一种胸腺肽的提取方法与流程

1.本发明属于化药提取领域，具体涉及一种胸腺肽的提取方法。


背景技术：

2.胸腺肽是一种小分子活性肽。其结构和功能与人体非常接近，而且分子小，可被肠道直接吸收，快捷参与人体的正常代谢与调节，在药理学上，具有更高的生化机制合理性和特异治疗有效性。本品为免疫调节药。具有调节和增强人体细胞免疫功能的作用，能促使有丝分裂原激活后的外周血中的t淋巴细胞成熟，增加t细胞在各种抗原或致有丝分裂原激活后各种淋巴因子（如：α、γ干扰素、白介素2和白介素3）的分泌，增加t细胞上淋巴因子受体的水平。它同时通过对t4辅助细胞的激活作用来增强淋巴细胞反应。此外，本品可能影响nk前体细胞的趋化，该前体细胞在暴露于干扰素后变得更有细胞毒性。因此，本品具有调节和增强人体细胞免疫功能的作用。
3.现有胸腺肽提取工艺为：将检验合格的小牛胸腺去除内外包装，并预处理后，初绞1～3遍；将初绞的小牛胸腺精绞研磨3～8分钟，制成匀浆；将匀浆液在超声波粉碎仪中超声裂解，将裂解液用hcl溶液调节ph值至2.0～2.5；将裂解后的浆液置-20℃冷库冻融1～2次；最后一次冻融后，加热至80℃
±
2℃，保温10～20分钟，滤布过滤，制成提取液；将提取液经离心分离、过滤与超滤，得到产品。
4.操作过程中需要在-20℃冷库反复冻融1～2次，使用滤布过滤，滤过效率低，生产操作耗时较长，操作繁琐，产品收率较低，生产成本较高。
5.本发明采取多次渗透压调节、高速压滤、高速冷冻离心、活性炭吸附、超滤精制等多重精制而成。原料单一、来源广泛、生产操作简单、提取周期短、产品收率高、纯度高。极大提升了产品的提取效率，降低了生产成本，保证了产品质量。


技术实现要素：

6.本发明旨在提供一种产率及纯度高、生物活性及质量好的胸腺肽提取方法。
7.为了实现上述发明目的，本发明一种胸腺肽提取方法，具体实施方案为：本发明所述一种胸腺肽的提取方法，该提取方法分成粗制与精制两个阶段，步骤包括：渗透压调节、高速压滤、高速冷冻离心、活性炭吸附、超滤精制。
8.本发明所述一种胸腺肽的提取方法，该提取方法步骤渗透压调节通过调整溶液ph完成。
9.本发明所述一种胸腺肽的提取方法，该提取方法为：1）原料绞碎、胶磨之后通过调整溶液ph使细胞破裂，目标物质释放，部分杂蛋白变性析出后保温提取，提取液通过高速冷冻离心、压滤机压滤、超滤机超滤除杂蛋白得超滤液；2）超滤液通过调整ph使部分杂蛋白变性析出后加入药用活性炭保温提取、压滤、钛棒过滤、调整ph后超滤进行杂质去除，得产品中的小分子多肽成分。
10.本发明所述一种胸腺肽的提取方法，该提取方法胶磨原料与水的配比为1~1.5：1.8-3。
11.本发明所述一种胸腺肽的提取方法，该提取方法步骤1）中溶液ph调至3.5～4.5、40
±
5℃提取15-30h。
12.本发明所述一种胸腺肽的提取方法，该提取方法步骤2）中超滤液ph调至5.0～5.5、加3
‰
药用活性炭，80
±
5℃保温10-30min。
13.本发明所述一种胸腺肽的提取方法，该提取方法步骤2）中钛棒过滤ph调至6.4～7.1。
14.本发明所述一种胸腺肽的提取方法，该提取方法具体为：1）原料胸腺净洗后绞碎，加原料量1.8倍纯化水胶磨，肉浆调整溶液ph至3.5～4.5使细胞破裂，目标物质释放，部分杂蛋白变性析出后40℃提取20h，提取完毕80℃保温30min得提取液，提取液通过高速冷冻离心、压滤机压滤、超滤机超滤除杂蛋白得超滤液；2）超滤液调ph至5.0～5.5使部分杂蛋白变性析出后加入、加3
‰
药用活性炭80℃保温20min提取、压滤、钛棒过滤、过滤液调ph至6.4～7.1后超滤进行杂质去除，得小分子多肽。
15.本发明所述一种胸腺肽的提取方法，该提取方法选用10000-20000分子量超滤机。
16.本发明工艺效果分析：（1）产品经过多次除杂：溶液调节了三次ph，利于不同杂蛋白分子的变性析出，先后采取过滤、活性炭吸附、超滤等方式对产品组分进行分离，保证了产品的纯度。
17.（2）将离心上清液的滤过方式由滤布过滤法改为压滤法提升了过滤效果。
18.（3）活性炭的去除方法由薄膜抽滤改为压滤及钛棒过滤极大提升了过滤效果和效率，降低了生产劳动强度，缩短了过滤操作时间。
19.（4）采用二次超滤，对进行多次ph调节后再超滤。加大了对杂蛋白分子的去除能力，保证了最终产品的纯度。
具体实施方式
20.下面实施例只为进一步说明本发明，不以任何形式限制本发明范围。
21.实施例11）原料胸腺净洗后绞碎，加原料量1.8倍纯化水胶磨，肉浆调整溶液ph至3.5～4.5使细胞破裂，目标物质释放，部分杂蛋白变性析出后40℃提取20h，提取完毕80℃保温30min得提取液，提取液通过高速冷冻离心、压滤机压滤、10000分子量超滤机超滤除杂蛋白得超滤液；2）超滤液调ph至5.0～5.5使部分杂蛋白变性析出后加入、加3
‰
药用活性炭80℃保温20min提取、压滤、钛棒过滤、过滤液调ph至6.4～7.1后10000分子量超滤机超滤进行杂质去除，得小分子多肽。
22.实施例21）原料胸腺净洗后绞碎，加原料量2倍纯化水胶磨，肉浆调整溶液ph至3.5～4.5使细胞破裂，目标物质释放，部分杂蛋白变性析出后35℃提取25h，提取完毕85℃保温30min得提取液，提取液通过高速冷冻离心、压滤机压滤、15000分子量超滤机超滤除杂蛋白得超滤
液；2）超滤液调ph至5.0～5.5使部分杂蛋白变性析出后加入、加3
‰
药用活性炭75℃保温30min提取、压滤、钛棒过滤、过滤液调ph至6.4～7.1后15000分子量超滤机超滤进行杂质去除，得小分子多肽。
23.实施例31）原料胸腺净洗后绞碎，加原料量3倍纯化水胶磨，肉浆调整溶液ph至3.5～4.5使细胞破裂，目标物质释放，部分杂蛋白变性析出后45℃提取20h，提取完毕80℃保温20min得提取液，提取液通过高速冷冻离心、压滤机压滤、20000分子量超滤机超滤除杂蛋白得超滤液；2）超滤液调ph至5.0～5.5使部分杂蛋白变性析出后加入、加3
‰
药用活性炭85℃保温15min提取、压滤、钛棒过滤、过滤液调ph至6.4～7.1后20000分子量超滤机超滤进行杂质去除，得小分子多肽。
24.对比例：现有胸腺肽提取工艺为：将检验合格的小牛胸腺去除内外包装，并预处理后，初绞1～3遍；将初绞的小牛胸腺精绞研磨3～8分钟，制成匀浆；将匀浆液在超声波粉碎仪中超声裂解，将裂解液用hcl溶液调节ph值至2.0～2.5；将裂解后的浆液置-20℃冷库冻融1～2次；最后一次冻融后，加热至80℃
±
2℃，保温10～20分钟，滤布过滤，制成提取液；将提取液经离心分离、过滤与超滤，得到产品。
25.表一：实施例1样品检测结果：表二：实施例2样品检测结果：
表三：实施例3样品检测结果：表四：对比例样品检测结果：
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。