一种用于抑制赖氨酰tRNA合成酶的芳香环类化合物

一种用于抑制赖氨酰trna合成酶的芳香环类化合物
技术领域
1.本发明涉及药物化学领域，更具体地，本发明涉及芳香环类药物及其在抑 制赖氨酰trna合成酶方面的应用。


背景技术：

2.氨酰trna合成酶(aarss)催化氨基酸和相应的trna的氨酰化反应，合成 蛋白质翻译的重要原料：氨酰trna。该反应的特异性直接决定了遗传信息翻译 的准确性。每一种参与蛋白质生物合成的氨基酸都需要一个特定的aars来对它 进行催化。因此，每一种aars对于蛋白质翻译过程都是必不可少的。aars早已 被认为是研究新型抗生素的优良平台。它们不仅仅存在于细胞质中，还存在于 一些可以进行蛋白质合成的细胞器之中，比如，线粒体，叶绿体，或者顶质体 (存在于疟疾等原虫中)。aars家族在细菌中为抗生素研发提供了的不同靶点 有大约20个，而在真核病原微生物中提供了大约双倍多的靶点，比如，疟原虫 中有37个不同的aars(包括细胞质，线粒体和顶质体aars)。
3.疟疾是一种由疟原虫引起的急性传染病，多由蚊子叮咬传播。虽然青蒿素 衍生物等药物的联合用药可以有效地治疗疟疾，但是近年来在柬埔寨西部和泰 国西部等地区发现出现了对这些治疗耐药的情况。在这些地区发现了具有多重 耐药性的疟原虫，对青蒿素的敏感性降低，被称为“超级疟疾”。如不能得到有 效控制，“超级疟疾”可能会进一步扩散传播。疟疾仍是世界上最主要的致死病 因之一，疟原虫对青蒿素类抗疟药物产生抗药性是当前全球抗疟面临的最大技 术挑战。
4.同时，尽管目前已经有多种抗生素药物，但抗生素的滥用加速了细菌耐药 性的产生。具有耐药能力的细菌经过不断的进化与变异，获得了针对不同抗菌 药物耐药的能力，这种能力在斗争中不断强化，细菌逐步从单一耐药到多重耐 药甚至泛耐药，最终成为耐药超级细菌。这类细菌能对抗生素有强大的抵抗作 用，能逃避被杀灭的危险。目前引起特别关注的超级细菌主要有：耐甲氧西林 金黄色葡萄球菌(mrsa)、耐多药肺炎链球菌(mdrsp)、万古霉素肠球菌 (vre)等等。由于大部分抗生素对其不起作用，超级细菌对人类健康已造成 极大的危害。
5.因此，迫切需要研发新的作用靶点的新型抗生素。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种能够直接靶向赖氨酰trna合成酶的小分子化合 物具有作为新型抗生素的药用价值。
7.本发明的第一方面，提供了一种如下式所示的化合物、或其光学异构体或其 外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐：
[0008][0009]
式中，
[0010]
ar选自下组：苯环、吡啶环；
[0011]
r1选自下组：取代或未取代的c3-c8饱和或不饱和的碳环、s(o)2ra；
[0012]
ra选自下组：h、取代或未取代的c1-c6烷基；
[0013]
r2选自下组：h、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c1-c6烷氧 基、s(o)2ra、c(o)ra、c(o)ora、c3-c8碳环、3-8元杂环；其中，所述的c3-c8 碳环或3-8元杂环还可以任选地被一个或多个选自下组的取代基取代：卤素、c1
‑ꢀ
c6烷基、取代或未取代的c3-c8碳环、取代或未取代的3-8元杂环；
[0014]
r3选自下组：h、卤素、硝基、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的 c1-c6烷氧基；
[0015]
r4选自下组：h、取代或未取代的c1-c6烷氧基、s(o)2ra；
[0016]
且所述的取代指基团上的一个或多个h原子被选自下组的基团替代：卤素、 c1-c6烷基、c1-c6烷氧基。
[0017]
在另一优选例中，ar选自下组：苯环、吡啶环；
[0018]
r1选自下组：取代或未取代的c3-c6饱和或不饱和的碳环、s(o)2ra；
[0019]
ra选自下组：h、取代或未取代的c1-c4烷基；
[0020]
r2选自下组：h、取代或未取代的c1-c4烷基、取代或未取代的c1-c4烷氧 基、s(o)2ra、c(o)ra、c(o)ora、c3-c8碳环、3-8元杂环；其中，所述的c3-c6 碳环或3-6元杂环还可以任选地被一个或多个选自下组的取代基取代：卤素、c1
‑ꢀ
c4烷基、取代或未取代的c3-c6碳环、取代或未取代的3-6元杂环；
[0021]
r3选自下组：h、卤素、硝基、取代或未取代的c1-c4烷基、取代或未取代的 c1-c4烷氧基；
[0022]
r4选自下组：h、取代或未取代的c1-c4烷氧基、s(o)2ra；
[0023]
且所述的取代指基团上的一个或多个h原子被选自下组的基团替代：卤素、 c1-c4烷基、c1-c4烷氧基。
[0024]
在另一优选例中，ar选自下组：苯环、吡啶环；
[0025]
r1选自下组：c3-c6饱和或不饱和的碳环、s(o)2ra；
[0026]
ra选自下组：h、甲基；
[0027]
r2选自下组：h、c1-c4烷基、c1-c4卤代烷基、c1-c4烷氧基、s(o)2ra、 c(o)ra、c(o)ora、c3-c8碳环、3-8元杂环；其中，所述的c3-c6碳环或3-6元 杂环还可以任选地被一个或多个选自下组的取代基取代：卤素、c1-c4烷基、取代 或未取代的c3-c6碳环、取代或未取代的3-6元杂环；
[0028]
r3选自下组：h、卤素、硝基、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、 c1-c4卤代烷氧基；
[0029]
r4选自下组：h、c1-c4烷氧基、c(o)ra、s(o)2ra；
[0030]
且所述的取代指基团上的一个或多个h原子被选自下组的基团替代：卤素、 c1-c4烷基、c1-c4烷氧基。
[0031]
在另一优选例中，所述的式a化合物具有如下式i所示的结构：
[0032][0033]
其中，x和y各自独立地为n或ch。
[0034]
在另一优选例中，r1选自下组：异丙基磺酰基、环己基、2,3-环己烯基。
[0035]
r2独立地表示选自下组的基团：氢原子、甲氧基、
[0036]
r3独立地表示选自下组的基团：氢原子、氟原子、甲氧基、三氟甲氧基、乙 酰基、三氟甲基、甲基、硝基。
[0037]
ar1表示苯环或吡啶环。
[0038]
在另一优选例中，所述的化合物选自下组：
[0039]
[0040][0041]
本发明的第二方面，提供了一种如本发明第一方面所述的化合物、或其光学异 构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于， 用于选自下组的用途：
[0042]
(a)制备治疗或预防赖氨酰trna合成酶的活性或表达量相关的疾病或病症的 药物组合物；
[0043]
(b)制备治疗或预防抑制感染性疾病的药物组合物；
[0044]
(c)制备选自下组的农林用品：除草剂、杀菌剂或杀虫剂。
[0045]
在另一优选例中，所述的感染性疾病是由选自下组的病原体导致的疾病：病 毒、细菌、真菌、寄生虫、疟疾。
[0046]
在另一优选例中，所述的感染性疾病是炎症。
[0047]
在另一优选例中，所述的感染性疾病选自下组：真菌性皮肤病、疟原虫感染的 寄
生虫病。
[0048]
在另一优选例中，所述的疟原虫是红内期疟原虫。
[0049]
本发明的第三方面，提供了一种药物组合物或农药组合物，所述的药物组 合物包括：(a)如本发明第一方面所述的化合物，或其光学异构体或其外消旋 体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐，和(b)药学上可接受的载体，或农 药学上可接受的载体。
[0050]
在另一优选例中，所述药物组合物中含有0.001-99wt％，较佳地0.1-90wt％， 更佳地1-80wt％的式a化合物、或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或 其药学上可接受的盐，按组合物的总重量计。
[0051]
在另一优选例中，所述的农药组合物用于抑制病原微生物。
[0052]
在另一优选例中，所述的农药组合物用于抑制农业杂草。
[0053]
在另一优选例中，所述的农药组合物用于抑制农业害虫。
[0054]
在另一优选例中，所述的农药组合物选自下组：除草剂、杀菌剂、杀虫剂。
[0055]
在另一优选例中，所述的农药组合物是选自下组的形式：凝胶、分散剂、乳液 或溶液。
[0056]
本发明的第四方面，提供了一种体外非治疗性地抑制赖氨酰trna合成酶蛋 白质翻译的方法，所述方法包括：将赖氨酰trna合成酶与如本发明第一方面所述 的式a化合物、或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接 受的盐进行接触，从而抑制赖氨酰trna合成酶的活性。
[0057]
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例) 中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方 案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
[0058]
图1.本发明化合物与恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶结合曲线。
[0059]
图2.本发明化合物特异抑制恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶活性效果图。
[0060]
图3.部分优选化合物对红内期恶性疟原虫菌株的生长抑制活性结果。
具体实施方式
[0061]
本发明人经过广泛而深入地研究，首次发现了一类结构如式a所示芳香类 化合物可以高效抑制恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶,显著地直接抑制疟原虫的 生长。实验表明，所述的式a化合物对疟原虫赖氨酰trna合成酶有较好的抑 制效果。同时对哺乳动物细胞具有较小的毒性。而因为赖氨酰trna合成酶在各 种病原微生物以及农业杂草和病虫害中的普遍存在，因此本发明的式a化合物也 可用于病毒、细菌、真菌、寄生虫、疟疾、炎症等感染性疾病的人药或兽药用途， 以及用于除草剂、杀菌剂、杀虫剂等农林药物用途。
[0062]
术语
[0063]
疟疾
[0064]
疟疾在世界上分布广泛，是严重危害人体健康的寄生虫病之一，是亚非拉 广大地区的重要公共卫生问题。据统计，现在全球仍有1.2亿疟疾患者，带虫 者约近3亿；非洲每年还有百万儿童死于疟疾。人群中除由于遗传基因决定对 某些疟原虫具先天免疫力，及高疟
区婴儿可从母体获得一定的抵抗力外，对疟 原虫普遍易感。在流行区，成人反复感染的机会多，可呈带虫状态，而易感者 主要是儿童。孕妇生理功能特殊，免疫力低，易感疟疾。此外，非疟区的无免 疫力人群进入疟区，也为易感者，且可引起疟疾暴发流行。
[0065]
赖氨酰trna合成酶
[0066]
赖氨酰trna合成酶(lysrs)，即催化赖氨酸和trna
lys
产生赖氨酰 trna
lys
的酶，在各种病原微生物以及农业杂草和病虫害中的普遍存在。本领域已 有的研究证明，其在多种生物体的代谢活动中存在，且有望成为例如病毒性感染等 疾病或病症的有效治疗靶点。
[0067]
式a化合物
[0068]
如本文所用，“本发明化合物”、或“式a化合物”可互换使用，指式a所示的 化合物、或其消旋体、对应异构体、或其药学上可接受的盐。应理解，该术语主要 包括上述组分的混合物。
[0069][0070]
式中，
[0071]
r1独立地表示选自下组的基团：异丙基磺酰基、环己基、2,3-环己烯基。
[0072]
r2独立地表示选自下组的基团：氢原子、甲氧基、
[0073]
r3独立地表示选自下组的基团：氢原子、氟原子、甲氧基、三氟甲氧基、乙 酰基、三氟甲基、甲基、硝基。
[0074]
ar1表示苯环或吡啶环。
[0075]
在本发明中，还包括式a化合物的药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的 盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括 无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包 括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、 丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、 苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基 酸。
[0076]
本发明的式a化合物可采用现有技术中本领域技术人员熟知的方法进行制备， 对各个步骤的反应参数没有特别限制。此外，上述化合物也可通过市售方式获得。
[0077]
除非特别说明，本发明中，所有出现的化合物均意在包括所有可能的光学 异构体，如单一手性的化合物，或各种不同手性化合物的混合物(即外消旋体)。 本发明的所有化合物之中，各手性碳原子可以任选地为r构型或s构型，或r 构型和s构型的混合物。
[0078]
用途
[0079]
本发明的上述式a化合物可用于抑制病原体赖氨酰trna合成酶，进而预防 或治疗感染性疾病。
[0080]
本发明还提供了一种抑制赖氨酰trna合成酶的方法，用于农业除草剂，杀菌 剂和杀虫剂的用途。
[0081]
在一实施例中，本发明提供了一种体外非治疗性的抑制恶性疟原虫赖氨酰 trna合成酶的方法，包括：例如在体外培养体系中，将恶性疟原虫赖氨酰trna 合成酶与式a化合物(或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上 可接受的盐)进行接触，从而抑制恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶的活性。
[0082]
本发明还提供了一种抑制恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶的方法，该方法可 以是治疗性的或非治疗性的。通常，该方法包括步骤：给需要的对象施用本发明的 式a化合物。优选地，所述对象包括人和非人动物(啮齿动物、兔、猴、家畜、家 禽、狗、猫、鸽等)。
[0083]
组合物和施用方法
[0084]
由于本发明化合物具有优异的对赖氨酰trna合成酶的抑制活性，因此本发 明化合物、或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐， 以及含有以本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于(a)抑制赖氨酰 trna合成酶的活性；(b)通过抑制赖氨酰trna合成酶的活性，用于病毒、细菌、 真菌、寄生虫、疟疾、炎症等感染性疾病的人药或兽药用途，以及用于除草剂、杀 菌剂、杀虫剂等农林药物用途。
[0085]
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接 受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量 足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。
[0086]“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶 物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此 指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低 化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤 维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、 硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二 醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、 着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
[0087]
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包 括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给 药。
[0088]
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固 体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷 酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄 糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基 吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、 碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂， 例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂 酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬 脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中， 剂型也可包含缓冲剂。
[0089]
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠 衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且这种组合物中，活性化合 物或化合物
的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组 分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种 或多种形成微胶囊形式。
[0090]
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊 剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或 其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、 1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、 蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
[0091]
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、 甜味剂、矫味剂和香料。
[0092]
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧 乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
[0093]
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散 液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适 宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混 合物。
[0094]
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入 剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要 时可能需要的推进剂一起混合。
[0095]
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
[0096]
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳 动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，具体剂量应考虑给药 途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
[0097]
农药组合物
[0098]
合适的农药组合物是用于控制农业有害物的生物活性化合物，包括但不限于， 除草剂、植物生长调节剂、作物干燥剂、杀真菌剂、杀细菌剂、抑菌剂、杀昆虫剂、 和驱虫剂、连同它们的水溶性盐和酯。
[0099]
本发明的农药组合物可以是凝胶、分散剂、乳液或溶液的形式，其中任选地掺 入各种湿润剂、分散剂、乳化剂或胶凝剂。分散剂和乳化剂包括磺基蓖麻酸脂，基 于环氧乙烷和壬醇和辛醇的缩合物的季铵衍生物或产物，或通过和还氧乙烷缩合使 游离的羟基醚化而具有溶解性的脱水山梨糖醇的羧酸脂，以及这些类型的试剂的混 合物。这些凝胶、乳液、悬浮液、分散液和/或溶液可用水性、有机或水性-有机稀 释剂制得，这些稀释剂例如是苯乙酮、异佛尔酮、甲苯、二甲苯、矿物油、动物油 或植物油，以及水溶性聚合物(以及这些稀释剂的混合物)，它们可含有离子或非离 子型的湿润剂、分散剂或乳化剂或其混合物，例如上述的那些类型。
[0100]
在一种优选的实验方案中，本发明的组合物采用水溶液的形式，即所述载体为 水。
[0101]
本发明的主要优点包括：
[0102]
(a)本发明的式a化合物对赖氨酰trna合成酶具有显著的抑制效果，其抑制 恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶的ic
50
值达到578.8nm。
[0103]
(b)本发明的典型式a化合物以明确的作用机理靶向恶性疟原虫赖氨酰trna 合成酶。
[0104]
(c)本发明的式a化合物对于与赖氨酰trna合成酶靶点相关的多种疾病的 治疗具有良好的开发应用前景。
[0105]
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明 本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分 比和份数按重量计算。
[0106]
合成实施例
[0107]
本发明的通用合成方法如下：
[0108]
步骤1
[0109][0110]
氩气保护下向苯胺化合物(300mg)中加入2,4-二氯-1,3,5-三嗪(1.5当量)， 反应体系避光加入无水四氢呋喃(10ml)，搅拌下加入n,n-二异丙基乙胺(1 ml)，避光条件氩气保护下常温搅拌48小时。反应完成后用水淬灭，并用乙酸 乙酯(3
×
5ml)萃取水相。合并有机相，并用na2so4干燥。旋蒸除去溶剂后， 粗产物通过快速柱层析法分离纯化(石油醚：乙酸乙酯3：1)，得到白色固体 产物(400mg，产率85％)。
[0111]
步骤2
[0112][0113]
氩气保护下向步骤1中产物(50mg)中加入邻甲氧基苯胺类底物(1.5当 量)，反应体系避光加入无水n,n-二甲基甲酰胺(dmf，3ml)，搅拌下加入 n,n-二异丙基乙胺(dipea，0.75ml)，避光条件氩气保护下常温搅拌12小 时。反应完成后用水淬灭，并用乙酸乙酯(3
×
5ml)萃取水相。合并有机相， 并用na2so4干燥。旋蒸除去溶剂后，粗产物通过快速柱层析法分离纯化(石油 醚：乙酸乙酯2：1)，得到产物。
[0114]
换用不同的邻甲氧基苯胺类底物，得到以下化合物：
[0115]
jz031
[0116][0117]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.29(s,1h),8.08(s,1h),7.81(d,j＝8.4hz,1h), 7.47(s,1h),7.28(dd,j＝8.5,1.7hz,1h),7.25(d,j＝2.9hz,1h),7.16(dd,j＝ 17.0,9.8hz,
1h),6.51(d,j＝2.0hz,1h),6.02(d,j＝7.6hz,1h),5.71(d,j＝9.7 hz,1h),3.85(s,3h),3.66(d,j＝11.8hz,2h),3.61(d,j＝5.3hz,1h),2.68(dd, j＝26.4,14.2hz,6h),2.63(s,2h),2.36(s,3h),2.13(d,j＝9.3hz,2h),2.02
–
1.90 (m,5h),1.70(ddd,j＝26.9,19.0,10.0hz,6h),1.66
–
1.54(m,2h).
[0118]
jz032
[0119][0120]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.27(s,1h),8.05(d,j＝30.8hz,1h),7.65(s, 1h),7.47(s,1h),7.35
–
7.28(m,1h),7.25
–
7.20(m,2h),6.50(s,1h),3.83(s,3h), 3.64(d,j＝11.4hz,2h),2.78
–
2.59(m,7h),2.51(s,3h),2.38(t,j＝11.4hz,1h), 2.31(s,3h),2.17(d,j＝2.6hz,2h),1.94(d,j＝12.1hz,2h),1.81(d,j＝10.9hz, 4h),1.69(ddd,j＝18.3,15.5,8.0hz,3h),1.50
–
1.31(m,4h),1.31
–
1.19(m,2h).
[0121]
jz033
[0122][0123]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ9.45(s,1h),8.71(s,1h),8.46(s,2h),7.91(dd, j＝7.9,1.3hz,2h),7.66(t,j＝7.4hz,1h),7.33(d,j＝8.4hz,1h),7.28(d,j＝ 7.7hz,1h),6.97(d,j＝8.5hz,1h),3.98(s,3h),3.31
–
3.20(m,1h),1.32(t,j＝ 6.0hz,6h).
[0124]
jz034
[0125][0126]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ9.51(s,1h),9.03(s,1h),8.59(d,j＝8.4hz,1h), 8.46(s,1h),7.89(t,j＝7.1hz,1h),7.81(dd,j＝8.5,1.5hz,1h),7.73(s,1h), 7.63(t,j＝7.8hz,1h),7.22(t,j＝7.6hz,1h),6.95(d,j＝8.6hz,1h),3.97(s, 3h),3.88(s,3h),3.31
–
3.20(m,1h),1.31(t,j＝6.7hz,6h).
[0127]
jz035
[0128][0129]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ9.31(s,1h),8.43(d,j＝66.0hz,2h),8.10(d,j ＝8.8hz,1h),7.87(d,j＝7.9hz,1h),7.61(s,2h),7.22(t,j＝7.4hz,1h),6.51 (t,j＝7.0hz,2h),3.87(s,3h),3.81(s,3h),3.24(dq,j＝14.2,7.1hz,1h),1.30 (d,j＝6.8hz,6h).
[0130]
jz036
[0131][0132]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.38(s,1h),8.51(d,j＝8.4hz,1h),8.37(s,1h), 8.10(s,1h),7.81(dd,j＝7.9,1.2hz,2h),7.63
–
7.54(m,1h),7.17(dd,j＝13.5, 5.9hz,1h),6.74(t,j＝8.6hz,1h),6.58
–
6.47(m,1h),3.78(d,j＝9.7hz,3h), 3.77
–
3.63(m,3h),3.18(m,j＝6.8hz,1h),1.24(d,j＝6.8hz,6h).
[0133]
jz037
[0134][0135]1h nmr(500mhz,acetone)δ9.77(s,1h),9.30(s,1h),8.59(d,j＝8.3hz, 2h),8.43
–
8.32(m,1h),7.94
–
7.83(m,2h),7.73(t,j＝7.8hz,2h),7.36(dtd,j ＝15.3,8.5,1.0hz,2h),3.53
–
3.40(m,2h),1.35
–
1.21(m,12h).
[0136]
jz038
[0137][0138]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.27(s,1h),8.45(d,j＝8.1hz,1h),8.37(s,1h), 8.27(d,j＝5.6hz,1h),7.78(dt,j＝79.5,39.7hz,2h),7.57(t,j＝7.8hz,1h), 7.24
–
7.13(m,1h),7.07
–
6.96(m,1h),6.91(t,j＝7.7hz,1h),6.84(dd,j＝10.6, 9.4hz,1h),3.90
–
3.79(m,3h),3.26
–
3.11(m,1h),1.24(d,j＝6.9hz,6h).
[0139]
jz039
[0140][0141]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.35(s,1h),8.61
–
8.48(m,1h),8.43(s,1h), 8.13(d,j＝29.0hz,1h),7.88(dd,j＝16.9,10.1hz,1h),7.76(d,j＝47.8hz,1h), 7.65(t,j＝7.8hz,1h),7.27
–
7.19(m,1h),6.84(dt,j＝21.4,4.9hz,2h),3.95
–ꢀ
3.78(m,3h),3.35
–
3.17(m,1h),2.37
–
2.19(m,3h),1.29(dd,j＝19.4,7.0hz, 6h).
[0142]
jz040
[0143][0144]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.35(s,1h),7.76(d,j＝61.3hz,2h),7.26(dd, j＝17.5,12.7hz,2h),7.18(t,j＝7.3hz,1h),6.77(d,j＝8.6hz,1h),6.51(d,j ＝7.2hz,1h),6.00(s,1h),5.70(s,1h),3.80(d,j＝25.4hz,3h),3.73
–
3.53(m, 3h),3.22(dd,j＝89.3,73.3hz,2h),2.17(d,j＝0.7hz,1h),2.07(d,j＝27.5hz, 2h),2.01
–
1.94(m,1h),1.74(s,1h),1.58(d,j＝18.6hz,2h).
[0145]
jz041
[0146][0147]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ9.48(s,1h),8.75
–
8.64(m,1h),8.61
–
8.53(m, 1h),8.49
–
8.44(m,1h),8.05
–
7.99(m,1h),7.95
–
7.90(m,1h),7.82
–
7.77(m, 1h),7.68(ddd,j＝20.8,12.1,4.9hz,1h),4.04(dd,j＝7.8,4.3hz,3h),4.03
–ꢀ
3.99(m,2h),3.28
–
3.22(m,1h),1.32(dt,j＝4.9,2.6hz,6h).
[0148]
jz042
[0149][0150]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ9.37(s,1h),8.56(dd,j＝23.0,14.4hz,1h),8.48 (d,j＝11.0hz,1h),7.88(dd,j＝21.4,6.4hz,2h),7.66(t,j＝8.0hz,1h),6.99
–ꢀ
6.87(m,1h),4.08
–
4.00(s,3h),3.25(dt,j＝13.9,6.9hz,1h),3.19(d,j＝14.3 hz,2h),1.31(t,j＝
6.5hz,6h).
[0151]
jz043
[0152][0153]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ9.28(s,1h),8.52(d,j＝8.4hz,1h),8.34(s,1h), 7.86(d,j＝7.9hz,1h),7.68
–
7.63(m,1h),7.20(d,j＝7.8hz,1h),6.90(d,j＝7.8hz,1h),6.61(dd,j＝7.8,5.1hz,1h),5.60(s,1h),4.74(s,1h),3.83(s,3h), 3.31
–
3.18(m,1h),1.30(d,j＝6.8hz,6h).
[0154]
jz044
[0155][0156]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.49(s,1h),8.55
–
8.49(m,1h),8.38(s,1h), 8.14(dd,j＝10.6,3.0hz,1h),7.95
–
7.86(m,1h),7.67(dd,j＝17.3,8.5hz,2h), 7.31(dd,j＝14.1,6.3hz,1h),6.83(dd,j＝9.0,4.9hz,1h),6.79
–
6.71(m,1h), 3.92(d,j＝12.8hz,3h),3.23(m,j＝13.7,6.8hz,1h),1.32(t,j＝7.3hz,6h).
[0157]
jz045
[0158][0159]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.33(s,1h),8.45(s,2h),7.91(d,j＝7.7hz, 1h),7.86(d,j＝7.5hz,1h),7.68(dd,j＝15.3,7.8hz,1h),7.35
–
7.23(m,2h), 6.95
–
6.83(m,2h),3.96
–
3.89(m,3h),3.28
–
3.20(m,1h),1.30(d,j＝6.8hz, 6h).
[0160]
生物实施例1
[0161]
化合物与恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶结合实验
[0162]
首先，通过在含有20mm三羟甲基氨基甲烷(ph用盐酸调节为8.0)、200 mm氯化钠，500μm赖氨酸和200μm不同化合物的缓冲液中以10μm浓度稀释 恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶蛋白，并在室温下孵育10分钟。在含有20mm 三羟甲基氨基甲烷ph 8.0、200mm氯化钠的测定缓冲液中将orange 染料(sigma)稀释至40倍浓度，然后将10μl 40倍浓度染料溶液加入反应体系 中，终浓度为4倍。震荡混匀后，将样品等分添加到96孔pcr板中，使最终测定 体积达到20μl。完全混合后，将最终溶液以0.015℃/秒的速度从25℃加热到 90℃，并通过quantstudio 3(thermo fisher scientific的applied biosystems)仪 器监测荧光
信号。
[0163]
检测结果如图1中所示，本发明的化合物恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶结 合曲线如图1所示，结果显示，本发明化合物与恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶 具有良好的结合效果，化合物对恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶热变性温度有一 定的影响。其中化合物jz034、jz038、jz042与恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶 结合后，分别使其热变性温度提高了10.31℃、10.06℃、8.82℃。
[0164]
生物实施例2
[0165]
化合物jz034、jz036、jz038高效特异抑制恶性疟原虫赖氨酰trna合 成酶活性
[0166]
在biofil 96孔组织培养板上，用孔雀绿磷酸盐测定系统(sigma-aldrich) 测定恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶的酶促氨基酰化作用产生的磷酸根离子。 该测定法在80μl体系中进行，其中包含40mm 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(ph 7.5), 100nm恶性疟原虫赖氨酰trna合成酶蛋白，1mm二硫苏糖醇，8mm氯化 镁、500μm l-赖氨酸，0.32nm-125μm化合物和100μm腺嘌呤核苷三磷酸。 将试剂混合液以1000转/分钟的速度摇匀一分钟，然后在30℃下孵育6个小 时。通过添加20μl孔雀绿工作试剂显色并终止酶活性。将混合物以1000转/ 分钟摇匀1分钟，并在室温下静置30分钟。最后在magellan读板仪(tecan) 上测量od 612nm，并用prism(graphpad)进行非线性回归拟合曲线计算化合 物半数抑制浓度ic
50
。结果如图2所示，图2显示了恶性疟原虫赖氨酰trna 合成酶酶活抑制曲线，化合物jz034、jz036、jz038的ic
50
分别为9.682μm、 578.8nm、4.545μm。
[0167]
生物实施例3
[0168]
化合物jz034、jz036、jz038高效抑制疟原虫生长
[0169]
根据标准程序在人o
+
红细胞中培养寄生虫。为了制备》80％的环形寄生虫， 用5％山梨糖醇预处理寄生虫的异步培养物使其生长周期同步在环形中间阶段 (侵袭后6-10小时)，在96孔板中使用了恶性疟原虫菌株来测试抗疟疾作用。 将寄生虫与含有1％寄生虫病，2％血细胞比容的化合物在96孔板中孵育，总计200μl。化合物的最大浓度为10μm。使寄生虫在37℃，5％co2、5％o2、90％ n2下生长72小时。72小时后，将100μl裂解缓冲液(0.12mg/ml皂素，0.12％ triton x-100，30mm 4-羟乙基哌嗪乙磺酸，7.5mm乙二胺四乙酸)添加到板 的每个孔中，其中包含5x sybr green i(invitrogen；以10000
×
浓度提供)。然 后，将板在黑暗中孵育2小时，然后在仪器上以485nm激发和535nm发射读取荧 光信号。化合物jz034、jz036、jz038对红内期恶性疟原虫菌株的生长抑制活性 结果如图3所示，测得化合物jz034、jz036、jz038半最大效应浓度ec
50
分别为 453nm、250nm、2.17μm。可以看出优选化合物对红内期恶性疟原虫生长也有 明显的抑制。
[0170]
在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献 被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后， 本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申 请所附权利要求书所限定的范围。