类风湿因子IgG、IgM、IgA复合质控品及其制备方法、应用与流程

文档序号:26228919发布日期:2021-08-10 16:28阅读:来源:国知局

技术特征:

1.类风湿因子igg、igm、iga复合质控品的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

s1、分别获取小鼠rf抗体的可变区基因序列、人igm恒定区基因序列和人iga恒定区基因序列,小鼠rf抗体的可变区基因序列如seqidno.2所示,其氨基酸序列如seqidno.4所示;

s2、根据步骤s1获得的基因序列按以下排序顺序合成全基因序列:

小鼠rf抗体的可变区基因序列-linker-人iga恒定区基因序列-linker-人igm-恒定区基因序列;获得的全基因序列如seqidno.1所示,其氨基酸序列如seqidno.3所示;

s3、将步骤s2获得的全基因序列引入含有人iggfc片段基因表达序列的pfuse-higg1-fc2载体中,制备同时含有人igg、人igm、人igafc段和小鼠rf抗体可变区的重组质粒;

s4、将步骤s3获得的重组质粒转染哺乳细胞,获取同时含有人igg、人igm、人igafc段和小鼠rf抗体可变区的重组抗体。

2.根据权利要求1所述的类风湿因子igg、igm、iga复合质控品的制备方法,其特征在于,步骤s1中,小鼠rf抗体的可变区基因序列的获取过程如下:

通过类风湿因子抗原免疫小鼠获得小鼠rf抗体,通过抗体氨基酸序列测序得到小鼠rf抗体的可变区氨基酸序列,根据哺乳动物密码子偏爱性,合成小鼠rf抗体的可变区基因序列。

3.根据权利要求2所述的类风湿因子igg、igm、iga复合质控品的制备方法,其特征在于,小鼠rf抗体的获得过程如下:

将类风湿因子抗原通过多次免疫小鼠获得可表达rf抗体的脾细胞;提取脾细胞与sp2/0细胞融合、筛选、验证得到可高效表达抗rf抗原单克隆抗体的细胞株;通过细胞培养,表达纯化得到高纯度的单克隆抗体。

4.根据权利要求1所述的类风湿因子igg、igm、iga复合质控品的制备方法,其特征在于,步骤s2中,全基因序列的合成过程如下:

针对小鼠rf抗体的可变区基因序列、人igm恒定区基因序列和人iga恒定区基因序列,插入刚性linker连接,n端加入蜂毒信号肽序列,在序列上游加入限制性核酸内切酶位点ecori,下游序列插入限制性核酸内切酶位点ncoi。

5.根据权利要求1所述的类风湿因子igg、igm、iga复合质控品的制备方法,其特征在于,步骤s4中采用的哺乳细胞为hek293哺乳细胞。

6.根据权利要求1所述的类风湿因子igg、igm、iga复合质控品的制备方法,其特征在于,还包括以下步骤:

将获得的同时含有人igg、人igm、人igafc段和小鼠rf抗体可变区的重组抗体制备成缓冲溶液。

7.如权利要求1-6任一项所述的制备方法制备的同时含有人igg、人igm、人igafc段和小鼠rf抗体可变区的重组抗体。

8.一种类风湿因子igg、igm、iga复合质控品,其特征在于,包括如权利要求1-6任一项所述的制备方法制备的同时含有人igg、人igm、人igafc段和小鼠rf抗体可变区的重组抗体。

9.根据权利要求8所述的一种类风湿因子igg、igm、iga复合质控品,其特征在于,由含有重组抗体的缓冲液配制而成。

10.如权利要求1-6任一项所述的制备方法制备的同时含有人igg、人igm、人igafc段和小鼠rf抗体可变区的重组抗体在抗类风湿因子抗体igg检测试剂盒、抗类风湿因子抗体igg检测试剂盒、抗类风湿因子抗体iga检测试剂盒和抗类风湿因子抗体iga/g/m检测试剂盒中的应用。


技术总结
本发明公开了类风湿因子IgG、IgM、IgA复合质控品及其制备方法、应用,制备方法为通过用类风湿因子抗原免疫小鼠获得小鼠RF抗体,通过抗体氨基酸序列测序得到小鼠RF抗体的可变区氨基酸序列,通过序列设计和全基因合成RF抗体可变区‑人IgA恒定区‑人IgM恒定区并联碱基序列,并将序列引入含有人IgG Fc片段基因表达序列的pFUSE‑hIgG1‑Fc2载体中,制备同时含有人IgG、IgM、IgA Fc段和RF抗体可变区的重组质粒,将该重组质粒转染HEK293哺乳细胞,获取同时含有人IgG、IgM、IgA Fc段和RF抗体可变区的重组抗体,将该重组抗体配制为质控品,可同时用于RF‑IgG、RF‑IgM、RF‑IgA及RF‑IgG/M/A四类检测试剂盒,其均一性、精密性和稳定性较好,既方便了临床操作,又极大的节约了成本,也极大的控制了质控品间的批间差。

技术研发人员:陈鑫;潘敬梅;秦枫;黄敬双;曹长春;王健;张小飞;颜松;周玥;张伟
受保护的技术使用者:四川携光生物技术有限公司
技术研发日:2021.04.29
技术公布日:2021.08.10
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