一种快速鉴定及定量样本中粟酒裂殖酵母的方法

文档序号:24876502发布日期:2021-04-30 12:52阅读:来源:国知局

技术特征:

1.鉴定粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)的引物,其特征在于,其序列如seqidno:2、seqidno:3所示。

2.应用权利要求1所述引物鉴定粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)的方法,其特征在于,包括步骤:将待测样品制成菌悬液,将菌悬液稀释涂布获得单菌落,以seqidno:2、seqidno:3所示序列为引物进行菌落pcr,通过凝胶电泳观察pcr产物,如果电泳图谱上pcr产物在100-250bp之间有条带,则说明样品中含有粟酒裂殖酵母,如果pcr产物不在100~250bp之间或者没有条带时,说明样品中没有粟酒裂殖酵母。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述样品为发酵食品成品或者取自发酵食品发酵过程中的样品,包括大曲或酒醅。

4.根据权利要求2或3所述的方法,其特征在于,所述样品中含有库德里阿兹威毕赤酵母(pichiakudriavzevii)、酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)、拜尔结合酵母(zygosaccharomycesbailii)、白色假丝酵母(candidahumilis)和巴氏哈萨克斯坦酵母(kazachstaniabarnettii)。

5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,还对100-250bp之间的pcr产物进行测序,并将测序结果与粟酒裂殖酵母的乙醇脱氢酶编码基因序列进行比对。

6.应用权利要求1所述引物定量检测粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)的方法,其特征在于,包括步骤:

(1)配置不同菌浓的、已知浓度的粟酒裂殖酵母菌悬液,分别提取菌悬液中的基因组;

(2)利用seqidno:2、seqidno:3所示引物对基因组分别进行荧光定量pcr,以ct值为横坐标,以细胞数量或细胞数量的lg值为纵坐标,绘制标准曲线;

(3)提取待测样品中的基因组,利用seqidno:2、seqidno:3所示引物对待测样品的基因组进行荧光定量pcr,将荧光定量pcr的ct值代入标准曲线,换算得到样品中的粟酒裂殖酵母的数量。

7.区分粟酒裂殖酵母与库德里阿兹威毕赤酵母(pichiakudriavzevii)、酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)、拜尔结合酵母(zygosaccharomycesbailii)、白色假丝酵母(candidahumilis)、巴氏哈萨克斯坦酵母(kazachstaniabarnettii)的方法,其特征在于,以seqidno:2、seqidno:3所示序列为引物,进行菌落pcr或分别以上述酵母的基因组为模板进行pcr,通过凝胶电泳观察pcr产物,如果电泳图谱上pcr产物在100-250bp之间有条带,则说明相应菌株是粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)。

8.用于粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)的定性、定量的检测试剂盒,其特征在于,含有seqidno:2、seqidno:3所示引物,还包括dna聚合酶及缓冲液。

9.使用权利要求8所述试剂盒对粟酒裂殖酵母进行定性检测的方法,其特征在于,包括:将待测样品制成菌悬液,将菌悬液稀释涂布获得单菌落,以seqidno:2、seqidno:3所示序列为引物进行菌落pcr,通过凝胶电泳观察pcr产物,如果电泳图谱上pcr产物在100-250bp之间有条带,则说明样品中含有粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)。

10.使用权利要求8所述试剂盒对粟酒裂殖酵母进行定量检测的方法,其特征在于,包括:(1)配置不同菌浓的、已知浓度的粟酒裂殖酵母菌悬液,分别提取菌悬液中的基因组;(2)利用seqidno:2、seqidno:3所示引物对基因组分别进行荧光定量pcr,以ct值为横坐标,以细胞数量或细胞数量的lg值为纵坐标,绘制标准曲线;(3)提取待测样品中的基因组,利用seqidno:2、seqidno:3所示引物对待测样品的基因组进行荧光定量pcr,将荧光定量pcr的ct值代入标准曲线,换算得到样品中的粟酒裂殖酵母的数量。


技术总结
本发明公开了一种快速鉴定及定量样本中粟酒裂殖酵母的方法,属于生物工程技术领域。本发明针对粟酒裂殖酵母乙醇脱氢酶基因Adh4设计了特异性引物SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3,可以通过PCR技术实现对大曲、酒醅等样本中发酵体系中粟酒裂殖酵母的快速定性和定量检测;准确性高、有效性好、灵敏性高。本发明技术方案适用发酵食品成品或者取自发酵食品发酵过程的样品。

技术研发人员:杜海;徐岩;周天慈;孙佳
受保护的技术使用者:江南大学
技术研发日:2021.01.12
技术公布日:2021.04.30
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