一种治疗银屑病的齐墩果酸衍生物及其制备方法与流程

本发明属于化学药物合成
技术领域：
，涉及一种治疗银屑病的齐墩果酸衍生物及其制备方法。
背景技术：
：齐墩果酸属于五环三萜类化合物，广泛存在于自然界中，具有多种显著的生物活性。研究表明，齐墩果酸对银屑病的治疗具有很好的功效。但是齐墩果酸的大分子量和低水溶性限制了其生物利用度及在临床中的应用，同时，齐墩果酸中存在的羧基结构，使齐墩果酸成为酸性药物，无论是口服给药还是皮肤给药，都会对人体产生刺激性反应。对齐墩果酸结构改性，以此来提高齐墩果酸的生物利用度，降低本身的副作用，使齐墩果酸发挥最大的药用价值。技术实现要素：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种治疗银屑病的齐墩果酸衍生物，其衍生物具有式(i)分子结构：本发明的另一个目的在于提供一种治疗银屑病的齐墩果酸衍生物的制备方法，包括如下步骤：(1)将齐墩果酸溶解于四氢呋喃中，加入硼烷二甲硫醚络合物，温度0～10℃，回流反应6～15h，升温至室温，过滤去除沉淀，滤液浓缩成浸膏，用水、醇淋洗，真空干燥即可；(2)将步骤(1)的产物溶解于有机溶剂中，加入苯磺酰氯，在碱性条件下，室温回流反应20～24h，过滤、浓缩去除有机溶剂，加入饱和碳酸氢钠溶液，用石油醚萃取2～3次，合并石油醚层，用无水硫酸镁干燥，浓缩，将浓缩产物进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯与丙酮的混合液为洗脱剂梯度洗脱，得到目标产物纯化液，再将目标产物的纯化液利用凝胶柱纯化，以乙酸乙酯与氯仿的混合液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩、真空干燥即得最终目标产物；步骤(1)中，所述齐墩果酸与硼烷二甲硫醚络合物的摩尔比为1:(1.5～1.8)；所述醇淋洗是用10％的乙醇淋洗2～8bv，再用70～85％乙醇淋洗；步骤(2)中，所述的有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、甲醇或乙醇；所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、三甲胺、三乙胺、咪唑、吡啶或dmap；所述的硅胶纯化中，乙酸乙酯与丙酮的体积比为10:1；所述凝胶柱为sephadexlh-20，所述凝胶柱直径为15mm，长度为300mm；所述混合液中，乙酸乙酯与氯仿的体积比为8:3。根据上述制备方法的一种优选，包括如下步骤：(1)将15g齐墩果酸溶解于四氢呋喃中，加入3.7g硼烷二甲硫醚络合物，温度0～5℃，回流反应13～15h，升温至室温，过滤去除沉淀，滤液浓缩成浸膏，用水淋洗，之后用10％的乙醇淋洗2～8bv，再用80％乙醇淋洗，真空干燥即可；(2)将步骤(1)的产物溶解于二氯甲烷中，加入苯磺酰氯，加入氢氧化钠，室温回流反应20～24h，过滤、浓缩去除有机溶剂，加入饱和碳酸氢钠溶液，用石油醚萃取2～3次，合并石油醚层，用无水硫酸镁干燥，浓缩，将浓缩产物进行硅胶柱层析，以体积比为10:1的乙酸乙酯与丙酮的混合液为洗脱剂梯度洗脱，得到目标产物纯化液，再将目标产物利用sephadexlh-20凝胶胶柱层析纯化，以体积比为8:3的乙酸乙酯与氯仿的混合液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩、真空干燥即得最终目标产物。本发明衍生物在用于治疗银屑病药物中的应用。与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明所述的齐墩果酸衍生物能够显著改善咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型动物的皮肤炎症反应，降低皮损程度，缓解皮肤红斑、鳞屑、浸润等症状；同时，齐墩果酸衍生物还能降低齐墩果酸衍生物能够显著改善患有银屑病小鼠的皮肤炎症反应，使与银屑病相关的炎症因子il-17、ifn-γ的含量。由此说明，齐墩果酸衍生物具有开发为治疗银屑病模型小鼠的前景，具有很好的社会效益和经济效益。附图说明图1：实施例1为治疗银屑病的齐墩果酸衍生物核磁共振氢谱图。具体实施方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。实施例1(1)将15g齐墩果酸溶解于100ml四氢呋喃中，加入3.7g硼烷二甲硫醚络合物，温度0～5℃，回流反应13～15h，升温至室温，过滤去除沉淀，滤液浓缩成浸膏，用水淋洗，之后用10％的乙醇淋洗2～8bv，再用80％乙醇淋洗，真空干燥即可；(2)将步骤(1)的产物溶解于100ml二氯甲烷中，加入苯磺酰氯，加入氢氧化钠，室温回流反应20～24h，过滤、浓缩去除有机溶剂，加入饱和碳酸氢钠溶液，用石油醚萃取2～3次，合并石油醚层，用无水硫酸镁干燥，浓缩，将浓缩产物进行硅胶柱层析，以体积比为10:1的乙酸乙酯与丙酮的混合液为洗脱剂梯度洗脱，得到目标产物纯化液，再将目标产物利用sephadexlh-20凝胶胶柱层析纯化，以体积比为8:3的乙酸乙酯与氯仿的混合液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩、真空干燥即得最终目标产物。产率为82.01％。实验例2齐墩果酸衍生物对银屑病的药学研究1.实验方法选取昆明种健康小鼠，在适宜环境中培养后，使用1％水合氯醛(0.2ml/20g)经腹腔注射麻醉，去除小鼠背部毛发，形成大小2cm×3cm的裸露区。小鼠随机分组，分为：正常组(对照组1)、模型组(对照组2)、卤米松组(对照组3)、齐墩果酸组(对照组4)、齐墩果酸衍生物组(实验组)。正常组：小鼠裸露部位每天涂抹凡士林软膏42mg；模型组：小鼠背部裸露区涂抹咪喹莫特42mg/次，每日1次，连续处理7天；卤米松组：小鼠裸露部位上午定时涂抹咪喹莫特42mg/次，每日1次，下午定时给予卤米松涂抹42mg/次，连续给药7天。齐墩果酸组和实验组：小鼠裸露部位上午定时涂抹咪喹莫特42mg/次，每日1次，下午定时涂抹齐墩果酸衍生物和齐墩果酸，0.96mg/次，连续给药7天。2.评价指标(1)银屑病面积与严重性指数(pasi):在第7天时，按照pasi标准对小鼠背部皮肤皮损情况进行评分。包括红斑、鳞屑、浸润三大指标(每个指标分数0-4分)，且三者相加的和为总积分，即综合pasi评分。0分:无；1分:轻度；2分:中度；3分:重度；4分:极重度。(2)脾指数：第7天实验结束后，小鼠麻醉处死后，取出小鼠脾脏组织用生理盐水清洗后、吸干水分，称取脾脏重量。脾脏指数＝小鼠脾脏重量/体重×100％(3)皮损病理变化和表皮厚度：处死小鼠后，用剪刀将皮损部位的皮肤取下，将其剪成小块。做成石蜡切片进行he染色，观察皮损病理变化。同时选取切片上5个代表性位点，测量其厚度，以5个位点的平均值为表皮厚度。(4)il-17和inf-γ含量：从小鼠脾脏中收集脾淋巴细胞，培养72小时后，采用elisa法，按照试剂盒说明书进行检测。3.实验结果(1)银屑病面积与严重性指数(pasi)研究结果表明，第7天时，正常组小鼠背部皮肤光滑、无红斑、鳞屑与浸润性斑块；模型组小鼠背部皮肤出现大面积红斑与浸润性斑块，出现大量白色鳞屑，皮损严重甚至出现皲裂，形成典型银屑病症状；卤米松对照组小鼠仅略微出现红斑、鳞屑、浸润性斑块；实验组小鼠也仅略微出现红斑、鳞屑、浸润性斑块，皮损程度显著低于模型组，几乎与卤米松组相当；齐墩果酸组小鼠出现中等程度的皮损现象，皮肤表面出现较多红斑、有一定数量的浸润性斑块。表1齐墩果酸衍生物对银屑病模型小鼠综合pasi评分影响组别评分对照组10.00±0.00对照组26.49±1.61对照组30.56±0.30对照组45.37±1.21实验组0.77±0.24由表1数据表明，相比较于模型组，齐墩果酸衍生物组、齐墩果酸组小鼠的综合pasi评分均由不同程度减低，其中齐墩果酸衍生物组小鼠的综合pasi评分下降程度更加明显，表明齐墩果酸衍生物能显著改善咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型动物的皮肤炎症，降低皮损伤程度，缓解皮肤红斑、鳞屑、浸润性斑块等病症，其作用效果几乎与阳性药物卤米松相当。(2)体重和脾脏指数测定结果表2齐墩果酸衍生物对银屑病小鼠体重和脾脏指数的影响组别体重(g)脾指数(mg/g)对照组125.35±0.545.10±2.41对照组218.18±1.5812.03±3.16对照组323.78±1.726.53±2.58对照组420.48±1.3911.05±1.98实验组24.01±1.156.06±2.50由表2数据表明，与正常组相比，模型组、齐墩果酸组小鼠体重显著下降，卤米松组、齐墩果酸衍生物组几乎没有明显变化，说明在此剂量下齐墩果酸衍生物对小鼠体重的影响很小，说明齐墩果酸衍生物对患病小鼠具有更小的毒副作用。由表2数据表明，模型组小鼠的脾指数明显高于正常组，说明造模成功，齐墩果酸衍生物能够显著降低银屑病小鼠的脾指数，其效果与卤米松组相当，但是齐墩果酸组小鼠的脾指数几乎没有影响。(3)皮损病理变化和表皮厚度显微镜下观察发现，正常组小鼠的皮厚度比较薄，可以看到2～3层正常形态的细胞；模型组小鼠表皮棘细胞显著增厚，出现明显角化过度伴角化不全现象，血管增生扩张明显，表现出典型的银屑病样症状，说明造模成功；与模型组相比，齐墩果酸衍生物组和卤米松组小鼠皮肤表层较为完整，仅略有角化过度。但是，齐墩果酸组小鼠表皮棘细胞层显著增厚以及角化过度和角化不完现象明显。表3齐墩果酸衍生物对银屑病小鼠表皮厚度的影响组别表皮厚度(μm)对照组133.80±2.18对照组2100.73±4.02对照组343.61±1.74对照组491.02±2.46实验组44.19±2.37(4)细胞因子水平测试现代医学认为，银屑病的发病与自身免疫有关。il-17和ifn-γ是银屑病患者重要的促炎性细胞因子，一旦细胞因子被打破，扰乱细胞因子新陈代谢周期及免疫平衡，从而导致牛皮癣的的发生。表4齐墩果酸衍生物对银屑病小鼠细胞因子水平的影响组别il-17(ng/ml)ifn-γ(ng/ml)对照组17.62±1.524.09±0.81对照组215.03±2.179.12±.53对照组38.72±1.904.78±2.02对照组413.59±2.528.74±2.80实验组9.76±2.225.94±1.85由表4数据表明，相比较于模型组，齐墩果酸衍生物组小鼠脾脏淋巴上清液中il-17和ifn-γ的含量显著下降，但其效果低于卤米松；齐墩果酸组小鼠淋巴脾脏淋巴上清液中il-17和ifn-γ的含量并没有明显下降。说明齐墩果酸衍生物可以抑制il-17和ifn-γ的含量，以此来缓解银屑病症状。当前第1页12