一种拓展性多能干细胞诱导分化为心肌细胞的方法及应用

文档序号:26263711发布日期:2021-08-13 19:15阅读:来源:国知局

技术特征:

1.拓展的多潜能干细胞在制备心肌细胞中的应用。

2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用包括:将拓展的多潜能干细胞诱导分化为心肌细胞。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述诱导分化方法包括:通过小分子分阶段调控wnt信号通路,诱导eps细胞分化为心肌细胞。

4.一种拓展性多能干细胞诱导分化为心肌细胞的方法,其特征在于,所述方法包括:通过小分子分阶段调控wnt信号通路,诱导eps细胞分化为心肌细胞。

5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述方法包括:通过小分子分阶段调控wnt信号通路,诱导eps细胞分化为心肌细胞,在小分子分阶段调控前,所述方法还包括将epsc经mtesrtm1和/或knockouttmdmem/f-12+b27+fgf2+tgfβ快速过渡转化;

优选的,b27细胞培养添加剂中含有胰岛素;培养时间控制为1-4天;

进一步优选的,当拓展性多能干细胞汇合度达到50%以上时即可起始诱导分化形成心肌细胞,优选大于85%,更优选为95%以上。

6.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述小分子分阶段调控,具体包括:先添加化学小分子chir99021,进行培养;再添加wnt信号通路抑制化学小分子iwr和iwp2,进行培养。

7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述chir99021的使用浓度控制为5-10μm,优选为7.5μm;使用iwr的浓度范围为2.5-7.5μm,优选为5μm;使用iwp2的浓度范围1-5μm,优选为2.5μm;

在小分子分阶段调控时期,使用的细胞培养基包括1640+b27;优选的,b27细胞培养添加剂中不含有胰岛素;

优选的,小分子分阶段调控时期培养时间控制为3-7天,优选为4-5天。

8.权利要求3-7任一项所述方法获得的心肌细胞。

9.权利要求3-7任一项所述方法和/或权利要求8所述心肌细胞在如下任意一种或多种中的应用:

a)制备心肌产品用于相关基础研究;

b)药物筛选及心脏相关疾病诊断;

c)心脏相关疾病治疗。

10.如权利要求9所述应用,其特征在于,

所述应用a)中,所述相关基础研究包括对心肌细胞结构功能、特性、信号通路以及电生理检测及研究;

所述应用b)中,包括药物安全评价和新药分子研发;

所述应用c)中,所述心脏相关疾病包括心梗;所述治疗方法包括细胞治疗。


技术总结
本发明提供一种拓展性多能干细胞诱导分化为心肌细胞的方法及应用,属于生物医学技术领域。本发明诱导分化所用试剂为化学成分明确的培养基,可获得纯度高、批次间分化效率稳定的心肌细胞。与现有多能干细胞分化的心肌细胞相比,本发明获得的心肌细胞早期增殖能力强,延长培养并构建成心肌微组织后成熟度高,排列结构更整齐,功能性收缩力增强,因此适用于心脏疾病机理研究、药物筛选和细胞治疗等多种应用,因此具有良好的实际应用之价值。

技术研发人员:张冬卉;李俐;蔡琳;万忠均;汪如香
受保护的技术使用者:湖北大学
技术研发日:2021.05.17
技术公布日:2021.08.13
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