一种高效固氮的蓝藻工程菌及其制备方法和应用

文档序号:25610178发布日期:2021-06-25 14:48阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种高效固氮蓝藻工程菌,是野生型鱼腥藻(anabaena sp.)pcc 7120的细胞分裂相关因子ftn的基因被敲除的突变体。2.权利要求1所述的高效固氮蓝藻工程菌的制备方法,包括以下步骤:1)构建敲除载体,其上含有细胞分裂相关因子ftn基因的上下游同源片段flanka和flankb,二者之间为选择性标记基因;2)用所述敲除载体转化野生型鱼腥藻pcc 7120,然后在选择性平板上筛选阳性菌株,并通过基因检测选取阳性纯合突变菌株

ftn;3)将步骤2)选取的阳性纯合突变菌株

ftn进行培养,测定其固氮酶活性以及生长速率,获得固氮酶活性高且生长好的高效固氮蓝藻工程菌。3.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤1)中所述上下游同源片段flanka和flankb的长度为3kb。4.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤1)中所述选择性标记基因为抗性标记基因。5.如权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述抗性标记基因选自:红霉素抗性基因em、卡那霉素抗性基因kan、新霉素抗性基因neo、链霉素抗性基因sm。6.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤1)通过pcr扩增和无缝克隆的方式将ftn基因的上下游同源片段flanka和flankb以及选择性标记基因连入prl277载体上,构建敲除载体prl277ftn,其中,上游同源片段flanka和下游同源片段flankb的序列分别如序列表中seq id:9和10所示,所述选择性标记基因是红霉素抗性基因em。7.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤2)中,在选择性平板上通过连续划线传代培养筛选阳性菌株,再通过pcr验证平板筛选出的阳性菌株是否为纯合突变株。8.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤3)中获得的高效固氮蓝藻工程菌的固氮酶活是野生型的2倍以上。9.权利要求1所述的高效固氮蓝藻工程菌在农业生产中的应用。
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