一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂的制作方法

1.本发明涉及蛋白免疫印迹领域，尤其涉及一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂。


背景技术：

2.免疫印迹，又称蛋白质印迹(westernblot)，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样本中的某种蛋白质的方法。免疫印迹方法首先是使用凝胶电泳分离天然或变性的蛋白质，然后将凝胶中的蛋白质用电印迹方法转移到化学惰性的高分子转移膜上，之后将目的蛋白的特异性一级抗体(一抗)与转移膜上的目的蛋白识别并进行免疫结合反应，再用标记过的二级抗体(二抗)与一抗结合，之后用对二抗分子中标记物的检测证明目的蛋白的存在及表达量的区别。抗体与抗原能够特异性结合是基于抗原决定簇(表位)与抗体超变区的沟槽分子表面的结构互性与亲合性而结合的。是抗原和对应抗体在一定条件下特异结合形成可逆性抗原一抗体复合物的过程。而我们最终的结果是呈现在显影的x胶片上的。整个显影过程是在暗室下进行的，显影的过程中不可避免的会对x胶片造成部分污染，例如指纹，铅笔印等。因此急需研发一种可以有效去除x胶片上的污渍，并且不会影响胶片的性能和影像质量的胶片清洗剂。


技术实现要素：

3.有鉴于此，本发明提出了蛋白质印迹实验中可以有效去除x胶片上的污渍，并且不会影响胶片的性能和影像质量的胶片清洗剂。
4.本发明的技术方案是这样实现的：一方面，本发明提供了一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂，按照质量百分数为100％计算，包括表面活性剂1.6
‑
4.5％，无水乙醇0.1
‑
0.5％，余量为去离子水。
5.在以上技术方案的基础上，优选的，所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠、二辛基琥珀酸磺酸钠和羧甲基纤维素中的一种或多种。
6.在以上技术方案的基础上，优选的，按照质量百分数为100％计算，还包括助剂0.9
‑
2.2％，所述助剂为硼酸钠、碳酸钠和硅酸钠中的一种或多种。
7.在以上技术方案的基础上，优选的，按照质量百分数为100％计算，所述胶片清洗剂包括：十二烷基硫酸钠1
‑
3％、二辛基琥珀酸磺酸钠0.5
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1％、羧甲基纤维素0.1
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0.5％、硼酸钠0.5
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1.0％、碳酸钠0.3
‑
0.7％、硅酸钠0.1
‑
0.5％、无水乙醇0.1
‑
0.5％，余量为去离子水。
8.在以上技术方案的基础上，优选的，按照质量百分数为100％计算，所述胶片清洗剂包括：十二烷基硫酸钠3％、二辛基琥珀酸磺酸钠1％、羧甲基纤维素0.5％、硼酸钠1.0％、碳酸钠0.7％、硅酸钠0.5％、无水乙醇0.15％，余量为去离子水。
9.另一方面，本发明还提供了一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂的制
10.备方法，包括如下步骤：
11.s1，按照质量百分数分别称取表面活性剂、助剂、无水乙醇和去离子水，将表面活性剂和助剂依次加入去离子水中，加热至80
‑
100℃溶解得到混合液；
12.s2，待s1混合液冷却至20
‑
30℃时，加入无水乙醇，搅拌溶解，制得胶片清洗剂。
13.再者，本发明还提供了一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂的使用方法，包括如下步骤：蛋白免疫印迹显影结束后，取下晾干的胶片，将上述胶片清洗剂喷洒在胶片上，然后用无尘布快速擦拭即可。
14.最后，本发明提供的一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂，所述胶片清洗剂用于清洗蛋白免疫实验中显影的x光胶片。
15.本发明的一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂相对于现有技术具有以下有益效果：
16.(1)本发明的清洗剂毒性较小，化学性质较为稳定，没有腐蚀性，不会产生静电而引起燃烧，并且不会影响胶片的性能和影像质量。
17.(2)本发明的清洗剂可以去除x光胶片上的灰尘、油渍、铅笔印、墨汁等污渍，使蛋白免疫实验结果更加干净明显。
18.(3)本发明清洗剂的使用方法简单且快速高效。
附图说明
19.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
20.图1为本发明的蛋白质免疫印迹实验中使用清洗剂前的胶片显影图；
21.图2为本发明的显影后使用对比例的清洗剂清洁后的胶片图；
22.图3为本发明的显影后使用含有表面活性剂不含助剂的清洗剂的实施例清洁后的胶片图；
23.图4为本发明显影后使用含有表面活性剂和助剂的清洗剂的实施例清洁后的胶片图。
具体实施方式
24.下面将结合本发明实施方式，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
25.实施例一
26.一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂，按照重量百分数为100％计算，包括十二烷基硫酸钠1.6％、无水乙醇0.1％，余量为去离子水。
27.实施例二
28.一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂，按照重量百分数为100％计算，包括十二烷基硫酸钠1％、二辛基琥珀酸磺酸钠2％、无水乙醇0.3％，余量为去离子水。
29.实施例三
30.一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂，按照重量百分数为100％计算，包括十二烷基硫酸钠1％、二辛基琥珀酸磺酸钠1％和羧甲基纤维素2％、无水乙醇0.4％，余量为去离子水。
31.实施例四
32.一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂，按照质量百分数为100％计算，包括十二烷基硫酸钠1.6％、二辛基琥珀酸磺酸钠2.9％、硼酸钠0.9％、碳酸钠1.3％、无水乙醇0.5％，余量为去离子水。
33.实施例五
34.一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂，按照重量百分数为100％计算，包括：十二烷基硫酸钠1％、二辛基琥珀酸磺酸钠0.5％、羧甲基纤维素0.1％、硼酸钠0.5％、碳酸钠0.3％、硅酸钠0.1％、无水乙醇0.1％，余量为去离子水。
35.实施例六
36.一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂，按照重量百分数为100％计算，包括：十二烷基硫酸钠2％、二辛基琥珀酸磺酸钠0.8％、羧甲基纤维素0.3％、硼酸钠0.8％、碳酸钠0.5％、硅酸钠0.3％、无水乙醇0.5％，余量为去离子水。
37.实施例七
38.一种用于蛋白免疫印迹实验的胶片清洗剂，按照重量百分数为100％计算，所述胶片清洗剂包括：十二烷基硫酸钠3％、二辛基琥珀酸磺酸钠1％、羧甲基纤维素0.5％、硼酸钠1.0％、碳酸钠0.7％、硅酸钠0.5％、无水乙醇0.15％，余量为去离子水。
39.对比例一
40.以表面活性剂10％十二烷基磺酸钠和pbs为对照，来验证本发明的清洗效果。
41.对比例二
42.以30％双氧水和5％乙醇为清洗剂，来验证本发明的清洗效果。
43.实施例1
‑
7的胶片清洗剂的制备方法，包括如下步骤：
44.s1，按照实施例1
‑
8分别称取表面活性剂和/或助剂、无水乙醇和去离子水，将表面活性剂和助剂依次加入去离子水中，加热至80
‑
100℃溶解得到混合液；
45.s2，待s1混合液冷却至20
‑
30℃时，加入无水乙醇，搅拌溶解，制得胶片清洗剂。
46.蛋白质免疫印迹实验方法，包括如下步骤：
47.s1，电泳，以小鼠肝hepg2细胞系进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，每个孔的蛋白上样量为50μg。配制10％的聚丙烯酰胺分离胶混合液，聚丙烯酰胺凝分离胶混合液的组成为30％丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺、1.5mol/l tris
‑
hcl(ph8.8)、10％吐温、10％过硫酸铵、temed。取一定量的上述溶液或试剂混合均匀后全量加样于玻璃板中，并缓慢加入去离子水为封水层，室温下放置30min等待分离胶凝固。待分离胶凝固后倒掉所封水层，加入2ml聚丙烯酰胺浓缩胶，同时在胶面上插上梳子。待浓缩胶凝固后，缓慢拔掉梳子，加样于上样孔中，80v电压跑电泳，待样品在浓缩胶和分离胶的界面处压成一条线时，调电压至150v。电泳结束后，分开两块玻璃板，切除浓缩胶；
48.s2，转膜：pvdf膜事先用甲醇激活3min，然后将海绵和滤纸以及pvdf膜都浸泡在转膜液里，将胶轻轻放在事先预冷的transferbuffer里面，转膜用的夹板黑色放上，白色放
下；先垫一层海绵，再垫滤纸，然后将胶放在滤纸上，pvdf膜在放在胶上；接着对称着继续放滤纸和海绵，最后把夹板夹好，黑对黑，白对红的插在转膜槽中(黑胶白膜)；将电压调至300ma，时间为120min；
49.s3，封闭：用5％的脱脂奶粉(使用tbs配置)封闭液进行封闭，室温下反应2小时；
50.s4，一抗孵育：一抗孵育
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根据稀释比1:1000的比例，加入一抗(cd19抗体)，室温反应2小时；洗膜
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次日，用事先配好的tbst室温洗涤3遍，每次10min；
51.s5，二抗孵育
‑
根据稀释比1:1000的比例，加入二抗(mouse anti
‑
tubulin
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beta)，室温孵育2小时，用tbst洗涤3遍，每次10min；
52.s6，显色：使用ecl化学发光超敏显色试剂盒进行显色，数码化学发光成像系统tanon 4500sf进行曝光，曝光时间根据目的条带出现的情况再做适当的调整，至目的条带清晰为止，显影条带见图1；
53.s7，清洗：蛋白免疫印迹显影结束后，取下晾干的胶片，将实施例1
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7和对比例1
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2所述的胶片清洗剂喷洒在胶片上，然后用无尘布快速擦拭即可。
54.图1为未使用清洗剂清洁胶片的显影图，胶片上清晰可见的是各种污渍。使用对比例1和2清洗剂清洗胶片后，胶片上的污渍依然存在，见图2。采用本发明实施例1
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3的清洗剂，清洁胶片后，胶片上的污渍被清除，但依然可见污渍模糊的印迹，见图3。采用实施例4
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7的清洗液，清洗胶片后，胶片上的污渍明显被清除干净，污渍无显影，见图4。表明本发明的清洗液，可以清洗污渍，不影响蛋白显影结果。
55.以上所述仅为本发明的较佳实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。