硫代三氮唑类化合物、其制备方法及其应用

1.本发明涉及化合物合成技术领域，具体而言，涉及硫代三氮唑类化合物、其制备方法及其应用。


背景技术：

2.癌(cancer)是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类，恶性肿瘤有很多种，其性质类型各异、累及的组织和器官不同、病期不同、对各种治疗的反应也不同，因此大部分患者需要进行综合治疗。所谓综合治疗就是根据患者的身体状况、肿瘤的病理类型、侵犯范围等情况，综合采用手术、化疗、放疗、免疫治疗、中医中药治疗、介入治疗、微波治疗等手段，以期较大幅度地提高治愈率，并改善患者的生活质量。现有技术中治疗恶性肿瘤的药物的靶向小分子是热门研究点，而其中含有杂原子的小分子更是研究的重点，但是并不是任意的杂原子小分子都有相关的性能或者治疗效果。
3.鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供硫代三氮唑类化合物、其制备方法及其应用。该硫代三氮唑类化合物有效抑制组蛋白去甲基化酶的活性，继而对于胃癌或者肺腺癌等肿瘤有良好的治疗效果。
5.本发明是这样实现的：
6.第一方面，本发明提供一种硫代三氮唑类化合物，其结构式如下所示：其中，r1选自取代或未取代烷基、取代或未取代环烷基、取代或未取代苯基和取代或未取代杂脂肪环基团形成的官能团组中的任意一种；r2为取代芳香基，r3为取代苯基。
7.第二方面，本发明提供一种前述实施方式任一项所述的硫代三氮唑类化合物的制备方法，包括参照下述合成路径合成所述硫代三氮唑类化合物：
[0008][0009]
第三方面，本发明提供一种前述实施方式任一项所述的硫代三氮唑类化合物在制备抗肿瘤的药物中的应用。
[0010]
第四方面，本发明提供一种前述实施方式任一项所述的硫代三氮唑类化合物在制备抑制组蛋白去甲基化酶(lsd1)或周期素依赖型激酶8(cdk8)的活性的抑制剂中的应用。
[0011]
本发明具有以下有益效果：该硫代三氮唑类化合物对于胃癌细胞系hgc27或者肺腺癌细胞系h1975有良好的抗增殖作用，且能有效抑制组蛋白去甲基化酶的活性，继而可能对胃癌或者肺腺癌等肿瘤有良好的治疗效果。
具体实施方式
[0012]
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0013]
本发明实施例提供一种硫代三氮唑类化合物，其结构式如下所示：
[0014]
其中，r1选自取代或未取代烷基、取代或未取代环烷基、取代或未取代苯基和取代或未取代杂脂肪环基团形成的官能团组中的任意一种；r2为取代芳香基，r3为取代苯基。该硫代三氮唑类化合物有效抑制组蛋白去甲基化酶的活性，继而对于胃癌或者肺腺癌等肿瘤有良好的治疗效果。
[0015]
其中，r1选自c1
‑
c10取代或未取代烷基、c3
‑
c15取代或未取代环烷基、c6
‑
c20取代或未取代苯基和c2
‑
c10取代或未取代杂脂肪环基团形成的官能团组中的任意一种；例如，r1的取代苯基的取代基选自卤素、烷基和酰基形成的官能团组中的任意一种；r1的取代苯基的取代基选自氯、碘、甲酰基和c1
‑
c5烷基。r1选自甲基、乙基、丙基、环己烷基、环丙烷基、单取代苯基(例如，r1的单取代苯基为邻位取代苯基或对位取代苯基)、
形成的官能团组中的任意一种；优选，r1为碳原子和杂原子个数总和为4
‑
6个的基团；具体地，r1选自
[0016]
中的任意一种。
[0017]
进一步地，r2为取代苯基；r2的取代苯基的取代基选自卤素、胺基、烷基、氨基以及醚基形成的官能团组中的任意一种；例如，r2的取代苯基的取代基选自f、nh2‑
、叔胺基、甲醚基以及c1
‑
c5烷基；且r2的取代苯基为单取代苯基；r2的单取代苯基为对位取代的单取代苯基。
[0018]
进一步地，r3的取代苯基为单取代苯基或者双取代苯基；r3的取代苯基为对位取代苯基、间位取代苯基、邻对位苯基和间对位苯基中的任意一种；其中，r3的取代苯基的取代基选自卤素、氰基、取代烷基、取代醚基、酯基和苯基形成的官能团组中的任意一种；r3选自下述基团中的任意一种：
[0019][0020]
需要说明的是：(1)上述结构式所示的基团中的虚线或者波浪线均表示断键的位置，即该基团中与该硫代三氮唑类化合物母核连接的位置。
[0021]
(2)上述单取代苯基和双取代苯基是除了与该硫代三氮唑类化合物母核连接的位置外，还有1个取代基和2个取代基。
[0022]
(3)上述取代苯基在满足化学价键的规则的基础上，除了单取代、双取代还可以是三取代、4取代等多取代。
[0023]
(4)上述单取代苯基可以是邻间对取代中的任意一种，双取代可以是邻间对任意两者的组合，也可以都是邻位或者都是间位。
[0024]
(5)上述烷基除了可以是甲基、乙基、丙基、异丙基和叔丁基以外，还可以是其他的
c1
‑
c10烷基或者c1
‑
c5烷基；
[0025]
上述环烷基除了可以是环己烷基、环丙烷基以外还可以是环戊烷基等脂肪族环烷烃；
[0026]
上述酰基除了甲酰基，还可以是乙酰基、丙酰基等酰基；
[0027]
上述胺基可以是叔胺，也可以是伯胺或者仲胺；
[0028]
上述醚基可以是甲醚基也可是乙醚基和丙醚基等；
[0029]
上述烷基、取代苯基、酰基、胺基、醚基、环烷基、氰基、酯基等可以进一步被取代，例如可以进一步被卤素、硝基、烷基等取代进行对应的取代基团。
[0030]
硫代三氮唑类化合物选自下述结构式所示化合物中的任意一种：
[0031][0032]
本实施例提供一种上述硫代三氮唑类化合物的制备方法，包括参照下述合成路径
合成所述硫代三氮唑类化合物：
[0033][0034]
具体地，步骤i的操作包括：向25ml圆底烧瓶中加入1mmol不同含有r1的原料化合物和1
‑
1.2mmol含有r2的原料化合物(例如1mmol、1.1mmol或者1.2mmol等1
‑
1.2mmol之间的任意数值)，加入醇溶剂(例如，10ml乙醇)使其溶解，80
‑
100℃(80℃、85℃、90℃、95℃以及100℃等80
‑
100℃之间的任意数值)加热回流搅拌反应30
‑
60分钟(如30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟以及30
‑
60分钟之间的任意数值)。tcl监测。待反应完成后，将圆底烧瓶放入冰水中冷却，过滤收集所得固体，用水洗涤，真空干燥，得中间体。
[0035]
步骤ii的操作包括：向25ml圆底烧瓶中加入步骤i所得中间体，再加入碱性物质(例如，2mol/l naoh水溶液10ml)使其溶解，60
‑
110℃(例如100℃、101℃、102℃、103℃、104℃、105℃、106℃、107℃、108℃、109℃以及110℃等60
‑
110℃之间的任意数值)加热回流搅拌30
‑
60分钟(如30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟以及30
‑
60分钟之间的任意数值)，tcl监测。
[0036]
步骤iii的操作包括：待步骤ii的反应完成后，使反应液降温至5
‑
25℃，一边搅拌一边向反应体系中缓慢加入酸性物质(例如稀盐酸)，直至ph＝1
‑
2，例如ph为1、1.5或者2等1
‑
2之间的任意数值，过滤收集所得固体，用酸性物质(例如稀盐酸溶液)洗涤次，真空干燥，得中间体。
[0037]
步骤iv的操作包括：向25ml圆底烧瓶中加入1mmol含有r3的原料化合物和3
‑
5eq碱性物质(如koh)于烧瓶中，加入醇溶液(如乙醇)使其溶解，再加入步骤iii所得1
‑
1.2mmol中间体(例如1mmol、1.1mmol或者1.2mmol等1
‑
1.2mmol之间的任意数值)，60
‑
100℃(80℃、85℃、90℃、95℃以及100℃等60
‑
100℃之间的任意数值)加热回流搅拌30
‑
60分钟(如30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟以及30
‑
60分钟之间的任意数值)，tcl监测，待反应完成后，旋干反应液，硅胶柱层析纯化得硫代三氮唑类化合物。
[0038]
本实施例还提供一种上述硫代三氮唑类化合物在制备抗肿瘤的药物中的应用，其中，该肿瘤为胃癌或者肺腺癌，且该硫代三氮唑类化合物在制备抑制组蛋白去甲基化酶的活性的抑制剂中的应用。
[0039]
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
[0040]
实施例1
[0041]
本发明实施例提供一种硫代三氮唑类化合物(记为g1)，其结构式如下所示：
[0042][0043]
本发明实施例还提供一种上述硫代三氮唑类化合物的制备方法，包括：
[0044]
将向25ml圆底烧瓶中加入1mmol 4
‑
羧基苯基异硫氰酸酯和1mmol 4
‑
甲氧基苯甲酰肼，加入10ml乙醇使其溶解，90℃加热回流搅拌反应1小时。tcl监测。待反应完成后，将圆底烧瓶放入冰水中冷却30分钟，过滤收集所得固体，用水洗涤2次，真空干燥，得中间体。
[0045]
向25ml圆底烧瓶种加入上步所得中间体，再加入2mol/l naoh水溶液10ml使其溶解，105℃加热回流搅拌1小时，tcl监测，待反应完成后，将反应液置于冰水，一边搅拌一边向反应体系中缓慢加入浓盐酸，直至ph＝1，过滤收集所得固体，用稀盐酸溶液洗2次，真空干燥，得中间体。
[0046]
向25ml圆底烧瓶中加入1mmol 4
‑
氟苄溴和5eq koh与烧瓶中，加入10ml乙醇使其溶解，再加入上步所得1mmol中间体，90℃加热回流搅拌1小时，tcl监测，待反应完成后，旋干反应液，硅胶柱层析纯化得终产物g1。
[0047]
对该化合物进行表征，表征数据如下：白色固体，产率66.6％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ8.03(d,j＝8.5hz,2h),7.42
–
7.37(m,4h),7.27(d,j＝8.9hz,2h),7.16
–
7.11(m,2h),6.91(d,j＝8.9hz,2h),4.39(s,2h),3.73(s,3h).hrms(esi):m/z calcd for c
23
h
19
fn3o3s
+
(m+h)
+
436.1126；found:436.0952.
[0048]
实施例2
[0049]
本发明实施例提供一种硫代三氮唑类化合物(记为g2)，其结构式如下所示：
[0050]
其合成方法与实施例1相同，区别在于含有r3的原料化合物不同，该硫代三氮唑类化合物的表征数据如下：白色固体，产率57.6％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ8.04(d,j＝8.5hz,2h),7.43(s,3h),7.40
–
7.32(m,1h),7.27(d,j＝8.9hz,2h),7.21(ddd,j＝8.8,4.3,2.0hz,1h),6.92(d,j＝8.9hz,2h),4.38(s,2h),3.73(s,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
23
h
18
f2n3o3s
+
(m+h)
+
:454.103；found:454.0965.
[0051]
实施例3
‑
实施例48
[0052]
实施例3
‑
实施例48分别提供一种硫代三氮唑类化合物，其制备方法，与实施例1相同，区别在于含有r1的原料化合物、含有r2的原料化合物或者含有r3的原料化合物有所不同。其最终形成的硫代三氮唑类化合物的结构式以及表征如下所示：
[0053]
实施例3：结构式：4
‑
(3
‑
((4
‑
三氟甲基苄基)硫基)
‑5‑
(4
‑
甲氧基苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑4‑
基)苯甲酸(g3)：白色固体，产率59.8％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ8.03(d,j＝8.5hz,2h),7.67(d,j＝8.2hz,2h),7.59(d,j＝8.1hz,2h),7.43(d,j
＝8.3hz,2h),7.28(d,j＝8.9hz,2h),6.92(d,j＝8.9hz,2h),4.49(s,2h),3.73(s,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
24
h
19
f3n3o3s
+
(m+h)
+
:486.1094；found:486.1116.
[0054]
实施例4：结构式：4
‑
(3
‑
((4
‑
氯
‑3‑
氟苄基)硫基)
‑5‑
(4
‑
甲氧基苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑4‑
基)苯甲酸(g4)：白色固体，产率60.4％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ13.33(s,1h),8.04(d,j＝8.4hz,2h),7.57(d,j＝8.9hz,1h),7.42(s,2h),7.38
–
7.31(m,2h),7.27(d,j＝8.8hz,2h),6.91(d,j＝8.9hz,2h),4.37(s,2h),3.73(s,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
23
h
18
clfn3o3s
+
(m+h)+:470.0736；found:470.0776.
[0055]
实施例5：结构式：4
‑
(3
‑
((3，4
‑
,二氯苄基)硫基)
‑5‑
(4
‑
甲氧基苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑4‑
基)苯甲酸(g5)：淡黄色固体，产率70.2％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ8.04(d,j＝8.5hz,2h),7.61(d,j＝1.9hz,1h),7.56(d,j＝8.3hz,1h),7.41(d,j＝8.5hz,2h),7.35(dd,j＝8.3,2.0hz,1h),7.27(d,j＝8.9hz,2h),6.91(d,j＝8.9hz,2h),4.37(s,2h),3.73(s,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
23
h
18
cl2n3o3s
+
(m+h)
+
:486.0440；found:486.0427.
[0056]
实施例6：结构式：4
‑
(3
‑
((4
‑
溴
‑2‑
氟苄基)硫基)
‑5‑
(4
‑
甲氧基苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑4‑
基)苯甲酸(g6)：白色固体，产率65.6％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ8.04(d,j＝8.5hz,2h),7.52(dd,j＝9.7,1.4hz,1h),7.44(d,j＝8.4hz,2h),7.41
–
7.35(m,2h),7.27(d,j＝8.9hz,2h),6.92(d,j＝8.9hz,2h),4.34(s,2h),3.74(s,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
23
h
18
brfn3o3s
+
(m+h)
+
:514.0231found:514.0224.
[0057]
实施例7：结构式：4
‑
(3
‑
((2
‑
氯
‑4‑
氟苄基)硫基)
‑5‑
(4
‑
甲氧基苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑4‑
基)苯甲酸(g7)：白色固体，产率66.1％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ8.04(d,j＝8.5hz,2h),7.59
–
7.53(m,1h),7.46
–
7.40(m,3h),7.27(d,j＝8.8hz,2h),7.19(td,j＝8.5,2.6hz,1h),6.92(d,j＝8.8hz,2h),4.43(s,2h),3.74(s,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
23
h
18
clfn3o3s
+
(m+h)
+
:470.0736；found:470.0760.
[0058]
实施例8：结构式：4
‑
(3
‑
((4
‑
三氟甲氧基苄基)硫基)
‑5‑
(4
‑
甲氧基苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑4‑
基)苯甲酸(g8)：白色固体，产率58.8％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ8.03(d,j＝8.5hz,2h),7.49(d,j＝8.7hz,2h),7.41(d,j＝8.5hz,2h),7.31(d,j＝8.0hz,2h),7.27(d,j＝8.9hz,2h),6.92(d,j＝8.9hz,2h),4.43(s,2h),3.74(s,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
24
h
18
f3n3o4s
+
(m+h)
+
:502.1043；found:502.1096.
[0059]
实施例9：结构式：3
‑
((2
‑
氯
‑4‑
氟苄基)硫基)
‑5‑
(4
‑
氟苯基)
‑4‑
(4
‑
碘苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑(g9)：黄色固体，产率70.4％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.88(d,j＝8.6hz,2h),7.58(dd,j＝8.6,6.2hz,1h),7.44
–
7.38(m,3h),7.28
–
7.20(m,3h),7.14(d,j＝8.6hz,2h),4.44(s,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
21
h
14
clf2in3s
+
(m+h)
+
:539.9604；found:539.9578.
[0060]
实施例10：结构式：，3
‑
((3,4
‑
氟苄基)硫基)
‑5‑
(4
‑
氟苯基)
‑4‑
(4
‑
碘苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑(g10)：白色固体，产率69.7％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.89(d,j＝8.6hz,2h),7.41(dd,j＝8.9,5.4hz,2h),7.39
–
7.32(m,2h),7.24(t,j＝8.9hz,3h),7.15(d,j＝8.6hz,2h),4.40(s,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
21
h
13
f3in3nas
+
(m+na)
+
:545.9719；found:545.9661.
[0061]
实施例11：结构式：3
‑
((3
‑
氯
‑4‑
氟苄基)硫基)
‑5‑
(4
‑
氟苯基)
‑4‑
(4
‑
碘苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑(g11)：白色固体，产率62.1％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.88(d,j＝8.6hz,2h),7.59(dd,j＝7.2,2.0hz,1h),7.43
–
7.35(m,4h),7.24(t,j＝8.9hz,2h),7.13(d,j＝8.6hz,2h),4.38(s,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
21
h
14
clf2in3s
+
(m+h)
+
:539.9604；found:539.9566.
[0062]
实施例12：结构式：3
‑
(4
‑
氟苯基)
‑4‑
(4
‑
碘苯基)
‑5‑
((4
‑
(三氟甲基)苄基)硫基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑(g12)：白色固体，产率71.1％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.88(d,j＝8.6hz,2h),7.68(d,j＝8.2hz,2h),7.61(d,j＝8.2hz,2h),7.42(dd,j＝8.9,5.4hz,2h),7.24(t,j＝8.9hz,2h),7.14(d,j＝8.6hz,2h),4.50(s,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
22
h
15
f4in3s
+
(m+h)
+
:555.9962；found:555.9882.
[0063]
实施例13：结构式：3
‑
((4
‑
氟苄基)硫基)
‑5‑
(4
‑
氟苯基)
‑4‑
(4
‑
碘苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑(g13)：白色固体，产率58.6％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.88
(d,j＝8.6hz,2h),7.44
–
7.38(m,4h),7.24(t,j＝8.9hz,2h),7.13(t,j＝8.3hz,4h),4.40(s,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
21
h
15
f2in3nas
+
(m+na)
+
:505.9994；found:505.9964.
[0064]
实施例14：结构式：3
‑
((3
‑
氯
‑4‑
氟苄基)硫基)
‑5‑
(4
‑
氟苯基)
‑4‑
(2
‑
氯苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑(g14)：白色固体，产率64.9％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.70(ddd,j＝15.1,7.9,1.5hz,2h),7.61(td,j＝8.9,8.4,6.1hz,2h),7.57(dd,j＝7.6,1.5hz,1h),7.47
–
7.40(m,3h),7.26
–
7.17(m,3h),4.49(s,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
21
h
14
cl2f2n3s
+
(m+h)
+
:448.0248；found:448.0222.
[0065]
实施例15：结构式：3
‑
((4
‑
溴
‑2‑
氟苄基)硫基)
‑5‑
(4
‑
氟苯基)
‑4‑
(2
‑
氯苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑(g15)：白色固体，产率56.8％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.70(ddd,j＝12.5,7.9,1.4hz,2h),7.63(td,j＝7.8,1.7hz,1h),7.58
–
7.51(m,2h),7.44
–
7.37(m,4h),7.23(t,j＝8.9hz,2h),4.41(d,j＝2.7hz,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
23
h
18
clfn3o3s
+
(m+h)
+
:491.9743；found:491.9710.
[0066]
实施例16：结构式：3
‑
(4
‑
(叔丁基)苯基)
‑5‑
((4
‑
氟苄基)硫基)
‑4‑
(4
‑
碘苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑(g16)：白色固体，产率65.2％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.88(d,j＝8.6hz,2h),7.39(d,j＝8.3hz,4h),7.30(d,j＝8.6hz,2h),7.13(dt,j＝8.9,4.6hz,4h),4.39(s,2h),1.24(s,10h).hrms(esi)m/z:calcd for c
25
h
24
fin3s
+
(m+h)
+
:544.0714；found:544.0662.
[0067]
实施例17：结构式：4
‑
(((5
‑
(4
‑
氨基苯基)
‑4‑
苯乙基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)苯甲腈(g17)：白色固体，产率68.0％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.72(d,j＝8.4hz,2h),7.64(d,j＝8.3hz,2h),7.16(dt,j＝18.8,7.7hz,5h),6.93(d,j＝8.6hz,2h),6.75(d,j＝6.7hz,2h),4.57(s,2h),4.36(t,j＝6.8hz,2h),2.92(t,j＝6.7hz,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
24
h
21
kn5s
+
(m+k)
+
:450.1155；found:450.1137.
[0068]
实施例18：结构式：2
‑
(4
‑
(((5
‑
(4
‑
氨基苯基)
‑4‑
苯乙基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)苯基)丙酸(g18)：白色固体，产率58.9％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.24(d,j＝8.1hz,2h),7.17
–
7.11(m,5h),7.04(d,j＝8.5hz,2h),6.74(d,j＝8.4hz,4h),4.20(s,2h),3.88(t,j＝7.1hz,2h),2.59(t,j＝7.1hz,2h),1.39(d,j＝7.2hz,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
26
h
27
n4o2s
+
(m+h)
+
:459.1849；found:
459.1849.
[0069]
实施例19：结构式：4
‑
(((5
‑
(4
‑
氨基苯基)
‑4‑
(3
‑
吗啉丙基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)苯甲腈(g19)：白色固体，产率69.6％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.66(d,j＝8.2hz,2h),7.49(d,j＝8.2hz,2h),7.26(d,j＝8.5hz,2h),6.78(d,j＝8.5hz,2h),4.43(s,2h),4.01
–
3.90(m,2h),3.59
–
3.52(m,4h),2.18(s,4h),2.12(t,j＝6.6hz,2h),1.56(p,j＝6.7hz,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
23
h
27
n6os
+
(m+h)
+
:435.1962；found:435.1967.
[0070]
实施例20：结构式：4
‑
(((5
‑
(4
‑
氨基苯基)
‑4‑
(3
‑
吗啉丙基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)苯甲腈(g19)：淡黄色固体，产率74.7％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.35(d,j＝8.5hz,2h),7.14(d,j＝8.4hz,2h),7.08(d,j＝8.4hz,2h),6.78(d,j＝8.5hz,2h),4.43(s,2h),1.94(q,j＝12.4hz,2h),1.76(d,j＝11.5hz,2h),1.57(s,1h),1.29(s,3h),1.17(s,1h),0.93
–
0.79(m,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
22
h
25
f2n4os
+
(m+h)
+
:431.1712；found:431.1719.
[0071]
实施例21：结构式：甲基4
‑
(((5
‑
(4
‑
氨基苯基)
‑4‑
环己基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)硫基)苯甲酸甲酯(g21)：白色固体，产率58.0％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.98(s,1h),7.86(d,j＝7.8hz,1h),7.68(d,j＝7.7hz,1h),7.48(t,j＝7.7hz,1h),7.08(d,j＝8.4hz,2h),6.65(d,j＝8.4hz,2h),4.56(s,2h),3.91(dt,j＝11.9,3.3hz,1h),3.85(s,3h),1.87(dd,j＝21.2,8.8hz,2h),1.70(d,j＝12.4hz,2h),1.59(d,j＝13.5hz,2h),1.53(s,1h),1.17
–
1.00(m,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
23
h
27
n4o2s
+
(m+h)
+
:423.1849；found:423.1849.
[0072]
实施例22：结构式：4
‑
(5
‑
(([1,1'
‑
联苯基]
‑4‑
基甲基)硫基)
‑4‑
环己基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)苯胺(g22)：白色固体，产率66.9％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.52(t,j＝7.1hz,3h),7.44
–
7.31(m,5h),7.28(d,j＝7.6hz,1h),7.00(d,j＝8.5hz,2h),6.72(d,j＝8.5hz,2h),4.45(s,2h),3.93(ddt,j＝12.6,7.6,4.0hz,1h),1.80(q,j＝11.9hz,2h),1.67(d,j＝12.8hz,2h),1.39(d,j＝11.2hz,2h),1.07(dq,j＝23.2,12.9hz,4h).hrms(esi)m/z:calcd for c
27
h
29
n4s
+
(m+h)
+
:441.2107；found:441.2110.
[0073]
实施例23：结构式：4
‑
(5
‑
((4
‑
(苄氧基)苄基)硫基)
‑4‑
环己基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)苯胺(g23)：白色固体，产率79.6％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.35(dt,j＝21.7,7.3hz,5h),7.21(t,j＝7.9hz,1h),7.12(d,j＝8.5hz,2h),6.88(t,j＝
6.0hz,2h),6.82(s,1h),6.76(d,j＝8.5hz,2h),4.58(s,2h),4.36(s,2h),3.97(dddd,j＝13.2,7.3,5.8,3.4hz,1h),1.90
–
1.81(m,2h),1.71(d,j＝13.1hz,2h),1.46(d,j＝11.3hz,2h),1.11(dd,j＝25.8,13.3hz,4h).hrms(esi)m/z:calcd for c
28
h
31
n4os
+
(m+h)
+
:471.2213；found:471.2220.
[0074]
实施例24：结构式：4
‑
(((5
‑
(4
‑
(二甲氨基)苯基)
‑4‑
苯乙基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)苯甲腈(g24)：白色固体，产率69.7％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.64(d,j＝8.3hz,2h),7.47(d,j＝8.3hz,2h),7.20(d,j＝8.9hz,2h),7.16
–
7.12(m,3h),6.79
–
6.74(m,3h),4.32(s,2h),4.12(t,j＝7.0hz,2h),3.01(s,6h),2.71(t,j＝7.0hz,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
26
h
25
kn5s
+
(m+k)
+
:478.1462；found:478.1466.
[0075]
实施例25：结构式：2
‑
(4
‑
(((5
‑
(4
‑
(二甲氨基)苯基)
‑4‑
苯乙基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)苯基)丙酸(g25)：白色固体，产率54.8％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.24(d,j＝8.0hz,2h),7.20
–
7.16(m,3h),7.13(dd,j＝5.5,2.9hz,4h),6.80(d,j＝8.8hz,2h),6.74(dd,j＝6.3,2.7hz,2h),4.20(s,2h),3.90(t,j＝7.1hz,2h),3.02(s,6h),2.58(t,j＝7.0hz,2h),1.39(d,j＝7.1hz,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
28
h
31
n4o2s
+
(m+h)
+
:487.2157；found:487.2172.
[0076]
实施例26：结构式：4
‑
(5
‑
((4
‑
(二氟甲氧基)苄基)硫基)
‑4‑
苯乙基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基苯胺(g26)：白色固体，产率74.2％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.45(d,j＝8.6hz,2h),7.41(d,j＝9.0hz,2h),7.22
–
7.19(m,3h),7.16(d,j＝8.5hz,2h),6.93
–
6.89(m,2h),6.87(d,j＝8.9hz,2h),4.44(s,2h),4.24(t,j＝7.2hz,2h),3.03(s,6h),2.83(d,j＝4.5hz,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
26
h
27
f2n4os
+
(m+h)
+
:481.1868；found:481.1869.
[0077]
实施例27：结构式：4
‑
(5
‑
(([1,1'
‑
联苯基]
‑4‑
基甲基)硫基)
‑4‑
苯乙基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基苯胺(g27)：白色固体，产率58.5％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.60(s,1h),7.57
–
7.53(m,3h),7.42(t,j＝7.6hz,4h),7.34(t,j＝7.3hz,1h),7.17(d,j＝9.0hz,2h),7.08(dt,j＝14.2,6.9hz,3h),6.80(d,j＝9.0hz,2h),6.71(d,j＝6.9hz,2h),4.51(s,2h),4.24(t,j＝7.0hz,2h),3.05(s,6h),2.81(t,j＝7.0hz,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
31
h
31
n4s
+
(m+h)
+
:491.2264；found:491.2266.
[0078]
实施例28：结构式：4
‑
(5
‑
((4
‑
(苄氧基)苄基)硫基)
‑4‑
苯乙基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基苯胺(g28)：白色固体，产率76.9％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.36(t,j＝8.0hz,2h),7.32(t,j＝7.2hz,2h),7.29
–
7.26(m,1h),7.24(d,j＝8.8hz,3h),7.13(t,j＝8.2hz,3h),7.03
–
6.96(m,2h),6.94(dd,j＝8.1,2.2hz,1h),6.84(d,j＝9.0hz,2h),6.75(d,j＝6.4hz,2h),5.03(s,2h),4.42(s,2h),4.25(t,j＝7.0hz,2h),3.06(s,6h),2.84(t,j＝6.9hz,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
32
h
33
kn4os
+
(m+k)
+
:559.1928；found:559.1926.
[0079]
实施例29：结构式：4
‑
(((5
‑
(4
‑
(二甲氨基)苯基)
‑4‑
(3
‑
吗啉丙基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)苯甲腈(g29)：白色固体，产率75.8％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.45(d,j＝8.9hz,2h),7.21(t,j＝7.9hz,1h),6.92
–
6.83(m,5h),4.66(s,2h),4.37(s,2h),4.00
–
3.92(m,2h),3.85(s,3h),3.13(s,3h),3.04(s,6h),3.00
–
2.94(m,2h),1.97
–
1.84(m,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
25
h
31
n6os
+
(m+h)
+
:463.2275；found:463.2279.
[0080]
实施例30：结构式：2
‑
(4
‑
(((5
‑
(4
‑
(二甲氨基)苯基)
‑4‑
(3
‑
吗啉丙基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)甲基)丙酸(g30)：白色固体，产率67.4％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.35(d,j＝8.9hz,2h),7.26(d,j＝8.1hz,2h),7.10(d,j＝8.1hz,2h),6.85(d,j＝8.9hz,2h),4.25(s,2h),3.70
–
3.62(m,4h),3.60(t,j＝4.7hz,4h),3.02(s,6h),2.37
–
2.29(m,4h),2.23(t,j＝6.8hz,2h),1.43(d,j＝7.1hz,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
27
h
36
n5o3s
+
(m+h)
+
:510.2533；found:510.2541.
[0081]
实施例31：结构式：4
‑
(5
‑
(([1,1'
‑
联苯基]
‑4‑
基甲基)硫基)
‑4‑
(3
‑
吗啉丙基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)
‑
n,n
‑
二甲苯胺(g31)：白色固体，产率67.0％；1hnmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.53(d,j＝8.4hz,3h),7.38(d,j＝8.3hz,3h),7.33(t,j＝7.3hz,2h),7.24(d,j＝8.9hz,3h),6.78(d,j＝8.9hz,2h),4.38(s,2h),3.82
–
3.77(m,2h),3.50
–
3.46(m,4h),3.00(s,6h),2.09(s,4h),2.02(d,j＝6.5hz,2h),1.45
–
1.38(m,2h).hrms(esi)m/z:calcd for c
30
h
34
n5os
+
(m+h)
+
:514.2635；found:514.2637.
[0082]
实施例32：结构式：4
‑
(4
‑
环己基
‑5‑
((4
‑
(二氟甲氧基)苄基)硫基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基苯胺(g32)：白色固体，产率62.9％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.53(d,j＝8.5hz,2h),7.48(d,j＝8.9hz,2h),7.13(d,j＝8.5hz,
2h),6.98(d,j＝8.9hz,2h),4.62(s,2h),4.29(tt,j＝12.6,3.5hz,1h),3.11(s,6h),2.22
–
2.10(m,2h),1.91(t,j＝12.3hz,4h),1.69(d,j＝11.9hz,1h),1.35
–
1.24(m,3h).hrms(esi)m/z:calcd for c
24
h
29
f2n4os
+
(m+h)
+
:459.2025；found:459.2029.
[0083]
实施例33：结构式：甲基4
‑
(((4
‑
环己基
‑5‑
(4
‑
(二甲氨基苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)苯甲酸甲酯(g33)：淡黄色固体，产率72.8％；1hnmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.92(d,j＝9.5hz,2h),7.58(d,j＝7.7hz,1h),7.43(t,j＝7.7hz,1h),7.24(d,j＝8.9hz,2h),6.84(d,j＝8.9hz,2h),4.49(s,2h),3.99(tt,j＝12.6,3.7hz,1h),3.88(s,3h),3.02(s,6h),1.95
–
1.86(m,2h),1.74(d,j＝13.1hz,2h),1.51(d,j＝11.1hz,2h),1.20
–
1.07(m,4h).hrms(esi)m/z:calcd for c
25
h
31
n4o2s
+
(m+h)
+
:451.2126；found:451.2183.
[0084]
实施例34：结构式：2
‑
(4
‑
(((4
‑
环己基
‑5‑
(4
‑
(二甲氨基)苯基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)苯氧基)乙酸(g34)：白色固体，产率79.3％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.72(s,4h),7.49(d,j＝9.0hz,2h),7.00(d,j＝9.0hz,2h),4.69(s,2h),4.30(tt,j＝12.6,3.5hz,1h),3.35(s,2h),3.11(s,6h),2.17(q,j＝10.9,9.4hz,2h),1.98
–
1.87(m,4h),1.38
–
1.20(m,4h).hrms(esi)m/z:calcd for c
25
h
30
nan4o3s
+
(m+na)
+
:489.1931；found:489.2175.
[0085]
实施例35：结构式：4
‑
(5
‑
(([1,1'
‑
联苯基]
‑4‑
基甲基)硫基)
‑4‑
环己基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基苯胺(g35)：白色固体，产率68.3％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.72(s,1h),7.59(dd,j＝14.0,8.0hz,5h),7.48
–
7.42(m,4h),7.35(t,j＝7.4hz,1h),7.28(d,j＝8.8hz,2h),4.69(s,2h),4.24(ddd,j＝12.5,9.1,3.6hz,1h),3.18(s,6h),2.16
–
2.07(m,2h),1.86(t,j＝13.4hz,4h),1.33
–
1.15(m,4h).hrms(esi)m/z:calcd for c
29
h
33
n4s
+
(m+h)
+
:460.2420；found:469.2409.
[0086]
实施例36：结构式：4
‑
(((5
‑
(4
‑
(二甲氨基)苯基)
‑4‑
甲基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)苯甲腈(g36)：白色固体，产率61.9％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.66(d,j＝8.3hz,2h),7.46(dd,j＝12.8,8.6hz,4h),6.85(d,j＝8.9hz,2h),4.38(s,2h),3.48(s,3h),3.03(s,6h).hrms(esi)m/z:calcd for c
19
h
19
n5nas
+
(m+na)
+
:372.1253；found:372.1255.
[0087]
实施例37：结构式：(4
‑
(((5
‑
(4
‑
(二甲氨基)苯基)
‑4‑
甲基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)苯基)丙酸(g37)：白色固体，产率64.0％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.70(s,2h),7.59(d,j＝9.0hz,2h),7.40(d,j＝7.5hz,2h),6.95
(d,j＝9.1hz,2h),4.52(s,2h),3.66(s,3h),3.10(s,6h).hrms(esi)m/z:calcd for c
21
h
25
n4o2s
+
(m+h)
+
:397.1693；found:397.1702.
[0088]
实施例38：结构式：4
‑
(5
‑
((4
‑
(二氟甲氧基)苄基)硫基)
‑4‑
甲基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基苯胺(g38)：白色固体，产率68.4％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.59(d,j＝8.9hz,2h),7.49(d,j＝8.6hz,2h),7.16(d,j＝8.6hz,2h),6.90(d,j＝9.0hz,2h),4.49(s,2h),3.61(s,3h),3.04(s,6h).hrms(esi)m/z:calcd for c
19
h
21
f2n4os
+
(m+h)
+
:391.1399；found:391.1398.
[0089]
实施例39：结构式：甲基4
‑
(((5
‑
(4
‑
(二甲氨基)苯基)
‑4‑
甲基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫基)甲基)苯甲酸甲酯(g39)：白色固体，产率74.7％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.91(d,j＝7.8hz,1h),7.79(s,1h),7.53(d,j＝7.7hz,1h),7.45
–
7.38(m,3h),6.84(d,j＝8.9hz,2h),4.34(s,2h),3.84(s,3h),3.33(s,3h),3.02(s,6h).hrms(esi)m/z:calcd for c
23
h
18
clfn3o3s
+
(m+h)
+
:383.1536；found:383.1517.
[0090]
实施例40：结构式：4
‑
(5
‑
(([1,1'
‑
联苯基]
‑4‑
基甲基)硫基)
‑4‑
甲基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基苯胺(g40)：白色固体，产率52.9％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.53
–
7.47(m,3h),7.40
–
7.35(m,3h),7.30(dd,j＝11.5,8.2hz,5h),6.76(d,j＝8.9hz,2h),4.30(s,2h),3.23(s,3h),2.99(s,6h).hrms(esi)m/z:calcd for c
24
h
24
n4nas
+
(m+na)
+
:423.1614；found:423.1621.
[0091]
实施例41：结构式：4
‑
(5
‑
((4
‑
(苄氧基)苄基)硫基)
‑4‑
甲基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
烯)
‑
n,n
‑
二甲基苯胺(g41)：白色固体，产率70.3％，纯度95％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.38(d,j＝8.9hz,2h),7.33
–
7.25(m,5h),7.19(t,j＝7.9hz,1h),6.89(dd,j＝8.2,2.2hz,1h),6.80(t,j＝8.5hz,3h),6.67(s,1h),4.94(s,2h),4.18(s,2h),3.17(s,3h),3.00(s,6h).hrms(esi)m/z:calcd for c
23
h
18
clfn3o3s
+
(m+h)
+
:431.1900；found:431.1904.
[0092]
实施例42：结构式：(4
‑
(((5
‑
(4
‑
氨基苯基)
‑4‑
苯乙基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫)甲基)苯基)硼酸，白色固体，产率80.4％，纯度95％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.66(s,2h),7.20(d,j＝7.2hz,2h),7.16
–
7.10(m,3h),7.02(d,j＝8.1hz,2h),6.72(d,j＝8.1hz,4h),4.23(s,2h),3.92(t,j＝6.9hz,2h),3.31(s,2h),2.61(t,j＝6.9hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso)δ172.49,156.21,150.75,149.15,139.50,137.45,134.75,129.73,129.01,128.94,128.45,127.14,114.34,113.97,45.70,38.28,35.19.ms(esi)m/z:calcd for c
23
h
24
bn4o2s
+
(m+h)
+
:431.2；found:431.2.
[0093]
实施例43：结构式：(4
‑
(((5
‑
(4
‑
氨基苯基)
‑4‑
(3
‑
吗啉丙基)
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫)甲基)苯基)硼酸，白色固体，产率79.5％，纯度95％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.63(d,j＝7.5hz,2h),7.22(t,j＝8.3hz,4h),6.78(d,j＝8.3hz,2h),4.34(s,2h),3.83(t,j＝7.1hz,2h),3.72
–
3.61(m,8h),2.64(s,4h),1.69
–
1.58(m,2h).
13
c nmr(101mhz,meod)δ173.90,156.58,150.84,149.95,133.87,129.59,127.85,114.27,113.63,70.01,64.73,53.94,52.19,24.45,19.41.ms(esi)m/z:calcd for c
22
h
29
bn5o3s
+
(m+h)
+
:454.2；found:454.2.
[0094]
实施例44：结构式：(4
‑
(((5
‑
(4
‑
氨基苯基)
‑4‑
环丙基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫)甲基)苯基)硼酸，白色固体，产率69.3％，纯度95％；1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.77(d,j＝7.9hz,2h),7.41(d,j＝7.8hz,2h),7.38
–
7.23(m,2h),6.86(dd,j＝67.1,7.4hz,2h),4.57(s,2h),4.03(q,j＝7.1hz,1h),2.00
–
1.81(m,4h),1.75(d,j＝13.5hz,2h),1.57(d,j＝11.8hz,1h),1.17(t,j＝7.1hz,3h).
13
c nmr(101mhz,dmso)δ156.67,150.76,148.21,139.34,134.75,130.58,128.55,126.74,114.49,113.91,56.51,37.78,31.31,25.82,24.98.ms(esi)m/z:calcd for c
21
h
26
bn4o2s
+
(m+h)
+
:409.2；found:409.1.
[0095]
实施例45：结构式：(4
‑
(((5
‑
(4
‑
氨基苯基)
‑4‑
甲基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫)甲基)苯基)硼酸，白色固体，产率49.5％，纯度95％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.67(s,2h),7.54(d,j＝8.7hz,2h),7.39(d,j＝7.6hz,2h),7.01(d,j＝8.6hz,2h),4.51(s,2h),3.62(s,3h).
13
c nmr(101mhz,dmso)δ156.56,150.87,149.24,142.16,139.52,134.75,129.72,128.42,114.12,113.93,38.12,31.98.ms(esi)m/z:calcd for c
16
h
18
bn4o2s
+
(m+h)
+
:341.1；found:341.2.
[0096]
实施例46：结构式：(4
‑
(((5
‑
(4
‑
二甲氨基苯基)
‑4‑
苯乙基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫)甲基)苯基)硼酸，白色固体，产率66.5％，纯度95％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.62(s,2h),7.16(d,j＝8.6hz,4h),7.14
–
7.11(m,3h),6.77(d,j＝8.9hz,2h),6.75
–
6.71(m,2h),4.22(s,2h),3.92(s,2h),3.01(s,6h),2.61(t,j＝7.0hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso)δ155.93,151.46,149.41,139.45,137.37,134.77,129.58,128.95,128.44,114.57,112.23,45.72,45.59,38.33,35.18.ms(esi)m/z:calcd for c
25
h
28
bn4o2s
+
(m+h)
+
:459.2；found:459.1.
[0097]
实施例47：结构式：(4
‑
(((5
‑
(4
‑
二甲氨基苯基)
‑4‑
环丙
基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫)甲基)苯基)硼酸，白色固体，产率69.3％，纯度95％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.62(d,j＝45.7hz,2h),7.25(d,j＝8.8hz,4h),6.84(d,j＝8.8hz,2h),4.42(s,2h),3.99(t,j＝13.8hz,1h),3.02(s,6h),1.91(q,j＝11.3,10.3hz,2h),1.73(d,j＝13.2hz,2h),1.51(d,j＝11.5hz,2h),1.30(d,j＝10.8hz,2h),1.12(d,j＝13.5hz,2h).
13
c nmr(101mhz,dmso)δ156.42,151.47,148.33,139.34,134.76,130.47,128.67,128.56,114.71,112.15,56.61,56.56,37.80,31.31,25.81,24.96.ms(esi)m/z:calcd for c
23
h
30
bn4o2s
+
(m+h)
+
:437.2；found:437.2.
[0098]
实施例48：结构式：(4
‑
(((5
‑
(4
‑
二甲氨基苯基)
‑4‑
甲基
‑
4h
‑
1,2,4
‑
三氮唑
‑3‑
基)硫)甲基)苯基)硼酸，白色固体，产率58.3％，纯度95％；1h nmr(400mhz,methanol
‑
d4)δ7.70(s,2h),7.59(d,j＝9.0hz,2h),7.40(d,j＝7.5hz,2h),6.95(d,j＝9.1hz,2h),4.52(s,2h),3.66(s,3h),3.10(s,6h).
13
c nmr(101mhz,dmso)δ154.41,152.83,139.70,138.45,134.85,130.67,130.48,128.25,46.65,37.20,33.43.ms(esi)m/z:calcd for c
18
h
22
bn4o2s
+
(m+h)
+
:369.2；found:369.3.
[0099]
实验例1细胞增殖抑制实验
[0100]
(1)实验试剂的配制：将10％胎牛血清及1％双抗试剂加入dmem培养基中，将胎牛血清溶液、双抗试剂和培养基充分震荡，混合均匀后制成完全培养基并分装，放在4℃冰箱中保存备用。以二甲基亚砜(dmso)1份、胎牛血清9份的比例混匀，制成细胞冻存液，以完全培养基1份、cck
‑
8试剂10份的比例混匀备用。
[0101]
(2)母液配制：用dmso溶解待测样品2mg，制成10mm母液，分装并放在
‑
20℃冰箱中避光保存，避免反复冻融。取适量母液，用完全培养基稀释到10μm，然后从10μm开始三倍稀释，共得到6个不同浓度的药物工作液，每孔终浓度分别为10μm、3.333μm、1.111μm、0.370μm、0.123μm、0.041μm。
[0102]
(3)细胞培养：待细胞生长至培养皿底面积的70％
‑
80％，用胰酶将细胞消化收集起来，离心后加入培养基重悬细胞并接种于直径100mm的一次性细胞培养皿中，并置于37℃、5％二氧化碳恒温培养箱中静置培养，视细胞生长状况进行换液等操作。
[0103]
(4)细胞传代：培养一段时间后，待细胞生长至培养皿底面积的70％
‑
80％，开始进行细胞传代工作，弃掉原来的培养液，用pbs溶液将细胞培养皿底部清洗3次，加入胰酶消化1
‑
2min，再加入完全培养基终止消化，收集细胞后离心，加入培养基重悬细胞，按1：3的比例接种于直径100mm的一次性细胞培养皿中，并置于37℃、5％二氧化碳恒温培养箱中静置培养，视细胞生长状况进行换液等操作。
[0104]
每孔4
×
103个接种于96孔细胞板中，让待测细胞株贴壁生长24h后，弃旧培养基。本实验设置了对照组、空白组和药物处理组，对照组为含dmso的培养基100μl，空白组为细胞和含dmso的完全培养基100μl，实验组为细胞和含不同浓度药物的培养基100μl。每个浓度设3个复孔，分别培养24h后，吸去旧培养基，加入110μl稀释的cck
‑
8试液，继续培养2h，用酶标仪在450nm处检测od值。
[0105]
实验重复3次，取实验结果的平均值作为最终实验结果。按公式计算生长抑制率(％inh)＝[(实验组od
‑
空白组od)/(对照组od
‑
空白组od)]
×
100％。通过样品活性对样品浓度进行非线性拟合得到ic50值。
[0106]
需要说明的是，本发明实施例首先测试了10μm浓度的g1
‑
g48在4个lsd1高表达细胞系中的抑制率作为初筛，初筛中抑制率大于50％的进行复筛，其抗肿瘤细胞增殖的抑制率和ic
50
结果如下：(结果参见表1
‑
表2)
[0107]
表1
[0108]
[0109][0110]
表2
[0111]
[0112]
[0113][0114]
通过上述结果可知，本发明实施例提供的硫代三氮唑类化合物能够特定地抑制hgc27细胞系、h1975细胞、hct116细胞系、mcf7细胞系、molm13细胞系和pc
‑
3细胞系，说明其可以有效地治疗胃癌、肺腺癌、结肠癌、乳腺癌、急性髓原白血病等肿瘤。
[0115]
实验例2酶活性抑制实验
[0116]
1.组蛋白去甲基化酶(lsd1)的alphalisa实验
[0117]
(1)配制反应体系：1x改良tris缓冲液(ph＝7.5)；样品系列稀释溶液，最终dmso的浓度为1％；酶溶液：在1x酶缓冲溶液中加入lsd1；底物肽溶液：在1x酶缓冲溶液中加入h3k4me2。
[0118]
(2)用echo声控移液系统进行操作，将5μl待测试化合物溶液或者空白对照溶液转移到384孔细胞板上，然后与酶(最终浓度为5nm)室温预孵育15分钟。
[0119]
(3)将5μl底物肽溶液(终浓度为100nm)加入到反应混合物中，室温孵育60min，反应开始。
[0120]
(4)加入15μl受体和供体溶液终止反应，室温孵育60分钟，暗光。
[0121]
(5)用的alpha模式读取数据。
[0122]
(6)数据处理：抑制率(％inh)＝(max
‑
signal)/(max
‑
min)*100，其中max加入了组蛋白去甲基化酶蛋白溶液和二甲基亚砜溶液，min只加了缓冲液和二甲基亚砜溶液；将％inh和化合物浓度代入graphpad prism 5软件中的以下公式以获得ic
50
值：y＝bottom+(top
‑
bottom)/(1+10^((logic
50
‑
x)*hill slope))，y为％inh，x为化合物浓度。
[0123]
2.糖原合成酶激酶3β(gsk3β)的凝胶迁移滞后实验实验
[0124]
(1)配制反应体系：1x激酶反应缓冲液；反应终止液；2.5x底物肽溶液：在1x激酶反应缓冲液中加fam标记肽和atp；样品系列稀释溶液，最终dmso的浓度为1％；2.5x酶溶液：在1x酶缓冲溶液中加入gsk3β。
[0125]
(2)在5μl待测化合物溶液和10μl 2.5x gsk3β酶溶液加到384孔细胞板上，室温下孵育10分钟。
[0126]
(3)加入10μl的2.5x底物肽溶液，在28℃下反应一定时间后加入30μl酶反应终止液。
[0127]
(4)在caliper上测试收集数据，对酶活性的抑制率(％inh)＝(max
‑
conversion)/(max
‑
min)100，“max”为未加化合物的dmso对照，“min”为低对照。将％inh和化合物浓度代入graphpad prism 5软件中的以下公式以获得ic
50
值：y＝bottom+(top
‑
bottom)/(1+10^((logic
50
‑
x)*hill slope))，y为％inh，x为化合物浓度。结果参见表3
‑
表5。
[0128]
表3
[0129][0130]
表4
[0131][0132][0133]
表5
[0134][0135]
3.周期素依赖性激酶8(cdk8)的adp
‑
glo实验
[0136]
(1)配制1x激酶缓冲液：50mm hepes，0.01％brij
‑
35，10mm mgcl2，1mm egta，50mm hepes。
[0137]
(2)化合物筛选：使用echo 550将化合物稀释液转移到培养板中，密封培养板，
1000g离心1min。在1x结合缓冲液中配制1.5x tracer236溶液，在384孔板中加入10μl1.5x tracer236溶液。在1x结合缓冲液中配制3x酶溶液，在384孔板中加入5μl 3x酶溶液，1000g离心30秒，rt 60分钟。在envision 2104上读取615nm和665nm的荧光信号。
[0138]
(3)数据处理：％inh＝100
‑
(signalcmpd
‑
signalave_pc)/(signalave_vc
‑
signalave_pc)
×
100。将％inh和化合物浓度代入graphpad prism 5软件中的以下公式以获得ic
50
值：y＝bottom+(top
‑
bottom)/(1+10^((logic
50
‑
x)*hill slope))，y为％inh，x为化合物浓度。
[0139]
(4)实验结果：仅对在hgc27和h1975中表现较好的5个化合物的ic
50
进行检测，结果见表6(sts为阳性化合物)：
[0140]
表6
[0141][0142]
根据上述表3
‑
表6可知，本发明实施例提供的硫代三氮唑类化合物能够有效抑制lsd1和cdk8的活性，但是对于gsk3β则无抑制效果，说明其能够作为抑制lsd1的活性的抑制剂，并对lsd1的活性过高导致的疾病有良好的治疗效果。
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以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。