936559和其他抗-pd-l1抗体公开在us 7,943,743和wo 2015/081158中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，抗-pd-l1抗体分子包含bms-936559的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0638]
另外已知的抗-pd-l1抗体包括下列文献中所述的那些，例如：wo 2015/181342、wo 2014/100079、wo 2016/000619、wo 2014/022758、wo 2014/055897、wo 2015/061668、wo 2013/079174、wo 2012/145493、wo 2015/112805、wo 2015/109124、wo 2015/195163、us 8,168,179、us 8,552,154、us 8,460,927和us 9,175,082，其通过引用整体并入。
[0639]
在一个实施方案中，抗-pd-l1抗体为与本文所述的抗pd-l1抗体之一竞争结合和/或结合pd-l1上的相同表位的抗体。
[0640]
lag-3抑制剂
[0641]
在某些实施方案中，本文所述的组合物和组合进一步与lag-3抑制剂联合施用。在一些实施方案中，lag-3抑制剂选自lag525(novartis)、bms-986016(bristol-myers squibb)或tsr-033(tesaro)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化(mf)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括mds(例如较低风险mds)。
[0642]
示例性lag-3抑制剂
[0643]
在一个实施方案中，lag-3抑制剂为抗-lag-3抗体分子。在一个实施方案中，lag-3抑制剂为如us 2015/0259420中所公开的抗-lag-3抗体分子，该文献于2015年9月17日公开，标题为“antibody molecules to lag-3and uses thereof”，其通过引用整体并入。本文所述的抗体分子可以通过us 2015/0259420(其通过引用整体并入)中所述的和us 2015/0259420(其通过引用整体并入)中所述的载体、宿主细胞和方法制备。
[0644]
其他示例性lag-3抑制剂
[0645]
在一个实施方案中，抗-lag-3抗体分子为bms-986016(bristol-myers squibb)，也称作bms986016。bms-986016和其他抗-lag-3抗体公开在wo 2015/116539和us 9,505,839中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，抗-lag-3抗体分子包含bms-986016的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0646]
在一个实施方案中，抗-lag-3抗体分子为tsr-033(tesaro)。在一个实施方案中，抗-lag-3抗体分子包含tsr-033的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0647]
在一个实施方案中，抗-lag-3抗体分子为imp731或gsk2831781(gsk和prima biomed)。imp731和其他抗-lag-3抗体公开在wo 2008/132601和us 9,244,059中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，抗-lag-3抗体分子包含imp731的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。在一个实施方案中，抗-lag-3抗体分子包含gsk2831781的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0648]
在一个实施方案中，抗-lag-3抗体分子为imp761(prima biomed)。在一个实施方案中，抗-lag-3抗体分子包含imp761的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0649]
另外的已知抗-lag-3抗体包括例如wo 2008/132601、wo 2010/019570、wo 2014/140180、wo 2015/116539、wo 2015/200119、wo 2016/028672、us 9,244,059、us 9,505,839中所述的那些，其通过引用整体并入。
[0650]
在一个实施方案中，抗-lag-3抗体为与本文所述的抗lag-3抗体之一竞争结合和/或结合lag-3上与本文所述的抗lag-3抗体之一相同的表位的抗体。
[0651]
在一个实施方案中，抗-lag-3抑制剂为可溶性lag-3蛋白，例如imp321(prima biomed)，例如如wo 2009/044273中所公开的，其通过引用整体并入。
[0652]
gitr激动剂
[0653]
在某些实施方案中，本文所述的组合物和组合可以与gitr激动剂联合施用。在一些实施方案中，gitr激动剂为gwn323(nvs)、bms-986156、mk-4166或mk-1248(merck)、trx518(leap therapeutics)、incagn1876(incyte/agenus)、amg 228(amgen)或inbrx-110(inhibrx)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化(mf)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗本文公开的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括mds(例如较低风险mds)。
[0654]
示例性gitr激动剂
[0655]
在一个实施方案中，gitr激动剂为抗-gitr抗体分子。在一个实施方案中，gitr激
动剂为如wo 2016/057846中所述的抗-gitr抗体分子，该文献于2016年4月14日公布，标题为“compositions and methods of use for augmented immune response and cancer therapy”，其通过引用整体并入。本文所述的抗体分子可以通过wo 2016/057846中所述的载体、宿主细胞和方法制备，其通过引用整体并入。本文所述的抗体分子可以通过wo 2016/057846中所述的载体、宿主细胞和方法制备，其通过引用整体并入。
[0656]
其他示例性gitr激动剂
[0657]
在一个实施方案中，抗-gitr抗体分子为bms-986156(bristol-myers squibb)，也称作bms 986156或bms986156。bms-986156和其他抗-gitr抗体公开在例如us 9,228,016和wo 2016/196792中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，抗-gitr抗体分子包含bms-986156的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0658]
在一个实施方案中，抗-gitr抗体分子为mk-4166或mk-1248(merck).mk-4166,mk-1248和其他抗-gitr抗体公开在例如us 8,709,424、wo 2011/028683、wo 2015/026684和mahne等人cancer res.2017；77(5):1108-1118中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，抗-gitr抗体分子包含mk-4166或mk-1248的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0659]
在一个实施方案中，抗-gitr抗体分子为trx518(leap therapeutics).trx518和其他抗-gitr抗体公开在例如us 7,812,135、us 8,388,967、us 9,028,823、wo 2006/105021和ponte j等人(2010)clinical immunology；135:s96中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，抗-gitr抗体分子包含trx518的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0660]
在一个实施方案中，抗-gitr抗体分子为incagn1876(incyte/agenus)。incagn1876和其他抗-gitr抗体公开在例如us 2015/0368349和wo 2015/184099中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，抗-gitr抗体分子包含incagn1876的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0661]
在一个实施方案中，抗-gitr抗体分子为amg 228(amgen)。amg 228和其他抗-gitr抗体公开在例如us 9,464,139和wo 2015/031667中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，抗-gitr抗体分子包含amg 228的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0662]
在一个实施方案中，抗-gitr抗体分子为inbrx-110(inhibrx)。inbrx-110和其他抗-gitr抗体公开在例如us 2017/0022284和wo 2017/015623中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，gitr激动剂包含inbrx-110的cdr序列(或统称为全部cdr序列)、重链或轻链可变区序列或重链或轻链序列的一个或多个。
[0663]
在一个实施方案中，gitr激动剂(例如融合蛋白)为medi 1873(medimmune)，也称作medi1873。medi 1873和其他gitr激动剂公开在例如us 2017/0073386、wo 2017/025610和ross等人cancer res 2016；76(14增刊):摘要nr 561中，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，gitr激动剂包含medi 1873的igg fc结构域、功能性多聚化结构域和的糖皮质激素诱导的tnf受体配体(gitrl)的受体结合结构域的一个或多个。
[0664]
另外已知的gitr激动剂(例如抗-gitr抗体)包括例如wo 2016/054638中所述的那
些，其通过引用整体并入。
[0665]
在一个实施方案中，抗-gitr抗体为与本文所述的抗gitr抗体之一竞争结合和/或与本文所述的抗gitr抗体之一结合gitr上的相同表位的抗体。
[0666]
在一个实施方案中，gitr激动剂为激活gitr信号传导途径的肽。在一个实施方案中，gitr激动剂是与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的fc区)融合的免疫粘附素结合片段(例如，包含gitrl的胞外或gitr结合部分的免疫粘附素结合片段)。
[0667]
il15/il-15ra复合物
[0668]
在某些实施方案中，本文所述的组合物和/或组合进一步与il-15/il-15ra复合物组合施用。在一些实施方案中，il-15/il-15ra复合物选自niz985(novartis)、atl-803(altor)或cyp0150(cytune)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗公开本文的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化(mf)。在一些实施方案中，这些组合用于治疗公开本文的癌症适应症，包括本文公开的血液适应症，包括mds(例如较低风险mds).
[0669]
示例性il-15/il-15ra复合物
[0670]
在一个实施方案中，il-15/il-15ra复合物包含与人il-15ra的可溶性形式复合的人il-15。所述复合物可以包含与il-15ra的可溶性形式共价结合或非共价结合的il-15。在一个具体的实施方案中，人il-15与il-15ra的可溶性形式共价结合。在一个具体的实施方案中，组合物的人il-15包含wo 2014/066527中所述的氨基酸序列，其通过引用整体并入，且人il-15ra的可溶性形式包含如wo 2014/066527中所述的氨基酸序列，其通过引用整体并入。本文所述的分子可以通过wo 2007/084342所述的载体、宿主细胞和中方法制备，其通过引用整体并入。
[0671]
其他示例性il-15/il-15ra复合物
[0672]
在一个实施方案中，il-15/il-15ra复合物为alt-803、il-15/il-15ra fc融合蛋白(il-15n72d:il-15rasu/fc可溶性复合物)。alt-803公开在wo 2008/143794中，其通过引用整体并入。
[0673]
在一个实施方案中，il-15/il-15ra复合物包含与il-15ra(cyp0150,cytune)的苏希结构域融合的il-15。il-15ra的苏希结构域是指从il-15ra的信号肽之后的第一个半胱氨酸残基开始并在所述信号肽之后的第四个半胱氨酸残基结束的结构域。与il-15ra的苏希结构域融合的il-15复合物公开在wo 2007/04606和wo 2012/175222中，其通过引用整体并入。
[0674]
药物组合物、制剂和药盒
[0675]
在另一个方面，本公开提供了组合物，例如，可药用组合物，所述组合物包含与可药用载体配制在一起的本文所述的组合。如本文所用，“可药用载体”包括生理上相容的任何和全部溶剂、分散介质、等渗剂和吸收延迟剂等。载体可以适于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、直肠、脊髓或表皮施用(例如，通过注射或输注)。
[0676]
本文所述的组合物可以处于多种形式。这些形式例如包括液体、半固体和固体剂型，如液态溶液剂(例如，可注射用溶液剂和可输注溶液剂)、分散体剂或混悬剂、脂质体剂和栓剂。优选的形式取决于预期的施用模式和治疗用途。典型的优选组合物处于可注射用溶液剂或可输注溶液剂形式。优选的施用模式是肠胃外施用(例如，静脉内、皮下、腹内、肌
内)。在一个优选实施方案中，通过静脉内输注或注射施用抗体。在另一个优选实施方案中，通过肌内或皮下注射施用抗体。
[0677]
如本文所用的短语“肠胃外施用”和“肠胃外方式施用”意指除了肠内和局部施用的外的施用模式，通常通过注射施用，并且包括，而不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、角皮下、关节内、被膜下、蛛网膜下、椎管内、硬膜外和胸骨内注射和输注。
[0678]
治疗性组合物典型地应当是无菌的并且在制造和储存条件下稳定。可以将组合物配制为溶液、微乳液、分散体、脂质体或适合高抗体浓度的其他有序结构。可以通过将活性化合物(例如，抗体或抗体部分)以要求的量连同上文所列举的一种成分或成分组合在适宜的溶剂中并入，根据需要，随后过滤消毒，制备无菌可注射溶液剂。通常，通过将所述活性化合物并入无菌溶媒中来制备分散体，所述无菌溶媒含有基础分散介质和来自上文所列举那些成分中的所要求的其他成分。在用于制备无菌注射溶液剂的无菌粉末情况下，优选的制备方法是从其先前无菌过滤的溶液产生有效成分外加任何额外所需成分的的粉末的真空干燥和冷冻干燥。可以例如通过使用衣层(如卵磷脂)，在分散体的情况下通过维持要求的粒度和通过使用表面活性剂，维持溶液剂的适宜流动性。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包含延迟吸收的物质例如单硬脂酸盐和明胶而引起。
[0679]
可以将本文所述的组合或组合物配制成适于施用(例如，静脉内施用)至如本文所述的受试者的制剂(例如，剂量制剂或剂型)。本文所述的制剂可以是液体制剂、冻干制剂或复配制剂。
[0680]
在某些实施方案中，所述制剂为液体制剂。在一些实施方案中，所述制剂(例如液体制剂)包含tim-3抑制剂(例如本文所述的抗-tim-3抗体分子)和缓冲剂。在一些实施方案中，所述制剂(例如液体制剂)包含tgf-β抑制剂(例如本文所述的抗-tgf-β抗体分子)和缓冲剂。在一些实施方案中，所述制剂(例如液体制剂)包含pd-1抑制剂(例如本文所述的抗-pd-1抗体分子)和缓冲剂。在一些实施方案中，所述制剂(例如液体制剂)包含il-1β抑制剂(例如本文所述的抗-il-1β抗体分子)和缓冲剂。
[0681]
在一些实施方案中，所述制剂(例如液体制剂)包含本文所述的抗-tim-3、抗-tgf-β、抗-pd1或抗-il-1β抗体分子，其以25mg/ml-250mg/ml、例如50mg/ml-200mg/ml、60mg/ml-180mg/ml、70mg/ml-150mg/ml、80mg/ml-120mg/ml、90mg/ml-110mg/ml、50mg/ml-150mg/ml、50mg/ml-100mg/ml、150mg/ml-200mg/ml或100mg/ml-200mg/ml、例如50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、110mg/ml、120mg/ml、130mg/ml、140mg/ml或150mg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，抗体分子以80mg/ml-120mg/ml、例如100mg/ml的浓度存在。
[0682]
在一些实施方案中，所述制剂(例如液体制剂)包含缓冲剂，其包含组氨酸(例如组氨酸缓冲液)。在某些实施方案中，所述缓冲剂(例如组氨酸缓冲液)以1mm-100mm、例如2mm-50mm、5mm-40mm、10mm-30mm、15-25mm、5mm-40mm、5mm-30mm、5mm-20mm、5mm-10mm、40mm-50mm、30mm-50mm、20mm-50mm、10mm-50mm或5mm-50mm、例如2mm、5mm、10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm或50mm的浓度存在。在一些实施方案中，所述缓冲剂(例如组氨酸缓冲液)以15mm-25mm、例如20mm的浓度存在。在其他实施方案中，所述缓冲剂(例如组氨酸缓冲液)具有4-7，例如5-6，例如5、5.5或6的ph。在一些实施方案中，所述缓冲剂(例如组氨酸
缓冲液)具有5-6，例如5.5的ph。在某些实施方案中，所述缓冲剂包含组氨酸缓冲液，其浓度为15mm-25mm(例如20mm)，且具有5-6(例如5.5)的ph。在某些实施方案中，所述缓冲剂包含组氨酸和组氨酸-hcl。
[0683]
在一些实施方案中，所述制剂(例如液体制剂)包含本文公开的抗体分子，其以80-120mg/ml、例如100mg/ml的浓度存在；和缓冲剂，其包含组氨酸缓冲液，其以15mm-25mm(例如20mm)的浓度存在并且具有5-6(例如5.5)的ph。
[0684]
在一些实施方案中，所述制剂(例如液体制剂)还包含碳水化合物。在某些实施方案中，碳水化合物为蔗糖。在一些实施方案中，碳水化合物(例如蔗糖)以50mm-500mm、例如100mm-400mm、150mm-300mm、180mm-250mm、200mm-240mm、210mm-230mm、100mm-300mm、100mm-250mm、100mm-200mm、100mm-150mm、300mm-400mm、200mm-400mm或100mm-400mm、例如100mm、150mm、180mm、200mm、220mm、250mm、300mm、350mm或400mm的浓度存在。在一些实施方案中，所述制剂包含碳水化合物或蔗糖，其以200mm-250mm、例如220mm的浓度存在。
[0685]
在一些实施方案中，所述制剂(例如液体制剂)包含如本文公开的抗体分子，其存在浓度为80-120mg/ml、例如100mg/ml；缓冲剂，其包含组氨酸缓冲液，其存在浓度为15mm-25mm(例如20mm)，并且具有5-6(例如5.5)的ph；和碳水化合物或蔗糖，其存在浓度为200mm-250mm、例如220mm。
[0686]
在一些实施方案中，所述制剂(例如液体制剂)还包含表面活性剂。在某些实施方案中，表面活性剂为聚山梨醇酯20。在一些实施方案中，表面活性剂或聚山梨醇酯20)以0.005％-0.1％(w/w)、例如0.01％-0.08％、0.02％-0.06％、0.03％-0.05％、0.01％-0.06％、0.01％-0.05％、0.01％-0.03％、0.06％-0.08％、0.04％-0.08％或0.02％-0.08％(w/w)、例如0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％(w/w)的浓度存在。在一些实施方案中，所述制剂包含表面活性剂或聚山梨醇酯20，其存在浓度为0.03％-0.05％、例如0.04％(w/w)。
[0687]
在一些实施方案中，所述制剂(例如液体制剂)包含如本文公开的抗体分子，其存在浓度为80-120mg/ml、例如100mg/ml；缓冲剂，其包含浓度为15mm-25mm(例如20mm)的组氨酸缓冲液，并且具有5-6(例如5.5)的ph；碳水化合物或蔗糖，其存在浓度为200mm-250mm、例如220mm；和表面活性剂或聚山梨醇酯20，其存在浓度为0.03％-0.05％、例如0.04％(w/w)。
[0688]
在一些实施方案中，所述制剂(例如液体制剂)包含如本文公开的抗体分子，其存在浓度为100mg/ml；缓冲剂，其包含组氨酸缓冲液(例如组氨酸/组氨酸-hcl)，浓度为20mm)，并且具有5.5的ph；碳水化合物或蔗糖，其存在浓度为220mm；和表面活性剂或聚山梨醇酯20，其存在浓度为0.04％(w/w)。
[0689]
在一些实施方案中，通过稀释包含本文所述的抗体分子的制剂制备液体制剂。例如，可以用饱和一种或多种赋形剂的溶液(例如浓缩赋形剂)稀释药物物质制剂。在一些实施方案中，所述溶液包含组氨酸、蔗糖或聚山梨醇酯20的一种、两种或全部。在某些实施方案中，所述溶液包含与药物物质制剂相同的赋形剂。示例性赋形剂包括但不限于氨基酸(例如组氨酸)、碳水化合物(例如蔗糖)或表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)。在某些实施方案中，液体制剂不为重构的冻干制剂。在其他实施方案中，液体制剂为复配的冻干制剂。在一些实施方案中，将所述制剂作为液体储存。在其他实施方案中，将所述自己制备成液体，且然后例如通过冻干或喷雾干燥来干燥，然后储存。
[0690]
在某些实施方案中，给每个容器(例如小瓶)填充0.5ml-10ml(例如0.5ml-8ml,1ml-6ml或2ml-5ml，例如1ml、1.2ml、1.5ml、2ml、3ml、4ml、4.5ml或5ml)液体制剂。在其他实施方案中，将液体制剂填充入容器(例如小瓶)，使得可以从每个容器(例如小瓶)中抽取出至少1ml(例如至少1.2ml、至少1.5ml、至少2ml、至少3ml、至少4ml或至少5ml)的可提取体积的液体制剂。在某些实施方案中，在临床场所不经稀释从容器(例如小瓶)中提取出液体制剂。在某些实施方案中，在临床场所从药物物质制剂稀释并且从容器(例如小瓶)中提取液体制剂。在某些实施方案中，在开始向患者输注之前，例如1小时内(例如45分钟、30分钟或15分钟内)将所述制剂(例如液体制剂)注射至输液袋。
[0691]
可以将本文所述的制剂储存在容器中。用于本文所述的任何制剂的容器可包括例如小瓶，和任选的塞子、帽或两者。在某些实施方案中，小瓶是玻璃小瓶，例如6r白色玻璃小瓶。在其他实施方案中，塞子是橡胶塞子，例如灰色橡胶塞子。在其他实施方案中，帽是翻盖的，例如铝翻盖的。在一些实施方案中，容器包含6r白色玻璃小瓶、灰色橡胶塞和铝翻盖。在一些实施方案中，容器(例如，小瓶)用于一次性容器。在某些实施方案中，容器(例如小瓶)中存在25mg/ml-250mg/ml、例如50mg/ml-200mg/ml、60mg/ml-180mg/ml、70mg/ml-150mg/ml、80mg/ml-120mg/ml、90mg/ml-110mg/ml、50mg/ml-150mg/ml、50mg/ml-100mg/ml、150mg/ml-200mg/ml或100mg/ml-200mg/ml、例如50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、110mg/ml、120mg/ml、130mg/ml、140mg/ml或150mg/ml如本文所述的的抗体分子。
[0692]
在一些实施方案中，所述制剂为冻干制剂。在某些实施方案中，所述冻干制剂从包含本文所述的抗体分子的液体制剂冻干或干燥。例如，每个容器(例如小瓶)可以填充1-5ml,例如1-2ml的液体制剂并冻干。
[0693]
在一些实施方案中，所述制剂为复配制剂。在某些实施方案中，从包含本文所述抗体分子的冻干制剂重构复配制剂。例如，复配制剂可以通过将冻干调配物制剂溶于稀释剂中使得蛋白质分散于复配制剂中来制备。在一些实施方案中，冻干制剂用1ml-5ml，例如1ml-2ml，例如1.2ml水或注射用缓冲液重构复配制剂。在某些实施方案中，冻干制剂用1ml-2ml注射用水重构，例如在临床场所。
[0694]
在一些实施方案中，复配制剂包含抗体分子(例如本文公开的抗-tim-3,抗-tgf-β、抗-pd-1或抗-il-1β抗体分子如)和缓冲剂。
[0695]
在一些实施方案中，复配制剂包含如本文公开的抗-tim-3、抗-tgf-β、抗-p-d1或抗-il-1β抗体分子，其存在浓度为25mg/ml-250mg/ml、例如50mg/ml-200mg/ml、60mg/ml-180mg/ml、70mg/ml-150mg/ml、80mg/ml-120mg/ml、90mg/ml-110mg/ml、50mg/ml-150mg/ml、50mg/ml-100mg/ml、150mg/ml-200mg/ml或100mg/ml-200mg/ml、例如50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、110mg/ml、120mg/ml、130mg/ml、140mg/ml或150mg/ml。在某些实施方案中，抗体分子以80mg/ml-120mg/ml、例如100mg/ml的浓度存在。
[0696]
在一些实施方案中，复配制剂包含缓冲剂，其包含组氨酸(例如组氨酸缓冲液)。在某些实施方案中，所述缓冲剂(例如组氨酸缓冲液)以1mm-100mm、例如2mm-50mm、5mm-40mm、10mm-30mm、15-25mm、5mm-40mm、5mm-30mm、5mm-20mm、5mm-10mm、40mm-50mm、30mm-50mm、20mm-50mm、10mm-50mm或5mm-50mm、例如2mm、5mm、10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm或50mm的浓度存在。在一些实施方案中，所述缓冲剂(例如组氨酸缓冲液)以15mm-25mm、例如20mm的浓度存在。在其他实施方案中，所述缓冲剂(例如组氨酸缓冲液)具有4-7，
例如5-6，例如5、5.5或6的ph。在一些实施方案中，所述缓冲剂(例如组氨酸缓冲液)具有5-6、例如5.5的ph。在某些实施方案中，所述缓冲剂包含组氨酸缓冲液，其浓度为15mm-25mm(例如20mm)并且具有5-6(例如5.5)的ph。在某些实施方案中，所述缓冲剂包含组氨酸和组氨酸-hcl。
[0697]
在一些实施方案中，复配制剂包含如本文公开的抗体分子，其存在浓度为80-120mg/ml、例如100mg/ml；和缓冲剂，其包含浓度为15mm-25mm(例如20mm)的组氨酸缓冲液，并且具有5-6(例如5.5)的ph。
[0698]
在一些实施方案中，复配制剂还包含碳水化合物。在某些实施方案中，碳水化合物为蔗糖。在一些实施方案中，碳水化合物(例如蔗糖)以50mm-500mm、例如100mm-400mm、150mm-300mm、180mm-250mm、200mm-240mm、210mm-230mm、100mm-300mm、100mm-250mm、100mm-200mm、100mm-150mm、300mm-400mm、200mm-400mm或100mm-400mm、例如100mm、150mm、180mm、200mm、220mm、250mm、300mm、350mm或400mm的浓度存在。在一些实施方案中，该制剂包含以200mm-250mm、例如220mm的浓度存在的碳水化合物或蔗糖。
[0699]
在一些实施方案中，复配制剂包含：本文公开的抗体分子，其存在浓度为80-120mg/ml、例如100mg/ml；缓冲剂，其包含浓度为15mm-25mm(例如20mm)的组氨酸缓冲液的缓冲剂，并且具有5-6(例如5.5)的ph；和碳水化合物或蔗糖，其存在浓度为200mm-250mm、例如220mm。
[0700]
在一些实施方案中，复配制剂还包含表面活性剂。在某些实施方案中，表面活性剂为聚山梨醇酯20。在一些实施方案中，表面活性剂或聚山梨醇酯20)以0.005％-0.1％(w/w)，例如0.01％-0.08％、0.02％-0.06％、0.03％-0.05％、0.01％-0.06％、0.01％-0.05％、0.01％-0.03％、0.06％-0.08％、0.04％-0.08％或0.02％-0.08％(w/w),例如0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％(w/w)的浓度存在。在一些实施方案中，该制剂包含以0.03％-0.05％、例如0.04％(w/w)的浓度存在的表面活性剂或聚山梨醇酯20。
[0701]
在一些实施方案中，复配制剂包含如本文公开的抗体分子，其存在浓度为80-120mg/ml、例如100mg/ml；缓冲剂，其包含浓度为15mm-25mm(例如20mm)的组氨酸缓冲液，并且具有5-6(例如5.5)的ph；碳水化合物或蔗糖，其在浓度为200mm-250mm、例如220mm；和表面活性剂或聚山梨醇酯20，其存在浓度为0.03％-0.05％、例如0.04％(w/w)。
[0702]
在一些实施方案中，复配制剂包含如本文公开的抗体分子，其存在浓度为100mg/ml、例如100mg/ml；缓冲剂，其包含浓度为20mm的组氨酸缓冲液(例如组氨酸/组氨酸-hcl)，并且具有5.5的ph；碳水化合物或蔗糖，其在浓度为220mm；和表面活性剂或聚山梨醇酯20，其存在浓度为0.04％(w/w)。
[0703]
在一些实施方案中，重构所述制剂，使得可从包含该重构制剂的容器(例如小瓶)中抽取出至少1ml(例如至少1.2ml、1.5ml、2ml、2.5ml或3ml的重构制剂的可提取体积。在某些实施方案中，在临床场所从容器(例如小瓶)中重构和/或提取该制剂。在某些实施方案中，将所述制剂(例如重构制剂)注射至输液袋，例如在开始向患者输注之前1小时内(例如45分钟、30分钟或15分钟内)。
[0704]
可用于本文所述制剂的其他示例性缓冲剂包括但不限于精氨酸缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂或磷酸盐缓冲剂。可用于本文所述制剂的其他示例性碳水化合物包括但不限于海藻
糖、甘露糖醇、山梨醇或其组合。本文所述的制剂还可以包含张度剂，例如氯化钠，和/或稳定剂，例如氨基酸(例如甘氨酸、精氨酸、甲硫氨酸或其组合)。
[0705]
抗体分子可以通过本领域已知的不同方法施用，不过，对于许多治疗应用，优选的施用途径/模式是静脉内注射或输注。例如，抗体分子可以通过静脉输注以大于20mg/min，例如20-40mg/min且典型地大于或等于40mg/min的速率施用，以达到约35-440mg/m2，典型地约70-310mg/m2且更典型地约110-130mg/m2的剂量。在实施方案中，抗体分子可以通过静脉输注以小于10mg/min；优选小于或等于5mg/min的速率施用，以达到约1-100mg/m 2
，优选约5-50mg/m2、约7-25mg/m2且更优选约10mg/m2的剂量。正如本领域技术人员将理解的，施用途径和/或模式会根据期望结果的不同而变化。在某些实施方案中，可以将活性化合物与保护化合物免于快速释放的载体一起制备，例如控释制剂，包括植入物、透皮贴剂和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备这类制剂的许多方法已获得专利或为本领域技术人员通常已知。参见，例如sustained and controlled release drug delivery systems,j.r.robinson,ed.,marcel dekker,inc.,new york,1978。
[0706]
在某些实施方案中，抗体分子可以通过口服施用，例如，与惰性稀释剂或可同化的食用载体一起施用。也可以将化合物(和其他成分，如果期望)封装在硬壳或软壳明胶胶囊中，压制成片剂或直接掺入受试者的膳食中。对于口服治疗施用，可以给化合物掺入赋形剂并以可摄取的片剂、口含片剂、锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂的形式使用。为了通过除肠道外施用的方式施用本发明的化合物，有必要用一种材料涂覆该化合物或与该化合物共同施用以防止其失活。也可以将治疗组合物与本领域已知的医疗装置一起施用。
[0707]
调整剂量方案以提供最佳期望的反应(例如治疗反应)。例如，可以单次推注施用，也可以随着时间的推移分次施用几次剂量，或者根据治疗情况的紧急情况，可以按比例减少或增加剂量。以剂量单位形式配制肠胃外组合物对于易于施用和剂量均匀性是特别有利的。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为待治疗受试者的单位剂量的物理离散单位；每个单位包含经计算可产生期望的治疗效果的预定量的活性化合物以及所需的药物载体。本发明的剂量单位形式的规格由并直接取决于(a)活性化合物的独特特性和待实现的特定治疗效果和(b)在混合这类用于个体治疗敏感性的活性化合物的领域中固有的限制。
[0708]
可以按超过20mg/分钟，例如，20-40mg/分钟和典型地大于或等于40mg/分钟的速率，通过静脉内输注施用抗体分子，以达到约35至440mg/m2、典型地约70至310mg/m2和更典型地约110至130mg/m2的剂量。在实施方案中，约110至130mg/m2的输注速率实现约3mg/kg的水平。在其他实施方案中，可以按小于10mg/分钟，例如，小于或等于5mg/分钟的速率，通过静脉内输注施用抗体分子，以达到约1至100mg/m2，例如，约5至50mg/m2、约7至25mg/m2或约10mg/m2的剂量。在一些实施方案中，经约30分钟时间输注抗体。应当注意，剂量值可以随待减轻的病状的类型和严重性的不同变化。应进一步理解，对于任何特定的受试者，应当根据受试者需要和施用组合物或监督其施用的人的专业判断，随时间推移调节特定给药方案，并且本文中所述的剂量范围仅是示例性和不意在限制要求保护的组合物的范围或实施。
[0709]
在一些实施方案中，抗-tim3抗体与tgf-β抑制剂，例如如本文所述的抗-tgf-β抗体联合施用。在某些实施方案中，tgf-β抑制剂通过静脉内施用。tgf-β抑制剂的治疗或预防
有效量的示例性、非限制性范围约为1000mg-约2500，典型地约1300mg-约2200mg。在某些实施方案中，tgf-β抑制剂以约1300mg-约1500mg(例如约1400mg)或约2000mg-约2200mg(例如约2100mg)的剂量(例如固定剂量(flat dose))通过注射(例如皮下或静脉内)施用。给药方案(例如固定给药方案)可以从例如每周1次到每2、3、4、5或6周1次之间改变。在一个实施方案中，tgf-β抑制剂以约1300mg-约1500mg(例如约1400mg)的剂量每2周1次或每3周1次施用。在一个实施方案中，tgf-β抑制剂以约2000mg-约2200mg(例如约2100mg)的剂量每2周1次或每3周1次施用。
[0710]
在一些实施方案中，抗-tim3抗体分子和抗-tgf-β抗体分子与本文所述的pd-1抑制剂(例如抗-pd-1抗体)联合施用。在某些实施方案中，抗-pd-1抗体通过静脉内施用。抗-pd-1抗体的治疗或预防有效量的示例性非限制性范围在约100mg-约600mg，典型地200mg-约500mg。在某些实施方案中，抗-pd-1抗体以约300mg-约500mg(例如约400mg)或约200mg-约400mg(例如约300mg)的剂量(例如固定剂量)通过注射(例如通过皮下或静脉内)施用。给药方案(例如固定给药方案)可变，例如从每周1次到每2、3、4、5或6周1次。在一个实施方案中，抗-pd-1抗体以约300mg-约500mg(例如约400mg)的剂量施用，每周3周1次或每4周1次。在一个实施方案中，抗-pd-1抗体以约200mg-约400mg(例如约300mg)的剂量施用，每3周1次或每4周1次。
[0711]
在一些实施方案中，抗-tim3抗体分子和抗-tgf-β抗体分子与本文所述的低甲基化药物联合施用。低甲基化药物的治疗或预防有效量的示例性非限制性范围在2mg/m
2-约50mg/m2，典型地为2mg/m
2-25 mg/m2。在某些实施方案中，低甲基化药物通过注射以约2mg/m
2-约4mg/m2(约2.5mg/m2)、约4mg/m
2-约6mg/m2(约5mg/m2)、约6mg/m
2-约8mg/m2(约7.5mg/m2)、约8mg/m
2-约12mg/m2(约10mg/m2)、约12mg/m
2-约18mg/m2(约15mg/m2)或约18mg/m
2-约25mg/m2(约20mg/m2)的剂量施用(例如通过皮下或静脉内)。在一些实施方案中，给药方案(例如固定给药方案)可以在42-天周期期间改变，例如从每天1次开始，持续1-3天。在一些实施方案中，给药方案(例如固定给药方案)可以在42-天周期期间改变，例如从每天1次开始，持续1-5天。在一些实施方案中，给药方案(例如固定给药方案)可以在28-天周期期间改变，例如从每天1次开始，持续1-3天。在一些实施方案中，给药方案(例如固定给药方案)可以在28-天周期期间改变，例如从每天1次开始，持续1-5天。在一些实施方案中，给药方案(例如固定给药方案)可以在42-天周期期间改变，例如从每8小时1次开始，持续1-3天。在一些实施方案中，给药方案(例如递增给药方案le)可以在42-天周期期间改变，例如从每天1次开始，持续1-3天。在一些实施方案中，给药方案(例如递增给药方案)可以在42-天周期期间改变，例如从每天1次开始，持续1-5天。例如，第1个周期的第1天、第2天和第3天的剂量分别约为5mg/m2、约10mg/m2和约20mg/m2。
[0712]
在一些实施方案中，抗-tim3抗体分子和抗-tgf-β抗体分子与如本文所述的抗-il-1β抗体分子联合施用。在某些实施方案中，抗-il-1β抗体分子通过静脉内施用。在某些实施方案中，抗-il-1β抗体分子通过皮下施用。抗-il-1β抗体分子的治疗或预防有效量的示例性非限制性范围为200mg每3周1次或250mg每4周1次。
[0713]
本发明的药物组合物可以包含“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明抗体或抗体部分。“治疗有效量”指以需要的剂量并持续需要的时间期限，有效实现所需治疗结果的量。修饰的抗体或抗体片段的治疗有效量可以根据多种因素如疾病状态、个体的年龄、性别
和重量和抗体或抗体部分在个体中激发所需反应的能力而变动。治疗有效量也是这样的一个量，其中修饰的抗体或抗体片段的任何有毒或有害作用不及治疗有益作用。相对于未治疗的个体，“治疗有效的剂量”优选地抑制可度量参数(例如肿瘤生长率)至少约20％、更优选地至少约40％、甚至更优选地至少约60％和仍更优选地至少约80％。可以在预示人肿瘤中的功效的动物模型系统中评价化合物抑制可度量参数(例如，癌症)的能力。或者，可以通过检验化合物抑制(依据熟练技术人员已知的测定法测定的这种体外抑制作用)的能力评价组合物的这种特性。
[0714]“预防有效量”指以需要的剂量并持续需要的时间期限，有效实现所需预防结果的量。通常，由于在个体中在疾病较早阶段之前或在疾病较早阶段使用预防性剂量，故预防有效量将小于治疗有效量。
[0715]
也处于本公开的范围内的是一种包含本文所述的组合、组合物或制剂的药盒。该药盒可以包含一种或多种其他要素，所述要素包括：(例如，根据本文所述给药方案的)使用说明书；其他试剂，例如，可用于螯合或否则偶联的标记物、治疗药或试剂、针对标记物或治疗药的抗体或放射防护组合物；配制抗体以便施用的装置或其他材料；可药用载体；和用于施用至受试者的装置或其他材料。
[0716]
所述组合的用途
[0717]
本文所述的组合可用于调整受试者的免疫应答。在一些实施方案中，增强、刺激或上调免疫应答。在某些实施方案中，抑制、降低或下调免疫应答。例如，可将所述组合施用于培养中的细胞(例如体外或离体)，或施用于受试者(例如体内)，以治疗、预防和/或诊断多种疾病，例如癌和免疫疾病。在一些实施方案中，所述组合产生协同效应。在其他实施方案中，所述组合产生累加效应。本文所述的组合可用于根据本文所述的方法治疗受试者中的本文所述的病症(例如，本文所述的癌症)。本文所述的组合还可用于制备用于根据本文所述的方法治疗受试者中本文所述的病症(例如，本文所述的癌症)的药物。
[0718]
如本文所用，术语“受试者”旨在包括人和非人动物。在一些实施方案中，受试者是人类受试者。术语“非人动物”包括哺乳动物和非哺乳动物，例如非人灵长类动物。在一些实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，受试者是需要增强免疫应答的人类患者。本文所述的组合适用于治疗患有可通过调节(例如，增强或抑制)免疫应答来治疗的病症的人类患者。在某些实施方案中，患者患有本文所述的病症(例如本文所述的癌症)或处于患有本文所述的病症(例如本文所述的癌症)的风险中。在一些实施方案中，受试者需要例如使用本文所述的组合治疗本文所述的病症(例如，本文所述的癌症)。
[0719]
在一些实施方案中，所述组合用于治疗骨髓纤维化(例如，原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))、白血病(例如，急性髓性白血病(aml)，例如复发性或难治性aml或新发aml；或慢性淋巴细胞白血病(cll))、淋巴瘤(例如，t细胞淋巴瘤、b细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或小淋巴细胞淋巴瘤(sll))、骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤)、肺癌(例如，非小细胞肺癌(nsclc)(例如，具有鳞状和/或非鳞状组织学的nsclc，或nsclc腺癌)或小细胞肺癌(sclc))、皮肤癌(例如，merkel细胞癌或黑素瘤(例如，晚期黑素瘤))、卵巢癌、间皮瘤、膀胱癌、软组织肉瘤(例如，血管外皮细胞瘤(hpc))、骨癌(骨肉瘤)、肾癌(例如，肾癌(例如，肾细胞癌))、肝癌(例如，肝细胞癌)、胆管癌、肉瘤、骨髓增生异常综合征(mds)(例如较低风险mds(例如极低
风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))、前列腺癌、乳腺癌(例如不表达雌激素受体、孕酮受体或her2/neu中的一种、两种或全部的乳腺癌)，例如三阴性乳腺癌)、结肠直肠癌、鼻咽癌、十二指肠癌、子宫内膜癌、胰腺癌、头颈癌(例如，头颈鳞状细胞癌(hnscc)、肛门癌、肛门癌、胃食道癌、甲状腺癌(例如，未分化甲状腺癌)、宫颈癌或神经内分泌肿瘤(net)(例如，不典型肺类癌)。
[0720]
在一些实施方案中，所述癌症为血液癌，例如骨髓增生性肿瘤、白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。例如，本文所述的组合可用于治疗癌症和恶性肿瘤，包括但不限于，例如骨髓纤维化、原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf)、原发性血小板增多症、真性红细胞增多症、急性白血病，例如b细胞急性淋巴细胞白血病(ball)、t细胞急性淋巴细胞白血病(tall)、急性髓性白血病(aml)、急性淋巴细胞白血病(all)；慢性白血病，例如慢性髓性白血病(cml)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)；另外的血液癌或血液病症，例如b细胞幼淋巴细胞白血病、母细胞性浆细胞样树突状细胞瘤、伯基特淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、毛细胞白血病、小细胞或大细胞滤泡性淋巴瘤、恶性淋巴增殖性病症、malt淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常和骨髓增生异常综合征(例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))、非霍奇金淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、浆细胞样树突细胞肿瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症和“白血病前期”，其是由骨髓血细胞的无效产生(或发育异常)联合的血液学病症的多样化集合等。
[0721]
在一些实施方案中，所述组合用于治疗骨髓增生性肿瘤，例如骨髓纤维化，例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf)。在一些实施方案中，所述组合用于治疗原发性骨髓纤维化。在一些实施方案中，受试者已经用对亚型jak1和jak2具有选择性的janus激酶抑制剂(jak抑制剂)治疗，例如鲁索替尼。在一些实施方案中，受试者尚未用对亚型jak1和jak2具有选择性的janus激酶抑制剂(jak抑制剂)(例如鲁索替尼)治疗。
[0722]
在一些实施方案中，所述组合用于治疗白血病，例如急性髓性白血病(aml)或慢性淋巴细胞白血病(cll)。在一些实施方案中，所述组合用于治疗淋巴瘤，例如小淋巴细胞淋巴瘤(sll)。在一些实施方案中，所述组合用于治疗骨髓瘤，例如多发性骨髓瘤(mm)。在某些实施方案中，患者不适合在患有本文所述的血液癌的患者中具有确定益处的标准治疗方案。在一些实施方案中，受试者不适合化疗。在一些实施方案中，化疗是强化诱导化学疗法。例如，本文所述的组合可用于治疗患有慢性淋巴细胞白血病(cll)或小淋巴细胞淋巴瘤(sll)的成年患者。作为另一个实例，本文所述的组合可用于治疗75岁或更大年龄的成人中的新诊断的急性髓性白血病(aml)，或具有排除使用强化诱导化疗的合并症的成人中的新诊断的急性髓性白血病(aml)。
[0723]
在某些实施方案中，受试者已被鉴定为在肿瘤浸润淋巴细胞中具有tim-3表达。在其他实施方案中，受试者在肿瘤浸润淋巴细胞中不具有可检测水平的tim-3表达。
[0724]
治疗癌症的方法
[0725]
在一个方面，本发明涉及使用本文所述的组合，或包含本文所述组合的组合物或制剂在体内治疗受试者，从而抑制或减少癌性肿瘤的生长。
[0726]
在某些实施方案中，所述组合包含tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂、任选地甲基化药物和任选地pd-1抑制剂或il-1β抑制剂。在某些实施方案中，所述组合包含tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂和任选地il-1β抑制剂。在一些实施方案中，根据本文公开的剂量方案施用或使用tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂和任选地pd-1抑制剂、低甲基化药物或il-1β抑制剂。在某些实施方案中，以有效治疗癌症或其症状的量施用所述组合。
[0727]
本文所述的组合、组合物或制剂可单独用于抑制癌性肿瘤的生长。或者，本文所述的组合、组合物或制剂可与以下一种或多种组合使用：癌的标准治疗、其另一抗体或抗原结合片段、免疫调节剂(例如，共刺激分子的激活剂或抑制分子的抑制剂)；疫苗，例如治疗性癌疫苗；或本文所述的其他形式的细胞免疫疗法。
[0728]
因此，在一个实施方案中，本公开提供了一种抑制受试者的肿瘤细胞生长的方法，包括向个体施用治疗有效量的本文所述的组合，例如，根据本文所述的剂量方案。在一个实施方案中，以本文所述的组合物或制剂的形式施用该组合。
[0729]
在一个实施方案中，所述组合适于在体内治疗癌症。为了实现抗原特异性免疫增强，可将所述组合与关注的抗原一起施用。当施用本文所述的组合时，可按顺序或同时施用该组合。
[0730]
在另一方面，提供了一种治疗受试者的方法，例如减少或改善受试者中的过度增殖状态或疾病(例如癌)，例如实体瘤、血液癌、软组织肿瘤或转移性病变。所述方法包括根据本文公开的剂量方案向受试者施用本文所述的组合或包含本文所述组合的组合物或制剂。
[0731]
如本文所用，术语“癌症”意指包括所有类型的癌生长或致癌过程、转移组织或恶性转化的细胞、组织或器官，而不论其组织病理学类型或侵袭阶段。癌疾病的例子包括但不限于血液癌、实体瘤、软组织肿瘤和转移性病变。
[0732]
在某些实施方案中，癌症是血液癌症。血液学癌症的实例包括但不限于骨髓纤维化、原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf)、真性红细胞增多症(pv)、原发性血小板增多症、骨髓增生异常综合征(mds)、较低风险骨髓增生异常综合征(mds)、较高风险骨髓增生异常综合征、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、小淋巴细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、b细胞淋巴瘤和弥漫性大b细胞淋巴瘤、前体b成淋巴细胞白血病/淋巴瘤、b细胞慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤、b细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤。脾边缘区b细胞淋巴瘤(有或没有绒毛状淋巴细胞)、毛细胞白血病、浆细胞骨髓瘤/浆细胞瘤、malt型结外边缘区b细胞淋巴瘤、结边缘区b细胞淋巴瘤(有或没有单核细胞样b细胞)、伯基特淋巴瘤、前体t成淋巴细胞性淋巴瘤/白血病、t细胞幼淋巴细胞白血病、t细胞颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性nk细胞白血病、成人t细胞淋巴瘤/白血病(htlv 1阳性)、鼻型结外nk/t细胞淋巴瘤、肠病型t细胞淋巴瘤、肝脾g-d t细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样t细胞淋巴瘤、蕈样真菌病/塞扎里综合征、间变性大细胞淋巴瘤(t/裸细胞，原发性皮肤型)、间变性大细胞淋巴瘤(t/裸细胞，原发性全身型)、未另外表征的外周t细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性t细胞淋巴瘤、真性红细胞增多症(pv)、骨髓增生异常综合征(mds)、惰性非霍奇金淋巴瘤(inhl)和侵袭性非霍奇金淋巴瘤(anhl)。
[0733]
在一些实施方案中，所述血液癌为骨髓纤维化(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(pet-mf)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(ppv-mf))。在一些实施方案中，所述骨髓纤维化是原发性骨髓纤维化(pmf)。
[0734]
实体瘤的实例包括但不限于各种器官系统的恶性肿瘤，例如肉瘤和癌(包括腺癌和鳞状细胞癌)，例如影响肝、肺、乳腺、淋巴、胃肠(例如结肠)、肛门、生殖器和泌尿生殖道(例如肾、尿路上皮、膀胱)、前列腺、中枢神经系统(如大脑、神经细胞或胶质细胞)、头颈部、皮肤、胰腺和咽部。腺癌包括恶性肿瘤，如大多数结肠癌、直肠癌、肾癌(如肾细胞癌(如透明细胞或非透明细胞肾癌)、肝癌、肺癌(如非小细胞肺癌(如鳞状或非鳞状非小细胞肺癌))、小肠癌和食道癌。鳞状细胞癌包括恶性肿瘤，如肺、食道、皮肤、头颈部、口腔、肛门和宫颈。在一个实施方案中，癌症是黑色素瘤，例如晚期黑色素瘤。癌症可能处于早期、中期、晚期或转移性癌症。上述癌症的转移病灶也可以使用本文所述的组合来治疗或预防。
[0735]
在某些实施方案中，所述癌是实体瘤。在一些实施方案中，癌是卵巢癌。在其他实施方案中，癌是肺癌，例如小细胞肺癌(sclc)或非小细胞肺癌(nsclc)。在其他实施方案中，癌是间皮瘤。在其他实施方案中，癌是皮肤癌，例如默克尔细胞癌或黑色素瘤。在其他实施方案中，癌是肾癌，例如肾细胞癌(rcc)。在其他实施方案中，癌是膀胱癌。在其他实施方案中，癌是软组织肉瘤，例如血管外皮细胞瘤(hpc)。在其他实施方案中，癌是骨癌，例如骨肉瘤。在其他实施方案中，所述癌是结直肠癌。在其他实施方案中，癌是胰腺癌。在其他实施方案中，所述癌是鼻咽癌。在其他实施方案中，所述癌是乳腺癌。在其他实施方案中，该癌是十二指肠癌。在其他实施方案中，癌是子宫内膜癌。在其他实施方案中，癌是腺癌，例如未知腺癌。在其他实施方案中，癌是肝癌，例如肝细胞癌。在其他实施方案中，该癌是胆管癌。在其他实施方案中，癌是肉瘤。
[0736]
在某些实施方案中，所述癌症为骨髓增生异常综合征，例如较低风险mds(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)或较高风险mds(例如高风险mds或极高风险mds))。在某些实施方案中，所述癌症为较低风险骨髓增生异常综合征(mds)(例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds)。在某些实施方案中，所述癌症为较高风险骨髓增生异常综合征(mds)(例如高风险mds或极高风险mds)。
[0737]
在另一实施方案中，所述癌是癌(例如，晚期或转移癌)、黑色素瘤或肺癌(例如，非小细胞肺癌)。在一个实施方案中，癌是肺癌，例如非小细胞肺癌或小细胞肺癌。在一些实施方案中，非小细胞肺癌是i期(例如，ia或ib期)、ii期(例如，iia或iib期)、iii期(例如，iiia或iiib期)或iv期非小细胞肺癌。在一个实施方案中，癌是黑色素瘤，例如晚期黑色素瘤。在一个实施方案中，癌是对其他疗法无反应的晚期或不可切除的黑色素瘤。在其他实施方案中，癌是具有braf突变(例如braf v600突变)的黑色素瘤。在另一个实施方案中，癌是肝癌，例如晚期肝癌，具有或不具有病毒感染，例如慢性病毒性肝炎。在另一个实施方案中，癌是前列腺癌，例如晚期前列腺癌。在另一个实施方案中，癌是骨髓瘤，例如多发性骨髓瘤。在又一个实施方案中，癌是肾癌，例如肾细胞癌(rcc)(例如转移性rcc、非透明细胞肾细胞癌(nccrcc)或透明细胞肾细胞癌(ccrcc))。
[0738]
在一些实施方案中，癌是高msi癌。在一些实施方案中，癌是转移性癌。在其他实施方案中，癌是晚期癌。在其他实施方案中，癌是复发性或难治性癌。
[0739]
使用本文所公开的组合、组合物或制剂可抑制其生长的示例性癌包括通常对免疫
治疗有反应的癌。此外，难治性或复发性恶性肿瘤可使用本文所述的组合进行治疗。
[0740]
其他可以治疗的癌包括但不限于基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌；原发性中枢神经系统淋巴瘤；中枢神经系统肿瘤；乳腺癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌；子宫内膜癌；食管癌；眼癌；头颈部癌；胃癌；上皮内肿瘤；肾癌；喉癌；白血病(包括急性髓系白血病、慢性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性或急性白血病)；肝癌；肺癌(如小细胞和非小细胞肺癌)；淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；淋巴细胞性淋巴瘤；黑色素瘤，例如皮肤或眼内恶性黑色素瘤；骨髓瘤；神经母细胞瘤；口腔癌(如唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；视网膜母细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌；肉瘤；皮肤癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫癌；泌尿系统癌、肝癌、肛门癌、输卵管癌、阴道癌、外阴癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、脊柱轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、t细胞淋巴瘤、环境诱发的癌，包括石棉诱发的癌，以及其他癌和肉瘤，以及上述癌的组合。
[0741]
如本文所用，术语“受试者”旨在包括人类和非人类动物。在一些实施方案中，受试者是人类受试者，例如，患有以tim-3功能异常为特征的疾病或状况的人类患者。通常，个体至少有一些tim-3蛋白，包括与抗体分子结合的tim-3表位，例如，足够高水平的支持抗体与tim-3结合的蛋白质和表位。“非人类动物”包括哺乳动物和非哺乳动物，如非人灵长类。在一些实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，受试者是需要增强免疫应答的人类患者。本文所述的方法和组合物适于治疗患有疾病的人类患者，其中可以通过调节(例如，增进或抑制)免疫应答，治疗所述疾病。
[0742]
本文公开的方法和组合物可用于治疗与上述癌症相关的转移性病变。
[0743]
在一些实施方案中，所述方法还包括确定肿瘤样本是否对pd-l1、cd8和ifn-γ中的一种或多种呈阳性，并且如果肿瘤样本对一种或多种(例如两种或全部三种)标记物呈阳性，则向患者施用治疗有效量的抗-tim-3抗体分子，任选地与如本文所述的一种或多种其他免疫调节剂或抗癌剂组合。
[0744]
在一些实施方案中，本文所述的组合用于治疗表达tim-3的癌。表达tim-3的癌包括但不限于宫颈癌(cao等人(2013)，plos one.；8(1)：e53834)、肺癌(zhuang等人(2012)，am j clin pathol.；137(6)：978-985)(例如非小细胞肺癌)、急性髓系白血病(kikushige等人(2010)，cell stem cell.2010年12月3日；7(6)：708-17)、弥漫性大b细胞淋巴瘤、黑色素瘤(fourcade等人(2010)，jem；207(10)：2175)、肾癌(例如肾细胞癌(rcc)，例如肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌或转移性肾细胞癌)、鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、鼻咽癌、结直肠癌、乳腺癌(例如，一种、两种或全部雌激素受体、孕激素受体或her2/neu不表达的乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌)、间皮瘤、肝细胞癌和卵巢癌。表达tim-3的癌可能是转移癌。
[0745]
在其他实施方案中，本文所述的组合用于治疗以巨噬细胞活性或巨噬细胞细胞标记物的高表达为特征的癌症。在一个实施方案中，该组合用于治疗以以下一种或多种巨噬细胞标记物的高表达为特征的癌症：lilrb4(巨噬细胞抑制受体)、cd14、cd16、cd68、msr1、siglec1、trem2、cd163、itgax、itgam、cd11b或cd11c。此类癌症包括但不限于弥漫性大b细胞淋巴瘤、多形性胶质母细胞瘤、肾-肾透明细胞癌、胰腺癌、肉瘤、肝细胞癌、肺腺癌、肾-肾乳头状细胞癌、皮肤黑色素瘤、脑低级胶质瘤、肺鳞状细胞癌、卵巢严重囊腺癌、头颈部鳞状
细胞癌、乳腺浸润癌、急性髓系白血病、宫颈鳞状细胞癌、宫颈腺癌、子宫癌、结直肠癌、子宫体子宫内膜癌、甲状腺癌、膀胱尿路上皮癌、肾上腺皮质癌、肾嫌色症和前列腺癌。
[0746]
本文所述的组合疗法可包括与一种或多种治疗药(例如，一种或多种抗癌剂、细胞毒性或细胞抑制剂、激素治疗、疫苗和/或其他免疫疗法)共同配制和/或共同施用的组合物。在其他实施方案中，抗体分子与其他治疗方式(包括手术、辐射、冷冻手术和/或热疗)组合施用。此类组合疗法可有利地利用较低剂量的施用治疗药，从而避免与各种单药疗法相关的可能毒性或并发症。
[0747]
本文所述的组合、组合物和制剂可进一步与其他药物或治疗方式组合使用，例如，选自wo 2017/019897表6中所列的一种或多种药物中的第二治疗药，其内容通过引用整体并入。在一个实施方案中，本文所述的方法包括向个体施用如wo2017/019897所述的抗-tim-3抗体分子(任选地与pd-1、pd-l1、lag-3、ceacam(例如，ceacam-1和/或ceacam-5)或ctla-4的一种或多种抑制剂组合)，进一步包括施用选自wo 2017/019897表6中所列的一种或多种药物中的第二治疗药，其量可有效治疗或预防疾病，例如本文所述的疾病，例如癌。当组合施用时，tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂、pd-1抑制剂、低甲基化药物、一种或多种附加药物或全部可以高于、低于或等于单独使用的每种药物的量例如作为单药疗法的剂量施用。在某些实施方案中，tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂、pd-1抑制剂、低甲基化药物、一种或多种附加药物或全部的施用量或剂量低于(例如，至少20％、至少30％、至少40％或至少50％)单独使用的每种药物例如，作为单药疗法的量或剂量。在其他实施方案中，得到期望效果(例如，癌治疗)的tim-3抑制剂、tgf-β抑制剂、pd-1抑制剂、低甲基化药物、一种或多种附加药物或全部的量或剂量较低(例如，至少20％、至少30％、至少40％或至少50％)。
[0748]
在其他实施方案中，附加治疗药选自本文公开和/或wo 2017/019897表6中列出的一种或多种药物。在一些实施方案中，附加治疗药选自以下一种或多种：1)蛋白激酶c(pkc)抑制剂；2)热休克蛋白90(hsp90)抑制剂；3)磷酸肌醇3-激酶(pi3k)和/或雷帕霉素(mtor)靶点的抑制剂；4)细胞色素p450的抑制剂(例如cyp17抑制剂或17α羟化酶/c17-20裂解酶抑制剂)；5)铁螯合剂；6)芳香化酶抑制剂；7)p53的抑制剂，例如p53/mdm2相互作用的抑制剂；8)凋亡诱导剂；9)血管生成抑制剂；10)醛固酮合酶抑制剂；11)平滑(smo)受体抑制剂；12)催乳素受体(prlr)抑制剂；13)wnt信号抑制剂；14)cdk4/6抑制剂；15)成纤维细胞生长因子受体2(fgfr2)/成纤维细胞生长因子受体4(fgfr4)抑制剂；16)巨噬细胞集落刺激因子(m-csf)抑制剂；17)一种或多种c-kit、组胺释放、flt3(例如flk2/stk1)或pkc的抑制剂；18)一种或多种vegfr-2(例如flk-1/kdr)、pdgfrbeta、c-kit或raf激酶c的抑制剂；19)生长抑素激动剂和/或生长激素释放抑制剂；20)间变性淋巴瘤激酶(alk)抑制剂；21)胰岛素样生长因子1受体(igf-1r)抑制剂；22)p-糖蛋白1抑制剂；23)血管内皮生长因子受体(vegfr)抑制剂；24)bcr-abl激酶抑制剂；25)fgfr抑制剂；26)cyp11b2抑制剂；27)hdm2抑制剂，例如hdm2-p53相互作用的抑制剂；28)酪氨酸激酶抑制剂；29)c-met抑制剂；30)jak抑制剂；31)dac抑制剂；32)11β-羟化酶抑制剂；33)iap抑制剂；34)pim激酶抑制剂；35)豪猪抑制剂；36)braf抑制剂，例如braf v600e或野生型braf；37)her3抑制剂；38)mek抑制剂；或39)脂质激酶抑制剂，如wo 2017/019897表6所述。
实施例
[0749]
实施例1
–
mbg453的临床前活性
[0750]
mbg453为高亲和力的人源化抗-tim-3igg4抗体(ab)(稳定化铰链，s228p)，其阻断tim-3与磷脂酰丝氨酸(ptdser)的结合。来自在高风险mds且先前没有低甲基化药物治疗的患者中进行的多中心开放标签ib期剂量递增研究(cpdr001x2105)的近期结果证明了令人鼓舞的初步功效，总应答率为58％，包括47％cr/mcr，其中反应者继续研究长达两年(borate等人blood 2019,134(增刊_1))。进行临床前实验以确定地西他滨和抗-tim-3组合在aml和mds中观察到的临床活性的作用机制。
[0751]
在基于板的测定中确定mbg453部分阻断tim-3/半乳糖凝集素-9相互作用，这也得到先前确定的人tim-3的晶体结构的支持(sabatos-peyton等人,aacr annual meeting abstract 2016)。确定mbg453介导中度抗体依赖性细胞吞噬作用(adcp)，如通过相对于对照在mbg453存在下测定改造的tim-3过表达的细胞系的吞噬摄取所测量的。在mbg453存在下，用地西他滨预处理aml细胞系(thp-1)增强了对t细胞免疫介导的杀伤的敏感性。在免疫缺陷宿主中的患者来源的异种移植物研究中，mbg453不增强地西他滨的抗白血病活性。
[0752]
总之，这些结果支持了mbg453的直接抗白血病作用和免疫介导的调节。重要的是，mbg453的体外活性定义了增强t细胞介导的aml细胞杀伤的能力。
[0753]
实施例2
–
mds的组合治疗的临床方案
[0754]
以下实施例描述了用于评估mbg453和nis793的组合在治疗mds，特别是较低风险mds中的建议的临床方案。mbg453和nis793通过静脉内输注施用，历时30分钟。将mbg453和nis793每3周一次(q3w)施用。基于新出现的临床数据，还可以通过方案修改来评估替代的剂量/时间表。
[0755]
为了安排程序和评估的目的，将周期定义为21天(mbg453+nis793臂)。
[0756]
在研究治疗期期间，将定期监测患者以评估治疗的安全性和功效。
[0757]
mbg453和nis793的计划起始剂量为选择为rd的剂量：mbg453，600mg静脉内，q3w，联合nis793，2100mg静脉内，q3w。
[0758]
实施例3
–
用于组合治疗骨髓纤维化的临床方案
[0759]
以下实施例描述了评估骨髓纤维化的组合治疗的建议的临床方案。
[0760]
这是用于具有多个治疗臂的开放标签研究的建议设计。本研究的设计适于允许放弃不耐受或无效的组合治疗并促进新组合的引入。
[0761]
本研究由剂量评估/递增部分和剂量扩展部分组成。
[0762]
在剂量评估部分期间，一组受试者用mbg453(推荐剂量，rd)+nis793(推荐剂量，rd)的主干或与第三伙伴组合进行治疗，以评估rd时组合的安全性和耐受性。mbg453、nis793和第三伙伴(例如地西他滨或斯巴达珠单抗)的组合以其各自的推荐剂量施用。
[0763]
随着研究进展并且基于从本研究收集的新出现的临床数据，在本研究的研究者同意下，诺华公司将决定是否：继续进行达到推荐剂量的任何治疗组以进一步探索剂量扩展部分中的安全性、耐受性和抗肿瘤活性；在剂量评估/递增部分中添加第三伙伴以包含三联治疗组(例如用地西他滨的治疗组2或用斯巴达珠单抗的治疗组3)；并且在剂量扩展部分中探索mbg453单一药剂(治疗组4)和/或nis793单一药剂(治疗组5)，以便评估单一药剂对功效的贡献。第三伙伴的剂量评估或剂量递增可以并行进行。
[0764]
在任何给定的治疗组合被认为是不可耐受的情况下，将不定义该组合的rd，并且将中断该治疗组合中的招募。此外，如果在其他临床研究中已经确定了其他研究药物或药物组合伙伴的给药剂量和安全性，则通过方案修改纳入其他研究药物或药物组合伙伴。
[0765]
实施例4
–
mbg453部分阻断tim-3和半乳糖凝集素9(galectin9)之间的相互作用
[0766]
半乳糖凝集素-9是tim-3的配体。asayama等人(oncotarget 8(51)：88904-88971(2017)通过tim-3-半乳糖凝集素9途径证明与mds的发病机制和疾病进展相关。本实施例说明了mbg453部分阻断tim-3和半乳糖凝集素9之间相互作用的能力。
[0767]
tim-3融合蛋白(研发系统)以2μg/ml的浓度在pbs(磷酸盐缓冲盐水)中以标准的mesoscale 96孔板(meso scale discovery)上涂覆，并在室温下孵育6小时。板子用pbst(含有0.05％吐温-20的pbs缓冲液)清洗三次，并在4℃下用含有5％probumin(millipore)的pbs阻断过夜。孵育后，板子用pbst和未标记抗体(f38-2e2(biolegend))清洗三次；mbg453；mbg453 f(ab')2；mbg453 f(ab)；或对照重组人半乳糖凝集素-9蛋白)在分析稀释液(2％probumin、0.1％吐温-20、0.1％triton x-100(sigma)和10％stabilguard(surmodics))中稀释，以连续稀释的方式加至平板上，并在室温下在轨道振动器上孵育1小时。板子用pbst清洗三次，并按照生产商的说明，将标记有msd sulfotag(meso scale discovery)的半乳糖凝集素-9，用分析稀释剂稀释至100nm，将稀释好的半乳糖凝集素-9溶液加至板上，在室温下在轨道振动器上一小时。平板用pbst再次洗涤三次，并向板中添加读取缓冲液t(1x)。在ma600成像仪上读取平板，评估竞争作用作为抗体对tim-3受体的gla9-sulfotag信号的阻断能力的指标。如图1所示，mbg453 igg4、mbg453 f(ab')2、mbg453 f(ab)和2e2部分阻断tim-3和半乳糖凝集素-9之间的相互作用，而对照半乳糖凝集素-9蛋白没有。
[0768]
实施例5
–
mbg453通过fcγr1的结合介导抗体依赖性细胞吞噬(adcp)
[0769]
thp-1效应细胞(人单核细胞aml细胞系)通过在37℃、5％co2下用20ng/ml佛波醇12肉豆蔻酸13醋酸酯(pma)刺激2至3天而分化为吞噬细胞。pma刺激的thp-1细胞被洗涤在烧瓶中的facs缓冲液(含有2mm edta的pbs)中，然后通过accutase(innovative cell technologies)处理分离。按照制造商的说明，用5.5μm celltrace cfse(thermofisherscientific)标记靶tim-3过度表达的raji细胞。将thp-1细胞和tim-3过度表达的cfse+raji细胞与mbg453、mabthera抗cd20(roche)阳性对照或阴性对照抗体(higg4抗体与raji tim-3+未表达的靶细胞)的稀释液以效应物与靶细胞(e:t)1:5的比例在96孔板中共同培养(在分析开始时在室温下以100x g旋转1分钟)。共培养物在37℃、5％co2下孵育30-45分钟。然后用4％的甲醛固定液(从16％储备液稀释，thermo fisher scitific)停止吞噬，并用apc结合的抗cd11c抗体(bd bioscific)对细胞进行染色。adcp通过基于bd facs canto ii的流式细胞术测定。吞噬作用以thp-1(效应物)群体中cfse(代表被吞噬的raji细胞靶点)和cd11c双阳性的thp-1细胞百分比进行评估。如图2所示，mbg453(方块)以剂量依赖性方式增强tim-3+raji细胞的thp-1细胞吞噬作用，然后相对于抗cd20阳性对照(空心圆圈)达到平台。阴性对照igg4以三角形显示。表达tim-3的raji细胞被用作靶细胞，与稳定转染的工程效应器jurkat细胞共同培养，以在nfat(活化t细胞的核因子)反应元件(nfat-re；promega)的控制下过度表达fcγria(cd64)和荧光素酶报告基因。靶tim-3+raji细胞与jurkat fcγria报告细胞以6:1的e:t比和分级浓度(500ng/ml至6pg/ml)的mbg453
或抗cd20 mabthera对照品(roche)在96孔板中共同孵育。分析开始时，在室温下以300x g离心培养板5分钟，并在37℃、5％co2增湿培养箱中培养6小时。通过细胞裂解和添加底物溶液(bio-glo)后的荧光素酶活性来量化与fcγria结合诱导的nfat依赖性报告基因表达的激活。如图3所示，通过荧光素酶活性测定，mbg453显示fcγria报告细胞系具有适度的剂量反应的结合。在独立的试验中，mbg453未与fcγriia(cd32a)结合。
[0770]
实施例6
–
mbg453增强免疫介导的地西他滨预处理的aml细胞杀伤
[0771]
将thp-1细胞接种在完整的rpmi-1640(gibco)培养基(补充2mm谷氨酰胺、100u/ml pen-strep、10mm hepes、1mm napyr和10％胎牛血清)板中。加入地西他滨(250或500nm；每天一次添加到培养基中，共五天)或二甲亚砜对照，在37℃、5％co2下孵育五天。在thp-1细胞铺板两天后，在1800x g的柠檬酸钠cpt管中离心20分钟，从全血中分离健康的人类供体外周血单核细胞(pbmc；medcor)。旋转完成后，将试管翻转10次，以使血浆和pbmc层混匀。细胞在2倍体积的pbs/macs缓冲液(miltenyi)中洗涤，并以250x g离心5分钟。吸取上清液，加入1ml pbs/macs缓冲液，然后通过移液管清洗细胞颗粒。加入19ml pbs/macs缓冲液进行洗涤，然后重复离心。吸取上清液，将细胞颗粒重新悬浮在1ml完全培养基中，然后移液至单细胞悬浮液中，并用完全rpmi将体积定容至10ml。100ng/ml抗cd3(ebioscience)加入培养基中，在37℃、5％co2下刺激48小时。在与地西他滨或二甲基亚砜培养5天后，按照制造商的说明，收获thp-1细胞并用celltracker
tm
深红色染料(thermofisher)标记。
[0772]
标记的thp-1细胞(地西他滨预处理的或二甲基亚砜对照处理的)与刺激的pbmc以1:1、1:2和1:3的效应物:靶细胞(e:t)比率(对每个供体优化，靶细胞数恒定在10,000个细胞/孔(costar 96孔平底板)共培养。用1μg/ml的higg4同型对照或mbg453处理微孔。将培养板放置在incucyte s3中，每4小时捕获一次图像期(image phase)红色荧光通道，持续5天。在完成分析时，使用incucyte图像分析软件将靶细胞数(红色事件)标准化为第一个成像时间点。
[0773]
如图4所示，thp-1细胞与抗cd3激活的pbmc的共培养导致thp-1细胞的杀伤，在试验终点，与higg4同型对照相比，mbg453(底部小提琴曲线中的条形图，每个点代表一个健康的pbmc供体)的存在增强了thp-1细胞的杀伤。用地西他滨预处理thp-1细胞(顶部小提琴曲线中的条形图，每个点代表一个健康的pbmc供体)，进一步增强了这种杀伤作用。综上所述，这些数据表明，mbg453阻断tim-3增强的免疫介导的thp-1aml细胞杀伤，而地西他滨预处理进一步增强了这种活性。
[0774]
实施例7
–
mbg453和地西他滨介导的在免疫缺陷宿主中患者来源的异种移植物杀伤的研究
[0775]
在两名aml患者来源的异种移植物(pdx)模型hamlx2143和hamlx5343中，评估了含和不含地西他滨的mbg453的活性。地西他滨(tci america)在每次给药前以5％葡萄糖水溶液(d5w)配制，每天施用一次共5天。以10ml/kg腹腔注射(i.p.)施用，最终剂量体积为1mg/kg。mbg453配制在pbs中的最终浓度为1mg/ml。每周一次以10ml/kg的体积进行i.p.施用，最终剂量为10mg/kg，治疗从给药第6天开始，在末剂地西他滨后24小时开始。通过对两种模型的体重变化监测和健康状况的目视检查，mbg453和地西他滨的组合用药耐受性良好。
[0776]
在一项研究中，小鼠被静脉注射2x106细胞，这些细胞是从携带idh1r132h突变的aml pdx#21432模型体内第5代分离出来的。动物一旦达到平均39％的白血病负担，即被随
机分至治疗组。从随机化当天开始处理，持续21天。动物继续进行研究，直到各自达到终点，即循环白血病负担超过90％的人类cd45+细胞、体重减轻》20％、后肢瘫痪迹象或身体状况不佳。单独使用地西他滨处理的haml21432植入小鼠表现出中等的抗肿瘤活性，在植入后约49天或治疗后第14天达到峰值(图5)。此时，单药和与mbg453联合使用，地西他滨治疗组的hcd45+细胞平均含量分别为51％和47％(图5)。同时，未治疗组和mbg453治疗组的白血病负担分别为81％和77％。在植入后第56天，地西他滨治疗组的白血病负担增加到66％，循环中的hcd45+细胞增加到61％。在该模型中，当地西他滨与mbg453组合时，未观察到任何组合活性(图5)。未治疗组和mbg453单药治疗组均在第56天达到90％白血病负荷的终点截止时间。
[0777]
在另一项研究中，向小鼠静脉注射2x106细胞，这些细胞是从aml pdx#5343模型体内第4代分离出来的，伴有krasg12d、wt1和ptpn11突变。一旦达到平均20％的白血病负担，动物被随机分至治疗组。从随机化当天开始处理，持续3周。动物继续进行研究，直到各自达到终点，即循环白血病负担超过90％的人cd45+细胞，体重减轻》20％，后肢瘫痪或身体状况不佳。单独使用地西他滨处理的haml5343植入小鼠显示出显著的抗肿瘤活性，峰值约为植入后53天或处理后21天。此时，地西他滨治疗组的hcd45+细胞平均含量分别为1％和1.3％，单药和与mbg453组合使用(图6)。同时，未治疗组的白血病负担为91％。到第53天，mbg453治疗组只剩下一只动物。在该模型中，当地西他滨与mbg453组合时，未观察到任何组合活性(图6)。在该模型中，地西他滨单药组和地西他滨/mbg453组合用药组的肿瘤负荷显著降低具有可比性。
[0778]
aml pdx植入的nod scid gamma(nsg；nod.cg prkdc《scid》il2rg《tm1wj1》/szj，jackson)模型缺乏免疫细胞，诸如表达tim-3的t细胞、nk细胞和髓系细胞，这表明在小鼠模型中mbg453可能需要某些免疫细胞功能来增强地西他滨活性。
[0779]
实施例8
–
mbg453增强对被改造为过表达tim-3的thp-1aml细胞的杀伤
[0780]
thp-1细胞表达tim-3mrna，但细胞表面tim-3蛋白含量较低或不表达。thp-1细胞通过慢病毒载体编码的flag标签稳定过度表达tim-3，而亲代thp-1细胞表面不表达tim-3蛋白。根据制造商说明，tim-3标记的thp-1细胞用2μm cfse(thermo fisher scientific)标记，thp-1亲代细胞用2μm ctv(thermo fisher scientific)标记。共培养分析在96孔圆形底板中进行。将thp-1细胞以1:1的比例混合，每孔总计100000个thp-1细胞(50000个表达tim-3的thp-1细胞和50000个thp-1亲代细胞)，并与100000个t细胞共培养三天，这些t细胞使用人pan t细胞分离试剂盒(miltenyi biotec)从健康人供体pbmc(bioreclation)纯化，是在不同数量的抗cd3/抗cd28 t细胞活化珠(thermofisherscitific)和25μg/ml mbg453(全抗体)、mbg453 f(抗体)或higg4同种型对照的情况下。然后用流式细胞仪检测和计数细胞。计算表达tim-3的thp-1细胞与亲代thp-1细胞之间的比率(图中y轴的“倍数”)并将其标准化为无抗cd3/抗cd28珠刺激的条件。图形的x轴表示刺激量，即每个细胞的珠子数。数据代表两个独立实验中的一个。如图7所示，mbg453(三角形)增强了t细胞介导的对过度表达tim-3的thp-1细胞的杀伤作用，mbg453f(ab)(空心方块)则未增强，这表明mbg453的fc部分对于mbg453增强的t细胞介导的对thp-1aml细胞的杀伤作用非常重要。
[0781]
实施例9
–
过表达tim-3的细胞表达低基线水平的il-1β
[0782]
如实施例5中所述，改造thp-1细胞以过表达tim-3。首先用10μm r848(invivogen)刺激过表达tim-3和亲本对照thp-1细胞20小时，然后用20μm尼日利亚菌素(invivogen)再
刺激4小时以激活nlrp3炎性体，总刺激时间为24小时。通过用于人il-1β测量的duoset elisa试剂盒(r&d systems)在24小时测量细胞培养上清液中分泌的il-1β。如图8中所示，过表达tim-3的thp-1细胞分泌显著更少的il-1β(非配对t检验，**p《0.01)，证明骨髓细胞上的tim-3表达与nlrp3炎性体介导的il-1β产生之间的潜在相关性。
[0783]
实施例10
–
在pdr001x2105i期研究中aml/mds患者中il-1βmrna的水平
[0784]
pdr001x2105批量rna-seq方法
[0785]
rna-seq
[0786]
使用promega maxwell 16lev simply rna blood kit(as1310)从全血和骨髓样品中提取总rna。对于全血样品，使用invitrogen globin-clear human mrna去除试剂盒(1980-4)耗尽提取的rna中的球蛋白mrna。使用与mrna的聚-a尾结合的聚-t探针富集提取的rna的mrna。然后将富集的mrna片段化，转化为cdna，然后使用truseq rna v2文库制备试剂盒(illumina#15027387和#15025062)进行ngs文库构建的剩余步骤：末端修复、a-加尾、索引衔接子连接和pcr扩增。将所得文库在illumina hiseq上测序至5000万个读段的目标深度。
[0787]
下一代测序数据处理
[0788]
使用star将序列数据与hg19参考人类基因组进行比对(dobin,a.,davis,c.,schlesinger,f.等人,bioinformatics,2012,29(1):15-21)。htseq用于定量映射到每个基因的读数的数量(anders,s.,pyl,pt.和huber,w.bioinformatics,2014,31(2):doi:10.1093/bioinformatics/btu638)。用edger(robinson,m.,mccarthy,d.和smyth g.bioinformatics,2010,26(1):139-40)，使用m值的截尾平均(tmm)方法对基因计数数据进行归一化。在将所有基因计数加1以避免取log2为0后，对归一化的基因计数数据的log2进行所有下游差异表达分析。
[0789]
基因差异表达分析
[0790]
使用limma(ritchie me等人,nucleic acidsresearch,2015,43(7):e47)进行差异表达分析，比较指定的组。使用benjamini-hochberg方法计算调整的p值，并将其解释为fdr的界限。
[0791]
rna-seq结果
[0792]
来自pdr001x2105 i期研究的新生物标志物数据暗示il-1β作为对mbg453+低甲基化药物治疗的抗性的潜在机制。用地西他滨和mbg453组合治疗的aml/mds患者的全转录组分析揭示出，较高的il-1βmrna表达水平与缺乏应答相关。在基线(筛选第-28天至第-1天)骨髓样品中，在地西他滨和mbg453组合群组中，与具有完全应答/部分应答(cr/pr)的患者相比，具有进行性疾病(pd)的患者中il-1βmrna的中值表达更高(图9)。此外，用地西他滨和mbg453处理时诱导的转录变化的分析显示，与无应答者组(稳定疾病/进行性疾病(sd/pd))相比，il-1β是应答者组(cr/pr)中最高的差异下调基因之一(图10a)。虽然在应答者组(cr/pr)中治疗后il-1βmrna表达下调，但在周期3第1天时间点，其在无应答者组(sd/pd)中保持较高(图10b)。治疗后il-1βmrna表达的倍数改变与在母细胞中最佳百分比变化正相关，表明治疗中较高的il-1β水平与患者中较高的母细胞存在是相关的(图10c)。这些数据共同表明，在对地西他滨+mbg453组合无应答的aml/mds患者中，il-1β表达水平在基线时更高，并且在治疗后保持更高。这些生物标志物数据表明il-1β可以在aml/mds中驱动对地西他滨+
mbg453组合的抗性中起作用。
[0793]
实施例11
–
剂量递增:nis793
[0794]
进行剂量递增以建立与mbg453组合臂组合使用的nis793的剂量，以及可能的单一药剂扩展。具体地，在考虑最大耐受剂量(mtd)的背景下，其为具有最适当的利益-风险比的一个或多个剂量，正如通过对安全性、耐受性、药代动力学(pk)、任何可利用功效和药效学(pd)的审阅所评估的。
[0795]
mtd是估计在超过33％的治疗患者中在dlt评估期期间具有小于25％的引起剂量限制性毒性(dlt)的风险的估计的最高剂量。选择用于组合和/或扩增的剂量可以是等于或小于mtd的任何剂量，并且可以在未确认mtd的情况下声明。在本研究中不需要确认mtd。
[0796]
每个剂量递增群组将从3至6名新治疗的患者开始。他们必须具有足够的暴露和随访，以被认为可用于评估剂量递增决定。
[0797]
当群组中的所有患者已完成dlt评估期或中断时，将作出剂量递增决定。将基于从正在进行的研究中评估的所有剂量水平可获得的所有相关数据的综合来做出决定，包括安全性信息、pk、可利用的pd和初步功效。
[0798]
任何剂量递增决定将不会超过通过贝叶斯逻辑回归模型(blrm)满足无超剂量控制的递增(ewoc)原则的剂量水平。在所有情况下，用于下一个递增群组的剂量将不超过先前测试的安全剂量的100％增加。在考虑所有可利用的临床数据后，研究者和赞助商可以推荐剂量的较小增加。
[0799]
为了在进一步递增之前或同时更好地理解nis793的安全性、耐受性、pk、pd或抗癌活性，可以在任何等于或低于在先测试并显示为安全的最高剂量的剂量水平下招募6至10名患者的富集群组。只有当10名患者中观察到2个或更多个dlt的概率小于30％时，才可以开放样本量为7-10的群组。
[0800]
为了降低患者暴露于过度毒性剂量的风险，当2名患者在新群组中经历dlt时，将用来自所有群组的迄今为止最新信息更新blrm，而不等待来自当前群组的所有患者完成评估期。
[0801]
如果在以新剂量水平治疗的患者群组中发生2个dlt，则停止招募加入该群组，并且将以满足ewoc标准的较低剂量水平开放下一个群组。
[0802]
如果在以已经测试的剂量水平治疗的患者群组中发生2个dlt，则在重新评估所有相关数据后，只有当剂量仍然满足ewoc标准时，才可以将另外的患者招募到开放群组中。或者，如果不能继续募集至相同剂量组，则可以将新的患者群组募集到满足ewoc标准的较低剂量。
[0803]
除了2个dlt的情况之外，可以基于新的安全性发现(包括但不限于观察到dlt)降低正在测试的当前剂量，然后完成群组。在决定降低之后，如果后续群组中的数据满足ewoc标准，则可以进行重新增加。
[0804]
本技术的实施方案
[0805]
以下是本技术中公开的实施方案。实施方案包括但不限于：
[0806]
1.包含tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂的组合产品，用于治疗受试者的骨髓纤维化。
[0807]
2.包含tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂的组合产品，用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征。
[0808]
3.治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)的方法，包含向该受试者施用tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂的组合。
[0809]
4.治疗受试者的骨髓纤维化的方法，包含向该受试者施用tim-3抑制剂和tgf-β抑制剂的组合。
[0810]
5.用于实施方案1或2的用途的组合产品或实施方案3或4的方法，其中tim-3抑制剂包含抗-tim-3抗体分子。
[0811]
6.用于实施方案1、2或5的用途的组合产品或实施方案3-5的方法，其中tim-3抑制剂包含mbg453、tsr-022、ly3321367、sym023、bgb-a425、incagn-2390、mbs-986258、ro-7121661、bc-3402、shr-1702或ly-3415244。
[0812]
7.用于实施方案1、2或5-6任一项的用途的组合产品或实施方案3-6任一项的方法，其中tim-3抑制剂包含mbg453。
[0813]
8.用于实施方案1、2或5-7任一项的用途的组合产品或实施方案3-7任一项的方法，其中以约700mg-约900mg的剂量施用tim-3抑制剂。
[0814]
9.用于实施方案1、2或5-8任一项的用途的组合产品或实施方案3-8任一项的方法，其中以约800mg的剂量施用tim-3抑制剂。
[0815]
10.用于实施方案1、2或5-9任一项的用途的组合产品或实施方案3-9任一项的方法，其中每4周1次施用tim-3抑制剂。
[0816]
11.用于实施方案1、2或5-9任一项的用途的组合产品或实施方案3-9任一项的方法，其中每8周1次施用tim-3抑制剂。
[0817]
12.用于实施方案1、2或5-7任一项的用途的组合产品或实施方案3-7任一项的方法，其中以约500mg-约700mg的剂量施用tim-3抑制剂。
[0818]
13.用于实施方案1、2、5-7或12任一项的用途的组合产品或实施方案3-7或12任一项的方法，其中以约600mg的剂量施用tim-3抑制剂。
[0819]
14.用于实施方案1、2或5-7任一项的用途的组合产品或实施方案3-7任一项的方法，其中以约300mg-约500mg的剂量施用tim-3抑制剂。
[0820]
15.用于实施方案1、2、5-7或14任一项的用途的组合产品或实施方案3-7或14任一项的方法，其中以约400mg的剂量施用tim-3抑制剂。
[0821]
16.用于实施方案1、2、5-9或12-15任一项的用途的组合产品或实施方案3-9或12-15任一项的方法，其中每3周1次施用tim-3抑制剂。
[0822]
17.用于实施方案1、2、5-9或12-15任一项的用途的组合产品或实施方案3-9或12-15任一项的方法，其中每6周1次施用tim-3抑制剂。
[0823]
18.用于实施方案12-15任一项的用途的组合产品或实施方案12-15任一项的方法，其中每4周1次施用tim-3抑制剂。
[0824]
19.用于实施方案1、2或5-18任一项的用途的组合产品或实施方案3-18任一项的方法，其中通过静脉内施用tim-3抑制剂。
[0825]
20.用于实施方案1、2或5-19任一项的用途的组合产品或实施方案3-19任一项的方法，其中在约20至约40分钟的期限内施用tim-3抑制剂。
[0826]
21.用于实施方案1、2或5-20任一项的用途的组合产品或实施方案3-20任一项的方法，其中在约30分钟的期限内施用tim-3抑制剂。
[0827]
22.用于实施方案1、2或5-21任一项的用途的组合产品或实施方案3-21任一项的方法，其中tgf-β抑制剂为抗-tgf-β抗体分子。
[0828]
23.用于实施方案1、2或5-22任一项的用途的组合产品或实施方案3-22任一项的方法，其中tgf-β抑制剂包含nis793、夫苏木单抗、pf-06952229或avid200。
[0829]
24.用于实施方案1、2或5-23任一项的用途的组合产品或实施方案3-23任一项的方法，其中tgf-β抑制剂包含nis793.
[0830]
25.用于实施方案1、2或5-24任一项的用途的组合产品或实施方案3-24任一项的方法，其中以约1300mg-约1500mg的剂量施用tgf-β抑制剂。
[0831]
26.用于实施方案1、2或5-25任一项的用途的组合产品或实施方案3-25任一项的方法，其中以约1400mg的剂量施用tgf-β抑制剂。
[0832]
27.用于实施方案1、2或5-26任一项的用途的组合产品或实施方案3-26任一项的方法，其中每2周1次施用tgf-β抑制剂。
[0833]
28.用于实施方案1、2或5-24任一项的用途的组合产品或实施方案3-24任一项的方法，其中以约2000mg-约2200mg的剂量施用tgf-β抑制剂。
[0834]
29.用于实施方案1、2、5-24或28任一项的用途的组合产品或实施方案3-24或28任一项的方法，其中以约2100mg的剂量施用tgf-β抑制剂。
[0835]
30.用于实施方案1、2或5-24任一项的用途的组合产品或实施方案3-24任一项的方法，其中以约600mg-约800mg的剂量施用tgf-β抑制剂。
[0836]
31.用于实施方案1、2、5-24或30任一项的用途的组合产品或实施方案3-24或30任一项的方法，其中以约700mg的剂量施用tgf-β抑制剂。
[0837]
32.用于实施方案1、2、5-26或28-31任一项的用途的组合产品或实施方案3-26或28-31任一项的方法，其中每3周1次施用tgf-β抑制剂。
[0838]
33.用于实施方案1、2、5-26或28-29任一项的用途的组合产品或实施方案3-26或28-29任一项的方法，其中每6周1次施用tgf-β抑制剂。
[0839]
34.用于实施方案1、2或5-33任一项的用途的组合产品或实施方案3-33任一项的方法，其中在约20至约40分钟的期限内施用tgf-β抑制剂。
[0840]
35.用于实施方案1、2或5-34任一项的用途的组合产品或实施方案3-34任一项的方法，其中在约30分钟的期限内施用tgf-β抑制剂。
[0841]
36.用于实施方案1、2或5-35任一项的用途的组合产品或实施方案3-35任一项的方法，其中将tgf-β抑制剂与tim-3抑制剂在同一天施用。
[0842]
37.用于实施方案1、2或5-36任一项的用途的组合产品或实施方案3-36任一项的方法，其中在施用tim-3抑制剂完成后施用tgf-β抑制剂。
[0843]
38.用于实施方案1或5-37任一项的用途的组合产品或实施方案4-37任一项的方法，其中所述组合产品还包含pd-1抑制剂。
[0844]
39.用于实施方案1或5-38任一项的用途的组合产品或实施方案4-38任一项的方法，其中pd-1抑制剂包含斯巴达珠单抗、纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、medi0680、regn2810、tsr-042、pf-06801591、bgb-a317、bgb-108、incshr1210或amp-224。
[0845]
40.用于实施方案1或5-31任一项的用途的组合产品或实施方案4-31任一项的方法，其中pd-1抑制剂包含斯巴达珠单抗。
[0846]
41.用于实施方案1或5-40任一项的用途的组合产品或实施方案4-40任一项的方法，其中以约300mg-约500mg的剂量施用pd-1抑制剂。
[0847]
42.用于实施方案1或5-41任一项的用途的组合产品或实施方案4-41任一项的方法，其中以约400mg的剂量施用pd-1抑制剂。
[0848]
43.用于实施方案1或5-42任一项的用途的组合产品或实施方案4-42任一项的方法，其中每4周1次施用pd-1抑制剂。
[0849]
44.用于实施方案1或5-20任一项的用途的组合产品或实施方案4-40任一项的方法，其中以约200mg-约400mg的剂量施用pd-1抑制剂。
[0850]
45.用于实施方案1、5-20或44任一项的用途的组合产品或实施方案4-20或44任一项的方法，其中以约300mg的剂量施用pd-1抑制剂。
[0851]
46.用于实施方案1或5-45任一项的用途的组合产品或实施方案4-45任一项的方法，其中每3周1次施用pd-1抑制剂。
[0852]
47.用于实施方案1或5-46任一项的用途的组合产品或实施方案4-46任一项的方法，其中通过静脉内施用pd-1抑制剂。
[0853]
48.用于实施方案1或5-47任一项的用途的组合产品或实施方案4-47任一项的方法，其中在约20至约40分钟的期限内施用pd-1抑制剂。
[0854]
49.用于实施方案1或5-48任一项的用途的组合产品或实施方案4-48任一项的方法，其中在约30分钟的期限内施用pd-1抑制剂。
[0855]
50.用于实施方案1、2或5-37任一项的用途的组合产品或实施方案3-37任一项的方法，其中所述组合还包含il-1β抑制剂。
[0856]
51.用于实施方案50的用途的组合产品或实施方案50的方法，其中il-1β抑制剂包含卡那单抗、吉伏组单抗、阿那白滞素、双醋瑞因、利纳西普、il-1亲和体(sobi 006,z-fc(swedish orphan biovitrum/affibody))和鲁吉珠单抗(abt-981)(abbott),cdp-484(celltech)或ly-2189102(lilly)。
[0857]
52.用于实施方案50或51的用途的组合产品或实施方案50或51的方法，其中il-1β抑制剂包含卡那单抗。
[0858]
53.用于实施方案50-52任一项的用途的组合产品或实施方案50-52任一项的方法，其中将il-1β抑制剂每3周以200mg给药。
[0859]
54.用于实施方案50-52任一项的用途的组合产品或实施方案50-52任一项的方法，其中将il-1β抑制剂每4周以250mg给药。
[0860]
55.用于实施方案50-52任一项的用途的组合产品或实施方案50-52任一项的方法，其中将il-1β抑制剂每8周以250mg给药。
[0861]
56.用于实施方案1或5-55任一项的用途的组合产品或实施方案4-46任一项的方法，其中所述组合还包含低甲基化药物。
[0862]
57.用于实施方案56的用途的组合产品或实施方案56的方法，其中低甲基化药物包含阿扎胞苷、地西他滨、cc-486或astx727。
[0863]
58.用于实施方案56或57的用途的组合产品或实施方案56或57的方法，其中低甲基化药物包含地西他滨。
[0864]
59.用于实施方案56-58任一项的用途的组合产品或实施方案56-58任一项的方
法，其中以约2mg/m
2-约25mg/m2的剂量施用低甲基化药物。
[0865]
60.用于实施方案56-59任一项的用途的组合产品或实施方案56-59任一项的方法，其中以约2.5mg/m2、约5mg/m2、约10mg/m2或约20mg/m2的剂量施用低甲基化药物。
[0866]
61.用于实施方案56-60任一项的用途的组合产品或实施方案56-60任一项的方法，其中每日1次施用低甲基化药物。
[0867]
62.用于实施方案56-61任一项的用途的组合产品或实施方案56-61任一项的方法，其中将低甲基化药物连续施用5天。
[0868]
63.用于实施方案56-62任一项的用途的组合产品或实施方案56-62任一项的方法，其中在42-天周期的第1、2、3、4和5天施用低甲基化药物。
[0869]
64.用于实施方案56-63任一项的用途的组合产品或实施方案56-63任一项的方法，其中在约0.5小时至约1.5小时的期限内施用低甲基化药物。
[0870]
65.用于实施方案56-63任一项的用途的组合产品或实施方案56-63任一项的方法，其中在约1小时的期限内施用低甲基化药物。
[0871]
66.用于实施方案56-59任一项的用途的组合产品或实施方案56-58任一项的方法，其中以约2mg/m
2-约20mg/m2的剂量施用低甲基化药物。
[0872]
67.用于实施方案56-59或66任一项的用途的组合产品或实施方案56-59或66任一项的方法，其中以约2.5mg/m2、约5mg/m2、约7.5mg/m2、约15mg/m2或约20mg/m2的剂量施用低甲基化药物。
[0873]
68.用于实施方案56-60或66-67任一项的用途的组合产品或实施方案56-60或66-67任一项的方法，其中每日1次施用低甲基化药物。
[0874]
69.用于实施方案56-61或66-68任一项的用途的组合产品或实施方案56-61或66-68任一项的方法，其中将低甲基化药物连续施用3天。
[0875]
70.用于实施方案56-61或66-69任一项的用途的组合产品或实施方案56-61或66-69任一项的方法，其中在42天周期的第1、2和3天施用低甲基化药物。
[0876]
71.用于实施方案56-61或66-69任一项的用途的组合产品或实施方案56-61或66-69任一项的方法，其中在28天周期的第1、2和3天施用低甲基化药物。
[0877]
72.用于实施方案56-61或66-71任一项的用途的组合产品或实施方案56-61或66-71任一项的方法，其中在约0.5小时至约1.5小时的期限内施用低甲基化药物。
[0878]
73.用于实施方案56-61或66-72任一项的用途的组合产品或实施方案56-61或66-72任一项的方法，其中在约1小时的期限内施用低甲基化药物。
[0879]
74.用于实施方案56-73任一项的用途的组合产品或实施方案56-73任一项的方法，其中通过皮下、口服或静脉内施用低甲基化药物。
[0880]
75.用于实施方案1或5-74任一项的用途的组合产品或实施方案4-74任一项的方法，其中所述骨髓纤维化是原发性骨髓纤维化(pmf)、et后(pet-mf)骨髓纤维化或pv后骨髓纤维化(ppv-mf)。
[0881]
76.用于实施方案1或5-75任一项的用途的组合产品或实施方案4-75任一项的方法，其中所述骨髓纤维化是原发性骨髓纤维化(pmf)。
[0882]
77.用于实施方案2、5-37或50-55任一项的用途的组合产品或实施方案3、5-37或50-55任一项的方法，其中所述骨髓增生异常综合征为较低风险骨髓增生异常综合征
(mds)，例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds，或较高风险骨髓增生异常综合征，例如高风险mds或极高风险mds。
[0883]
78.用于实施方案2、5-37、50-55或77任一项的用途的组合产品或实施方案3-37、50-55或77任一项的方法，其中所述骨髓增生异常综合征是较低风险骨髓增生异常综合征(mds)，例如极低风险mds、低风险mds或中等风险mds。
[0884]
79.包含mbg453和nis793的组合产品，用于治疗受试者的骨髓纤维化，
[0885]
任选地，其中所述组合产品还包含地西他滨；
[0886]
任选地，其中所述组合产品还包含pdr001，且
[0887]
任选地，其中mgb453以600mg的剂量每3周1次施用，nis793以2100mg的剂量每3周1次施用，pdr001以300mg的剂量每3周1次施用，且地西他滨在42天周期的第1、2和3天以约5mg/m
2-约20mg/m2的剂量施用。
[0888]
80.治疗受试者的骨髓纤维化的方法，包含向该受试者施用mbg453和nis793的组合，
[0889]
任选地，其中所述组合还包含地西他滨，
[0890]
任选地，其中所述组合还包含pdr001，且
[0891]
任选地，其中mgb453以600mg的剂量每3周1次施用，nis793以2100mg的剂量每3周1次施用，pdr001以300mg的剂量每3周1次施用，且地西他滨在42天周期的第1、2和3天以的约5mg/m
2-约20mg/m2剂量施用。
[0892]
81.治疗受试者的骨髓纤维化的方法，包含向该受试者施用mbg453和nis793的组合，
[0893]
任选地，其中所述组合还包含地西他滨，
[0894]
任选地，其中所述组合还包含卡那单抗，且
[0895]
任选地，其中mgb453以600mg的剂量每3周1次施用，nis793以2100mg的剂量每3周1次施用，卡那单抗以200mg的剂量每3周1次施用，且地西他滨在42天周期的第1、2和3天以约5mg/m
2-约20mg/m2的剂量施用。
[0896]
82.治疗受试者的骨髓纤维化的方法，包含向该受试者施用mbg453和nis793的组合，
[0897]
任选地，其中所述组合还包含地西他滨，
[0898]
任选地，其中所述组合还包含卡那单抗，且
[0899]
任选地，其中mgb453以800mg的剂量每4周1次施用，nis793以1400mg的剂量每2周1次施用，卡那单抗以250mg的剂量每4周1次施用，且地西他滨在42天周期的第1、2和3天以约5mg/m
2-约20mg/m2的剂量施用。
[0900]
83.包含mbg453和nis793的组合产品，用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)，
[0901]
任选地，其中mgb453以600mg的剂量每3周1次施用，且nis793以2100mg的剂量每3周1次施用。
[0902]
84.包含mbg453和nis793的组合产品，用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)，
[0903]
任选地，其中mgb453以800mg的剂量每4周1次施用，且nis793以2100mg的剂量每3
周1次施用。
[0904]
85.治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)的方法，包含向该受试者施用mbg453和nis793的组合，
[0905]
任选地，其中mgb453以600mg的剂量每3周1次施用，且nis793以2100mg的剂量每3周1次施用。
[0906]
86.治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)的方法，包含向该受试者施用mbg453和nis793的组合，
[0907]
任选地，其中mgb453以800mg的剂量每4周1次施用，且nis793以2100mg的剂量每3周1次施用。
[0908]
87.包含mbg453、nis793和卡那单抗的组合产品，用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)，
[0909]
任选地，其中mgb453以800mg的剂量每4周1次施用，nis793以2100mg的剂量每3周1次施用，且卡那单抗以250mg的剂量每4周1次施用。
[0910]
88.治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)的方法，包含向该受试者施用mbg453、nis793和卡那单抗的组合，
[0911]
任选地，其中mgb453以800mg的剂量每4周1次施用，nis793以2100mg的剂量每3周1次施用，且卡那单抗以250mg的剂量每4周1次施用。
[0912]
89.包含mbg453、nis793和卡那单抗的组合产品，用于治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)，
[0913]
任选地，其中mgb453以800mg的剂量每4周1次施用，nis793以1400mg的剂量每3周1次施用，且卡那单抗以250mg的剂量每4周1次施用。
[0914]
90.治疗受试者的骨髓增生异常综合征(mds)的方法，包含向该受试者施用mbg453、nis793和卡那单抗的组合，
[0915]
任选地，其中mgb453以800mg的剂量每4周1次施用，nis793以1400mg的剂量每3周1次施用，且卡那单抗以250mg的剂量每4周1次施用。
[0916]
通过引用并入
[0917]
本文提及的所有出版物、专利和注册号在此通过引用以其整体并入，就好像每个单独的出版物或专利被具体和单独地指示通过引用并入一样。
[0918]
等同方案
[0919]
虽然已经讨论了本发明的具体实施方案，但上述说明书是说明性的而非限制性的。本发明的许多变通方案将在审阅本说明书和以下权利要求后对本领域技术人员变得显而易见。本发明的全部范围应通过参考权利要求书及其等同方案的全部范围以及说明书及其变通方案来确定。