一种双功能MDM2蛋白降解剂，及其制备方法、药物组合物和应用与流程

一种双功能mdm2蛋白降解剂，及其制备方法、药物组合物和应用
技术领域
1.本发明涉及小分子药物领域，具体地，本发明提供了一种mdm2蛋白降解剂，及其制备方法、药物组合物和应用。


背景技术：

2.p53基因是与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因，具有维持基因组稳定，抑制或阻止细胞转化的功能，从而抑制肿瘤的发生。以p53为靶点的抗肿瘤新药的研究已成为该领域的一个热点，研究结果表明，mdm2(murine double minute 2)是p53的关键负调节因子，p53激活mdm2转录，mdm2反过来抑制p53活性，二者形成自动调节反馈环，以保持正常情况下p53和mdm2都处于低水平状态。肿瘤细胞内mdm2的异常表达导致p53的快速降解以及p53通路的失活，从而影响了其对肿瘤的抑制水平，因此将p53从mdm2控制中释放出来，激活p53通路，预期可以到达抑制肿瘤细胞生长和诱导其凋亡的作用。与由于不常见原因引起的正常细胞p53激活不同的是，肿瘤细胞处于包括缺氧和促凋亡癌基因激活在内的各种损害的持续的细胞应激下。因而，对肿瘤中p53途径的灭活具有强的选择性优势，并且有研究人员提出消除p53功能可能是肿瘤存活的前提。为了支持这一观点，三个调查研究组已经使用小鼠模型证明p53功能的缺失是肿瘤得以维持的持续要求。当研究人员恢复p53灭活的肿瘤的p53功能时，该肿瘤会消退。
3.在50％的实体瘤和10％的液体瘤中，p53通过突变和/或缺失来进行灭活。在癌症中，p53途径的其他主要成员也发生遗传或表观遗传改变。mdm2是一种癌蛋白质，它抑制p53功能，有报道指出mdm2以高达10％的发生率被基因扩增激活。mdm2继而被另一种肿瘤抑制因子p14arf抑制。p53下游的改变被认为可能负责至少部分地灭活p53野生型中的p53途径。为了支持这一概念，一些p53野生型肿瘤似乎显示出凋亡功能的降低，但它们经受细胞周期停滞的能力仍然是完整的。一种癌症治疗策略涉及使用结合mdm2并抵消它与p53的相互作用的小分子。mdm2通过三种机制抑制p53活性：1)用作e3泛蛋白连接酶以促进p53降解；2)结合至p53转录激活结构域并阻断p53转录激活结构域；以及3)从细胞核向细胞质输出p53。这三种机制都将通过抵消mdm2-p53相互作用来进行阻断。这种治疗策略可以针对性地应用于p53野生型肿瘤，并且已有研究显示利用小分子mdm2蛋白降解剂有希望减小肿瘤在体外和体内的生长。进一步地，在患有p53-灭活的肿瘤的患者中，由于抑制mdm2后，使正常组织中野生型p53得以稳定，可能会选择性地保护正常组织免受损害。
4.蛋白降解靶向嵌合体(protac)是一项源于诺贝尔化学奖的技术，protac技术原理是利用双功能小分子将靶蛋白和细胞内的e3连接酶链接起来，使靶蛋白泛素化，从而被蛋白酶体识别而导致靶蛋白降解。真核生物细胞中一直在努力维持适当的蛋白水平，每一时刻它们都在生成和降解成千上万种蛋白。维持蛋白平衡的关键因子是一个称为泛素(ubiquitin)的小蛋白分子。当它被链接到蛋白上后，会导致这些蛋白被运送到蛋白酶体中进行降解。双功能蛋白降解剂包含靶蛋白抑制剂、连接基团(linker)和e3泛素蛋白连接酶
蛋白质的配体。
5.综上所述，本领域需要开发新型的双功能mdm2蛋白降解剂。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种新型的mdm2蛋白降解剂。
7.本发明的第一方面，提供了一种蛋白降解靶向嵌合体，所述的蛋白降解靶向嵌合体包括：
8.mdm2靶蛋白抑制剂-c(o)nh-l
2-y
1-b19.其中，
[0010]-l
2-y
1-为连接基团，其中，l2为-(y2)
r-，y2选自下组：-ch
2-、-o-、-n(r
2b
)-；
[0011]
且r为0、1、2、3、4、5、6、7或8；
[0012]
y1选自下组：-c≡c-、-ch＝ch-、-ch
2-、-o-、-n(r
2b
)-、-c(＝o)n(r
2c
)-、-n(r
2d
)c(＝o)ch2o-和-n(r
2e
)c(＝o)ch2n(r
2f
)-组成的组；或者y1不存在；
[0013]
其中，-n(r
2d
)c(＝o)ch2o-和-n(r
2e
)c(＝o)ch2n(r
2f
)-的羧酰胺氮原子和-c(＝o)n(r
2e
)-的碳原子与l2连接；
[0014]r2b
、r
2c
、r
2d
、r
2e
和r
2f
各自独立地选自由氢和c1-4烷基组成的组；
[0015]
b1选自下组：
[0016][0017]
所述的mdm2靶蛋白抑制剂为如下式i所示的化合物与连接基团通过共价键形成的结构片段；
[0018][0019]
其中，
[0020]
为5元、6元或7元的杂环基；其中，所述的杂环基包括1-3个n原子，和0-2个选自下组s和o的杂原子；
[0021]
x为c＝o或s＝(o)2；
[0022]
n为1、2、3或4；
[0023]
各个r各自独立地选自下组：h、氰基、卤素、取代或未取代的c
1-c6的烷基、取代或未取代的c
1-c6的烷氧基、取代或未取代的c
3-c8的环烷基、取代或未取代的c
6-c
10
芳基、或取代或未取代的具有1-3个选自下组n、s和o的杂原子的5-10元杂芳基；
[0024]
z1选自下组：h、取代或未取代的c
1-c6的烷基、取代或未取代的c
1-c6的烷氧基、取代或未取代的c
3-c8的环烷基(包括单环、并环或桥环形式)、取代或未取代的c
6-c
10
芳基；
[0025]
q选自下组：
[0026]
m、p各自独立地为1、2、3或4；
[0027]
各个z2或z3各自独立地选自下组：无、取代或未取代的c
1-c7亚烷基、nr1、o、s、c＝o、s＝(o)2；
[0028]
z4选自其中，所述的r1选自下组：h、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c
6-c
10
芳基、氰基、-c(＝o)-nrdre、-c(＝o)-取代或未取代的c1-c6烷氧基、-c(＝o)-取代或未取代的c1-c6烷基、-c(＝o)-取代或未取代的c3-c10环烷基、-c(＝o)-取代或未取代的c2-c6烯基、-c(＝o)-取代或未取代的c2-c6炔基；
[0029]
rd、re各自独立地选自下组：h、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c3-c10环烷基、取代或未取代的c
6-c
10
芳基；或者所述的rd和re与相邻的n原子构成4-10元杂环，所述杂环含有1-2个氮原子和0-2个s或o原子；
[0030]
r2选自下组：取代或未取代的c
1-c6的烷基、取代或未取代的c
3-c8的环烷基、取代或未取代的c
6-c
10
芳基、或取代或未取代的具有1-3个选自下组n、s和o的杂原子的5-10元杂芳基；
[0031]
除非特别说明，所述的“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：卤素、c1-c6烷基、卤代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、卤代的c1-c6烷氧基、c3-c8环烷基、卤代的c3-c8环烷基、氧代、-cn、羟基、氨基、羧基、未取代或被一个或多个选自下组的取代基取代的选自下组的基团：c6-c10芳基、卤代的c6-c10芳基、具有1-3个选自n、s和o的杂原子的5-10元杂芳基、卤代的具有1-3个选自n、s和o的杂原子的5-10元杂芳基；所述的取代基选自下组：卤素、c1-c6烷氧基；
[0032]
附加条件是，当z4为时，q为
[0033]
在另一优选例中，所述的选自下组：
[0034]
在另一优选例中，所述的式i化合物具有如下式ii所述的结构：
[0035][0036]
在另一优选例中，n为3。
[0037]
在另一优选例中，r选自下组：取代或未取代的c
1-c6的烷基、取代或未取代的c
6-c
10
芳基。
[0038]
在另一优选例中，所述的式i化合物具有如下式iii所述的结构：
[0039][0040]
其中，ra和rb各自独立地为取代或未取代的c
6-c
10
芳基、或取代或未取代的具有1-3个选自下组n、s和o的杂原子的5-10元杂芳基；
[0041]
rc和rd各自独立地选自下组：h、氰基、卤素、取代或未取代的c
1-c6的烷基、取代或未取代的c
1-c6的烷氧基；
[0042]
各基团的定义如上文中所述。
[0043]
在另一优选例中，ra和rb各自独立地为取代或未取代的苯基。
[0044]
在另一优选例中，所述的式i化合物具有如下式iv所述的结构：
[0045][0046]
在另一优选例中，所述的z1选自下组：取代或未取代的c
3-c8的环烷基(包括单环、并环或桥环形式)、取代或未取代的c
6-c
10
芳基。
[0047]
在另一优选例中，所述的蛋白降解靶向嵌合体具有如下式v所述的结构：
[0048][0049]
其中，z5是由l
2-y
1-b1组成的基团。
[0050]
在另一优选例中，所述的-l
2-y
1-为连接基团，其中，l2为-(y2)
r-，y2选自下组：-ch
2-、-o-；
[0051]
且r为0、1、2、3、4、5、6、7或8；
[0052]
y1选自下组：-c≡c-、-ch＝ch-、-ch
2-、-o-、-n(r
2b
)-、-c(＝o)n(r
2c
)-。
[0053]
本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，包含(1)如本发明第一方面所述的蛋白降解靶向嵌合体，或其立体异构体或互变异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物；(2)药学上可接受的载体。
[0054]
本发明的第三方面，提供了一种如本发明第一方面所述的蛋白降解靶向嵌合体，或其立体异构体或互变异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物或如本发明第二方面所述的药物组合物的用途，其用于制备预防和/或治疗与mdm2的活性或表达量相关的疾病的药物组合物。
[0055]
本发明的第四方面，提供了一种mdm2蛋白降解剂，所述抑制剂包含如本发明第一方面所述的蛋白降解靶向嵌合体、或其立体异构体或互变异构体、或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
[0056]
在另一优选例中，所述的药物组合物被用于治疗选自下组的疾病：膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；淋巴谱系造血系统肿瘤(包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、b-细胞淋巴瘤、t-细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤(burkett
′
s lymphoma))；骨髓谱系造血系统肿瘤(包括急性和慢性骨髓性白血病、骨髓发育不良综合征和前髓细胞白血病)；间充质起源的肿瘤(包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤以及其他肉瘤，例如软组织肉瘤和骨肉瘤)；中枢和外周神经系统的肿瘤(包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、胶质瘤和神经鞘瘤)；以及其他肿瘤(包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病(xenoderomapigmentosum)、角化棘皮瘤(keratoctanthoma)、甲状腺滤泡状癌和卡波西肉瘤)、子宫内膜癌、头部和颈部癌、胶质母细胞瘤、恶性腹水、造血系统癌症、甲状腺增生症(尤其是grave病)、囊肿、哮喘、慢性阻塞性肺疾病(copd)、肺气肿、银屑病、接触性皮炎、结膜炎、变态反应性鼻炎、全身性红斑狼疮(sle)、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病(crohn’s disease)、多发性硬化症、类风湿性关节炎、炎性肠疾病、阿尔茨海默氏病(alzheimer’s disease)、动脉粥样硬化、亨廷顿氏病(huntington’s disease)、炎性疾病、缺氧、溃疡、病毒感染、细菌感染，和细菌性败血症。
[0057]
在另一优选例中，所述的疾病为p53野生型癌症。
[0058]
在另一优选例中，所述的癌症为p53野生型和cdkn2a突变体癌症。
[0059]
在另一方面，本发明提供了用于确定哪些患者应施用本发明化合物的诊断。
[0060]
在另一优选例中，提供了一种体外抑制mdm2活性或表达量的方法，所述方法包括步骤：将本发明第一方面所述的蛋白降解靶向嵌合体、或其立体异构体或互变异构体、或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物与mdm2蛋白接触。
[0061]
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
[0062]
本发明人经过广泛而深入的研究，发现了一类具有优异的抑制效果的mdm2蛋白降解剂。在此基础上，发明人完成了本发明。
[0063]
定义
[0064]
如本文所用，术语“烷基”包括直链或支链的烷基。例如c
1-c8烷基表示具有1-8个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基等。
[0065]
如本文所用，术语“烯基”包括直链或支链的烯基。例如c
2-c6烯基指具有2-6个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。
[0066]
如本文所用，术语“炔基”包括直链或支链的炔基。例如c
2-c6炔基是指具有2-6个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基、或类似基团。
[0067]
如本文所用，术语“c
3-c
10
环烷基”指具有3-10个碳原子的环烷基。其可以是单环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、或类似基团。也可以是双环形式，例如桥环或螺环形式。
[0068]
如本文所用，术语“c
1-c8烷胺基”是指被c
1-c8烷基所取代的胺基，可以是单取代或双取代的；例如，甲胺基、乙胺基、丙胺基、异丙胺基、丁胺基、异丁胺基、叔丁胺基、二甲胺基、二乙胺基、二丙胺基、二异丙胺基、二丁胺基、二异丁胺基、二叔丁胺基等。
[0069]
如本文所用，术语“c
1-c8烷氧基”是指具有1-8个碳原子的直链或支链的烷氧基；例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
[0070]
如本文所用，术语“具有1-3个选自下组n、s和o的杂原子的3-10元杂环烷基”是指具有3-10个原子的且其中1-3个原子为选自下组n、s和o的杂原子的饱和或部分饱和的环状基团。其可以是单环，也可以是双环形式，例如桥环或螺环形式。具体的实例可以为氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢-2h-吡喃基、哌啶基、四氢呋喃基、吗啉基和吡咯烷基等。
[0071]
如本文所用，术语“c
6-c
10
芳基”是指具有6-10个碳原子的芳基，例如，苯基或萘基等类似基团。
[0072]
如本文所用，术语“具有1-3个选自下组n、s和o的杂原子的5-10元杂芳基”指具有5-10个原子的且其中1-3个原子为选自下组n、s和o的杂原子的环状芳香基团。其可以是单环，也可以是稠环形式。具体的实例可以为吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、(1,2,3)-三唑基以及(1,2,4)-三唑基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异恶唑基、噻唑基、恶唑基等。
[0073]
本发明所述的基团除非特别说明是“取代的或未取代的”，否则本发明的基团均可被选自下组的取代基所取代：卤素、腈基、硝基、羟基、氨基、c
1-c6烷基-胺基、c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、c
1-c6烷氧基、卤代c
1-c6烷基、卤代c
2-c6烯基、卤代c
2-c6炔基、卤代c
1-c6烷氧基、烯丙基、苄基、c
6-c
12
芳基、c
1-c6烷氧基-c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基-羰基、苯氧羰基、c
2-c6炔基-羰基、c
2-c6烯基-羰基、c
3-c6环烷基-羰基、c
1-c6烷基-磺酰基等。
[0074]
如本文所用，“卤素”或“卤原子”指f、cl、br、和i。更佳地，卤素或卤原子选自f、cl和br。“卤代的”是指被选自f、cl、br、和i的原子所取代。
[0075]
除非特别说明，本发明所描述的结构式意在包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构和几何异构体(或构象异构体))：例如含有不对称中心的r、s构型，双键的
(z)、(e)异构体等。因此，本发明化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体、非对映异构体或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。
[0076]
如本文所用，术语“互变异构体”表示具有不同能量的结构同分异构体可以超过低能垒，从而互相转化。比如，质子互变异构体(即质子移变)包括通过质子迁移进行互变，如1h-吲唑与2h-吲唑。化合价互变异构体包括通过一些成键电子重组而进行互变。
[0077]
如本文所用，术语“溶剂合物”是指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。
[0078]
如本文所用，术语“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。
[0079]
mdm2蛋白降解剂
[0080]
如本文所用，“本发明化合物”指式i所示的化合物，并且还包括及式i化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物：
[0081][0082]
其中，
[0083]
为5元、6元或7元的杂环基；其中，所述的杂环基包括1-3个n原子，和0-2个选自下组s和o的杂原子；
[0084]
x为c＝o或s＝(o)2；
[0085]
n为1、2、3或4；
[0086]
各个r各自独立地选自下组：h、氰基、卤素、取代或未取代的c
1-c6的烷基、取代或未取代的c
1-c6的烷氧基、取代或未取代的c
3-c8的环烷基、取代或未取代的c
6-c
10
芳基、或取代或未取代的具有1-3个选自下组n、s和o的杂原子的5-10元杂芳基；
[0087]
z1选自下组：h、取代或未取代的c
1-c6的烷基、取代或未取代的c
1-c6的烷氧基、取代或未取代的c
3-c8的环烷基(包括单环、并环或桥环形式)、取代或未取代的c
6-c
10
芳基；
[0088]
q选自下组：
[0089]
m、p各自独立地为1、2、3或4；
[0090]
各个z2或z3各自独立地选自下组：取代或未取代的c
1-c7亚烷基、nr1、o、s、c＝o、s＝(o)2；
[0091]
z4选自其中，所述的r1选自下组：h、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c
6-c
10
芳基、氰基、-c(＝o)-nrdre、-c(＝o)-取代或未取代的c1-c6烷氧基、-c(＝o)-取代或未取代的c1-c6烷基、-c(＝o)-取代或未取代的c3-c10环烷基、-c(＝o)-取代或未取代的c2-c6烯基、-c(＝o)-取代或未取代的c2-c6炔基；
[0092]
rd、re各自独立地选自下组：h、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c3-c10环烷基、取代或未取代的c
6-c
10
芳基；或者所述的rd和re与相邻的n原子构成4-8元杂环，所述杂环含有1-2个氮原子和0-1个s或o原子；
[0093]
r2选自下组：取代或未取代的c
1-c6的烷基、取代或未取代的c
3-c8的环烷基、取代或未取代的c
6-c
10
芳基、或取代或未取代的具有1-3个选自下组n、s和o的杂原子的5-10元杂芳基；
[0094]
除非特别说明，所述的“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：卤素、c1-c6烷基、卤代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、卤代的c1-c6烷氧基、c3-c8环烷基、卤代的c3-c8环烷基、氧代、-cn、羟基、氨基、羧基、未取代或被一个或多个选自下组的取代基取代的选自下组的基团：c6-c10芳基、卤代的c6-c10芳基、具有1-3个选自n、s和o的杂原子的5-10元杂芳基、卤代的具有1-3个选自n、s和o的杂原子的5-10元杂芳基；所述的取代基选自下组：卤素、c1-c6烷氧基；
[0095]
附加条件是，当z4为时，q为
[0096]
如本文所用，“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。适合形成盐的阳离子包括：碱金属和碱土金属的阳离子，例如钠离子、锂离子、钾离子、钙离子、镁离子等，以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，包括(但不限于)铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙基胺、乙基胺等。
[0097]
在另一优选例中，所述的m、n、p、z1、z2、z3、z4、q、r各自独立地为表1中各个化合物所对应的基团。
[0098]
优选的mdm2蛋白降解剂为如下所示的化合物：
[0099][0100]
作为mdm2蛋白降解剂的双功能蛋白降解靶向嵌合体
[0101]
本发明中，还提供了一种作为mdm2蛋白降解剂的双功能蛋白降解靶向嵌合体，所述的靶向嵌合体具有如下式所示的结构：
[0102]
mdm2靶蛋白抑制剂-c(o)nh-l
2-y
1-b1[0103]
其中，
[0104]-l
2-y
1-为连接基团，其中，l2为-(y2)
r-，y2选自下组：-ch
2-、-o-、-n(r
2b
)-；
[0105]
且r为0、1、2、3、4、5、6、7或8；
[0106]
y1选自下组：-c≡c-、-ch＝ch-、-ch
2-、-o-、-n(r
2b
)-、-c(＝o)n(r
2c
)-、-n(r
2d
)c(＝o)ch2o-和-n(r
2e
)c(＝o)ch2n(r
2f
)-组成的组；或者y1不存在；
[0107]
其中，-n(r
2d
)c(＝o)ch2o-和-n(r
2e
)c(＝o)ch2n(r
2f
)-的羧酰胺氮原子和-c(＝o)n(r
2e
)-的碳原子与l2连接；
[0108]r2b
、r
2c
、r
2d
、r
2e
和r
2f
各自独立地选自由氢和c1-4烷基组成的组；
[0109]
b1选自下组：
[0110][0111]
所述的mdm2靶蛋白抑制剂为如上所述的式i化合物。
[0112]
药物组合物和施用方法
[0113]
由于本发明化合物具有优异的mdm2的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗(稳定、减轻或治愈)癌症。可用本发明化合物治疗的癌症包括(而不限于)癌如膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；淋巴谱系造血系统肿瘤(包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、b-细胞淋巴瘤、t-细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤(burkett’s lymphoma)；骨髓谱系造血系统肿瘤(包括急性和慢性骨髓性白血病、骨髓发育不良综合征和前髓细胞白血病)；间充质起源的肿瘤(包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤以及其他肉瘤，例如软组织肉瘤和骨肉瘤)；中枢和外周神经系统的肿瘤(包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、胶质瘤和神经鞘瘤)；以及其他肿瘤(包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病(xenoderomapigmentosum)、角化棘皮瘤(keratoctanthoma)、甲状腺滤泡状癌和卡波西肉瘤)。可用本发明化合物治疗的其他癌症包括子宫内膜癌、头部和颈部癌、胶质母细胞瘤、恶性腹水，和造血系统癌症。
[0114]
可用本发明化合物治疗的具体癌症包括软组织肉瘤、骨癌(如骨肉瘤)、乳腺肿瘤、膀胱癌、li-fraumeni综合征、脑肿瘤、横纹肌肉瘤、肾上腺皮质癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌，和急性骨髓性白血病(aml)。
[0115]
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物及药学上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
[0116]“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
[0117]
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)。
[0118]
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
[0119]
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
[0120]
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
[0121]
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
[0122]
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
[0123]
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
[0124]
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物(例如化学抗癌药物)联合给药。
[0125]
联合给药时，所述药物组合物还包括与一种或多种(2种，3种，4种，或更多种)其他药学上可接受的化合物(例如化学抗癌药物)。该其他药学上可接受的化合物(例如化学抗癌药物)中的一种或多种(2种，3种，4种，或更多种)可与本发明的化合物同时、分开或顺序
地用于治疗癌症或相关疾病。
[0126]
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
[0127]
本发明的主要优点包括：
[0128]
(1)本发明的化合物结构新颖且具有优异的mdm2抑制作用。本技术中，将现有的砜类化合物改造为硫亚胺类化合物，使其能够保持抑制mdm2的活性或表达量的同时，降低血浆蛋白结合率，游离型药物增多，易跨膜转运到器官组织发挥作用。
[0129]
(2)本发明的化合物对正常细胞的毒性非常低，因而可以在较大的剂量范围内应用于治疗对象。
[0130]
(3)本发明化合物具有良好的成药性，相较于现有化合物而言，本发明化合物具有更好的溶解度，且在体内实验之中表现出良好的生物利用度，除此之外，相较于现有化合物，本发明的化合物极易制成药学上可接受的盐，因而有助于进一步形成制剂。
[0131]
(4)本发明化合物以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗癌症相关疾病。
[0132]
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
[0133]
实施例中出现的各个化合物通过以下途径制备：
[0134]
实施例1
[0135]
2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(丙基-2-砜脒基)丁基-2-)-2-氧代哌啶-3-基)乙酸的合成
[0136][0137]
步骤1：4-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-5-羟基-2-甲基戊酸甲酯
[0138][0139]
将4-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-2-甲基-5-氧代戊酸甲酯(36.5g)溶于乙醇(300ml)中，冷却至0～5℃，分批加入nabh4(2.85g)，0～10℃反应2小时，tlc跟踪反应基本完全，滴加乙酸(～8ml)至不放出氢气为止，浓缩溶剂，加入乙酸乙酯300ml，依次用水、饱和碳酸氢钠洗涤，无水硫酸镁干燥后，浓缩得37g 4-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-5-羟基-2-甲基戊酸甲酯。
[0140]
步骤2：4-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-5-羟基-2-甲基戊酸
[0141][0142]
将37g 4-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-5-羟基-2-甲基戊酸甲酯溶于乙醇(300ml)中，加入lioh.h2o(8.4g)的水溶液100ml，20℃反应18小时，tlc跟踪反应基本完全，滴加4n盐酸至ph《1，浓缩溶剂，加入甲苯50℃萃取250ml
×
2，用水洗涤，得到4-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-5-羟基-2-甲基戊酸的甲苯溶液直接进行下步反应。
[0143]
步骤3：5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基四氢-2h-吡喃-2-酮
[0144][0145]
将4-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-5-羟基-2-甲基戊酸的甲苯溶液，加入tsoh.h2o(1.0g)，加热分水回流反应2小时，tlc跟踪反应基本完全，冷却后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，无水硫酸镁干燥后，浓缩甲苯溶液得到粗品37.7g，柱层析分离得到5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基四氢-2h-吡喃-2-酮。
[0146]
步骤4：(
±
)(3s,5r,6r)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基四氢-2h-吡喃-2-酮
[0147][0148]
将5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基四氢-2h-吡喃-2-酮(6.7g)和溴丙烯(7.26g)溶于thf(25ml)中，冷却至-50℃，滴加lihmds(26ml 1m in thf)溶液,滴完升至0℃搅拌1小时，tlc跟踪原料消失，加入饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取，柱层析分离，得到6.0g产物，异构体较难通过过柱纯化，将6.0g产物加入50ml正庚烷/甲苯(10：1)，加热回流溶解，缓慢冷却至室温，析出2.8g固体，为(
±
)(3s,5r,6r)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基四氢-2h-吡喃-2-酮。
[0149]1hnmr(cdcl3,400mhz)：7.22～7.11(m,4h),6.873(d,1h,j＝1.9hz),6.745(d,1h,j＝7.8hz),6.58～6.54(m,2h),5.804(m,1h),5.677(d,1h,j＝5.1hz),5.157(d,1h,j＝10.2hz),5.125(dd,1h,j＝1.6,15.3hz),3.787(dt,1h,j＝4.5,12.2hz),2.598(dd,1h,j＝7.9,14.1hz),2.488(dd,1h,j＝7.1,13.7hz),1.954(t,1h,j＝14.0hz),1.897(dd,1h,j＝4.5,14.0hz),1.389(s,3h).
[0150]
步骤5：2-((2r,3r)-2-(3-氯苯基)-3-(4-氯苯基)-3-羟基丙基)-n-((s)-1-羟基-3-甲基丁基-2)-2-甲基戊烯-4-酰胺
[0151][0152]
将(
±
)(3s,5r,6r)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基四氢-2h-吡喃-2-酮(1.0g)溶于甲苯(1ml)中，加入l-缬氨醇(0.825g)，加热至100℃反应5小时，tlc跟踪反应基本完全，冷却后加入乙酸乙酯，依次用1n盐酸、饱和碳酸氢钠洗涤，无水硫酸镁干燥后，浓缩得2-((2r,3r)-2-(3-氯苯基)-3-(4-氯苯基)-3-羟基丙基)-n-((s)-1-羟基-3-甲基丁基-2)-2-甲基戊烯-4-酰胺1.48g。
[0153]
步骤6：三氟甲磺酸(3s,5s,6r,8s)-8-烯丙基-6-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-3-异丙基-8-甲基-2,3,5,6,7,8-六氢噁唑[3,2-a]并-4-吡啶盐
[0154][0155]
将2-((2r,3r)-2-(3-氯苯基)-3-(4-氯苯基)-3-羟基丙基)-n-((s)-1-羟基-3-甲基丁基-2)-2-甲基戊烯-4-酰胺(63.6g)溶于dcm(640ml)中，加入2,6-lutidine(57g)，冷却至-78℃，滴加tf2o(97.6g)，滴完升至室温反应过夜，用0.5mtfoh溶液(200ml)洗涤，乙酸乙酯(500ml
×
2)萃取，有机相浓缩后溶于dcm(400ml)，柱层析分离，条件为：
[0156]
硅胶：120g
[0157]
每次上样量：10g
[0158]
流动相：a为正庚烷，b为丙酮
[0159]
时间(min)流动相比例0-525％5-1525％-35％15-3035％30-3525％
[0160]
得到极性小的异构体(27.4g，34.8％)为三氟甲磺酸(3s,5s,6r,8s)-8-烯丙基-6-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-3-异丙基-8-甲基-2,3,5,6,7,8-六氢噁唑[3,2-a]并-4-吡啶盐：
[0161]1hnmr(d6-dmso,400mhz):8.15～7.10(m,8h),5.812(m,1h),5.346(dd,1h,j＝1.2,16.8hz),5.238(dd,1h,j＝1.5,10.1hz),5.173(d,1h,j＝11.3hz),5.003(dd,1h,j＝5.5,10.2hz),4.870(t,1h,j＝10.2hz),4.323(m,1h),4.057(ddd,1h,3.1,13.7,10.6hz),2.812(dd,1h,j＝7.1,13.7hz),2.717(dd,1h,j＝7.4,13.7hz),2.316(t,1h,13.7hz),
1.993(dd,1h,j＝13.7,3.5hz),1.303(s,3h),0.579(d,3h,j＝6.7hz),0.524(d,3h,j＝7.0hz),0.428(m,1h).
[0162]
和极性大的异构体(22.8g，28.9％)为三氟甲磺酸(3s,5r,6s,8r)-8-烯丙基-6-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-3-异丙基-8-甲基-2,3,5,6,7,8-六氢噁唑[3,2-a]并-4-吡啶盐：
[0163]1hnmr(d6-dmso,400mhz):7.50～7.05(m,8h),5.902(m,1h),5.290(dd,1h,j＝1.6,17.2hz),5.230(dd,1h,j＝2.4,10.2hz),5.140(d,1h,j＝10.2hz),5.084(dd,1h,j＝3.9,10.2hz),4.927(t,1h,j＝10.2hz),3.878(m,1h),3.423(m,1h),2.733(dd,1h,j＝8.3,14.1hz),2.657(dd,1h,j＝6.7,13.7hz),2.334(t,1h,13.7hz),2.005(dd,1h,j＝13.7,2.7hz),1.334(s,3h),0.884(d,3h,j＝6.6hz),0.662(d,3h,j＝6.6hz).
[0164]
步骤7：(3s,5r,6s)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-1-((s)-1-(异丙基巯基)-3-甲基丁基-2)-3-甲基哌啶-2-酮
[0165][0166]
氮气保护下将异丙硫醇(10.4g)滴加到叔丁醇钾的(82.2ml 1m thf)溶液中，适当冷却使温度不超过30℃，滴完搅拌10min，加入三氟甲磺酸(3s,5s,6r,8s)-8-烯丙基-6-(3-氯苯基)-5-(4-氯苯基)-3-异丙基-8-甲基-2,3,5,6,7,8-六氢噁唑[3,2-a]并-4-吡啶盐(17.8g)的dmf溶液(80ml)，升至50℃反应3小时，tlc跟踪反应完毕，倒入600ml水中，乙酸乙酯(200ml
×
3)萃取，水洗，浓缩后柱层析分离得到13.5g油状产物(3s,5r,6s)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-1-((s)-1-(异丙基巯基)-3-甲基丁基-2)-3-甲基哌啶-2-酮。
[0167]
步骤8：(3s,5r,6s)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-1-((s)-1-(异丙基亚砜基)-3-甲基丁基-2)-3-甲基哌啶-2-酮
[0168][0169]
将(3s,5r,6s)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-1-((s)-1-(异丙基巯基)-3-甲基丁基-2)-3-甲基哌啶-2-酮(2.03g)溶于甲醇(25ml)，加入0.60ml30％双氧水，20～25℃反应2天，加入硫代硫酸钠溶液终止反应，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，过滤后浓缩，柱层析分离得1.99g(3s,5r,6s)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-1-((s)-1-(异丙基亚砜基)-3-甲基丁基-2)-3-甲基哌啶-2-酮，为两个异构体的混合物，收率95％。
[0170]1hnmr(cdcl3,400mhz):7.27～7.00(m,7h),6.978(d,1h,j＝6.8hz),5.898(m,1h),5.260(d,1h,j＝16.8hz),5.180(dd,1h,j＝1.2,10.0hz),4.860(d,1h,j＝8.4hz),3.620(t,1h,j＝10.5hz),3.541(ddd,1h,j＝2.3,11.0,13.3hz),3.017(m,2h),2.860(dd,1h,j＝
2.7,12.9hz),2.741(dd,1h,j＝8.2,14.1hz),2.716(dd,1h,j＝2.8,13.3hz),2.585(dd,1h,j＝6.7,13.7hz),2.188(m,1h),2.101(t,1h,j＝13.7hz),1.922(dd,1h,j＝2.8,13.7hz),1.343(d,3h,j＝7.0hz),1.277(d,3h,j＝7.0hz),1.199(s,3h),0.863(t,1h,j＝6.6hz),0.675(d,3h,j＝6.7hz),0.481(d,3h,j＝7.0hz).
[0171]
步骤9：2,2,2-三氟乙酰n-(((s)-2-((3s,5r,6s)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-1-基)-3-甲基丁基)(异丙基)(氧)-l6-砜脒基胺)
[0172][0173]
将(3s,5r,6s)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-1-((s)-1-(异丙基亚砜基)-3-甲基丁基-2)-3-甲基哌啶-2-酮(336mg)和三氟乙酰胺(142.4mg)溶于dcm(4ml)，然后加入mgo(126.5mg)和rh2(oac)4(6.9mg)，最后加入phi(oac)2(303.7mg)室温搅拌过夜，过滤，固体用dcm洗涤，溶液浓缩后，过柱，淋洗液为正庚烷/乙酸乙酯＝2：1，得58mg产物2,2,2-三氟乙酰n-(((s)-2-((3s,5r,6s)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-1-基)-3-甲基丁基)(异丙基)(氧)-l6-砜脒基胺)，为两个异构体的混合物，收率14％。
[0174]1hnmr(cdcl3,400mhz):7.3～7.1(m,6h),6.932(s,1h),6.860(t,1h,j＝3.2hz),5.904(m,1h),5.239(m,2h),4.959(d,1h,j＝10.8hz),4.450(dd,1h,j＝7.6,15.2hz),4.135(m,1h),3.368(m,2h),3.186(ddd,1h,j＝1.6,7.6,9.2hz),2.658(m,2h),2.390(m,1h),2.229(t,1h,j＝13.6hz),1.898(dd,1h,j＝3.2,14.0hz),1.522(d,3h,j＝7.0hz),1.484(d,3h,j＝7.0hz),1.282(t,1h,j＝7.2hz),1.256(s,3h),0.684(d,3h,j＝6.8hz),0.620(d,3h,j＝7.2hz).
[0175]
步骤10：2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(n-(2,2,2-三氟乙酰基)-2-丙基砜脒基)丁基-2-)-2-氧代哌啶-3-基)乙酸
[0176][0177]
将2,2,2-三氟乙酰n-(((s)-2-((3s,5r,6s)-3-烯丙基-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-1-基)-3-甲基丁基)(异丙基)(氧)-l6-砜脒基胺)(150mg)和三氯化钌(7.3mg)溶于dcm/水(5ml/5ml)中，然后加入四丁基硫酸氢铵(15.8mg)和高碘酸钠(300mg)室温搅拌过夜，过滤，用dcm萃取，溶液干燥浓缩后，过柱，淋洗液为正庚烷/乙酸乙酯＝1：1，得120mg产物2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(n-(2,2,2-三氟乙酰基)-2-丙基砜脒基)丁基-2-)-2-氧代哌啶-3-基)乙酸，为两
个异构体的混合物，收率77.6％。
[0178]1h nmr(400mhz,methanol-d4)δ7.27(br,4h),7.19
–
6.89(m,4h),5.00(dd,1h,j＝20.4,11.0hz),4.44(ddd,1h,j＝28.6,15.1,9.2hz),4.08(m,1h),3.71
–
3.48(m,2h),3.39
–
3.17(m,2h),3.05
–
2.92(m,1h),2.67
–
2.55(m,1h),2.34
–
1.93(m,4h),1.51(d,3h,j＝7.1hz),1.47(d,3h,j＝7.1hz),1.46(s,3h),1.35(d,3h,j＝3.2hz),0.47(d,3h,j＝7.0hz).
[0179]
步骤11：2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(2-丙基砜脒基)丁基-2-)-2-氧代哌啶-3-基)乙酸
[0180][0181]
将2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(n-(2,2,2-三氟乙酰基)-2-丙基砜脒基)丁基-2-)-2-氧代哌啶-3-基)乙酸(100mg)溶于甲醇(2.0ml)，然后加入碳酸钾(417mg)室温搅拌2小时，加入水和乙酸乙酯，用3nhcl调ph至6，分液，溶液干燥浓缩后，过柱，淋洗液为正庚烷/乙酸乙酯＝1：1到0：1，得两个异构体产物，极性大的为31mg，极性小的为18mg，总收率57％。极性小的化合物培养单晶，经单晶x衍射实验得出化合物的构型
[0182]
rs极性大的化合物12：1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ7.22(br,4h),7.10
–
6.91(m,3h),6.84(dd,1h,j＝5.4,3.3hz),5.38(d,1h,j＝11.0hz),4.12
–
3.97(m,1h),3.40
–
3.20(m,2h),3.13(m,1h),2.94
–
2.72(m,2h),2.37(t,1h,j＝13.7hz),2.19(m,1h),1.91(dd,1h,j＝13.8,3.0hz),1.57(d,1h,j＝6.8hz),1.41(s,3h),1.37(d,3h,j＝7.1hz),1.35(d,3h,j＝7.1hz),1.30
–
1.13(m,3h),0.61(d,2h,j＝6.6hz),0.44(d,2h,j＝6.8hz).
[0183]
ss极性小的化合物13：1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ7.24(br,4h),7.09
–
6.95(m,3h),6.86(dd,1h,j＝5.4,3.1hz),5.30(d,1h,j＝11.0hz),3.99(dd,1h,j＝13.6,10.4hz),3.46(t,1h,j＝8.6hz),3.30(ddd,1h,j＝14.0,10.9,3.1hz),3.13(m,1h),2.99
–
2.76(m,3h),2.37(t,1h,j＝13.7hz),2.12(dt,1h,j＝14.9,6.9hz),1.90(dd,1h,j＝13.8,3.0hz),1.43
–
1.34(m,6h),0.61(d,3h,j＝6.6hz),0.42(d,3h,j＝
6.9hz).
[0184]
实施例2
[0185]
化合物4-(2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((s)-3-甲基-1-((s)-2-丙基砜脒基)丁-2-基)-2-氧代哌啶-3-基)乙酰胺基)苯甲酸
[0186][0187]
步骤1：4-(2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(n-(2,2,2-三氟乙酰基)-2-丙基砜脒基)丁基-2-)-2-氧代哌啶-3-基)乙酰胺基)苯甲酸甲酯的合成
[0188][0189]
氮气保护下于0℃将2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(n-(2,2,2-三氟乙酰基)-2-丙基砜脒基)丁基-2-)-2-氧代哌啶-3-基)乙酸(800mg)、对氨基苯甲酸甲酯(219mg)、dmap(324mg)和edc.hcl(508.4mg)依次加入到dcm(16ml)溶液中，加完室温搅拌过夜。tlc检测反应完全。冰浴下将水滴加到反应液中淬灭反应，冷的1nhcl溶液调节ph＝2，分液，有机相用1nhcl再洗涤一次，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，浓缩，残留物柱层析分离得白色泡沫状固体600mg，收率62.6％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.84(s,1h),8.07(d,j＝8.7hz,2h),7.71(d,j＝8.7hz,2h),7.27
–
7.06(m,6h),6.97(s,1h),6.91(t,j＝3.6hz,1h),4.97(d,j＝10.9hz,1h),4.56(dd,j＝13.9,10.6hz,1h),4.14(q,j＝7.2hz,1h),3.94(s,3h),3.39(dd,j＝16.4,11.7hz,3h),2.89(q,j＝14.4hz,2h),2.38(t,j＝13.8hz,1h),2.15
–
1.92(m,2h),1.58(d,j＝6.8hz,3h),1.53(d,j＝6.9hz,3h),1.46(s,3h),0.75(d,j＝6.7hz,3h),0.36(d,j＝7.0hz,3h).
[0190]
步骤2：4-(2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((s)-3-甲基-1-((s)-2-丙基砜脒基)丁-2-基)-2-氧代哌啶-3-基)乙酰胺基)苯甲酸的合成
[0191][0192]
室温下依次将4-(2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(n-(2,2,2-三氟乙酰基)-2-丙基砜脒基)丁基-2-)-2-氧代哌啶-3-基)乙酰胺基)苯甲酸甲酯(600mg)和lioh.h2o(127mg)加入到meoh/h2o/thf(2.4ml/1.2ml/1.2ml)的溶液中，加完室温搅拌。tlc检测反应完全。浓缩掉溶剂，残留物加水10ml，乙酸乙酯20ml，冷的1nhcl溶液调节ph＝2，分液，水层用乙酸乙酯再提取一次，合并有机相，水洗,饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，浓缩，残留物制备分离冻干得白色固体250mg，收率48.4％。1h nmr(400mhz,methanol-d4)δ8.05(d,j＝7.5hz,2h),7.81(d,j＝8.7hz,2h),7.20(m,6h),6.86(d,j＝19.2hz,2h),5.13(s,1h),5.01(s,1h),4.43(s,1h),3.57(m,3h),3.08(d,j＝13.6hz,1h),2.67(d,j＝13.9hz,1h),2.48
–
2.06(m,3h),1.47(d,j＝38.1hz,9h),0.77(s,3h),0.59(s,3h).lc-ms:m+1＝686.2
[0193]
按照同样的实验方法，将对氨基苯甲酸甲酯换为2-甲氧基-4-氨基苯甲酸甲酯可以得到4-(2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(丙烷-2-基硫脒基)丁烷-2-基)-2-氧代哌啶-3-基)乙酰胺基)-2-甲氧基苯甲酸。
[0194]
实施例3
[0195]
4-(2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(丙烷-2-基硫脒基)丁烷-2-基)-2-氧代哌啶-3-基)乙酰胺基)-n-(5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)戊-4-炔-1-基)-2-甲氧基苯甲酰胺的合成
[0196][0197]
步骤1：
[0198][0199]
将3-溴-2-溴甲基-苯甲酸甲酯(5.00g，16.2mmol)和3-氨基-哌啶-2，6-二酮盐酸盐(2.94g，17.9mmol)加入乙腈(50ml)中，然后加入三乙胺(8.21g，81.1mmol)，加热回流过夜，反应液变为深紫色，冷却至室温后过滤，固体用水(20ml)和mtbe(20ml)洗涤，真空干燥后得2.70g固体，收率52％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.03(s,1h),7.88(d,j＝7.9hz,1h),7.78(d,j＝7.5hz,1h),7.52(t,j＝7.7hz,1h),5.16(dd,j＝13.3,5.1hz,1h),4.43(d,j＝17.6hz,1h),4.27(d,j＝17.6hz,1h),2.92(ddd,j＝18.1,13.6,5.4hz,1h),2.65
–
2.51(m,1h),2.45(dd,j＝13.3,4.3hz,1h),2.02(ddd,j＝13.0,6.1,3.3hz,1h).
[0200]
步骤2：
[0201][0202]
将化合物3-(4-溴-1-氧代异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮(1.00g，3.09mmol)和化合
物戊-4-炔-1-基氨基甲酸叔丁酯(680mg，3.71mmol)加入无水dmf(10ml)中，氮气置换后，加入cui(59mg，0.31mmol)和pd(pph3)2cl2(217mg，0.31mmol)，氮气保护下80℃反应过夜，冷却至室温后，加入乙酸乙酯和水，萃取分层，有机相干燥，浓缩后柱层析分离得到1.12g化合物(5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异-4-基)戊-4-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯，收率85％。lc-ms，正离子[m+1]＝426。
[0203]
步骤3：
[0204][0205]
将化合物(5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异-4-基)戊-4-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.10g，2.59mmol)加入4m hcl/二氧六环溶液(15ml)中，室温搅拌过夜，浓缩后得到650mg化合物5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异-4-基)戊-4-炔-1-基)胺盐酸盐，收率69％。lc-ms，正离子[m+1]＝326。
[0206]
步骤4：
[0207][0208]
将化合物4-(2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(丙烷-2-基硫脒基)丁烷-2-基)-2-氧代哌啶-3-基)乙酰胺基)-2-甲氧基苯甲酸(71.6mg，0.1mmol)和化合物5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异-4-基)戊-4-炔-1-基)胺盐酸盐(43.4mg，0.12mmol)加入无水dmf(2.0ml)中，室温下搅拌5min后加入hatu(45.6mg，0.12mmol)，然后加入dipea(51.7mg，0.4mmol)，室温搅拌过夜，制备hplc分离得到20mg固体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.00(s,1h),10.43(s,1h),8.17(t,j＝5.8hz,1h),7.77(d,j＝8.5hz,1h),7.71(d,j＝7.3hz,1h),7.63(dd,j＝7.7,1.1hz,1h),7.58
–
7.47(m,2h),7.36(s,3h),7.32
–
7.11(m,3h),6.98(d,j＝7.7hz,1h),6.94(s,1h),5.29(d,j＝10.9hz,1h),5.15(dd,j＝13.3,5.0hz,1h),4.55
–
4.45(m,1h),4.35(d,j＝17.9hz,1h),3.95(s,1h),3.85(s,3h),3.45(q,j＝6.7hz,2h),3.18(s,1h),3.08(d,j＝13.5hz,1h),
2.93(t,j＝15.2hz,1h),2.68
–
2.52(m,5h),2.18
–
2.06(m,3h),2.01(d,j＝11.7hz,1h),1.84(q,j＝6.9hz,2h),1.35(d,j＝3.7hz,3h),1.33(d,j＝3.7hz,3h),1.28(s,3h),0.59(d,j＝6.6hz,3h),0.41(d,j＝6.9hz,3h).
[0209]
实施例4
[0210]
4-(2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(丙烷-2-基硫脒基)丁烷-2-基)-2-氧代哌啶-3-基)乙酰胺基)-n-(5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)戊基)-2-甲氧基苯甲酰胺
[0211][0212]
步骤1：
[0213][0214]
将化合物5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异-4-基)戊-4-炔-1-基)胺盐酸盐(79mg)加入甲醇(10ml)中，氮气置换后加入10％pd/c(75mg)，然后用氢气置换，室温常压下反应3天后，lc-ms显示反应完全，氮气置换后，过滤，滤液浓缩后得68mg固体。
[0215]
步骤2：
[0216][0217]
将化合物4-(2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(丙烷-2-基硫脒基)丁烷-2-基)-2-氧代哌啶-3-基)乙酰胺基)-2-甲氧基苯甲酸(98mg)和化合物5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)戊-1-胺盐酸盐(60mg)加入无水dmf(2.0ml)中，室温下搅拌5min，待固体溶清后加入hatu(62.4mg)，然后加入dipea(70.8mg，)，室温搅拌过夜，制备hplc分离得到20mg固体。
[0218]
实施例5
[0219]
4-(2-((3r,5r,6s)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-1-((2s)-3-甲基-1-(丙烷-2-基硫脒基)丁烷-2-基)-2-氧代哌啶-3-基)乙酰胺基)-n-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)氨基)丁基)-2-甲氧基苯甲酰胺
[0220][0221]
步骤1：
[0222][0223]
将(4-氧代丁基)胺基甲酸叔丁酯(774mg，4.14mmol)和3-(4-氨基-1-氧代异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮(1.18g，4.55mmol)加入dmf(8.0ml)中溶解后，室温加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.75g，8.28mmol)搅拌过夜，反应液用乙酸乙酯稀释后，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后，浓缩得到粗品，柱层析分离得到固体530mg。
[0224]
步骤2
[0225][0226]
参考实施例3中的步骤3
[0227]
步骤3
[0228][0229]
参考实施例3中的步骤4。
[0230]
实施例6
[0231][0232]
步骤1：
[0233][0234]
参考实施例3中的步骤4。步骤2：
[0235][0236]
参考实施例3中的步骤3
[0237]
步骤3：
[0238][0239]
参考实施例3中的步骤4。
[0240]
各个化合物的表征数据见下表。
[0241]
[0242]
[0243][0244]
生物测试例1均相时间分辨荧光测定(htrf测定)
[0245]
体外htrf测定的标准测定条件由以下组成：总反应体积为50ul的在黑色384-孔
costar聚丙烯板中在1xpbs缓冲液ph为7.4中的1mm dtt、0.1％bsa、2.5nm gst-hmdm2(aa1-188)、5nm生物素化-p53(aa1-83)、1.8nm sa-xlent(cisbio；bedford,ma)、0.6nm抗-gst穴状化合物(cryptate)单克隆抗体(cisbio；bedford,ma)和200mm kf。人mdm2的氨基酸残基1-188在大肠杆菌中被表达为氨基末端的谷胱甘肽-s-转移酶(gst)融合蛋白(gst-hmdm2)。人p53的残基1-83在大肠杆菌中被表达为氨基末端的avitag《tm》-trxa-6xhis融合蛋白(生物素化p53)。每种蛋白质均通过亲和色谱法从细胞匀浆中分离出来。
[0246]
具体地，将10ulgst-hmdm2与10ul在10％dmso中的稀释的化合物(各种浓度，连续稀释)一起在室温下温育20分钟。将20ul生物素化-p53加入到gst-hmdm2+化合物混合物中，然后在室温下温育60min。将10ul由sa-xlent、抗-gst穴状化合物抗体和kf组成的检测缓冲液加入到gst-hmdm2、生物素化-p53和化合物反应物中，并放置在室温下以达到平衡并保持平衡》4hr。该反应物中的dmso的最终浓度为2％。在微板多标记读取器上测量时间分辨荧光读数。相对于nutlin-3计算抑制百分比。
[0247]
当mdm2蛋白降解剂的效价增大时，执行改进的htrf测定(htrf2测定)。除了下面的试剂浓度变化之外，所有测定条件都与上述条件相同：0.2nm gst-hmdm2(1-188)、0.5nm生物素化-p53(1-83)、0.18nm sa-xlent，和100mm kf。
[0248]
结果在下表中给出。+表示为《10nm，++表示为10～100nm，+++表示为》100nm
[0249]
表1 htrf assay
[0250]
编号ic
50
055+056+057+058+059+060+061+062+063+
[0251]
生物测试例2p21测定
[0252]
hmdm2和p53之间的相互作用的抑制导致经由p53的稳定化和积累的p53通路的激活。p53激活许多基因的转录，其中一个基因是p21《waf1/cip1》。为了评估hmdm2蛋白降解剂的效价，利用定量逆转录聚合酶链反应(qrt-pcr)测量相对于二甲亚砜(dmso)-处理的对照细胞而言化合物相关的细胞中的p21转录本水平。
[0253]
在第1天，将sjsa-1细胞以3x104个细胞/孔的密度接种在96-孔细胞培养板中的100ul生长培养基(rpmi1640；10mm hepes；1mm丙酮酸钠；1x青霉素-链霉素-谷氨酰胺(psq)；和10％胎牛血清(所有试剂都得自invitrogen；carlsbad,ca))中。将该细胞在37℃和5％co2下培养过夜。
[0254]
在第2天，将hmdm2蛋白降解剂连续稀释在dmso(sigma-aldrich；st.louis,mo)中。将5ul的每种化合物稀释液加入到245ul含有10％fbs的经过滤的测定培养基(rpmi1640，10mm hepes，1mm丙酮酸钠，和1xpsq)中。或者，还在存在10％人血清或10％小鼠血清的情况
下，或者在不存在任何血清的情况下进行该测定。将生长培养基从接种的sjsa-1细胞上除去并用100ul/孔的测定培养基代替。然后将100ul含有稀释的抑制剂的培养基加入到每个孔中至最终体积为200ul。该化合物的剂量滴定产生范围为0.049um
–
50um的最终浓度，外加dmso对照。将该细胞在抑制剂存在下在37℃和5％co2下温育7小时。在温育结束时，将培养基从细胞上除去，并将该板储存在-80℃。
[0255]
在第3天，使用qiagen biorobot universal workstation从抑制剂-和dmso-处理的sjsa-1细胞中纯化出总rna，所述纯化按照来自制造商(qiagen；valencia,ca)的rneasy96biorobot8000试剂盒方案进行。
[0256]
为了测量存在的p21转录本的水平，使用qrt-pcr。p21和管家基因、甘油醛3-磷酸脱氢酶(gapdh)的水平都从来自每个抑制剂-或dmso-处理的孔的总rna以技术重复测定。在applied biosystemsprism7900ht仪器上采用相对定量(δδct)方法使用下列循环条件测定qrt-pcr反应：48℃，30分钟，接着是95℃，10分钟，然后为40个由95℃，15秒和60℃，1分钟组成的循环。利用applied biosystemssds2.2软件用gapdh作为内源对照以及用dmso-处理的样品作为校准器来分析数据。sds2.2软件为每个所处理样品计算出相对于dmso对照的p21水平的相对定量(rq)或增大倍数。由参考化合物的拟合曲线的最大值定义最大(100％)的p21诱导倍数。将所测试的每种抑制剂剂量下的p21诱导倍数转化为代表最大值百分比的值。利用xlfit软件(idbusinesssolutions,alameda,ca)制作剂量反应曲线以计算所测试的每种抑制剂的ic
50
转变值(transitvalue)。+表示为《1μm，++表示为1-10μm，+++表示为》10μm
[0257]
表2 cell assay(sjsa-1cells)
[0258]
编号ic
50
055+056+057++058++059++060++061++062++063++
[0259]
在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。