一种可重复利用的核酸荧光探针及相应的核酸检测方法

文档序号:25351208发布日期:2021-06-08 13:32阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种可重复利用的核酸荧光探针,其特征在于,其包含荧光探针、淬灭探针以及含有与目标物结合区域的dna;所述荧光探针标记有荧光基团,所述淬灭探针标记有淬灭基团;荧光探针、淬灭探针通过含有与目标物结合区域的dna连接或者结合到一起,所述淬灭基团能淬灭所述荧光基团的荧光信号,所述核酸荧光探针中所有单链dna的3’端进行硫代修饰。2.根据权利要求1所述的可重复利用的核酸荧光探针,其特征在于:具体为a、b、c中的任一种:a、线性dna探针所述线性dna探针由以下a1

a3共三条单链dna组成:a1荧光基团标记链;a2淬灭基团标记链;a3非标记链:由目标识别域、目标结合域、淬灭探针互补域依次连接而成;其中目标结合域与所述a1荧光基团标记链稳定结合,淬灭探针互补域与所述a2淬灭基团标记链稳定结合;b、dna发夹探针所述的dna发夹探针为一条包含以下b1

b4的结构域的dna单链:b1目标识别域;b2以荧光基团标记的目标结合域;b3颈环域;b4以淬灭基团标记的目标置换域;其中,所述b2与所述b4形成稳定结合;c、three

wayjunctiondna纳米探针所述的three

wayjunctiondna纳米探针由c1

c4共四条dna单链组成:c1荧光基团标记的荧光探针链;c2淬灭基团标记的淬灭探针链;c3包含目标置换域和荧光探针互补域的链;c4包含目标识别域、目标结合域和淬灭探针互补域的链;所述c1与所述c3中的荧光探针互补域稳定结合;所述c2与所述c4中的淬灭探针互补域稳定结合;所述c3的目标置换域与所述c4的目标结合域稳定结合。3.根据权利要求2所述的可重复利用的核酸荧光探针,其特征在于:所述荧光基团为fam,所述淬灭基团为bhq1。4.根据权利要求1

3任一所述的可重复利用的核酸荧光探针,其特征在于:所述a1荧光基团标记链长度为20个核苷酸;所述a2淬灭基团标记链长度为22个核苷酸;所述a3非标记链,目标识别域长度为6个核苷酸;目标结合域长度为20个核苷酸;所述b1目标识别域长度为16个核苷酸;所述b2以荧光基团标记的目标结合域长度为10个核苷酸;所述b3颈环域长度为20个核苷酸;所述b4以淬灭基团标记的目标置换域长度为10个核苷酸;所述c1与所述c3中的荧光探针互补域稳定结合;所述c2与所述c4中的淬灭探针互补域稳定结合;所述c3的目标置换域与所述c4的目标结合域稳定结合。5.根据权利要求1

4任一所述的可重复利用的核酸荧光探针,其特征在于:为检测
sars

cov

2病毒,具体可重复利用的核酸荧光探针为w1

w5中的任一套:w1、以序列表序列1为目标物,所述核酸荧光探针由序列表序列2所示的单链dna、序列表序列3所示的单链dna、序列表序列4所示的单链dna构成;w2、以序列表序列1为目标物,所述核酸荧光探针由序列表序列5所示的单链dna构成;w3、以序列表序列8为目标物,所述核酸荧光探针由序列表序列6所示的单链dna、序列表序列7所示的单链dna、序列表序列9所示的单链dna、序列表序列10所示的单链dna构成;w4、以序列表序列11为目标物,所述核酸荧光探针由序列表序列6所示的单链dna、序列表序列7所示的单链dna、序列表序列12所示的单链dna、序列表序列13所示的单链dna构成;w5、以序列表序列14为目标物,所述核酸荧光探针由序列表序列6所示的单链dna、序列表序列7所示的单链dna、序列表序列15所示的单链dna、序列表序列16所示的单链dna构成。6.使用权利要求1

5任一所述可重复利用的核酸荧光探针的核酸检测方法,其特征在于,包括将核酸荧光探针与多个待测样本依次混合,检测与每个待测样本混合时的荧光信号,判断该待测样本是否含有目标物,判断标准如下:若待测样本中存在目标物则荧光信号发生未激活

激活

未激活的动态变化,若待测样本中不存在目标物则荧光信号不发生动态变化。7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,具体包括如下步骤:s1、根据目标物设计上述核酸荧光探针;s2、目标物的单次检测:在含有s1中的核酸荧光探针的探针体系中加入待测样本与核酸外切酶构成检测体系,测定荧光强度,同时设置阴性对照;s3、目标物的多次检测:多次添加不同的待测样本,重复步骤s2;s4、对检测的荧光信号进行分析,按如下标准来确定待测样本中是否存在目标物:若待测样本中存在目标物,目标物与核酸荧光探针链置换反应后荧光信号从off态变为on态,其被核酸外切酶降解后探针重新杂交,导致荧光从on态又变为off态,荧光信号动态变化与阴性对照不同;若待测样本中不存在目标物,荧光信号动态变化与阴性对照相同,荧光信号保持off态,荧光信号动态变化与阴性对照相同。8.根据权利要求6或7所述的方法,其特征在于,所述核酸外切酶为exoⅲ。9.产品,其特征在于,所述产品由x1和x2组成;所述x1为所述核酸荧光探针,所述x2为进行检测所需的试剂和/或仪器。10.权利要求1

5任一所述核酸荧光探针、或权利要求6

8任一所述的方法、或权利要求9所述的产品在制备核酸检测试剂中的应用。
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