一种本维莫德杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途与流程

本发明涉及药物合成领域，具体涉及一种本维莫德杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途。
背景技术：
：本维莫德是从共生微生物线虫和细菌代谢产物中发现的新的广谱杀菌剂和生物活性物质，是新一代消炎药物，可用于治疗多种重大自身免疫性疾病，如牛皮癣、湿疹、发浓性结肠炎和多种过敏性疾病。本维莫德的化学名称为5-[(e)-2-苯乙烯基]-2-异丙基-1,3-苯二酚，其结构如下：影响药品质量的主要因素之一是药品杂质，杂质研究作为药物研究的重要组成部分，杂质能否得到合理有效的控制，直接关系到药物的质量可控性和安全性。因此，本维莫德杂质的控制对于保证本维莫德药物的效能，降低药物的不良反应具有关键作用。药物杂质研究的首要条件是获得杂质对照样品，然而，目前缺乏关于本维莫德杂质及其制备工艺的报道，因此需开发本维莫德相关杂质及其制备方法，用于提高本维莫德原料和制剂的质量控制。技术实现要素：本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种本维莫德杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途，该杂质化合物作为杂质对照品，可用于本维莫德原料药或其制剂样品的质量分析，为其工艺条件选择提供参考，有利于加强生产过程中药品的质量控制。为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：一种本维莫德杂质化合物，其化学名称为e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体，其结构如式(i)所示：发明人在本维莫德的生产和研究过程中，发现、分离得到一种杂质化合物e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体，该杂质化合物目前尚未有文献报道，是一种新的本维莫德杂质。通过高分辨质谱和核磁共振波谱等数据对该杂质化合物进行结构表征，确认该杂质化合物的结构如式(i)所示，参数描述具体如下：hrms(esi)：m/z531.25[m+na]+；1h-nmr(600mhz，dmso-d6)δ：1.27(d，6h)，3.44(m，1h)，3.38(t，2h)，6.21(s，2h)，7.17(t，1h)，7.29(t，2h),7.33(d，2h)；13c-nmr(150mhz，cd3od)δ：21.12，23.95，51.70，105.84，118.52，126.90，127.72，128.92，140.56，142.94，156.62。本发明还提供了上述本维莫德杂质化合物的制备方法，以式(ii)化合物即5-[(e)-2-苯乙烯基]-2-异丙基-1,3-苯二酚为原料，在光照条件下发生环加成反应，制得式(i)化合物，具体路线如下：优选地，所述本维莫德杂质化合物的制备方法，包括以下步骤：(1)以式(ii)化合物为原料，在紫外光照射条件下发生环加成反应，制得含式(i)化合物的粗品；(2)将所述粗品重结晶，得到含有式(i)化合物的固体；(3)含有式i化合物的固体经过柱层析纯化分离，得到式(i)化合物。优选地，所述步骤(1)中，将式(ii)化合物置于波长为254-365nm的紫外光线下照射，持续时间1-10天，优选为2-10天，更优选为5-10天，制得含式(i)化合物的粗品。紫外光的波长及照射时间对于式(i)化合物的收率影响较大，照射时间过短会导致式(i)化合物的收率较低，照射时间为2-10天有助于提高式(i)化合物的收率，尤其当照射时间为5-10天时收率大于10％，照射时间大于10天后收率变化不大。优选地，所述步骤(2)中，重结晶溶剂可为甲醇、乙醇或甲苯。优选地，所述步骤(3)中，采用的柱层析硅胶规格为100-400目，洗脱溶剂为正己烷与乙酸乙酯混合物，提高式(i)化合物的纯度。本发明制备本维莫德杂质化合物e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体的工艺简单，收率高，纯度高。本发明提供了上述的本维莫德杂质化合物的检测方法，所述检测方法采用高效液相色谱法进行测定。优选地，填充剂为辛烷基硅烷键合硅胶或十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为水和乙腈，流动相流速为0.5-1.5ml/min，检测波长为200nm-250nm，柱温为25-40℃。本发明还提供了上述的本维莫德杂质化合物或根据上述方法制备得到的本维莫德杂质化合物在本维莫德原料药或制剂的质量控制中作为杂质对照品的用途。研究发现，e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体存在于本维莫德原料药或制剂产品中，在制备本维莫德过程中，如不控制e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体的生成，缺乏对其含量的控制，可能导致最终产品质量不合格，从而影响本维莫德制剂临床使用的安全性和有效性，因此，应对e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体进行质量控制。而对本维莫德原料和制剂的质量控制，必须有质量合格的杂质对照品。本发明制备的e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体纯度高，可作为本维莫德原料药或制剂检测中的杂质对照品，提高本维莫德的生产质量控制中对杂质e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体的准确定位。本发明还提供一种本维莫德原料药或制剂的杂质检测方法，所述检测方法采用高效液相色谱法进行测定，具体包括以下步骤：s1.取本维莫德原料药或制剂，采用水和乙腈的混合溶剂溶解并稀释定容，得到供试品溶液；s2.取上述的杂质化合物或根据上述方法制备得到的杂质化合物作为杂质对照品，采用水和乙腈的混合溶剂溶解并稀释定容，得到对照品溶液；s3取步骤s1中制备的供试品溶液与步骤s2中制备的对照品溶液分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有该杂质化合物峰，以峰面积计算该杂质化合物含量；与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明制备了高纯度的e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体，可作为本维莫德原料或制剂检测中的杂质对照品，以提高本维莫德的生产质量控制中对e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体的准确定位和定性，加强对该杂质的控制，提高本维莫德制剂质量，从而保证本维莫德制剂临床使用的安全性和有效性。附图说明图1为本发明的杂质化合物的高效液相色谱图。图2为本发明的杂质化合物的高分辨质谱图。图3为本发明的杂质化合物的核磁共振氢谱图。图4为本发明的杂质化合物的核磁共振碳谱图。具体实施方式为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1一种本维莫德杂质化合物的制备方法，包括以下步骤：(1)取e-1,3-二甲氧基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯ag置于波长为254nm的紫外光线下照射，持续时间1天，得到含式(i)化合物的粗品；(2)取含有式(i)化合物的粗品，加入2.5aml甲苯，加热至60℃使其全部溶解后，降温，析出结晶后，过滤，收集滤液，浓缩，得含式(i)化合物的固体；(3)取含式(i)化合物的固体，以正己烷和乙酸乙酯的混合物为洗脱剂，经柱层析纯化，收集含高纯度杂质的洗脱液，减压浓缩，得高纯度的式(i)化合物0.6g，收率6％,测得纯度为99.4％。本实施例中e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体的纯度检测方法如下：1)用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈和水为流动相，紫外检测器检测波长240nm，流速1.0ml/min，柱温为30℃，进行梯度洗脱检测；梯度洗脱比例如表1所示：表1时间(分钟)水乙腈055452015854015852)样品溶液的配制：取e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体适量，以水-乙腈(50:50)作为稀释液，配制成约0.4mg/ml溶液；3)检测：精密吸取样品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，色谱图如图1所示，按照面积归一法计算得到e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体的含量。上述步骤(2)中，重结晶溶剂也可选用甲醇或乙醇；所述步骤(3)中，采用的柱层析硅胶规格为100-400目。本发明中可以适当调整梯度洗脱的条件，填充剂选用十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为水和乙腈，流动相流速为0.5-1.5ml/min，检测波长为200-250nm，柱温为25-40℃。实施例2一种本维莫德杂质化合物的制备方法，包括以下步骤：(1)取e-1,3-二甲氧基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯ag置于波长为365nm的紫外光线下照射，持续时间10天，得到含式(i)化合物的粗品；(2)取含有式(i)化合物的粗品，加入2.5aml甲苯，加热至60℃使其全部溶解后，降温，析出结晶后，过滤，收集滤液，浓缩，得含式(i)化合物的固体；(3)取含式(i)化合物的固体，以正己烷和乙酸乙酯的混合物为洗脱剂，经柱层析纯化，收集含高纯度杂质的洗脱液，减压浓缩，得高纯度的式(i)化合物2g，收率20％，测得纯度为99.6％。本实施例中e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体的纯度检测方法如下：1)用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈和水为流动相，紫外检测器检测波长240nm，流速1.0ml/min，柱温为30℃，进行梯度洗脱检测；梯度洗脱比例如表2所示：表2时间(分钟)水乙腈055452015854015852)样品溶液的配制：取e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体适量，以水-乙腈(50:50)作为稀释液，配制成约0.4mg/ml溶液；3)检测：精密吸取样品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，按照面积归一法计算得到e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体的含量。实施例3一种本维莫德杂质化合物的制备方法，包括以下步骤：(1)取e-1,3-二甲氧基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯ag置于波长为254nm的紫外光线下照射，持续时间5天，得到含式(i)化合物的粗品；(2)取含有式(i)化合物的粗品，加入2.5aml甲醇，加热至60℃使其全部溶解后，降温，析出结晶后，过滤，收集滤液，浓缩，得含式(i)化合物的固体；(3)取含式(i)化合物的固体，以正己烷和乙酸乙酯的混合物为洗脱剂，经柱层析纯化，收集含高纯度杂质的洗脱液，减压浓缩，得高纯度的式(i)化合物1.1g，收率11％，测得纯度为98.9％。本实施例中e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体的纯度检测方法如下：1)用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈和水为流动相，紫外检测器检测波长240nm，流速1.0ml/min，柱温为30℃，进行梯度洗脱检测；梯度洗脱比例如表3所示：表3时间(分钟)水乙腈055452015854015852)样品溶液的配制：取e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体适量，以水-乙腈(50:50)作为稀释液，配制成约0.4mg/ml溶液；3)检测：精密吸取样品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，按照面积归一法计算得到e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体的含量。通过高分辨质谱、核磁共振氢谱和核磁共振碳谱分析方法，对本发明的杂质化合物的结构进行表征，确认该杂质化合物的结构如式(i)所示。该杂质化合物的高分辨质谱图如图2所示，hrms(esi)：m/z531.25[m+na]+。该杂质化合物的1h-nmr图谱如图3所示，(600mhz，dmso-d6)δ：1.27(d，6h)，3.44(m，1h)，3.38(t，2h)，6.21(s，2h)，7.17(t，1h)，7.29(t，2h),7.33(d，2h)。该杂质化全物的13c-nmr图谱如图4所示，(150mhz，cd3od)δ：21.12，23.95，51.70，105.84，118.52，126.90，127.72，128.92，140.56，142.94，156.62。实施例4以本发明制备的e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体作为杂质对照品用于对本维莫德原料或制剂进行分析检测的方法，包括如下步骤：取本维莫德原料或制剂、e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体，精密称定，用水-乙腈(50:50)溶液溶解并稀释制成浓度为0.4mg/ml的供试品溶液和对照品溶液。用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水和乙腈为流动相；按表4进行梯度洗脱，检测波长为240nm，流速为每分钟1.0ml，柱温为30℃,供试品溶液的色谱图中如有e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体峰，按外标法计算e-1,3-二羟基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯二聚体含量。表4在采用本发明的杂质对照品用于对本维莫德原料或制剂进行分析检测的方法中，填充剂也可以选用十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为水和乙腈，流动相流速为0.5-1.5ml/min，检测波长为200-250nm，柱温为25-40℃。综上所述，本发明制备的本维莫德杂质6-甲基-5-[(e)-2-苯乙烯基]-2-异丙基-1,3-苯二酚，收率高，纯度高，可作为本维莫德原料或制剂检测中的杂质的对照品，提高本维莫德的生产质量控制中对6-甲基-5-[(e)-2-苯乙烯基]-2-异丙基-1,3-苯二酚的准确定位和定性，有助于消除本维莫德中的杂质隐患，进一步提高本维莫德的质量。最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。当前第1页12