一种黑色食品发酵型复合小分子肽、口服液及制备方法和应用

本发明属于小分子肽提取制备技术领域，具体涉及一种黑色食品发酵型复合小分子肽、口服液及制备方法和应用。

背景技术：

大脑中枢神经系统的反应速度以及学习能力对于青少年的成长是至关重要的。反应速度快、学习能力强、记忆力持久，对青少年的学习和生活都有着积极的作用。老年人一旦记忆力下降或者患上阿尔茨海默病，不仅在一定程度上代表着机体的衰老，也会严重影响个体及其家人的生活质量。因此，大脑健康对于青少年和老年人的生活质量都是非常重要的。

大脑功能减退的主要原因有以下几个方面：1.不良情绪；2.失眠；3.疾病；4.年龄；5.用脑过度；6.依赖；7.压力；8.不良嗜好。因此对于大脑益智的调节在当今社会背景下显得尤为重要。

目前在改善大脑功能和益智等方面的研究中，有利用海参花、鱼籽等进行天然产物提取。但是这些天然产物的取材并不固定，存在原材料获取难、原材料获取成本高、制备过程周期长、技术复杂等问题。因此，如何选择易于获得并且市场质量易于控制的原材料，进行食品或保健食品的研发？如何从制备工艺上达到高效能、缩短生产周期？如何通过生物学技术将大分子物质转化成利于人体吸收的小分子类物质？以上问题将成为当下益智类产品小分子肽类物质提取和制备技术中亟待解决的问题。

技术实现要素：

为了解决上述问题，本发明提供了一种黑色食品发酵型复合小分子肽、口服液及制备方法和应用。本发明提供的黑色食品发酵型复合小分子肽对增强记忆有良好的促进作用。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种黑色食品发酵型复合小分子肽，包括以下质量份的原料：黑松子5～10份、黑扁豆10～20份、黑豆10～20份和黑面菇10～20份；所述黑色食品发酵型复合小分子肽由上述原料经发酵和酶解得到。

本发明提供了上述技术方案中所述的黑色食品发酵型复合小分子肽的制备方法，包括如下步骤：将黑松子、黑扁豆、黑豆和黑面菇进行发酵，制备黑色食品发酵液；将得到的黑色食品发酵液进行酶解，得到蛋白酶解液；将蛋白酶解液超滤，得到黑色食品发酵型复合小分子肽。

优选的，所述发酵包括如下步骤：将黑松子、黑扁豆、黑豆、黑面菇和去离子水混合，加入复合益生菌进行发酵，得到黑色食品发酵液；所述黑松子、黑扁豆、黑豆和黑面菇的总质量和去离子水的体积比为1g:(5～10)ml；所述复合益生菌的添加量为0.5～1g/l；所述发酵的条件为：温度35～36℃，发酵时间36～48h。

优选的，所述复合益生菌包括嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、乳双歧杆菌和青春双歧杆菌；所述复合益生菌的单位为1xl0¹¹cfu/g。

优选的，所述酶解包括如下步骤：将黑色食品发酵液依次使用纤维素酶、木瓜蛋白酶进行酶解，得到蛋白酶解液；所述纤维素酶添加的量占黑色食品发酵液的质量百分比为0.1％～0.3％，所述木瓜蛋白酶添加的量占黑色食品发酵液的质量百分比为0.1％～0.3％；所述纤维素酶的酶活性为10万u/g，所述木瓜蛋白酶的酶活性为10万u/g；所述纤维素酶的酶解条件为：温度45～55℃，ph4.5～6.5，时间1～2h；所述木瓜蛋白酶的酶解条件为：温度55～65℃，ph6～7，时间1～2h。

优选的，所述超滤过程包括如下步骤：将蛋白酶解液通过分子量为2000da的滤膜进行超滤，收集滤液，得到黑色食品发酵型复合小分子肽。

优选的，超滤后还包括干燥步骤。

本发明提供了一种黑色食品发酵型复合小分子肽口服液，包括上述技术方案中所述的黑色食品发酵型复合小分子肽，所述黑色食品发酵型复合小分子肽的质量百分含量为10％～50％。

本发明提供了上述技术方案中所述的黑色食品发酵型复合小分子肽或上述技术方案中所述的制备方法得到的黑色食品发酵型复合小分子肽在制备益智保健品中的应用。

本发明提供了上述技术方案中所述的黑色食品发酵型复合小分子肽或上述技术方案中所述的制备方法得到的黑色食品发酵型复合小分子肽在提高记忆力保健品中的应用。

有益效果：

本发明提供了一种黑色食品发酵型复合小分子肽，包括以下质量份的原料：黑松子5～10份、黑扁豆10～20份、黑豆10～20份和黑面菇10～20份；所述黑色食品发酵型复合小分子肽由上述原料经发酵和酶解得到。本发明提供的黑色食品发酵型复合小分子肽的原料中包含了黑松子、黑扁豆、黑豆和黑面菇等食品，原材料来源较广、购买成本低、食品成分安全可靠、无毒副作用，坚持服用对增强记忆有良好的促进作用；同时，还能够对人体消化系统及内分泌系统有很好地调节和改善的作用。实施例的结果表明，本发明提供的黑色食品发酵型复合小分子肽能够显著缩短小鼠走迷宫的的时间，具有提高小鼠记忆力的作用。

附图说明

图1为小鼠迷宫试验示例图；

图2为实施例1不同处理组小鼠走出迷宫的时间结果；

图3为实施例2不同处理组小鼠走出迷宫的时间结果；

图4为实施例3不同处理组小鼠走出迷宫的时间结果；

图5为三组实施例复合小分子肽结果对比图。

具体实施方式

本发明提供了一种黑色食品发酵型复合小分子肽，包括以下质量份的原料：黑松子5～10份、黑扁豆10～20份、黑豆10～20份和黑面菇10～20份；所述黑色食品发酵型复合小分子肽由上述原料经发酵和酶解得到。

以质量份计，所述黑色食品发酵型复合小分子肽的原料包括5～10份黑松子，进一步优选为7～10份，更进一步优选为10份。黑松子中富含亚油酸、亚麻油酸等多种不饱和脂肪酸，有软化血管和防治心脑血管疾病动脉粥样硬化的作用。另外，黑松子中含有丰富的微量元素磷，对人的大脑神经有很好的修复作用，与黑豆、黑扁豆、黑面菇协同作用，对于改善记忆有明显的效果。

以质量份计，所述黑色食品发酵型复合小分子肽的原料包括10～20份黑扁豆，进一步优选为15～20份，更进一步优选为20份。黑扁豆有健脾的作用，是一味补脾而不滋腻，除湿而不燥烈的健脾化湿良药，对于脾胃调和起着很好的改善作用，黑扁豆与黑豆、黑面菇、黑松子协同作用，改善记忆力。

以质量份计，所述黑色食品发酵型复合小分子肽的原料包括10～20份黑豆，进一步优选为15～20份，更进一步优选为20份。黑豆蛋白质含量和脂肪含量可以满足人体需求，脂肪中的不饱和脂肪酸还可以降低血液中的胆固醇；黑豆含有丰富的维生素，如维生素b族和维生素e，黑豆中还含有丰富的黑色素和微量元素等，对于满足大脑对微量物质的需求有实质性的帮助。黑豆与黑松子、黑扁豆、黑面菇协同作用，改善记忆力。

以质量份计，所述黑色食品发酵型复合小分子肽的原料包括10～20份黑面菇，进一步优选为15～20份，更进一步优选为20份。黑面菇富含黑面菇多糖，具有增强机体免疫力、护肝、增强机体排毒能力，调节肠道菌群，促进消化和排便的作用。黑面菇属于黑色食物的范畴，与黑松子、黑扁豆和黑豆有协同作用，可以调节肠道菌群健康，有促进消化、增强机体免疫力和抗衰老的作用，并且对增强大脑记忆力有良好的促进作用。

本发明提供的黑色食品发酵型复合小分子肽通过“脑-肠轴系统”调节肠道环境，改善肠道菌群稳定及肠道健康环境，通过内分泌、免疫和代谢等多种机制影响中枢神经系统。对机体产生一定程度的神经元调节作用，从而达到益智的效果。

本发明提供了上述技术方案中所述的黑色食品发酵型复合小分子肽的制备方法，包括如下步骤：将黑松子、黑扁豆、黑豆和黑面菇进行发酵，得到黑色食品发酵液；将得到的黑色食品发酵液进行酶解，得到蛋白酶解液；将蛋白酶解液超滤，得到黑色食品发酵型复合小分子肽。

在本发明中，所述发酵包括如下步骤：将黑松子、黑扁豆、黑豆、黑面菇和去离子水混合，加入复合益生菌进行发酵，得到黑色食品发酵液。在本发明中，所述黑松子、黑扁豆、黑豆和黑面菇的总质量和去离子水的体积比为1g:(5～10)ml。本发明特定的比例有利于黑色食品原材料的发酵，一方面可以使黑色食品原材料在水溶液中充分混匀，有利于液体发酵，另一方面不会因为添加过多的水而稀释黑色食品发酵液的浓度。本发明所述复合益生菌优选包括嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、乳双歧杆菌和青春双歧杆菌；本发明所述复合益生菌的单位优选为1xl0¹¹cfu/g。在本发明中，复合益生菌的添加量为0.5～1g/l，进一步优选为1g/l，以使黑色食品和复合益生菌的效用发挥到最大。本复合益生菌对于肠道微生物有调节作用，可以稳定肠道内微环境。并且复合菌发酵的效果会优于单个益生菌发酵。本发明对复合益生菌的来源没有特殊要求。本发明实施例中使用的复合益生菌购于郑州百益宝生物技术有限公司，所述嗜酸乳杆菌的菌株编号为jyla-126，干酪乳杆菌的菌株编号为jylc-374，鼠李糖乳杆菌的菌株编号为jylr-005，长双歧杆菌的菌株编号为jblc-141，乳双歧杆菌的菌株编号为jybr-190，青春双歧杆菌的菌种编号为jyba-152。在本发明中，所述发酵的温度优选为35～36℃，进一步优选为36℃；所述发酵的时间优选为36～48h，进一步优选为48h。本发明选择特定的发酵条件可充分释放黑色食品中的异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、缬氨酸等7种人体必需的氨基酸和黑面菇多糖，具有增强机体免疫力，增强脑组织记忆的作用。

本发明将黑松子、黑扁豆、黑豆和黑面菇一起进行发酵，得到黑色食品发酵液。黑色食品发酵液中的黑松子含有丰富的磷脂和微量元素，能降低心脑血管疾病的发病率，同时提高大脑功能，刺激神经元调节中枢神经系统，增强记忆力；黑色食品发酵液中的黑扁豆含有丰富的花青素，具有清除自由基、抗氧化和抗衰老的作用，除此之外，黑扁豆含有丰富的蛋白质，脂肪和微量元素等营养物质，补充大脑营养；黑色食品中的黑豆含有丰富的蛋白质、维生素、黑色素等物质，对于机体的维生素和微量物质的补充起到重要作用；黑色食品发酵液中的黑面菇在菌类食材中蛋白质含量占比较多，大概有30％～45％，并且富含维生素以及碳水化合物以及铁、锌、锰等微量元素和矿物质；黑松子、黑扁豆、黑豆、黑面菇中的有效物质可以发挥协同作用，共同改善脑功能，提高记忆力。

得到黑色食品发酵液后，本发明将得到的黑色食品发酵液进行酶解，得到蛋白酶解液。本发明优选将黑色食品发酵液依次使用纤维素酶、木瓜蛋白酶进行酶解，得到蛋白酶解液。本发明通过多种酶的联合作用使黑松子、黑扁豆、黑豆、黑面菇中的植物纤维素和蛋白质等在特定条件下完全酶解，达到植物细胞壁充分破壁，细胞内营养物质充分释放，并将大分子蛋白质转化成更利于人体吸收的小分子肽，达到改善脑功能的效果。在本发明中，所述纤维素酶的酶活性优选为10万u/g；所述木瓜蛋白酶的酶活性优选为10万u/g。本发明对纤维素酶、木瓜蛋白酶的来源没有特殊要求，满足上述酶活性要求即可。本发明实施例中使用的对纤维素酶、木瓜蛋白酶均购自青岛隆川生物科技有限公司，木瓜蛋白酶编号为9001-73-4；纤维素酶编号为9012-54-8。在本发明中，所述纤维素酶添加的量占黑色食品发酵液的质量百分比优选为0.1％～0.3％，进一步优选为0.3％；所述木瓜蛋白酶添加的量占黑色食品发酵液的质量百分比优选为0.1％～0.3％，进一步优选为0.3％。本发明特定的比例可使酶解效率更高。在本发明中，所述纤维素酶的酶解条件优选为温度45～55℃，ph4.5～6.5，时间1～2h，进一步优选为温度50℃，ph5，时间2h；所述木瓜蛋白酶的酶解条件优选为温度55～65℃，ph6～7，时间1～2h，进一步优选为温度55℃，ph6，时间2h。本发明特定的酶解条件使酶解的效率达到最优效果。

酶解后，本发明优选对酶进行灭活，得到蛋白酶解液。本发明对酶灭活的方法没有特殊要求，采用本领域技术人员常规灭活方法即可。

得到蛋白酶解液后，本发明将蛋白酶解液经超滤，得到黑色食品发酵型复合小分子肽。本发明优选分子量为2000da的滤膜进行蛋白酶解液过滤，收集滤液。本发明通过超滤得到分子量小于2000da的黑色食品发酵型复合小分子肽。本发明优选超滤后的过滤液，并对其进行干燥，得到黑色食品发酵型复合小分子肽干粉。本发明对干燥的方法没有特殊要求，采用本领域常规的干燥方法即可。本发明优选喷雾干燥方法进行干燥，进一步优选为真空喷雾干燥。

本发明提供的黑色食品发酵型复合小分子肽的制备工艺简单、可重复性强、可量化生产。本发明最终得到的黑色食品发酵型复合小分子肽，多方位地对机体进行调节，改善肠道微生物菌群健康，增强机体免疫力及抗氧化能力，从而达到抗衰老，改善记忆力和益智的效果。

另外，本发明的黑色食品发酵型复合小分子肽制成干粉，便于储存，方便转化成各种剂型产品使用。黑色食品发酵型复合小分子肽干粉制备成功后，可制备成黑色食品发酵型复合小分子肽口服液或者压缩饼干等方便食品，增强口感，并且便于携带。

本发明提供了一种黑色食品发酵型复合小分子肽口服液，包括上述技术方案中所述的黑色食品发酵型复合小分子肽，所述黑色食品发酵型复合小分子肽的质量百分含量为10％～50％。，进一步优选为50％。在本发明中，所述黑色食品发酵型复合小分子肽口服液还包括甜味剂，所述甜味剂优选为木糖醇。在本发明中，所述甜味剂的质量百分含量优选为2％～5.5％，进一步优选为5.5％。本发明提供的黑色食品发酵型复合小分子肽口服液能够显著提高记忆力且口感好、安全无毒，适合长期服用。在本发明中，所述黑色食品发酵型复合小分子肽口服液的制备方法优选包括如下步骤：将黑色食品发酵型复合小分子肽干粉加超纯水溶解；溶解后加入甜味剂，调配比例后得到所述黑色食品发酵型复合小分子肽口服液。得到所述黑色食品发酵型复合小分子肽口服液后优选进行灭菌和罐瓶包装。本发明对灭菌的方法没有特殊要求，采用本领域常规灭菌方法即可。本发明实施例优选高温灭菌方法进行灭菌，所述高温灭菌的条件优选为120℃灭菌15min。本发明对罐瓶包装的方法没有特殊要求，采用本领域常规罐瓶包装的方法即可。

本发明提供了上述技术方案中所述的黑色食品发酵型复合小分子肽或上述技术方案中所述的制备方法得到的黑色食品发酵型复合小分子肽在制备益智保健品中的应用。

本发明提供了上述技术方案中所述的黑色食品发酵型复合小分子肽或上述技术方案中所述的制备方法得到的黑色食品发酵型复合小分子肽在提高记忆力保健品中的应用。

为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种黑色食品发酵型复合小分子肽、口服液及制备方法和应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

一种黑色食品发酵型复合小分子肽的制备方法：

各原材料组分及质量配比为：黑松子5g、黑扁豆10g、黑豆10g和黑面菇10g。

1、黑色食品发酵液的制备：将5g黑松子、10g黑扁豆、10g黑豆、10g黑面菇研磨成粉，加入350ml去离子水；然后加入复合益生菌0.4g，在36℃条件下发酵48h，得到黑色食品发酵液。复合益生菌购于郑州百益宝生物技术有限公司，包括嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、乳双歧杆菌和青春双歧杆菌，其中嗜酸乳杆菌的菌株编号为jyla-126，干酪乳杆菌的菌株编号为jylc-374，鼠李糖乳杆菌的菌株编号为jylr-005，长双歧杆菌的菌株编号为jblc-141，乳双歧杆菌的菌株编号为jybr-190，青春双歧杆菌的菌种编号为jyba-152。

2、黑色食品发酵型复合小分子肽的制备：(1)蛋白酶解液的制备：对黑色食品发酵液进行蛋白酶解，依次添加1.2g纤维素酶和1.2g木瓜蛋白酶；两种酶的酶活单位为10万u/g，两种酶均购自购自青岛隆川生物科技有限公司，木瓜蛋白酶编号为9001-73-4；纤维素酶编号为9012-54-8；纤维素酶的酶解条件为50℃、ph＝5、酶解2h；木瓜蛋白酶的酶解条件为55℃、ph＝6、酶解2h。酶解后，高温热处理使酶失活，得到蛋白酶解液。(2)黑色食品发酵型小分子肽干粉的制备：通过分子量为2000da的滤膜，将所得到的上述蛋白酶解液进行超滤，收集滤液。将分子量小于2000da的滤液浓缩，经真空喷雾干燥，得到黑色食品发酵型复合小分子肽干粉。

3、黑色食品发酵型复合小分子肽口服液的制备，方法为：将上述制备的黑色食品发酵型复合小分子肽干粉水解，加入甜味剂木糖醇，调配比例，使黑色食品发酵型复合小分子肽的质量百分含量为50％、木糖醇的质量百分含量为5.5％，微生物指标检测、重金属检测，合格后进行高温120℃杀菌，冷却包装，得到黑色食品发酵型复合小分子肽口服液。

实施例2

一种黑色食品发酵型复合小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，原料质量配比为黑松子7g、黑扁豆15g、黑豆15g和黑面菇15g；去离子水的添加量为350ml；复合益生菌的添加量为0.4g；纤维素酶的添加量为1.2g；木瓜蛋白酶的添加量为1.2g。

黑色食品发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用实施例2制备得到的黑色食品发酵型复合小分子肽配制而成。

实施例3

一种黑色食品发酵型复合小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，原料质量配比为黑松子10g、黑扁豆20g、黑豆20g和黑面菇20g；去离子水的添加量为350ml；复合益生菌的添加量为0.4g；纤维素酶的添加量为1.3g；木瓜蛋白酶的添加量为1.3g。

黑色食品发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用实施例3制备得到的黑色食品发酵型复合小分子肽配制而成。

对比例1

一种黑松子发酵型小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，所述原料质量配比为黑松子5g；去离子水的添加量为50ml。

一种黑松子发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用对比例1制备得到的黑松子发酵型小分子肽配制而成。

对比例2

一种黑扁豆发酵型小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，所述原料质量配比为黑扁豆10g；去离子水的添加量为100ml。

一种黑扁豆发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用对比例2制备得到的黑扁豆发酵型小分子肽配制而成。

对比例3

一种黑豆发酵型小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，所述原料质量配比为黑豆10g；去离子水的添加量为100ml。

一种黑豆发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用对比例3制备得到的黑豆发酵型小分子肽配制而成。

对比例4

一种黑面菇发酵型小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，所述原料质量配比为黑面菇10g；去离子水的添加量为100ml。

一种黑面菇发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用对比例4制备得到的黑面菇发酵型小分子肽配制而成。

对比例5

一种黑松子发酵型小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，所述原料质量配比为黑松子7g；去离子水的添加量为47ml。

一种黑松子发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用对比例5制备得到的黑松子发酵型小分子肽配制而成。

对比例6

一种黑扁豆发酵型小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，所述原料质量配比为黑扁豆15g；去离子水的添加量为100ml。

一种黑扁豆发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用对比例6制备得到的黑扁豆发酵型小分子肽配制而成。

对比例7

一种黑豆发酵型小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，所述原料质量配比为黑豆15g；去离子水的添加量为100ml。

一种黑豆发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用对比例7制备得到的黑豆发酵型小分子肽配制而成。

对比例8

一种黑面菇发酵型小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，所述原料质量配比为黑面菇15g；去离子水的添加量为100ml。

一种黑面菇发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用对比例8制备得到的黑面菇发酵型小分子肽配制而成。

对比例9

一种黑松子发酵型小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，所述原料质量配比为黑松子10g；去离子水的添加量为50ml。

一种黑松子发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用对比例9制备得到的黑松子发酵型小分子肽配制而成。

对比例10

一种黑扁豆发酵型小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，所述原料质量配比为黑扁豆20g；去离子水的添加量为100ml。

一种黑扁豆发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用对比例10制备得到的黑扁豆发酵型小分子肽配制而成。

对比例11

一种黑豆发酵型小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，所述原料质量配比为黑豆20g；去离子水的添加量为100ml。

一种黑豆发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用对比例11制备得到的黑豆发酵型小分子肽配制而成。

对比例12

一种黑面菇发酵型小分子肽，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，所述原料质量配比为黑面菇20g；去离子水的添加量为100ml。

一种黑扁豆发酵型小分子肽口服液，其制备方法同实施例1相同，不同之处在于，使用对比例12制备得到的黑面菇发酵型小分子肽配制而成。

应用例1

考察实施例1和对比例1～4的口服液对益智的效果，具体方案如下：

(1)动物：56只wistar小鼠购(自吉林大学白求恩医学院动物实验中心)，饲养于spf级动物房中适应一周，在此期间自由进食饮水。

(2)主要试剂：实施例1中的复合发酵型小分子肽水解口服液、黑松子发酵型小分子肽水解口服液、黑扁豆发酵型小分子肽口服液、黑豆发酵型小分子肽口服液、黑面菇发酵型小分子肽口服液、dha鱼油胶囊，购于广东佰腾药业有限公司、普通饲料、生理盐水。

(3)试验流程：将小鼠随机分为7组：空白对照组(a1)、复合小分子肽组(a2)、黑松子组(a3)、黑扁豆组(a4)、黑豆组(a5)、黑面菇组(a6)、阳性对照dha组(a7)。每组8只小鼠(初始体重20±2.0g，spf级)除空白对照组之外，复合小分子肽组、黑松子组、黑扁豆组、黑豆组、黑面菇组分别进行对应的口服液1ml/(只·次)的灌胃，空白对照组则使用生理盐水对小鼠进行1ml/(只·次)的灌胃。dha组使用的是市面上成熟的产品，进行每次1mg的胶囊内容物灌胃。每天2次，即早晚各一次。与此同时空白组给等量的生理盐水，分别记录7天和14天不同组小鼠走迷宫所用时间，小鼠迷宫试验示例图如图1，每组小鼠平均走出迷宫的时间结果如表1和图2所示。

表1不同处理组小鼠走出迷宫的时间结果

注：^*表示p<0.05，即试验组组与空白组比较。

由表1和图2的结果可知，黑色食品发酵型复合小分子肽与空白对照组和黑松子发酵型小分子肽组、黑扁豆发酵型小分子肽组、黑豆发酵型小分子肽组、黑面菇发酵型小分子肽组、dha组对比，黑色食品发酵型复合小分子肽组小鼠经过7天服用后，走迷宫的时间较短，表明该组动物具有较好的学习能力，大脑反应速度比较快；并且14天后，再进行迷宫实验，黑色食品发酵型复合小分子肽组小鼠走迷宫时间再次明显缩短，表明黑色食品发酵型复合小分子肽组小鼠的记忆力增强，经过长期服用可以提高学习能力和反应能力，还能增强小鼠之前走迷宫的记忆力，很快能找到迷宫出口。与空白对照组相比黑色食品发酵型复合小分子肽组具有显著差异，对于机体有增强学习能力，缩短反应时间，增加记忆的作用。黑色食品发酵型复合小分子肽的益智效果要优于黑松子小分子肽、黑扁豆小分子肽、黑豆小分子肽、黑面菇小分子肽、dha鱼油胶囊。

应用例2

考察实施例2和对比例5～8的口服液对益智的效果，具体方案如下：

(1)动物：56只wistar小鼠购(自吉林大学白求恩医学院动物实验中心)，饲养于spf级动物房中适应一周，在此期间自由进食饮水。

(2)主要试剂：实施例2中的复合发酵型小分子肽水解口服液、黑松子发酵型小分子肽水解口服液、黑扁豆发酵型小分子肽口服液、黑豆发酵型小分子肽口服液、黑面菇发酵型小分子肽口服液、dha鱼油胶囊，购于广东佰腾药业有限公司、普通饲料、生理盐水。

(3)试验流程：将小鼠随机分为7组：空白对照组(b1)、复合小分子肽组(b2)、黑松子组(b3)、黑扁豆组(b4)、黑豆组(b5)黑面菇组(b6)、阳性对照dha组(b7)。每组8只小鼠(初始体重20±2.0g，spf级)除空白对照组之外，复合小分子肽组、黑松子组、黑扁豆组、黑豆组、黑面菇组分别进行对应的口服液1ml/(只·次)的灌胃，空白对照组则使用生理盐水对小鼠进行1ml/(只·次)的灌胃。dha组使用的是市面上成熟的产品，进行每次1mg的胶囊内容物灌胃。每天2次，即早晚各一次。与此同时空白组给等量的生理盐水，分别记录7天和14天不同组小鼠走迷宫所用时间，小鼠迷宫试验示例图如图1，每组小鼠平均走出迷宫的时间结果如表2和图3所示。

表2不同处理组小鼠走出迷宫的时间结果

注：^*表示p<0.05，即试验组与空白组比较。

由表2和图3的结果可知，黑色食品发酵型复合小分子肽组的小鼠走出迷宫的时间最短，其结果与空白对照组相比具有显著差异，表明了其反应能力和学习能力都比较强。进一步证明了黑色食品复合小分子肽口服液对于大脑有较好的益智作用。其他组别与空白对照组相比均无显著性差异，与市面已有的dha鱼油胶囊相比，本发明的黑色食品发酵型复合小分子肽对小鼠的学习认知作用更明显，益智效果更好。与实施例1中的黑色食品复合小分子肽组相比，随本实施例原材料配比调整，实施例2中的黑色食品发酵型复合型小分子肽的浓度增加，小鼠走迷宫的时间缩短，结果表明高浓度的黑色食品复合小分子肽具有更强地缩短反应时间，提高学习能力，以及增强记忆力的作用。

应用例3

考察实施例3和对比例9～12的口服液对益智的效果，具体方案如下：

动物试验具体步骤如下：

(1)动物：56只wistar小鼠购(自吉林大学白求恩医学院动物实验中心)，饲养于spf级动物房中适应一周，在此期间自由进食饮水。

(2)主要试剂：实施例2中的复合发酵型小分子肽水解口服液、黑松子发酵型小分子肽水解口服液、黑扁豆发酵型小分子肽口服液、黑豆发酵型小分子肽口服液、黑面菇发酵型小分子肽口服液、dha鱼油胶囊，购于广东佰腾药业有限公司、普通饲料、生理盐水。

(3)试验流程：将小鼠随机分为7组：空白对照组(c1)、复合小分子肽组(c2)、黑松子组(c3)、黑扁豆组(c4)、黑豆组(c5)黑面菇组(c6)、阳性对照dha组(c7)。每组8只小鼠(初始体重20±2.0g，spf级)除空白对照组之外，复合小分子肽组、黑松子组、黑扁豆组、黑豆组、黑面菇组分别进行对应的口服液1ml/(只·次)的灌胃，空白对照组则使用生理盐水对小鼠进行1ml/(只·次)的灌胃。dha组使用的是市面上成熟的产品，进行每次1mg的胶囊内容物灌胃。每天2次，即早晚各一次。与此同时空白组给等量的生理盐水，分别记录7天和14天不同组小鼠走迷宫所用时间，小鼠迷宫试验示例如图1，每组小鼠平均走出迷宫的时间结果如表3和图4所示。

表3不同处理组小鼠走出迷宫的时间结果

注：^*表示p<0.05，即试验组组与空白组比较。

由表3和图4的结果可知，实施例3中的黑色食品发酵型复合小分子肽组的小鼠走出迷宫的时间最短，7天和14天的数据与空白对照组相比有显著性，表明了其反应能力和学习能力都比较强。进一步证明了黑色食品复合小分子肽口服液对于大脑有较好的益智作用。其他组别与空白对照组相比数据并无显著性。与dha组相比，本发明的配方对小鼠的学习认知作用更明显，益智效果更好。与实施例1和实施例2中的黑色食品复合小分子肽组相比，随本实施例原材料配比调整，实施例3中的黑色食品发酵型复合型小分子肽的浓度最大，小鼠走迷宫的时间也是最短的，见图5。结果表明高浓度的黑色食品复合小分子肽具有更好地缩短反应时间，提高学习能力，以及增强记忆力的作用。

上述实施例的结果表明，本发明提供的黑色食品发酵型复合小分子肽能够显著提高记忆力，改善大脑功能，且原材料来源较广、购买成本低、食品成分安全可靠、无毒副作用。

尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其它实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。