：
1.本发明属多肽化学领域，特别涉及一种奥曲肽的制备方法。
背景技术：
2.奥曲肽(式1)为分子内含有一个二硫键的环八肽，是一种人工合成的人生长抑素的八肽衍生物，其作用与天然生长抑素相似。化学名为d-苯丙氨酰-l-半胱氨酰-l-苯丙氨酰-d-色氨酰-l-赖氨酰-l-苏氨酰-l-半胱氨酰-l-苏氨醇环-(2
→
7)-二硫化物；英文名为octreotide acetate。瑞士山德士(sandoz)公司于1982年合成，1988年美国fda批准醋酸奥曲肽用于胃肠道分泌类肿瘤和垂体肿瘤及肢端肥大症的治疗；1998年美国fda再次批准醋酸奥曲肽用于肢端肥大症的治疗。
[0003][0004]
公开的奥曲肽制备方法主要有两种：固相方法和液相方法。专利zl00134258.4采用液相方法合成，步骤繁琐，生产周期长。目前固相方法仍然是制备奥曲肽的主流方法，一类方法，如专利申请cn201010165270.x、专利zl200510029221.2及zl201210352668.3采用氯树脂及氯树脂类似物，与苏氨醇连接后合成奥曲肽。这类方法的缺点是氯树脂与苏氨醇的连接效率很低，导致过量苏氨醇及树脂的浪费，同时会增加后续洗涤树脂所需的溶剂消耗量以及最终的成本。另一类方法是采用添加linker的方案解决苏氨醇与树脂连接效率低的问题，如专利申请cn201610938844.x、专利zl200510024502.9及zl2004100108332。该类方法需要先将苏氨醇与linker在通过液相反应合成并纯化后才能用于奥曲肽的制备，增加了工艺周期且额外增加了一个原料的质控，导致工艺复杂化。以上两种方法均需要用价格昂贵的苏氨醇作为原料，且苏氨醇的利用率也不高，导致生产成本高昂。第三类固相合成方法采用酯还原的方法得到含有苏氨醇的奥曲肽，以解决成本高的问题，如专利申请cn02137521.6，采用boc-thr(ac)-wang树脂，tfa脱boc保护基，然后依次缩合fmoc氨基酸，用哌啶脱除fmoc保护基后缩合。合成结束后用硼氢化钠固相还原酯为醇，得到奥曲肽，收率仅为10.7％。进一步存在的问题是：采用tfa脱除boc保护基时，氨基酸thr会被切割下来，导致产率降低；另外在用哌啶脱除fmoc时，thr侧链保护基ac易脱落，产生副反应。专利zl201310333598.1采用boc-thr(tbu)-oh连接到氯甲基树脂上，盐酸/异丙醇脱boc，pd/c氢化切割及还原成醇，主要存在的问题是：先脱除巯基保护基trt再氢化的方式，会导致pd/c中毒失效；并需要在液相中环化形成二硫键，产生大量的废液。
技术实现要素：
[0005]
本发明的目的是提供一种简便、低成本、收率和纯度皆较高的奥曲肽制备方法，解决目前奥曲肽制备成本高或副反应多或工艺复杂或产率较低的问题。
[0006]
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
[0007]
本发明提供了一种奥曲肽的制备方法，包括以下步骤：
[0008]
(1)将fmoc-thr(tbu)-oh及酯化试剂加入到树脂中进行酯化反应，得到fmoc-thr(tbu)-树脂复合物；
[0009]
(2)按照固相多肽合成的方法，根据奥曲肽的序列，将保护氨基酸按c端至n端的顺序逐个偶联到步骤(1)所得树脂上获得保护的奥曲肽-树脂复合物；
[0010]
(3)向保护的奥曲肽-树脂复合物中加入切割试剂，脱除多肽侧链保护基，得到脱保护的奥曲肽-树脂复合物；
[0011]
(4)向脱保护的奥曲肽-树脂复合物中加入还原剂将步骤(1)中酯化反应形成的酯键还原为苏氨醇，同时将奥曲肽从树脂上裂解下来，并在裂解的同时将二硫键进行环化，得到奥曲肽粗品；
[0012]
(5)将奥曲肽粗品分离纯化，得到奥曲肽。
[0013]
本发明还提供了一种奥曲肽的制备方法，包括以下步骤：
[0014]
(1)将fmoc-thr(tbu)-oh及酯化试剂加入到pam树脂、hmba树脂或merrifield树脂中进行酯化反应，得到fmoc-thr(tbu)-树脂复合物；
[0015]
(2)向步骤(1)得到的fmoc-thr(tbu)-树脂复合物中加入fmoc脱保护试剂脱除fmoc保护基，反应结束后洗涤树脂，得到thr(tbu)-树脂，然后向thr(tbu)-树脂复合物中加入奥曲肽的c端第二个氨基酸和缩合试剂进行缩合反应，缩合反应结束后洗涤树脂；按照奥曲肽从c端到n端的顺序，更换氨基酸，重复fmoc脱保护反应和缩合反应，得到保护的奥曲肽-树脂复合物；
[0016]
(3)向保护的奥曲肽-树脂复合物中加入切割试剂，脱除多肽侧链保护基，得到脱保护的奥曲肽-树脂复合物；
[0017]
(4)向脱保护的奥曲肽-树脂复合物中加入还原剂将步骤(1)中酯化反应形成的键还原为苏氨醇，同时将奥曲肽从树脂上裂解下来，另外还原剂提供了弱碱性环境，使得奥曲肽从树脂上裂解的同时将二硫键进行环化，得到奥曲肽粗品；
[0018]
(5)将奥曲肽粗品经反相高效液相色谱分离纯化，得到奥曲肽精品。
[0019]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(1)中的树脂类型包括聚苯乙烯树脂，聚乙二醇树脂或聚苯乙烯-聚乙二醇共聚的树脂。
[0020]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(1)中的树脂为pam树脂、hmba树脂或merrifield树脂。
[0021]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(1)中的酯化试剂为dic、hobt、dmap、氟化钾中的一种或多种。
[0022]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(1)中各物质间的比例为n[fmoc-thr(tbu)-oh]：n(dic)：n(hobt)：n(dmap)：n(氟化钾)：n(树脂)＝4～1：4～1：4～1：0.5～0.1：4～1：1。
[0023]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(1)中的反应时间为1～24小时。
[0024]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(2)中fmoc脱保护试剂是体积比为1：1～4的哌啶与二甲基甲酰胺。所述fmoc脱保护反应的温度为20～60℃，反应时间为10～60min。
[0025]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(2)中的氨基酸的保护基分别为：所有氨基
酸的α氨基均为fmoc保护基，苏氨酸侧链羟基保护基为叔丁基，半胱氨酸侧链保护基为三苯甲基，赖氨酸和d-色氨酸侧链保护基为叔丁氧羰基。
[0026]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(2)中的缩合试剂为缩合试剂1、缩合试剂2及缩合试剂3的一种或多种混合；其中，缩合试剂1为dcc、dic、hbtu、hatu、bop、pybop中的一种，缩合试剂2为hobt、hoat中的一种，缩合试剂3为diea。
[0027]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(2)中各试剂的物质的量的比例为：氨基酸：缩合试剂1：缩合试剂2：缩合试剂3：树脂＝6～2：6～2：6～2：12～4：1。
[0028]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(2)中dcc或dic不与diea组合应用。
[0029]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(2)中缩合反应的温度为20～60℃，反应时间为1～4小时。
[0030]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(3)中的切割试剂为tfa混合液，所述的混合液中tfa的体积比不小于80％。
[0031]
在本发明的一些实施方案中，所述tfa混合液除了三tfa还包括重蒸水、tes、dtt、phenol、thioanisole、nh4i、tis、anisole和edt中的一种或多种混合。
[0032]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(3)保护的奥曲肽-树脂复合物中加入切割试剂进行反应的温度为0～60℃，反应时间为1～4小时。
[0033]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(4)中所述的还原剂为氯化锂混合液。
[0034]
在本发明的一些实施方案中，所述氯化锂混合液除了氯化锂还包括硼氢化钠、硼氢化锂、硼氢化钙、硼氢化钾以及硼氢化钠中的一种或多种混合。
[0035]
在本发明的一些实施方案中，所述氯化锂混合液中氯化锂所占的物质的量比例为50％。
[0036]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(4)中溶液为弱碱性，ph为8～10。
[0037]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(4)中的溶剂为四氢呋喃与乙醇的混合液。
[0038]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(4)中四氢呋喃与乙醇的体积比为2～4：1。
[0039]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(4)中还原剂与树脂的比例为n(还原剂)：n(树脂)＝20～5：1，还原剂溶液浓度为5～20mg/ml，室温下反应5～24小时。
[0040]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(5)中所述的奥曲肽粗品经反相高效液相色谱分离纯化，得到奥曲肽精品。
[0041]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(5)中的纯化条件为：制备柱填料为碳载硅胶类型。
[0042]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(5)中流动相为质量比均为0.1％三氟乙酸的水、乙腈或甲醇溶液中的一种或多种混合。
[0043]
在本发明的一些实施方案中，所述步骤(5)中制备柱为c4/c8/c
18
类型反相色谱柱。
[0044]
本发明优选技术方案的详细步骤为：
[0045]
(1)制备fmoc-thr(tbu)-树脂复合物
[0046]
向带有过滤装置的反应容器中加入树脂。向所述容器中加入溶剂二氯甲烷，浸没树脂，静置1小时，过滤。
[0047]
用dmf溶解fmoc-thr(tbu)-oh和酯化试剂后，加入到树脂中，室温下反应1h～24h。反应结束后，加入溶剂dmf，洗涤树脂六遍，过滤。其中所述的树脂类型包括聚苯乙烯树脂，
聚乙二醇树脂或聚苯乙烯-聚乙二醇共聚的树脂，包括但不限于pam树脂、hmba树脂或merrifield树脂，所述的酯化试剂为dic、hobt、dmap、氟化钾中的一种或多种，各物质间的比例为n[fmoc-thr(tbu)-oh]：n(dic)：n(hobt)：n(dmap)：n(氟化钾)：n(树脂)＝4～1：4～1：4～1：0.5～0.1：1。
[0048]
(2)制备保护的奥曲肽-树脂复合物
[0049]
在上述的fmoc-thr(tbu)-树脂复合物中加入体积比为1：1～4的pip与dmf溶液，进行脱保护反应，20～60℃下反应10～60min。反应完毕后，过滤。然后加入dmf洗涤树脂，过滤。
[0050]
向反应器中加入奥曲肽的c端第二个氨基酸[fmoc-cys(trt)-oh]和缩合试剂。20℃～60℃下反应1h～4h。反应结束后加入dmf洗涤树脂，过滤。所述缩合试剂为缩合试剂1、缩合试剂2及缩合试剂3的一种或多种混合；其中，缩合试剂1为dcc、dic、hbtu、hatu、bop、pybop中的一种，缩合试剂2为hobt、hoat中的一种，缩合试剂3为diea，且dic或dcc不与diea组合应用。其中所述的反应物物质的量之比为：n[fmoc-cys(trt)-oh]：n(缩合试剂1)：n(缩合试剂2)：n(缩合试剂3)：n(树脂)＝6～2：6～2：6～2：12～4：1。
[0051]
按照奥曲肽c端到n端的顺序，更换氨基酸，循环脱保护反应和缩合反应的操作，合成保护的奥曲肽-树脂复合物。其中所述的反应物物质的量之比以及反应条件同于fmoc-cys(trt)-oh。
[0052]
(3)制备脱保护的奥曲肽-树脂复合物
[0053]
在上述树脂中加入切割试剂，反应条件为0℃～60℃下反应1小时～4小时。所述的切割试剂为tfa、tes、dtt、phenol、thioanisole、nh4i、tis、anisole和edt中的至少一种与tfa的混合液，混合液中tfa的体积比不小于80％。反应结束后，加入二氯甲烷洗涤树脂。
[0054]
(4)制备奥曲肽粗品
[0055]
在脱保护的奥曲肽-树脂复合物中加入还原剂，反应5～24h，将奥曲肽从树脂上裂解下来，在裂解的同时将二硫键进行环化，得到奥曲肽粗品；所述的还原剂为硼氢化钠、硼氢化锂、硼氢化钙、硼氢化钾、硼氢化钠的至少一种与氯化锂的混合液，氯化锂混合液中氯化锂所占的物质的量比例为50％，还原剂与树脂的比例为n(还原剂)：n(树脂)＝20～5：1，还原剂溶液浓度为5～20mg/ml，室温下反应5～24h。
[0056]
(5)制备奥曲肽精品
[0057]
将奥曲肽粗品用体积比为5％的甲醇或乙腈水溶液溶解，采用制备型高效液相色谱纯化，得到奥曲肽精品。制备柱为c4/c8/c
18
类型反相色谱柱，流动相为含0.1％tfa的水、含0.1％tfa的乙腈和含0.1％tfa的甲醇中的一种或几种混合。
[0058]
本发明的有益效果是：采用pam树脂、hmba树脂或merrifield树脂为固相载体，并且采用fmoc保护苏氨酸，在脱除侧链保护基时奥曲肽不被从树脂上切割下来，可以实现在固相载体上脱除侧链保护基，仅需简单的洗涤即可完成侧链保护基与奥曲肽的分离，简化了工艺。采用价格低廉的苏氨酸为原料，避免了使用昂贵的苏氨醇原材料，大大降低了生产成本；采用还原、切割与环化同步进行的工艺，由于还原剂体积少，多肽浓度可以高达25mmol/l，大大减少了形成二硫键所需的溶剂(传统工艺中奥曲肽浓度为1-2mmol/l)，大大减少了四氢呋喃和乙醇的废液，并简化了工艺，收率和纯度皆较高。
[0059]
本发明中一些常用的缩写具有如下含义：
[0060]
fmoc:芴甲氧羰酰基
[0061]
tbu：叔丁基
[0062]
trt：三苯甲基
[0063]
tfa：三氟醋酸
[0064]
edt：乙二硫醇
[0065]
phenol：苯酚
[0066]
thioanisole：苯甲硫醚
[0067]
tes：三乙基硅烷
[0068]
tis：三异丙基硅烷
[0069]
dtt：1,2二硫苏糖醇
[0070]
anisole：苯甲醚
[0071]
nh4i：碘化铵
[0072]
meoh：甲醇
[0073]
dcm：二氯甲烷
[0074]
dmf：n,n-二甲基甲酰胺
[0075]
pip：哌啶
[0076]
dmap：二甲氨基吡啶
[0077]
diea：n,n-二异丙基乙胺
[0078]
bop：卡特缩合剂
[0079]
hobt:1-羟基苯并三氮唑
[0080]
dic：n,n-二异丙基碳二亚胺
[0081]
dcc：n,n-二环己基碳二亚胺
[0082]
hoat：n-羟基-7-偶氮苯并三氮唑
[0083]
hbtu：苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯
[0084]
hatu：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n，n，n'，n'-四甲基脲六氟磷酸酯
[0085]
pybop：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷
[0086]
fmoc-thr(tbu)-oh：n-(9-芴甲氧羰基)-o-叔丁基-苏氨酸
[0087]
fmoc-cys(trt)-oh：n-(9-芴甲氧羰基)-s-三苯甲基-半胱氨酸
[0088]
pam树脂：4-(羟甲基)苯基乙酰胺基甲基-聚苯乙烯树脂
[0089]
hmba树脂：羟甲基苯甲酰胺聚苯乙烯树脂
[0090]
merrifield树脂：氯甲基聚苯乙烯树脂
[0091]
如本文所用，“缩合反应”是两个或两个以上有机分子相互作用后以共价键结合成一个大分子，并常伴有失去小分子(如水、氯化氢、醇等)的反应。
[0092]
如本文所用，“保护基团”或“保护基”具有其在本领域中的普通含义。保护基团包括连接至或被配置成连接至分子(例如，肽)内的反应性基团(即，受保护的基团)以使得所述保护基团阻止或以其他方式抑制受保护的基团参与反应的化学部分。可通过将保护基团连接至分子来进行保护。当将保护基团从分子中除去时，例如，通过除去保护基团的化学转化，可发生去保护。
[0093]
如本文所用，“多肽”或“肽”具有其在本领域中的普通含义并且可指通过由一个氨
基羧酸分子的羰基碳与另一个氨基羧酸分子的氮原子形式上失去水而形成共价键之来自两个或更多个氨基羧酸分子(相同或不同)的酰胺。“氨基酸残基”也具有其在本领域中的普通含义并且指氨基酸(作为单个氨基酸或作为肽的一部分)在其与肽、另一个氨基酸或氨基酸残基组合之后的组合物。通常，当氨基酸与另一个氨基酸或氨基酸残基组合时，除去水，并且保留下来的氨基酸被称为氨基酸残基。术语“氨基酸”也具有其在本领域中的普通含义并且可包括蛋白质氨基酸和非蛋白质氨基酸。本发明中氨基酸残基的缩写是本领域中所用的指代20个常用l-氨基酸之一的标准3字母和/或1字母代码。
具体实施方式
[0094]
本发明通过以下实例作进一步举例说明，这些实例不应解释为对本发明的限制。下述实施例中，所有氨基酸的α氨基均为fmoc保护基，苏氨酸侧链羟基保护基为叔丁基，半胱氨酸侧链保护基为三苯甲基，赖氨酸和d-色氨酸侧链保护基为叔丁氧羰基。
[0095]
实施例1：制备奥曲肽
[0096]
(1)制备fmoc-thr(tbu)-树脂复合物
[0097]
向带有过滤装置的反应器中加入pam树脂(1.0mmol/g)1g，注入10ml二氯甲烷，静置1h，过滤。
[0098]
称量4mmol fmoc-thr(tbu)-oh，4mmol dic，4mmol hobt以及0.5mmol dmap，溶于10ml dmf中，加入到树脂中，室温下反应24h。反应结束后，过滤。然后加入10ml dmf，洗涤树脂六遍，过滤。
[0099]
(2)制备保护的奥曲肽-树脂复合物
[0100]
向反应器中加入10ml体积比为1：1的pip与dmf溶液，20℃下反应30min。反应完毕后，过滤。然后加入10ml dmf洗涤树脂六遍，过滤。
[0101]
取6mmol fmoc-cys(trt)-oh，6mmol dic，6mmol hobt，溶于10ml dmf中，将所得溶液加入到反应器中，30℃下反应4h。反应结束后，过滤。然后加入10ml dmf，洗涤树脂六遍，过滤。
[0102]
按照奥曲肽c端到n端的顺序，更换氨基酸，循环脱保护反应和缩合反应的操作，合成保护的奥曲肽-树脂复合物。
[0103]
(3)制备脱保护的奥曲肽-树脂复合物
[0104]
向上述保护的奥曲肽-树脂复合物中加入10ml切割试剂(按体积百分含量计，tfa:phenol:thioansole:碘化铵水溶液＝87.5％:5％:2.5％:5％，碘化铵水溶液的浓度为10mg/ml)，25℃下反应2h。反应结束后，加入二氯甲烷洗涤树脂6遍。
[0105]
(4)制备奥曲肽粗品
[0106]
在脱保护的奥曲肽-树脂复合物中加入20mmol、浓度10mg/ml、物质的量比为1：1的硼氢化钠与氯化锂溶液，溶剂为体积比为3：1的四氢呋喃与乙醇的混合液，反应24h，将奥曲肽从树脂上裂解下来，在裂解的同时将二硫键进行环化，得到奥曲肽粗品。
[0107]
(5)制备奥曲肽精品
[0108]
将奥曲肽粗品溶于体积比为5％的乙腈水溶液中，经高效液相色谱纯化得到奥曲肽精品，冷冻干燥后得0.55g，纯度为99.3％，产率67.5％。制备条件为：c
18
制备柱，两种流动相分别为质量比为0.1％tfa的水、乙腈溶液。
[0109]
实施例2：制备奥曲肽
[0110]
(1)制备fmoc-thr(tbu)-树脂复合物
[0111]
向带有过滤装置的反应器中加入hmba树脂(1.0mmol/g)1g，注入10ml二氯甲烷，静置1h，过滤。
[0112]
称量3mmol fmoc-thr(tbu)-oh，3mmol dic，3mmol hobt以及0.3mmol dmap，溶于10ml dmf中，加入到树脂中，室温下反应10h。反应结束后，过滤。然后加入10ml dmf，洗涤树脂六遍，过滤。
[0113]
(2)制备保护的奥曲肽-树脂复合物
[0114]
向反应器中加入10ml体积比为1：3的pip与dmf溶液，30℃下反应60min。反应完毕后，过滤。然后加入10ml dmf洗涤树脂六遍，过滤。
[0115]
取4mmol fmoc-cys(trt)-oh，4mmol dic，4mmol hobt，溶于10ml dmf中，将所得溶液加入到反应器中，40℃下反应2h。反应结束后，过滤。然后加入10ml dmf，洗涤树脂六遍，过滤。
[0116]
按照奥曲肽c端到n端的顺序，更换氨基酸，循环脱保护反应和缩合反应的操作，合成保护的奥曲肽-树脂复合物。
[0117]
(3)制备脱保护的奥曲肽-树脂复合物
[0118]
向上述保护的奥曲肽-树脂复合物中加入10ml切割试剂(按体积百分含量计，tfa:phenol:thioansole:edt＝87.5％:5％:2.5％:5％)，40℃下反应4h。反应结束后，加入二氯甲烷洗涤树脂6遍。
[0119]
(4)制备奥曲肽粗品
[0120]
在脱保护的奥曲肽-树脂复合物中加入10mmol、浓度5mg/ml、物质的量比为1：1的硼氢化钠与氯化锂溶液，溶剂为体积比为2：1的四氢呋喃与乙醇的混合液，反应10h，将奥曲肽从树脂上裂解下来，在裂解的同时将二硫键进行环化，得到奥曲肽粗品。
[0121]
(5)制备奥曲肽精品
[0122]
将奥曲肽粗品溶于体积比为5％的乙腈水溶液中，经高效液相色谱纯化得到奥曲肽精品，冷冻干燥后得0.407g，纯度为98.9％，产率50％。制备条件为：c8制备柱，两种流动相分别为质量比均为0.1％tfa的水、乙腈溶液。
[0123]
实施例3：制备奥曲肽
[0124]
(1)制备fmoc-thr(tbu)-树脂复合物
[0125]
向带有过滤装置的反应器中加入merrifield树脂(1.0mmol/g)1g，注入10ml二氯甲烷，静置1h，过滤。
[0126]
称量1mmol fmoc-thr(tbu)-oh，1mmol氟化钾，溶于10ml dmf中，加入到树脂中，室温下反应10h。反应结束后，过滤。然后加入10ml dmf，洗涤树脂六遍，过滤。
[0127]
(2)制备保护的奥曲肽-树脂复合物
[0128]
向反应器中加入10ml体积比为1：4的pip与dmf溶液，20℃下反应10min。反应完毕后，过滤。然后加入10ml dmf洗涤树脂六遍，过滤。
[0129]
取2mmol fmoc-cys(trt)-oh，2mmol hbtu，4mmol diea，溶于10ml dmf中，将所得溶液加入到反应器中，20℃下反应1h。反应结束后，过滤。然后加入10ml dmf，洗涤树脂六遍，过滤。
[0130]
按照奥曲肽c端到n端的顺序，更换氨基酸，循环脱保护反应和缩合反应的操作，合成保护的奥曲肽-树脂复合物。
[0131]
(3)制备脱保护的奥曲肽-树脂复合物
[0132]
向上述保护的奥曲肽-树脂复合物中加入10ml切割试剂(按体积百分含量计，tfa:tis:thioansole:edt＝87.5％:5％:2.5％:5％)，0℃下反应1h。反应结束后，加入二氯甲烷洗涤树脂6遍。
[0133]
(4)制备奥曲肽粗品
[0134]
在脱保护的奥曲肽-树脂复合物中加入5mmol、浓度20mg/ml的硼氢化钠溶液，溶剂为体积比为4：1的四氢呋喃与乙醇的混合液，反应5h，将奥曲肽从树脂上裂解下来，在裂解的同时将二硫键进行环化，得到奥曲肽粗品。
[0135]
(5)制备奥曲肽精品
[0136]
将奥曲肽粗品溶于体积比为5％的乙腈水溶液中，经高效液相色谱纯化得到奥曲肽精品，冷冻干燥后得0.203g，纯度为98.3％，产率40％。制备条件为：c4制备柱，两种流动相分别为质量比均为0.1％tfa的水、甲醇溶液。
[0137]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。