紫堇灵的对照品的制备方法与流程

本发明涉及一种紫堇灵的制备方法，尤其涉及能够制备可以用于tcl高纯度的紫堇灵的固体对照品的制备方法。

背景技术：

苦地丁(corydalisbungeana)为罂粟科紫堇属植物紫堇的干燥全草，别名小鸡菜、彭式紫堇，性寒，味苦，具有清热解毒，散结消肿的功效，用于治疗时疫感冒，咽喉肿痛，疔疮肿痛，痈疽发背，痄腮丹毒，日常用地丁草煎服即可起到一定的日常保健的作用，对排除毒素，增强抵抗力均有一定的作用。

作为苦地丁中药材的质量控制方法，《中华人民共和国药典》规定的其中的主要化合物紫堇灵是其指标成分。紫堇灵为苦地丁中的主要成分。紫堇灵(corynoline)，分子式为c21h21no5，结构式如下：

然而，如此重要的化合物，市场范围内几乎没有高纯度的中药对照品的贩卖，可以购买的标准品普遍的纯度97～98％左右。

已经公开的紫堇灵的现有提取制备方法非常有限。郑建芳等发表的《苦地丁生物碱的化学成分》，该文献公开的方法是从苦地丁干燥全草中，粉碎后用90％乙醇加热回流提取3次，减压回收乙醇，浸膏用2％盐酸研磨，用石油醚萃取3次，回收溶剂得石油醚浸膏，盐酸液用氨水调ph至10，用氯仿反复萃取，合并氯仿液并回收氯仿得总碱。硅胶柱层析分离，石油醚.氯仿、氯仿.甲醇梯度脱，得到多种生物碱，此法是研究苦地丁生物碱种类的方法，不是紫堇灵的专有方法。张浩曾发表《紫堇灵的分离制备及抗炎活性》(中国药科大学学报,2017(6):715-720.)，介绍了使用氯仿、丙酮等毒害性较大溶剂的分离方法，但是该方法不适合放大规模。黄阁发表了《苦地丁中紫堇灵和乙酰紫堇灵的制备和hplc测定》(中国中药杂质,2003(28):346-349)，其中提及了紫堇灵的制备方案，但是得到的产品纯度较低，不能作为对照品的制备方法。

更为重要的是，紫堇灵对照品除了用于hplc用于含量、纯度测定，在中药的质量检测过程中，还经常用于tlc的定性检测。现有的制备方法获得的紫堇灵以及市场上能够买到的标准品，虽然hplc纯度尚可，但是用于tlc定性检测时，本身存在杂质，使得作为对照品而言的应用场景受到了很大的限制。

现状是，紫堇灵已被药典列为指标成分，获得紫堇灵对照品显得十分必要。研发提供高通量、能提供高纯度、特别是高tlc的纯度紫堇灵，且适合大量制备的紫堇灵对照品制备方法是非常迫切的。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种高通量、能提供高纯度、特别是高tlc的纯度紫堇灵，且适合大量制备的紫堇灵对照品制备方法。本发明中，紫堇灵有时也称为分离目标物。

如果并未特殊说明，本发明中目标物的纯度和含量的百分数，为以质量比计的含量。如果并未特殊说明，本发明中液体与液体含量配比的百分数，例如甲酸在乙腈水溶液中的含量配比，以体积分数计量。

本发明通过简单高效的操作流程，能够分离得到纯度很高的紫堇灵，而且所得到的紫堇灵的tlc纯度也非常优异。

本发明的制备分离方法依次包括以下步骤：第一正相色谱柱提纯工序，将苦地丁药材粉碎物的萃取物浓缩液上样至正相色谱柱，用包含石油醚、乙酸乙酯、三乙胺的混合溶剂洗脱去除杂质，此时石油醚：乙酸乙酯：三乙胺混合比例是3～6：0.5～2：0.05～0.2洗脱，杂质先被洗脱下来，收集后部被洗脱的目标物，浓缩得到含有目标物的粗品浓缩液。

难溶性溶剂析出处理工序，将所述含有目标物的粗品浓缩液用二氯甲烷溶解，再利用二氯甲烷：甲醇1.5～0.8：1的混合溶液进行稀释，再加入对于紫堇灵而言为难溶性溶剂的溶剂，在50～60℃下将溶液进行浓缩，析出固体，抽滤，用20～40％的甲醇清洗抽滤得到的固体，得到目标物的半成品固体粉末；

第二正相色谱柱提纯工序：将目标物的半成品固体粉末上样至正相色谱柱，用包含二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺的混合溶剂洗脱，先以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:0.7～0.9:0.1的洗脱液洗脱去除杂质，再以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:1～1.1:0.1的洗脱液洗脱去除杂质；然后以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:1.2～1.3:0.1的洗脱液洗脱得到含目标品的洗脱液，收集该洗脱液，浓缩，冷冻干燥，获得固体的目标物。

在优选的本发明的制备方法中，所述苦地丁药材粉碎物的萃取物浓缩液的制备方法如下：将苦地丁药材粉碎为粉末，利用70％～95％的乙醇进行浸泡，将浸泡液过滤，浓缩得到第一原料浓缩液，将第一原料浓缩液用水溶解，利用酸性物质调整至ph至2～3，用等体积的第一有机溶剂萃取去除杂质，弃第一有机溶剂层，水层利用碱性物质调节调ph至8～9，再用等体积第二有机溶剂萃取，将第二有机溶剂萃取液浓缩得到浓缩液。

在优选的本发明的制备方法中，难溶性溶剂析出处理工序，所述对于紫堇灵而言为难溶性溶剂的溶剂，是70～90％的甲醇、乙醇或异丙醇的水溶液，优选为75～85％的甲醇水溶液。

在优选的本发明的制备方法中，第一正相色谱柱提纯工序中，所述溶剂清洗中使用的石油醚：乙酸乙酯：三乙胺混合比例是为4～4.5：0.5～2：0.1～0.15。

在优选的本发明的制备方法中，难溶性溶剂析出处理工序中，将所述含有目标物的粗品浓缩液用二氯甲烷溶解，再利用二氯甲烷：甲醇1.2～0.9：1的混合溶液进行稀释，再加入75～85％的甲醇水溶液。

在优选的本发明的制备方法中，第一正相色谱柱提纯工序中，正相色谱柱的填料为粒径为50～200目的硅胶，第二正相色谱柱提纯工序中，正相色谱柱的填料为粒径为100～300目的硅胶。

在优选的本发明的制备方法中，第二正相色谱柱提纯工序中，先以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4～4.5:0.7～0.9:0.1的洗脱液洗脱去除杂质，再以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4～4.5:1～1.1:0.1的洗脱液洗脱去除杂质；然后以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4～4.5:1.2～1.3:0.1的洗脱液洗脱得到含目标品的洗脱液。

在优选的本发明的制备方法中，用于调整第一原料浓缩液用水溶解的ph值的酸性物质为3～6％的盐酸，用于调整第二原料浓缩液用水溶解的ph值的碱性物质为浓氨水。

在优选的本发明的制备方法中，苦地丁药材粉碎物的萃取物浓缩液的制备时使用的第一有机溶剂为选自苯、四氯化碳、正己烷、环己烷、庚烷、乙醚、石油醚中的一种，第二有机溶剂为选自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚、氯仿中的一种。

在优选的本发明的制备方法中，难溶性溶剂析出处理工序，在53～57℃下将溶液进行浓缩，析出固体。

本发明还提供一种纯度为98.5％以上的紫堇灵的固体对照品，其通过权利要求1的制备方法制备得到，本发明的方法制备的对照品不但hplc纯度高，而且tlc的纯度也非常高。另外，参照实施例可知，本发明获得的紫堇灵的固体对照品在水分、溶剂残留及灼烧残渣等方面的指标也非常优秀。

本发明具有以下特点：

1、工艺步骤少，耗时短，得率高，操作简便，易于工业化生产；

2、所用的溶剂为乙醇、甲醇、石油醚、二氯甲烷及乙酸乙酯等，毒性小、环境污染小；

3、参照实施例可知，通过此工艺获得的紫堇灵对照品，用三种不同的方法检测hplc纯度均达到99.6％以上，tlc检测纯度，点样量在10-100ug，喷以碘化铋钾日光下检视仍无杂质点，水分为0.2％，炽灼残渣为0.04％，甲醇溶剂残留为0.02％，二氯甲烷溶剂残留为0.008％，乙酸乙酯溶剂残留未检出。

4、通过此工艺获得的紫堇灵产品纯度高，既可以用来定性也可以用于检测定量。

附图说明

图1比较例1的分离方法获得的紫堇灵tlc显色图(紫外)；

图2实施例1的分离方法获得的紫堇灵tlc显色图(紫外)；

图3实施例1的分离方法获得的紫堇灵tlc显色图(碘)；

图4实施例1中的难溶性溶剂析出处理前hplc图谱；

图5实施例1中的难溶性溶剂析出处理后hplc图谱；

图6实施例1获得的紫堇灵的hplc图谱；

图7为紫堇灵纯品的¹h-nmr图谱；

图8为紫堇灵纯品的¹³c-nmr图谱；

图9为紫堇灵纯品的质谱图。

具体实施方式

以下记载本发明的具体实施方式。

本发明的制备分离方法依次包括以下步骤：第一正相色谱柱提纯工序，将苦地丁药材粉碎物的萃取物浓缩液上样至正相色谱柱，用包含石油醚、乙酸乙酯、三乙胺的混合溶剂洗脱去除杂质，此时石油醚：乙酸乙酯：三乙胺混合比例是3～6：0.05～0.2：0.05～0.2洗脱，杂质先被洗脱下来，收集后部被洗脱的目标物，浓缩得到含有目标物的粗品浓缩液，

难溶性溶剂析出处理工序，将所述含有目标物的粗品浓缩液用二氯甲烷溶解，再利用二氯甲烷：甲醇1.5～0.8：1的混合溶液进行稀释，再加入对于紫堇灵而言为难溶性溶剂的溶剂，在50～60℃下将溶液进行浓缩，析出固体，抽滤，用20～40％的甲醇清洗抽滤得到的固体，得到目标物的半成品固体粉末；

第二正相色谱柱提纯工序：将目标物的半成品固体粉末上样至正相色谱柱，用包含二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺的混合溶剂洗脱，先以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:0.7～0.9:0.1的洗脱液洗脱去除杂质，再以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:1～1.1:0.1的洗脱液洗脱去除杂质；然后以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:1.2～1.3:0.1的洗脱液洗脱得到含目标品的洗脱液，收集该洗脱液，浓缩，冷冻干燥，获得固体的目标物。

本发明的发明人发现，作为通常的类似紫堇灵这样的生物碱类化合物，常规是采用添加了微量碱(三乙胺、氨水等)的正相色谱体系，不断的增加色谱分离的分辨率，利用更高压力和分离度更好的色谱柱进行不断的纯度提高的思路，能够逐渐提高紫堇灵的纯度，但是仅仅限于hplc纯度。通过正相色谱获得的hplc纯度较好的纯品，其tlc色谱试验中可见杂质。原因并不是很清楚，可能是药材原料中有着与紫堇灵伴生的一些植物次生代谢产物，在添加了生物碱的正相色谱分离体系中与目标物分离度不足，使得仅仅通过正相色谱体系完全不足以去除这些杂质，而且，这些在hplc的常规检测器中难以检测，因此，导致纯品的tlc纯度不高，使得得到的纯品用于tlc对照时，观感很差。参见图1。

本发明人无意间发现，这些导致tlc纯度不高的杂质成分，与紫堇灵的溶解性差异较大。利用这一特点，发明人不断研究，通过上述第一正相色谱柱提纯工序、难溶性溶剂析出处理工序和第二正相色谱柱提纯工序的协同运用，能够最大程度的发挥导致tlc纯度不高的杂质成分与紫堇灵的分离性。上述第一正相色谱柱提纯工序、难溶性溶剂析出处理工序和第二正相色谱柱提纯工序的顺序是重要的，调换顺序会导致无法获得tlc纯度高的紫堇灵，或者会极大的影响分离效率，极大降低回收率。

第一正相色谱柱提纯工序中，所述溶剂清洗中使用的石油醚：乙酸乙酯：三乙胺混合比例是为4～4.5：0.5～2：0.1～0.15。通过色谱提出可以除去大量的杂质，但是在tlc色谱中显现杂质的成分在此步骤分离度不高。本发明中第一正相色谱柱提纯工序中使用的正相色谱柱的填料，可以用公知的正相填料，所谓正相填料，就是固定相的极性大于流动相的极性的填料，如果流动相为有机溶剂，常用的填料为硅胶、al2o3、极性键合相填料等，本发明中优选使用硅胶。硅胶的粒径大小没有特别限制，从效率和填料易得的角度出发，在优选的本发明的制备方法中，第一正相色谱柱提纯工序中，正相色谱柱的填料为粒径为50～200目的硅胶。

本发明中，上述的难溶性溶剂析出处理工序是非常关键的步骤，其恰当的被设置在两次洗脱极性差异较大的正相色谱分离中，可以利用分离度不足的杂质的溶解度差异高效的清除tlc杂质。所述对于紫堇灵而言为难溶性溶剂的溶剂，通常是指紫堇灵的溶解度小于0.05g的溶剂，但是此处也并不进行这样的限制，只要是对于紫堇灵溶解度较低的溶剂，且对于杂质溶解度大的溶剂都可以使用，经过发明人的确认，本发明中使用70～90％的甲醇、乙醇或异丙醇的水溶液可以起到特别好的分离效果，特别优选为75～85％的甲醇水溶液，进一步特别优选80％的甲醇水溶液。

上述的难溶性溶剂析出处理工序中，在50～60℃下将溶液进行浓缩，析出固体，优选在53～57℃下将溶液进行浓缩，进一步优选在54～56℃下将溶液进行浓缩。浓缩过程中会有大量的紫堇灵析出，优选将该状态的混悬液充分的分散，分散方法没有特别限制，只要是使得粉末在溶剂中分散的方法即可，例如可以利用机械搅拌、超声波震荡等的方法，但不限于这些方法。然后进行抽滤，用20～40％的甲醇清洗抽滤得到的固体，优选用25～35％的甲醇进行清洗。

第二正相色谱柱提纯工序中，进一步优选先以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4～4.5:0.7～0.9:0.1的洗脱液洗脱去除杂质，再以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4～4.5:1～1.1:0.1的洗脱液洗脱去除杂质；然后以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4～4.5:1.2～1.3:0.1的洗脱液洗脱得到含目标品的洗脱液，本发明中，第二正相色谱柱提纯工序中，正相色谱柱的填料的例子与第一正相色谱柱提纯工序中的填料能使用的材料相同，优选使用硅胶，进一步优选为硅胶为粒径为100～300目的硅胶。

第二正相色谱柱分离工序中，使用二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:0.7～0.9:0.1和二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:1～1.1:0.1的洗脱液洗脱去除杂质；在这两个去除杂质的过程中，也会回收相当一部分的纯度较低的紫堇灵粗品，这些粗品，可以加入到目标物的粗品浓缩液中循环利用，也可以循环使用难溶性溶剂析出处理工序和第二正相色谱柱分离步骤，进一步提高回收率。

本发明的制备方法中作为原料的苦地丁药材粉碎物的萃取物浓缩液可以使用现有公知的方法提取，例如可以使用《紫堇灵的分离制备及抗炎活性》中的前处理中使用的方法得到浓缩液。苦地丁药材通过常规的植物萃取方法得到的浓缩液都可以经由本发明获得高纯度的目标物。但是如果考虑高纯度以外的情况，为了解决进一步的提高提取收率而有效利用药材的技术问题，并且兼顾时间成本，在优选的本发明的制备方法中，所述苦地丁药材粉碎物的萃取物浓缩液的制备方法如下：将苦地丁药材粉碎为粉末，利用70％～95％的乙醇进行浸泡，将浸泡液过滤，浓缩得到第一原料浓缩液，将第一原料浓缩液用水溶解，利用酸性物质调整至ph至2～3，用等体积的第一有机溶剂萃取去除杂质，弃第一有机溶剂层，水层利用碱性物质调节调ph至8～9，再用等体积第二有机溶剂萃取，将第二有机溶剂萃取液浓缩得到浓缩液。

根据上述的紫堇灵的对照品的制备方法，其特征在于，用于调整第一原料浓缩液用水溶解的ph值的酸性物质为3～6％的盐酸，用于调整第二原料浓缩液用水溶解的ph值的碱性物质为浓氨水。

在前期的萃取工序中个，第一有机溶剂为选自苯、四氯化碳、正己烷、环己烷、庚烷、乙醚、石油醚中的一种，第二有机溶剂为选自二氯甲烷、正丁醇、乙酸乙酯、乙醚、氯仿中的一种。在优选的本发明的制备方法中，有机溶剂萃取酸处理液是常规方案，利用乙酸乙酯或者正丁醇对调节至ph为3～4的酸性的第二原料浓缩液进行萃取，能够进一步兼顾收率和分离效率。

实施例

以下，通过实施例进一步详细说明本发明的典型的提取方式。以下实验方案仅仅是示例，并非对本发明的限定。本领域人员可以在理解实施例原理和发明精神的前提下进行任意的变更。

实施例1

原料提取：取500kg药材，每30kg药材加入200l90％乙醇(采购于上海泰坦科技股份有限公司，25l/桶)热提取1次，溶剂回收多次使用，60℃浓缩得到浓缩液100l，hplc定量约含紫堇灵448g；

萃取除杂：在浓缩液中加入6％hcl(采购于上海泰坦科技股份有限公司，500ml/瓶)调ph至2～3，用等体积的石油醚(采购于上海泰坦科技股份有限公司，25l/桶)萃取3次，萃取后水层用浓氨水(采购于上海泰坦科技股份有限公司，500ml/瓶)调ph至8～9，用等体积乙酸乙酯(采购于上海泰坦科技股份有限公司，25l/桶)萃取1～2次，得乙酸乙酯层，hplc定量乙酸乙酯层含紫堇灵300g；

硅胶柱色谱分离：将乙酸乙酯层用多根硅胶色谱柱进行分离，每根硅胶柱装5～6kg硅胶，拌样烘干后上样，每根硅胶柱上样约80g浸膏，用石油醚：乙酸乙酯：三乙胺4：1：0.1洗脱，前杂先被洗脱下来，目标后被洗脱下来，此步骤可去除大部分前杂，但无法完全去除，hplc定量硅胶柱层析后约含有250g目标，纯度>70％；

溶剂法除杂、去色：将正相后样品用二氯甲烷(采购于上海泰坦科技股份有限公司，25l/桶)溶解，二氯甲烷：甲醇为1：1的溶液稀释，再加入80％的甲醇，在55℃下浓缩至大量析出，抽滤，用30％甲醇清洗抽滤得到的固体，得到约103g纯白色固体，hplc定量含目标约102g，但tlc下仍有少量前杂；

正相硅胶柱去除前杂：样品二氯甲烷溶解后400g硅胶拌样，55℃烘干，5kg硅胶装柱，上样后用二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度洗脱，先以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4:0.8:0.1的洗脱液洗脱去除杂质，再以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4:1:0.1的洗脱液洗脱去除杂质；然后以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4:1.2:0.1的洗脱液洗脱得到含目标品的洗脱液，收集该洗脱液，浓缩，冷冻干燥，获得固体的目标物。分段收集洗脱液，约有30％的目标和tlc上的前杂一起被洗脱下来，无tlc前杂的目标约占70％；含前杂部分再次硅胶柱除前杂，合并2次正相除杂后的洗脱液，浓缩干后用水分散冻干，得到约无tlc前杂的95g目标。

通过质谱、核磁共振图谱可以确认其结构，质谱与核磁的图谱请参照图6-图8，固体产品回收工序前目标物的hplc谱图和冷冻干燥后固体的hplc图谱可以参照图5，能够稳定的提供高纯度的目标化合物。

图1～图3的tlc条件为：

展开剂：环己烷:三氯甲烷:甲醇7:2:1

硅胶板：0.4％氢氧化钠制备的硅胶g薄层板

图1和2为紫外灯下显色，图3为检视方法：喷以碘化铋钾日光下检视

图6-图8的hplc条件为：

仪器agilent1260

色谱柱agilentsb-c18，4.6×250mm，5μm

柱温30℃

进样量5μl

检测器dad

检测波长289nm

流动相组成:a-0.015mmol/l磷酸盐缓冲溶液，b-甲醇

比较例1

原料提取：取500kg药材，每30kg药材加入200l90％乙醇(采购于上海泰坦科技股份有限公司，25l/桶)热提取1次，溶剂回收多次使用，60℃浓缩得到浓缩液100l，hplc定量约含紫堇灵448g；

萃取除杂：在浓缩液中加入6％hcl(采购于上海泰坦科技股份有限公司，500ml/瓶)调ph至2～3，用等体积的石油醚(采购于上海泰坦科技股份有限公司，25l/桶)萃取3次，萃取后水层用浓氨水(采购于上海泰坦科技股份有限公司，500ml/瓶)调ph至8～9，用等体积乙酸乙酯(采购于上海泰坦科技股份有限公司，25l/桶)萃取1～2次，得乙酸乙酯层，hplc定量乙酸乙酯层含紫堇灵300g；

硅胶柱色谱分离：将乙酸乙酯层用多根硅胶色谱柱进行分离，每根硅胶柱装5～6kg硅胶，拌样烘干后上样，每根硅胶柱上样约80g浸膏，用石油醚：乙酸乙酯：三乙胺(采购于上海泰坦科技股份有限公司，500ml/瓶)4：0.1：0.1洗脱，前杂先被洗脱下来，目标后被洗脱下来，此步骤可去除大部分前杂，但无法完全去除，hplc定量硅胶柱层析后约含有250g目标，纯度>70％；

正相硅胶柱去除前杂：样品二氯甲烷(采购于上海泰坦科技股份有限公司，25l/桶)溶解后400g硅胶拌样，55℃烘干，5kg硅胶装柱，上样后用二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度洗脱，先以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4:0.8:0.1的洗脱液洗脱去除杂质，再以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4:1:0.1的洗脱液洗脱去除杂质；然后以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4:1.2:0.1的洗脱液分段收集洗脱液，约有30％的目标和tlc上的前杂一起被洗脱下来，无tlc前杂的目标约占70％；含前杂部分再次硅胶柱除前杂，合并2次正相除杂后的洗脱液，浓缩干后用水分散冻干，得到目标物。用tlc检测，发现tlc杂质很多，参见图1。

比较例2

将比较例1获得的目标物，用二氯甲烷(采购于上海泰坦科技股份有限公司，25l/桶)溶解，二氯甲烷：甲醇为1：1的溶液稀释，再加入80％的甲醇，在55℃下浓缩至大量析出，抽滤，用30％甲醇清洗抽滤得到的固体。用tlc进行检测，发现所获得的固体的tlc与比较例1的tlc图谱类似，区别不大。由此可知，难溶性溶剂处理工序的次序设置是重要的。

以下提供紫堇灵的部分波谱学数据：

参考图7和图8，实施例1获得的紫堇灵nmr图谱归属数据如下：

检测条件：cdcl3500mhz(¹h-nmr)125mhz(¹³c-nmr)

实施例1获得的紫堇灵的质谱信息如图9。

仪器：sciextripletof4600lc/ms

检测模式：esi-正离子模式

上述披露的各技术特征并不限于已披露的与其它特征的组合，本领域技术人员还可根据发明之目的进行各技术特征之间的其它组合，以实现本发明之目的，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。