一种用来预测婴幼儿肥胖病的乳源性唾液链球菌及其分离方法与流程

1.本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种用来预测婴幼儿肥胖病的乳源性唾液链球菌及其分离方法。


背景技术：

2.儿童肥胖目前是临床中常见的一种代谢性疾病，表现为体重在婴幼儿时期开始偏离正常的生长曲线。儿童肥胖患病率的增加会导致成年期慢性病患病率增加，如糖耐量受损和高血压。因此对婴幼儿出生后进行肥胖预测十分必要。
3.子代的肥胖受到遗传因素和环境因素的共同作用，遗传因素通过对某些基因(fto基因)的发现确定了“肥胖基因”的遗传作用，而环境因素可能对子代肥胖的作用更加明显，也是目前研究最为广泛的，如饮食、居住环境、运动、生命早期营养状态、肠道菌群等。但目前缺乏某一关键指标对子代肥胖的预测作用。
4.子代生命早期的营养来源首选是母乳，且母乳中的菌群在子代肠道中的定植对营养吸收与代谢也发挥重要的作用，但目前临床中缺乏通过对生命早期菌群的测序而实现对子代肥胖的预测作用，且对于母乳中的益生菌的分离，主要是传统意义上的双歧杆菌和乳酸杆菌，它们与子代肥胖并无相关性。唾液链球菌是一种重要的生命早期的定植菌，其嗜热亚种目前应用于乳制品发酵和工业生产中，在母乳中的研究甚少。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种用来预测婴幼儿肥胖病的乳源性唾液链球菌(streptococcus salivarius)及其分离方法。
6.本发明为解决上述技术问题采用以下技术方案：
7.本发明的第一方面是提供一种用来预测婴幼儿肥胖病的乳源性唾液链球菌，其16s rrna基因序列如下所示：
8.aggacgaacgctggcggcgtgcctaatacatgcaagtagaacgctgaagagaggagcttgctcttcttggaagagttgcgaacgggtgagtaacgcgtaggtaacctgccttgtagcgggggataactattggaaacgatagctaataccgcataacaatgggtgacccatgtcattcatttgaaaggggcaactgctccactacaagatggacctgcgttgtattagctagtaggtgaggtaacggctcacctaggcgacgatacatagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttcggcaatgggggcaaccctgaccgagcaacgccgcgtgagtgaagaaggttttcggatcgtaaagctctgttgtaagtcaagaacgagtgtgagagtggaaagttcacactgtgacggtagcttaccagaaagggacggctaattacgtgcccagcagccgcggtaatacgtaggtcccgagcgttgtccggatttattgggcgtaaagcgagcgcaggcggtttgataagtctgaagttaaaggctgtggctcaaccatagttcgctttggaaactgtcaaacttgagtgcagaaggggagagtggaattccatgtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaggaacaccggtggcgaaagcggctctctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgctaggtgttgggtcctttccg
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9.进一步地，该乳源性唾液链球菌为唾液链球菌菌株shdp5a1，其分类命名为streptococcus salivarius，保藏编号为cctcc no:m 2021060，保藏日期为2021年01月14日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址为中国武汉市武汉大学。
10.进一步地，该乳源性唾液链球菌分离自人新鲜母乳。
11.本发明的第二方面是提供上述乳源性唾液链球菌的分离方法，包括如下步骤：
12.步骤一，将新鲜母乳样本稀释后，取一部分涂布于kf链球菌琼脂平板上培养；
13.步骤二，培养完成后，挑选单菌落鉴定可得上述乳源性唾液链球菌。
14.进一步地，步骤一中将新鲜母乳稀释101‑
103倍。
15.进一步地，步骤一中的培养条件为37℃、厌氧，培养时间为2
‑
3天。
16.本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
17.本发明提供的一种用来预测婴幼儿肥胖病的乳源性唾液链球菌作为兼性厌氧菌，容易在在肠道中进行定植，为后期肠道菌群的成熟和稳定创造条件，因此通过对生命早期唾液链球菌的丰度检测可实现对子代肥胖的预测。
附图说明
18.本发明的公开的用来预测婴幼儿肥胖病的乳源性唾液链球菌shdp5a1，其已进行保藏，分类命名为streptococcus salivarius，其保藏编号为cctcc no:m2021060，保藏日期为2021年01月14日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址为中国武汉市武汉大学。
19.图1为本发明一实施中母乳菌群结构在孕妇肥胖组和正常组中的比较结果图；
20.图2为本发明一实施中6月龄婴幼儿肠道菌群结构在孕妇肥胖组和正常组中的比较结果图。
具体实施方式
21.本发明提供了一种用来预测婴幼儿肥胖病的乳源性唾液链球菌shdp5a1，现已进行保藏，其保藏编号为cctcc no:m 2021060，保藏日期为2021年01月14日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址为中国武汉市武汉大学。
22.在本发明一优选的实施例中，该乳源性唾液链球菌分离自人新鲜母乳。
23.下面通过具体实施例和附图对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
24.实施例1
25.本实施例提供一种乳源性唾液链球菌shdp5a1的分离方法，其中，该乳源性唾液链球菌的保藏编号为cctcc no：m 2021060，保藏日期为2021年01月14日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址为中国武汉市武汉大学；具体的分离方法如下：
26.新鲜母乳样本稀释10
‑
103倍后，取50
‑
200μl涂布于商品化kf链球菌琼脂平板上，37℃厌氧培养2
‑
3天，挑选单菌落鉴定获得。经鉴定，该菌株的16s rrna基因序列如下：
27.aggacgaacgctggcggcgtgcctaatacatgcaagtagaacgctgaagagaggagcttgctcttcttggaagagttgcgaacgggtgagtaacgcgtaggtaacctgccttgtagcgggggataactattggaaacgatagctaataccgcataacaatgggtgacccatgtcattcatttgaaaggggcaactgctccactacaagatggacctgcgttgtattagctagtaggtgaggtaacggctcacctaggcgacgatacatagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttcggcaatgggggcaaccctgaccgagcaacgccgcgtgagtgaagaaggttttcggatcgtaaagctctgttgtaagtcaagaacgagtgtgagagtggaaagttcacactgtgacggtagcttaccagaaagggacggctaattacgtgcccagcagccgcggtaatacgtaggtcccgagcgttgtccggatttattgggcgtaaagcgagcgcaggcggtttgataagtctgaagttaaaggctgtggctcaaccatagttcgctttggaaactgtcaaacttgagtgcagaaggggagagtggaattccatgtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaggaacaccggtggcgaaagcggctctctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgctaggtgttgggtcctttccgggattcagtgccgcagctaacgcattaagcactccgcctggggagtacgaccgcaaggttgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcccgatgctatttctagagataggaagttacttcggtacatcggtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccctattgttagttgccatcattcagttgggcactctagcgagactgccggtaataaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggttggtacaacgagttgcgagtcggtgacggcgagctaatctcttaaagccaatctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctacatgaagtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcacgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccacgagagtttgtaacacccgaagtcggtgaggtaaccttatggagccagccgcctaaggtgggatagatgattggggtgaagt。
28.验证实施例
29.本实施例通过检测母乳和婴幼儿粪便中的唾液链球菌丰度并检测婴幼儿的体重验证该乳源性唾液链球菌shdp5a1在婴幼儿肥胖预测中的作用。具体的实施过程和结果如下：
30.将10例孕期体重正常的孕妇和15例肥胖的孕妇(bmi>27kg/m2)纳入研究，婴儿分娩后产妇使用母乳喂养，签署知情同意书后进行乳汁收集。
31.首先将产妇乳房用生理盐水清洗后，用吸奶器抽取乳汁20ml，将5ml立即送至实验室进行稀释，取50
‑
200μl涂布于商品化kf链球菌琼脂平板上，37℃厌氧培养2
‑
3天，挑选单菌落进行菌落鉴定，其余15ml送至冰箱冻存，在婴幼儿6月龄进行体重等指标的随访，并再次收集粪便，送入冰箱冻存。所有样本进行16s rrna基因序列测序，结果如图1和图2所示。
32.根据对体重的随访记录和分析，肥胖孕妇分娩的6月龄婴幼儿平均体重要高于正常孕妇分娩组(9.08kg vs.8.37kg)；由图1和图2可知，其母乳中的唾液链球菌丰度要低于正常孕妇组(1.79％vs.2.73％)(图1)，且在6月龄婴幼儿肠道中同样存在较低的丰度
(10.88％vs.16.61％)(图2)。
33.以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对该实用进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。