1.一种乳铁蛋白制备方法,其包括如下步骤:
a)使原料乳液通过阳离子交换树脂层析柱;
b)用洗脱液对步骤a)中的阳离子交换树脂进行包含至少两次洗脱的第一组洗脱,得到洗脱收集液;
c)将步骤b)中的至少第2次洗脱收集液除盐;
d)使步骤c)中经除盐的洗脱收集液通过阳离子交换树脂层析柱;
e)用洗脱液对步骤d)中的阳离子交换树脂进行包含至少两次洗脱的第二组洗脱,得到洗脱收集液;
f)将步骤e)中的至少最后一次洗脱收集液除盐并干燥得到乳铁蛋白产物。
2.如权利要求1所述的方法,其中:
在步骤b)中,第一组洗脱包含至少三次洗脱;
在步骤f)中,将步骤e)中第二组洗脱中至少最后一次洗脱收集液与步骤b)中第一组洗脱中的至少最后一次洗脱收集液混合后,再进行除盐并干燥得到乳铁蛋白产物。
3.如权利要求1-2之一所述的方法,其中步骤b)中使用浓度依次升高的洗脱液进行程序洗脱;且步骤e)中使用浓度依次升高的洗脱液进行程序洗脱。
4.如权利要求1-3之一所述的方法,其中步骤a)中提供的原料乳液包含过氧化物酶。
5.如权利要求1-4任一项所述的方法,其中:
在步骤b)中,第一组洗脱包含三次洗脱;
在步骤c)中,将步骤b)中的第2次洗脱收集液除盐;
在步骤d)中,使步骤c)中经除盐的洗脱收集液通过阳离子交换树脂层析柱;
在步骤e)中,用洗脱液对步骤d)中的阳离子交换树脂进行包含两次洗脱的第二组洗脱,得到洗脱收集液;
在步骤f)中,将步骤e)中的第二洗脱收集液与步骤b)中的第三洗脱收集液组合,除盐并干燥得到乳铁蛋白产物。
6.如权利要求1-5任一项所述的方法,其中步骤a)中的乳液为牛或羊脱脂乳、或乳清液。
7.如权利要求1-6任一项所述的方法,其中步骤a)和步骤d)中的阳离子交换树脂各自独立地为琼脂糖型离子交换树脂、丙烯酸型离子交换树脂、聚苯乙烯型离子交换树脂中的任意一种或多种。
8.如权利要求1-7任一项所述的方法,其中步骤b)中使用的洗脱液各自独立地为氯化钠或氯化钾溶液,优选地其钠或钾离子的浓度各自独立地为0.07-0.8mol/l、优选0.1-0.6mol/l、优选0.12-0.5mol/l;和/或步骤e)中使用的洗脱液各自独立地为氯化钠或氯化钾溶液,优选地其钠或钾离子的浓度各自独立地为0.07-0.8mol/l、优选0.1-0.6mol/l、优选0.12-0.5mol/l。
9.如权利要求1-8任一项所述的方法,其中
步骤b)中的第一组洗脱包括顺序地使用第1洗脱液b1、和第2洗脱液b2进行洗脱,优选地第1洗脱液b1、和第2洗脱液b2各自独立地为氯化钠或氯化钾溶液;优选地第1洗脱液b1、和第2洗脱液b2中钠或钾离子的浓度的盐浓度依次升高;优选地,第1洗脱液b1中钠或钾离子的浓度为0.07~0.2mol/l、优选0.1~0.18mol/l、优选0.12~0.15mol/l;优选地,第2洗脱液b2中钠或钾离子的浓度为0.15~0.80mol/l、优选0.3-0.6mol/l、优选0.4-0.5mol/l;
优选地,步骤b)中的第一组洗脱包括顺序地使用第1洗脱液b1’、第2洗脱液b2’、和第3洗脱液b3’进行洗脱,优选地第1洗脱液b1’、第2洗脱液b2’、和第3洗脱液b3’各自独立地为氯化钠或氯化钾溶液;优选地第1洗脱液b1’、第2洗脱液b2’、和第3洗脱液b3’中钠或钾离子的浓度的盐浓度依次升高;优选地,第1洗脱液b1’中钠或钾离子的浓度为0.07~0.2mol/l、优选0.1~0.18mol/l、优选0.12~0.15mol/l;优选地,第2洗脱液b2’中钠或钾离子的浓度为0.15~0.28mol/l、优选0.18~0.26mol/l;优选地,第3洗脱液b3’中钠或钾离子的浓度为0.2~0.8mol/l、优选0.3-0.6mol/l、优选0.4-0.5mol/l;
和/或
步骤e)中的第二组洗脱包括顺序地使用第一洗脱液e1和第二洗脱液e2进行洗脱,优选地第一洗脱液e1和第二洗脱液e2各自独立地为氯化钠或氯化钾溶液;优选地第一洗脱液e1和第二洗脱液e2中钠或钾离子的浓度的盐浓度依次升高;优选地,第一洗脱液e1中钠或钾离子的浓度为0.07~0.2mol/l、优选0.1~0.18mol/l、优选0.12~0.15mol/l;优选地,第二洗脱液e2中钠或钾离子的浓度为0.2~0.8mol/l、优选0.3-0.6mol/l、优选0.4-0.5mol/l。
10.如权利要求1-9任一项所述的方法,其中
步骤c)和f)的除盐各自独立地通过超滤进行,和/或
步骤f)中的干燥通过冷冻干燥或者低温喷雾干燥进行。