一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌H16及其应用的制作方法

一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌h16及其应用
技术领域
1.本发明涉及微生物技术领域，更具体的说是涉及一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌h16及其应用。


背景技术：

2.稻曲病是由稻曲病菌—稻绿核菌ustilaginodea virens(cooke)takahashi侵染造成的一种水稻穗部真菌病害，在水稻生长后期感染颖花、颖壳、谷粒，俗称“丰收病”。稻曲病为世界性水稻病害，在中国、日本、美国、印度、菲律宾等多个国家均有发生。近年来，已经由水稻上的次要病害升级为主要病害之一。稻曲病菌繁殖过程中消耗病谷粒大量养分，不仅危害发生稻曲病的谷粒本身，而且影响临近谷粒的营养输送，造成空秕率增加，结实率和千粒重下降，从而导致减产。稻曲病不但在水稻穗部形成稻曲球，严重影响谷粒的生长，降低水稻的产量与品质，而且其病原真菌稻绿核菌所产生的稻曲病菌毒素对人畜也具有毒害作用。目前，已逐渐引起了专家学者对稻曲病产生菌以及所产稻曲病菌毒素的广泛关注。
3.在自然生态系统中，病原菌可能存在多种“天敌”或者“竞争对手”，因此能够杀死或者抑制病原菌的微生物都具有潜在的生防价值。拮抗菌可广泛应用于多种病虫害的防治。微生物拮抗制剂可通过寄生、抗生或竞争等方式直接产生抑菌效果，也可通过诱导植物自身的抗性起到间接保护效果。通过提取对病原菌有拮抗活性的抑菌物质，或者筛选对病原菌有拮抗活性的微生物来进行生物控制是一项具有可持续发展潜力的新型措施。生防菌可能来源于植物体内，也有可能是来自相关生存环境。
4.因此，提供一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌h16及其应用是本领域技术人员亟需解决的问题。


技术实现要素：

5.有鉴于此，本发明提供了一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌h16及其应用，纺锤形赖氨酸芽孢杆菌h16用于拮抗稻曲病菌，防治稻曲病。
6.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
7.一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(lysinibacillusfusiformis)h16，保藏编号为cctcc no：m 2021179，已保藏于中国典型培养物保藏中心，简称cctcc，地址为中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2021年02月02日，分类命名为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌h16，lysinibacillusfusiformis h16。
8.进一步，所述的一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌h16在拮抗稻曲病菌中的应用。
9.进一步，所述的一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌h16在防治稻曲病中的应用。
10.进一步，所述的一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌h16在制备防治稻曲病微生物菌剂中的应用。
11.经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌h16及其应用，纺锤形赖氨酸芽孢杆菌h16能够抑制水稻稻曲病菌菌株yy7850的
生长，这是纺锤形赖氨酸芽孢杆菌首次被发现具有拮抗稻曲病菌病原菌的实例，鉴于菌株h16具有抑制水稻稻曲病病原菌的能力，因此，该菌株具有开发成为水稻稻曲病生防菌的潜力。
附图说明
12.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
13.图1附图为本发明菌株h16的菌落形态；
14.图2附图为本发明菌株h16的系统发育树；
15.图3附图为本发明菌株h16对稻曲病菌菌株yy7850的抑菌效果图；
16.其中，a为对照；b为拮抗图。
具体实施方式
17.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
18.实施例1菌株h16的筛选和鉴定
19.将从中国水稻研究所试验田土壤通过富集培养、分离纯化到的多株细菌菌株进行稻曲病菌拮抗实验，通过拮抗实验成功筛选到一株细菌菌株，命名为菌株h16。菌落形态如图1所示。菌株h16菌落呈圆形，光滑，灰白色，扁平状，透明，直径1
‑
2mm，边缘整齐。
20.菌株h16经16s测序及比对分析鉴定为一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(lysinibacillusfusiformis)菌株，系统发育树如图2所示。
21.实施例2拮抗试验
22.(1)菌株培养
23.a、稻曲病菌菌株yy7850的培养：
24.将本实验室保存的稻曲病菌菌株yy7850接种到马铃薯蔗糖琼脂培养基(psa)平板上，28℃恒温培养，待菌落长出后接种到马铃薯蔗糖液体培养基(ps)中，150rpm，28℃恒温培养7d，八层纱布过滤获得孢子悬液，备用。
25.马铃薯蔗糖琼脂培养基(psa)：培养基采用北京索莱宝科技有限公司的psa琼脂培养基，按每升水加47.0g psa琼脂培养基的量配制psa琼脂培养基，分装后，121℃高压湿热灭菌20分钟，取出摇匀，冷却后4℃贮存备用。
26.马铃薯蔗糖液体培养基(ps)：马铃薯200g加水1000ml煮沸20～30min，用八层纱布过滤，滤液加蔗糖20g，定容至1l，121℃高压湿热灭菌20min后，取出冷却备用。
27.b、拮抗菌株h16的培养：
28.将菌株h16接种到lb斜面上，37℃恒温培养1d，待菌落长出后接种到lb液体培养基中，150rpm，37℃恒温培养1d，备用。
29.lb斜面：培养基采用生工生物工程(上海)股份有限公司生产的lb琼脂培养基，按每升水加35.0g lb琼脂培养基的量配制lb斜面，分装后，121℃高压湿热灭菌20分钟，趁热摆斜面，待斜面冷却后，4℃贮存备用。
30.lb液体培养基：培养基采用生工生物工程(上海)股份有限公司生产的lb液体培养基，按每升水加35.0g lb液体培养基的量配制lb液体培养基，分装后，121℃高压湿热灭菌20分钟，取出冷却备用。
31.(2)拮抗试验
32.取步骤(1)培养好的稻曲病菌yy7850孢子悬液(孢子数量为106cfu/ml)150μl，用灭菌后的涂布棒均匀涂布在直径为9cm的无菌psa平板上，28℃恒温预培养1d后，取直径为6mm的灭菌滤纸片于psa平板中间，加入5μl步骤(1)中培养好的拮抗菌株h16菌液(1
×
106cfu/ml)(以只涂布稻曲病菌yy7850孢子悬液不加拮抗菌h16的平板为对照)，28℃恒温正置培养，直到对照平板上长满菌落，测量抑菌圈半径。拮抗结果见图3，由图3可见，菌株h16对稻曲病菌菌株yy7850有明显的抑菌效果，抑菌圈半径为3.5cm。从而说明，筛选到的菌株h16具有抑制水稻稻曲病病原菌的能力，具有开发成为水稻稻曲病生防菌的潜力。
33.对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。