本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种蓝铜胜肽的合成方法。
背景技术：
1973年，美国dr.lorenpickart博士研究发现一种由三个氨基酸-甘氨酸，组氨酸，赖氨酸和铜离子组成的小肽即蓝铜胜肽(ghk-cu)。这也开启了蓝铜胜肽在除皱、抗衰、修复等美容方面的应用，以其分子量极小、极易吸收、无刺激、无负担、高活性、高效用等优点，成为当前最具逆转肌龄功效的高端成分。
在如今祛皱抗衰被重点关注的时代，蓝铜胜肽作为抗衰美容的新宠，是21世纪最无刺激的抗衰老除皱产品。
蓝铜胜肽系列产品目前在国内应用非常广泛，其不仅被用于高端化妆品中的祛皱抗衰等功能，还被用于激光美容后肌肤的修复，此外还包括漱口水等口腔修复以及皮肤损伤后的伤口愈合治疗等，安全、高效，效果显著，市场前景良好。
现有技术对于蓝铜胜肽产品的合成方法大多采用液相合成法，申请号为202010593858.9的中国发明专利申请公布了一种ghk三肽的合成方法，其以甘氨酸、组氨酸、h-lys-oh为主要原料，通过依次合成boc-gly-oh、boc-gly-osu、his(trt)、boc-gly-his(trt)-oh、boc-gly-his(trt)-osu、lys(boc)、boc-gly-his(trt)-lys(boc)-oh、ghk三肽三氟乙酸盐、ghk三肽若干中间产物，最后再经纯化得到ghk三肽，工艺步骤非常复杂，后处理过程比较繁琐，生产周期长。另外，申请号为202010590015.3的中国发明专利公布了一种ghk铜肽的合成方法，以ghk三肽为原料，将其与铜络合剂相络合，并通过过滤、旋干、冻干等后处理手段，得到高纯度的ghk铜肽，该合成方法得到的产品具有一定的吸潮性，而且由于工艺中采用了冻干工艺，因冻干设备的局限性，难以做到工业化生产。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种工艺步骤更加简单的蓝铜胜肽的合成方法，利用氯乙酰氯代替甘氨酸，避免了甘氨酸氨基的保护，通过控制羧基活化温度，避免了组氨酸咪唑基团上的仲胺的保护，最终得到晶体状蓝铜胜肽，不吸潮，可进行工业化生产。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：蓝铜胜肽的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)mca-his-oh(氯乙酰-l-组氨酸)的合成
搅拌下，向反应容器内依次加入水、四氢呋喃、组氨酸，用30％的氢氧化钠溶液调ph＝10，冷阱降温，料温降至5℃以下时，向料液中滴加氯乙酰氯和四氢呋喃的混合溶液，滴加过程中用30％的氢氧化钠溶液控ph＝10,设定温度下反应一定时间，用盐酸调ph＝7析出大量固体，搅拌一定时间后过滤，滤饼真空干燥箱干燥，得到mca-his-oh；
(2)mca-his-osu(氯乙酰-l-组氨酰琥珀酰亚胺)的合成
搅拌下，向反应容器内依次加入四氢呋喃、mca-his-oh、n-羟基琥珀酰亚胺，冷阱降温，使料温降至0℃，然后缓慢滴加二环己基碳二亚胺和四氢呋喃的混合料液，滴完后升至10-15℃反应一定时间，过滤，减压浓缩得到固体；
(3)mca-his-lys(tfa)-oh的合成
搅拌下，向反应容器内依次加入水、h-lys(tfa)-oh、碳酸氢钠，向料液中滴加四氢呋喃和mca-his-osu的混合溶液，滴加完设定温度下反应一定时间，然后在设定温度下减压浓缩，浓缩后的料液用浓盐酸调ph＝2,用乙酸乙酯萃取，水相用正丁醇萃取，合并正丁醇相，设定温度下减压浓缩得到固体；
(4)h-gly-his-lys-oh(甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸)的合成
搅拌下，向反应容器内加入氨水，外浴降温至5℃以下时，分4次加入mca-his-lys(tfa)-oh，加完后升温至设定温度反应一定时间，反应完后减压浓缩，得到蜡状固体，提纯后得到白色固体；
提纯过程为：在反应装置中，搅拌下依次加入水、蜡状固体，用盐酸调ph＝8，搅拌下向料液中滴加不良溶剂乙腈，加完缓慢降温至0℃，并保持0℃搅拌一定时间，过滤，滤饼50℃真空干燥箱干燥，得到白色固体；
(5)蓝铜胜肽的合成：
搅拌下，向反应容器内依次加入纯化水、h-gly-his-lys-oh,用盐酸调ph＝7±0.5，加入一水醋酸铜或硫酸铜或二水氯化铜搅拌一定时间，缓慢向料液滴加乙醇，加完后缓慢降温至10±2℃，保持料温10±2℃搅拌一定时间，过滤，滤饼真空干燥得到产品蓝铜胜肽晶体。
五步反应步骤过程如下：
本发明的有益效果是：本发明采用通过氯乙酰氯与组氨酸反应生成氯乙酰-l-组氨酸,然后与n-羟基琥珀酰亚胺反应得到mca-his-osu,然后与保护的赖氨酸反应得到mca-his-lys(tfa)-oh，然后与氨水反应得到ghk，通过与醋酸铜或硫酸铜或氯化铜反应得到铜肽的工艺步骤，利用mca-his-oh通过活化羧基，与h-lys(tfa)-oh反应得到mca-his-lys(tfa)-oh,通过与氨水反应，在mca变成甘氨酸的同时脱掉tfa，既避免了甘氨酸的保护、组氨酸的保护、boc-gly-oh羧基的活化，同时大幅度地减少了合成步骤，最后通过结晶的方式得到晶体状蓝铜胜肽，不吸潮、具有金属光泽，因结晶得到合格产品，避免了冻干，可实现工业化生产。实现了利用廉价易得的原料生产出高附加值的产品，大大提高了经济效益。
具体实施方式
下面对本发明的原理和特征进行描述，所举实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
本实施例蓝铜胜肽的合成方法包括如下步骤：
(1)mca-his-oh的合成
在装有温度计、搅拌器的250ml三颈瓶中，搅拌下依次加入30ml水、20ml四氢呋喃、组氨酸10g(64.45mmol)，用30％氢氧化钠溶液调ph＝10，冷阱降温，料温降至5℃时，向料液中滴加氯乙酰氯10.92g(96.68mmol)和10ml四氢呋喃的混合溶液，滴加过程中用30％氢氧化钠溶液控ph＝10,25℃反应2h，用盐酸调ph＝7析出大量固体，搅拌1h后过滤，滤饼真空干燥箱干燥得到14.16g固体，摩尔收率92.45％；
(2)mca-his-osu的合成
在装有温度计、搅拌器的250ml三颈瓶中，搅拌下依次加入四氢呋喃30ml、mca-his-oh10g(43.17mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺5.22g(45.33mmol)，冷阱降温，料温降至0℃时，缓慢滴加二环己基碳二亚胺9.8g(47.49mmol)和四氢呋喃20ml的混合料液，滴完后升至10℃反应2h，用过滤装置过滤，减压浓缩得到固体13.23g，摩尔收率93.20％；
(3)mca-his-lys(tfa)-oh的合成
在装有温度计、搅拌器的250ml三颈瓶中，搅拌下依次加入水30ml、h-lys(tfa)-oh8.1g(33.46mmol)、碳酸氢钠5.11g(60.84mmol)，向料液中滴加四氢呋喃30ml和mca-his-osu10g(30.42mmol)的混合溶液，滴加完25℃反应2h，45℃减压浓缩，浓缩后的料液用浓盐酸调ph＝2,用25ml乙酸乙酯萃取杂质2次，水相用25ml正丁醇萃取3次，合并正丁醇相，65℃减压浓缩得到固体12.62g，摩尔收率91.00％；
(4)h-gly-his-lys-oh的合成
在装有温度计、搅拌器的100ml三颈瓶中，搅拌下加入氨水30.75g(219.39mmol)，外浴降温至5℃以下，分4次加入mca-his-lys(tfa)-oh10g(21.94mmol)，加完后升温至50℃反应2h，反应完减压浓缩，得到蜡状固体；
在反应装置中，搅拌下依次加入水20ml、h-gly-his-lys-oh固体，用盐酸调ph＝8，搅拌下向料液中滴加40ml乙腈，加完缓慢降温至0℃，并保持0℃搅拌2h，过滤，滤饼50℃真空干燥箱干燥12h，得到白色固体7.06g,摩尔收率94.50％；
(5)蓝铜胜肽的合成：
在装有温度计、搅拌器的100ml三颈瓶中，搅拌下依次加入20ml纯化水、h-gly-his-lys-oh5g(14.69mmol),用盐酸调ph＝6.5，加入一水醋酸铜2.93g(14.69mmol)搅拌0.5小时，缓慢向料液滴加80ml乙醇，加完后缓慢降温至10±2℃，保持料温10±2℃搅拌2h，过滤，滤饼真空干燥得到纯度98.7％产品5.32g,摩尔收率89.90％。
实施例2
(1)mca-his-oh的合成
在装有温度计、搅拌器的250ml三颈瓶中，搅拌下依次加入30ml水、20ml四氢呋喃、组氨酸10g(64.45mmol)，用30％氢氧化钠溶液调ph＝10，冷阱降温，料温降至5℃时，向料液中滴加氯乙酰氯10.92g(96.68mmol)和10ml四氢呋喃的混合溶液，滴加过程中用30％氢氧化钠溶液控ph＝10,25℃反应2h，用盐酸调ph＝7析出大量固体，搅拌1h后过滤，滤饼真空干燥箱干燥得到14.17g固体，摩尔收率92.56％；
(2)mca-his-osu的合成
在装有温度计、搅拌器的250ml三颈瓶中，搅拌下依次加入四氢呋喃30ml、mca-his-oh10g(43.17mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺5.22g(45.33mmol)，冷阱降温，料温降至0℃时，缓慢滴加二环己基碳二亚胺9.8g(47.49mmol)和四氢呋喃20ml的混合料液，滴完后升至15℃反应2h，用过滤装置过滤，减压浓缩得到固体13.25g，摩尔收率93.40％；
(3)mca-his-lys(tfa)-oh的合成
在装有温度计、搅拌器的250ml三颈瓶中，搅拌下依次加入水30ml、h-lys(tfa)-oh8.1g(33.46mmol)、碳酸氢钠5.11g(60.84mmol)，向料液中滴加四氢呋喃30ml和mca-his-osu10g(30.42mmol)的混合溶液，滴加完至25℃反应2h，45℃减压浓缩，浓缩后的料液用浓盐酸调ph＝2,用25ml乙酸乙酯萃取杂质2次，水相用25ml正丁醇萃取3次，合并正丁醇相，65℃减压浓缩得到固体12.71g，摩尔收率91.67％；
(4)h-gly-his-lys-oh的合成
在装有温度计、搅拌器的100ml三颈瓶中，搅拌下加入氨水30.75g(219.39mmol)，外浴降温至5℃以下，分4次加入mca-his-lys(tfa)-oh10g(21.94mmol)，加完后升温至50℃反应2h，反应完减压浓缩，得到蜡状固体；
在反应装置中，搅拌下依次加入水20ml、h-gly-his-lys-oh固体，用盐酸调ph＝8，搅拌下向料液中滴加40ml乙腈，加完缓慢降温至0℃，并保持0℃搅拌2h，过滤，滤饼50℃真空干燥箱干燥12h，得到白色固体7.11g,摩尔收率95.15％；
(5)蓝铜胜肽的合成：
在装有温度计、搅拌器的100ml三颈瓶中，搅拌下依次加入20ml纯化水、h-gly-his-lys-oh5g(14.69mmol),用盐酸调ph＝7，加入硫酸铜2.34g(14.69mmol)搅拌0.5小时，缓慢向料液滴加80ml乙醇，加完后缓慢降温至10±2℃，保持料温10±2℃搅拌2h，过滤，滤饼真空干燥得到纯度98.4％的产品5.36g,摩尔收率90.60％。
实施例3
(1)mca-his-oh的合成
在装有温度计、搅拌器的250ml三颈瓶中，搅拌下依次加入30ml水、20ml四氢呋喃、组氨酸10g(64.45mmol)，用30％氢氧化钠溶液调ph＝10，冷阱降温，料温降至5℃时，向料液中滴加氯乙酰氯10.92g(96.68mmol)和10ml四氢呋喃的混合溶液，滴加过程中用30％氢氧化钠溶液控ph＝10,25℃反应2h，用盐酸调ph＝7析出大量固体，搅拌1h后过滤，滤饼真空干燥箱干燥得到14.15g固体，摩尔收率92.42％；；
(2)mca-his-osu的合成
在装有温度计、搅拌器的250ml三颈瓶中，搅拌下依次加入四氢呋喃30ml、mca-his-oh10g(43.17mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺5.22g(45.33mmol)，冷阱降温，料温降至0℃时，缓慢滴加二环己基碳二亚胺9.8g(47.49mmol)和四氢呋喃20ml的混合料液，滴完后升至15℃反应2h，用过滤装置过滤，减压浓缩得到固体13.23g，摩尔收率93.22％；
(3)mca-his-lys(tfa)-oh的合成
在装有温度计、搅拌器的250ml三颈瓶中，搅拌下依次加入水30ml、h-lys(tfa)-oh8.1g(33.46mmol)、碳酸氢钠5.11g(60.84mmol)，向料液中滴加四氢呋喃30ml和mca-his-osu10g(30.42mmol)的混合溶液，滴加完25℃反应2h，45℃减压浓缩，浓缩后的料液用浓盐酸调ph＝2,用25ml乙酸乙酯萃取杂质2次，水相用25ml正丁醇萃取3次，合并正丁醇相，65℃减压浓缩得到固体12.73g，摩尔收率91.81％；
(4)h-gly-his-lys-oh的合成
在装有温度计、搅拌器的100ml三颈瓶中，搅拌下加入氨水30.75g(219.39mmol)，外浴降温至5℃以下，分4次加入mca-his-lys(tfa)-oh10g(21.94mmol)，加完后升温至50℃反应2h，反应完减压浓缩，得到蜡状固体；
在反应装置中，搅拌下依次加入水20ml、h-gly-his-lys-oh固体，用盐酸调ph＝8，搅拌下向料液中滴加40ml乙腈，加完缓慢降温至0℃，并保持0℃搅拌2h，过滤，滤饼50℃真空干燥箱干燥12h，得到白色固体7.12g,摩尔收率95.35％；
(5)蓝铜胜肽的合成：
在装有温度计、搅拌器的100ml三颈瓶中，搅拌下依次加入20ml纯化水、h-gly-his-lys-oh5g(14.69mmol),用盐酸调ph＝7.5，加入二水氯化铜2.34g(14.69mmol)搅拌0.5小时，缓慢向料液滴加80ml乙醇，加完后缓慢降温至10±2℃，保持料温10±2℃搅拌2h，过滤，滤饼真空干燥得到纯度98.5％的产品5.40g,摩尔收率91.20％。
上述实施例中每步骤对应的摩尔收率＝生成物的实际生成的物质的量/生成物的理论生成的物质的量*100％。