技术特征：
1.一种环氧化物水解酶突变体，其特征在于：所述环氧化物水解酶突变体为下列之一：将seq id no.2所示的氨基酸序列第104位的苏氨酸突变为赖氨酸；将seq id no.2所示的氨基酸序列第179位的异亮氨酸突变为亮氨酸；将seq id no.2所示的氨基酸序列第232位的天冬氨酸突变为丝氨酸。2.一种编码权利要求1所述环氧化物水解酶突变体的基因。3.一种含有权利要求2所述基因的重组载体。4.一种根据权利要求1所述环氧化物水解酶突变体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、将seq id no.1所示序列与pet
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28a(+)质粒连接，构成重组表达载体pet
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28a(+)
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ehj；s2、以重组载体pet
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28a(+)
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ehj为模板，利用特异性定点突变引物构建环氧化物水解酶突变体重组表达载体；s3、将重组载体pet
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28a(+)
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ehj及突变体载体热击转化感受态，涂布抗性lb固体培养基中，过夜培养后进行菌落pcr验证；s4、将经过验证的阳性克隆子提取质粒，转化e.coli bl21(de3)后再次筛选出阳性克隆子，接种至含硫酸卡那霉素的lb培养基中，37℃振荡培养过夜，再按体积分数为2％的接种量接入装有100ml lb培养基的500ml三角瓶中，置于37℃和200rpm的条件下摇床振荡培养，当培养液od600达到合适值时，加入iptg作为诱导剂进行诱导表达。5.根据权利要求4所述的环氧化物水解酶突变体的制备方法，其特征在于，步骤s2所述特异性定点突变引物为：thr104
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f：gtagagcttctcaaggatggttgggaac；thr104
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r：gttcccaaccatccttgagaagctctac；lle179
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f：gtgcagcgactttatcgggcattgctccgt；lle179
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r：acggagcaatgcccgataaagtcgctgcac；asp232
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f：cgactttctggtttcaagtataagcgaa；asp232
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r：ttcgcttatacttgaaaccagaaagtcg。6.根据权利要求4所述的环氧化物水解酶突变体的制备方法，其特征在于，步骤s3所述感受态细胞为大肠杆菌dh5α感受态细胞，所述抗性lb固体培养基为含卡那霉素抗性的lb固体培养基。7.根据权利要求4所述的环氧化物水解酶突变体的制备方法，其特征在于，步骤s4所述含硫酸卡那霉素的lb培养基中硫酸卡那霉素的浓度为50mg/l。8.根据权利要求4所述的环氧化物水解酶突变体的制备方法，其特征在于，步骤s4所述培养液od600的合适值为0.6
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0.8。9.根据权利要求4所述的环氧化物水解酶突变体的制备方法，其特征在于，步骤s4所述iptg诱导剂的浓度为0.5mmol/l，诱导条件为在28℃条件下培养10h。
技术总结
本发明公开了一种催化效率提高的环氧化物水解酶突变体及其制备方法，环氧化物水解酶突变体是将如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第104位、第179位和第232位的氨基酸序列进行单点突变获得。制备方法：将编码环氧化物水解酶的基因克隆到质粒pET
技术研发人员：刘宇 刘佳琦 张畅
受保护的技术使用者：深圳市微滴科技顾问有限公司
技术研发日：2021.05.17
技术公布日：2021/9/9