甲酰胺类化合物在制备抗脊索肿瘤药物中的应用及试剂盒

本发明涉及甲酰胺类化合物在制药中的新用途。

背景技术：

脊索瘤是一种较为少见的原发性肿瘤，起源于胚胎残余的脊索组织，好发于40至60岁左右。其中颅底脊索瘤是一种罕见疾病，仅占颅内肿瘤的千分之一，发生于颅底的斜坡与鞍区，呈缓慢的侵袭性生长。流行病调查显示颅底脊索瘤的年发病率为0.2-0.8每百万人。颅底脊索瘤因其位置特殊，在大脑深部，累及周围组织会导致严重后果，甚至死亡。目前病人的治疗手段主要包括：

1、手术：根治性手术切除是目前唯一有效的治疗手段。但近70％患者无法获得肿瘤全切除。

2、放疗：在各种放疗方法中，目前仅有质子刀被证实对脊索瘤有一定疗效。但质子刀可能同时会损伤肿瘤周边组织，特别是脑干和视神经。故该方法仍存在相当的风险。此外，质子刀治疗需要高昂费用等多个客观因素，使得很多患者无法获得质子刀治疗。

3、药物：目前尚无对脊索瘤确实有效的药物，包括普通化疗和靶向治疗；

因此，本领域迫切需求探索脊索瘤治疗新手段，尤其是发现特定的药物靶点，可以切实有效治疗脊索瘤患者，满足临床应用的需要。

技术实现要素：

本发明的目的是公开一种甲酰胺类化合物在制备抗脊索肿瘤药物中的应用及试剂盒，以克服现有技术存在的上述缺陷，满足临床应用的需要。

所述的甲酰胺类化合物，为具有式i所示的化合物、或其盐和晶体，

所述化合物的盐为含有药物的化学上可接受的阴离子盐，优选盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、醋酸盐、三氟醋酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、草酸盐。

所述的晶体如wo2019/114792a1公开的晶体，如式i；

所述的甲酰胺类化合物或其盐和晶体的制备方法为公知的，可参见wo2019/114792a1专利的报道，本发明不再赘述。

药理实验表明，本发明所述的化合物或其盐和晶体具有较强的抑制脊索瘤tgf-β信号通路的活性，与阳性对照药vactosertib(casno.:1352608-82-2)活性相当,脊索瘤tgf-β信号通路的抑制活性高于另一阳性化合物ly3200882(casno.:1898283-02-7；

此外，本申请所表述的化合物对人颅底脊索瘤细胞系(um-chor1)的侵袭性有较强的抑制活性，与前述阳性化合物ly-364947(casno.:396129-53-6)和vactosertib相当，预示了本申请化合物在抗颅底脊索方面的潜在应用价值；

在此基础上，本发明人在体外及体内，均验证了本申请所所述的化合物可以制备治疗抗脊索肿瘤药物。

结合上述说明，本发明所述的化合物，对脊索瘤有较好的抑制活性，安全性优于现有技术报道的化合物，由此可见，所述化合物，对于脊索瘤肿瘤具有明显的治疗作用，可以用于制备治疗抗脊索瘤药物；

本发明的化合物，可以通过静脉注射、口服等途径施加于需要治疗的患者，剂量可由医师根据患者的具体情况决定。

本发明还涉及一种甲酰胺类化合物的药物组合物，包括治疗有效量的所述的甲酰胺类化合物或其盐和药学可接受的载体，所述载体，包括赋形剂如水、抗氧剂如亚硫酸钠，润滑剂如硬脂酸镁；

所述的药物组合物为片剂、胶囊剂、水性混悬剂、油性混悬剂、可分散的粉剂、颗粒剂、锭剂、乳剂、糖浆剂、乳膏剂、栓剂或注射剂；

本发明还涉及一种治疗抗脊索肿瘤药物的试剂盒，所述的试剂盒包括所述的甲酰胺类化合物。

本发明的有益效果是：

对脊索瘤具有较好的抑制活性，安全性优于现有技术报道的化合物，由此可见，所述化合物：毒性更低、更具开发前景的新型脊索瘤侵袭性抑制剂，具有作为临床治疗剂使用前景。

附图说明

图1为侵袭实验结果图。

图2为裸鼠体内抑瘤结果图

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但发明的实施方式不限于此，本发明请求保护的技术范围以权利要求书为准。

实施例1

利用celltiter-glo法测试化合物对于正常细胞系293-t(人肾上皮细胞)和hl7702(人肝细胞)的抑制活性。化合物的起始浓度为100微摩尔，2倍稀释，3个浓度复孔测定，具体试验操作参照试剂盒说明书进行。本申请化合物的半数抑制浓度(ic50)值见下表1。

表1本发明所述化合对两株正常细胞株的半数抑制浓度

由表1可见，本申请所表述化合物gfh-018相较于阳性化合物ly364947、vactosertib，对于人正常肾上皮细胞(293-t)和人正常肝细胞(hl7702)的抑制活性弱，具有更低的毒副作用，与现有技术相比，预示其作为抗肿瘤药物使用时具有更低的毒副作用，易于作为抗脊索瘤药物使用。

实施例2

利用celltiter-glo法测试化合物对于um-chor1(人颅底脊索瘤)、mcf7(人乳腺癌细胞)、u87mg(人恶性胶质瘤细胞)的抑制活性。化合物的起始浓度为100微摩尔，2倍稀释，3个浓度复孔测定，具体试验操作参照试剂盒说明书进行。具体结果见下表2。表1本发明所述化合对两株正常细胞株的半数抑制浓度

表2本发明所述化合对敏感肿瘤细胞株的半数抑制浓度

由表2可见，本申请所表述化合物gfh-018相较于阳性化合物ly364947、vactosertib，对于um-chor1(人颅底脊索瘤)、mcf7(人乳腺癌细胞)、u87mg(人恶性胶质瘤细胞)的抑制活性较高。

实施例3

将人颅底脊索瘤细胞系(um-chor1)铺到六孔板中，每孔约3*10^5个细胞，种板24小时，待细胞完全贴壁后，按浓度梯度加药72小时后，进行transwell侵袭实验，验证药物对于细胞的侵袭性的影响，即在transwell小室上室中加入100ul浓度为2*10^6个/ml的无血清细胞悬液，并将matrigel基质胶按1：50加入上室细胞悬液，在下室加入600ul含血清的完全培养基。所用小室为falconpermeablesupportfor24-wellplatewith8.0μmtransparentpetmembrane,sterile。

结果如图1。

术语：侵袭实验的方法在shank,liuc,liubh,etal.circularnoncodingrnahipk3mediatesretinalvasculardysfunctionindiabetesmellitus[j].circulation,2017.文献中有详细的记载。

其中：

gfh-018代表本申请所述药物gfh-018；

ly364947代表一种二杂芳基取代的吡唑类化合物，用作tgf-β受体i激酶；的选择性atp竞争性抑制剂,具体作用在hefang,liling,lipei-peietal.cyclooxygenase-2/sclerostinmediatestgf-β1-inducedcalcificationinvascularsmoothmusclecellsandratsundergoingrenalfailure.[j].aging(albanyny),2020,12:21220-21235.文献中有记载；

vactosertib代表一种高效的、选择性的、口服生物有效的tgf-β受体alk4/alk5抑制剂，具体作用在jungsuyoung,parkju-hwan,baekmin-junetal.developmentofanoralbentonite-basedmodified-releasefreeze-driedpowderofvactosertib:pharmacokineticsandanti-colitisactivityinrodentmodelsofulcerativecolitis.[j].intjpharm,2020,578:119103.文献中有记载。

图1中，从左往右分别给药浓度为0um、50um、100um。

由图1可见：结果图中被染为黑色的为细胞，代表穿过基质胶覆盖的膜的细胞，其密度与细胞侵袭性呈正相关。由实验结果可见，随着给药浓度升高，细胞密度逐渐降低，代表本申请所述药物gfh-018可以有效抑制脊索瘤细胞侵袭性，并且其效果略优于另外两个阳性化合物ly364947、vactosertib。

实施例4

本例为实施例12对mcf7裸鼠异种移植模型上的药效评价

运用皮下成瘤手段，给裸鼠皮下注射um-chor1细胞系，注射量为100ml细胞悬液和100mlmatrigel基质胶，细胞数量为5*10^6个/只。共给15只雌性裸鼠皮下注射肿瘤细胞系。并且在皮下瘤形成，即皮下注射细胞系21天后，称量裸鼠体重，并且给予灌胃给药gfh-018，将15只裸鼠分为高剂量组5只，低剂量组5只和空白对照组5只。高剂量组给药剂量为50mg/kg，低剂量组为25mg/kg，空白对照组为等药物体积溶剂，连续每天给药，连续7天。自皮下成瘤14天起开始记录肿瘤体积，具体结果如图2，裸鼠体重见表3，可见gfh-018可以在体内情况下抑制脊索瘤。

um-chor1细胞系指的是一种人的颅底脊索瘤细胞系；

gfh-018指的是本申请所述的一种甲酰胺类药物

如图2所示，高剂量为给药50mg/kg，低剂量为给药25mg/kg，nc为空白对照给等体积的药物溶剂。横坐标为皮下注射肿瘤细胞系的天数。

表3裸鼠体重情况

实施例5

组合物片剂制备

制备方法：将实施例1-26中任一化合物与蔗糖、玉米淀粉混合，加水湿润，搅拌均匀，干燥，粉碎过筛，加入硬脂酸钙，混合均匀，压片。每片重100mg，活性成分含量为10mg。

实施例6

组合物针剂制备

实施例1-26中任一的化合物10mg

注射用水70mg

制备方法：将活性成分溶解与注射用水，混合均匀，过滤，将所获得的溶液在无菌条件下分装与安瓿瓶中，每瓶80mg，活性成分含量为10mg/瓶。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的包含范围之内。