一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法

1.本发明涉及药材加工技术领域，特别涉及一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法。


背景技术：

2.近年来，动物疫病频发且日趋复杂，防控难度不断加大，尤其是非洲猪瘟、禽流感、猪蓝耳病等的爆发与流行给养殖业带来了巨大冲击，已成为困扰养殖业的大难题。除了做好良好的饲养管理和严格的生物安全措施，疫苗接种是防控这些传染病的重要措施。然而临床上动物疫苗免疫过程中，疫苗不能诱生高水平抗体、机体自身免疫力低下或处于免疫抑制状态等常导致疫苗免疫失败。因此，通过免疫增强剂诱导机体产生强烈免疫应答，提高疫苗免疫效果就显得尤为重要。大量研究表明，许多中药成分尤其是中药多糖，单方或复方制剂对健康动物或免疫抑制动物具有良好免疫调节作用，因此在提高动物免疫功能方面越来越受到人们的重视，成为免疫增强剂领域的研究热点。
3.大蒜是一种常用的药食两用的中药材，医学研究表明，大蒜具有抗菌、抗病毒、抗真菌与增强免疫等多种功效。大蒜多糖是大蒜的主要药效成分之一，现代药理学研究表明，大蒜多糖（garlicpolysaccharide，gps））具有增强免疫、抗氧化、保肝、抗病毒、抗炎、调节肠道菌群、抗凝血、抗肿瘤等多种药理活性，在食品工业、医药行业和畜牧兽医等多领域应用前景广阔。硒是动物必需的微量元素，具有增强免疫与抗氧化的药理作用。硒与多糖结合成硒多糖后，不仅兼有硒和多糖的双重生物活性，而且可以一定程度上增强多糖的药理活性或提高其生物利用度。为此，本研究采用硝酸
‑
亚硒酸钠法制备硒化大蒜多糖（seleniumgarlicpolysaccharide，sgps），并通过测定体液免疫相关指标、黏膜免疫相关指标、细胞因子分泌水平，评价了硒化大蒜多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响，为新型中药免疫增强剂的开发与应用提供参考依据。


技术实现要素：

4.本发明的主要目的在于提供一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法，可以有效解决背景技术中的问题。
5.一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法，所述处理方法包括如下步骤：s1、将大蒜研磨碎并采用水提醇沉法提取大蒜粗多糖cgps，冷冻干燥；s2、用三氯乙酸法除去cgps中的蛋白质，再经冷冻干燥，得纯化的大蒜多糖gps；s3、采用硝酸
‑
亚硒酸钠法，分别以亚硒酸钠的用量、反应温度和反应时间三因素、三水平设计正交试验，以优化硒化修饰条件，得到9种硒化大蒜多糖sgps1~sgps9；s4、将gps、sgps并溶于去离子水中，采用苯酚
‑
硫酸法测定多糖的糖含量，并采用紫外线可见分光光度计测定；s5、精密称取sgps并用超纯水稀释，加高氯酸
‑
硝酸混合酸，并放置于冰箱冷消化，
得到溶液；s6、将溶液置于通风厨内，进行加热与冷却，再用电感耦合等离子质谱仪测定溶液中硒的含量。
6.进一步，所述步骤s1中包括：
①
加无水乙醇浸泡12h后用索氏提取器回流脱脂2次，每次2h，纱布过滤取蒜末，65℃烘干后称重，加入7倍质量的水100℃浸提240min，再将浸提液浓缩至1/5体积，2500r/min离心10min，上清液缓慢加无水乙醇定容至80%，4℃冰箱静置过夜；
②
弃上清取沉淀并用丙酮洗涤两次后，置通风橱内晾干，再用超纯水溶解，冷冻干燥，得大蒜粗多糖cgps，称重，按下式公式计算得率：多糖得率（%）=多糖质量（g）/药材质量（g）
×
100%，同时测多糖含量。
7.进一步，所述步骤s2包括：
①
加去离子水溶解成0.1g/ml的溶液，于60℃水浴中使完全溶解，用10%naoh调溶液ph至7.0，之后加3%三氯乙酸溶液使占总溶液体积的7.5%，4℃静置4h，3000r/min离心20min；
②
取上清液缓加无水乙醇至终浓度为80%，静置过夜，取沉淀用丙酮洗两次，之后置于通风橱晾干，再用超纯水溶解，冷冻干燥得gps，称重，计算多糖得率，测糖含量。
8.进一步，所述步骤s3种包括：
①
取三个水平，为a：以每500mggps加200mg、300mg、400mg；b：50℃、70℃、90℃；c：6h、8h、10h，按照正交表设计9种修饰条件；
②
取gps500mg9份，分别置于250ml三角瓶中，缓慢滴加0.5%hno350ml，边加边搅拌使充分溶解，并搅拌均匀使充分接触，置于恒温水箱反应，反应结束后冷却至室温，用无水碳酸钠调节ph至5~6，3000r/min离心10min，上清液装入透析袋中流水透析。每隔6h取一次透析样液，用抗坏血酸法检测样液中是否含na2seo3，至无na2seo3残留时停止透析，透析袋内液体浓缩后冷冻干燥，得到9种sgps，依次标记为sgps1~sgps9。称重，计算硒化多糖得率，并进行糖含量、硒含量测定。
9.进一步，所述步骤s4中包括：
①
精密吸取0.1mg/ml的葡萄糖对照品储备液0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml各三份于试管中，加去离子水至2ml，摇匀，再加入5%苯酚溶液1ml后，接着迅速加入5ml浓硫酸，充分摇匀，静置至室温，用紫外可见分光光度计测定其490nm处的吸光度值，并绘制标准曲线，用于测定多糖的糖含量；
②
精密称取gps、sgps各100mg并溶于去离子水中，稀释成0.2mg/ml的样品溶液，吸取0.4ml于三个试管中，并加去离子水至2ml，然后加5%苯酚溶液1ml，充分摇匀，随之迅速加5ml浓硫酸，摇匀，静置于常温水中以至室温，紫外可见分光光度计测定其490nm处的吸光度值（a），并将a代入以上回归方程，得多糖含量，多糖含量（%）=多糖质量（mg）/多糖样品质量（mg）
×
100%。
10.进一步，所述步骤s5中包括：精密称取各sgps并用超纯水稀释至2mg/ml，精确吸取0.5ml装于250ml带塞三角瓶中，加高氯酸
‑
硝酸混合酸10ml，迅速盖上橡胶塞，然后放置于4℃冰箱冷消化12h，同时做空白试验，其中高氯酸与硝酸的比例为1：1。
11.进一步，所述步骤s6中包括：加热至溶液体积2ml左右，即刻停止加热，冷却至室温
后，转移至25ml容量瓶中超纯水定容至20ml。
12.与现有技术相比，本发明提供了一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法，具备以下有益效果：1、该具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法，制备方法简单，采用三氯乙酸法快速取出大蒜粗多糖内部的淡班制，并以采用硝酸
‑
亚硒酸钠法，分别以亚硒酸钠的用量、反应温度和反应时间三因素、三水平设计正交试验，以优化硒化修饰条件，得到9种硒化大蒜多糖，从而达到了多筛选，多优化的效果。
13.2、该具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法，安全性更高，制备周期短，硒化大蒜多糖热重高，去蛋白后多糖含量进一步提高，提高硒化的稳定性。
附图说明
14.图1为本发明一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法的流程示意图；图2为本发明一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法的sgps对绿壳蛋鸡adg的影响(n=6)示意图；图3为本发明一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法的sgps对绿壳蛋鸡血清抗体效价的影响(n=6)示意图；图4为本发明一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法的sgps对绿壳蛋鸡siga分泌的影响(n=6)示意图；图5为本发明一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法的sgps对绿壳蛋鸡ifn
‑
γ和il
‑
2分泌的影响(n=6)示意图。
具体实施方式
15.为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
16.实施例1：参照图1，一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法，包括以下步骤：s1：取500mg大蒜多糖置入250ml三角杯中，缓慢滴加0.5%hno350ml，边加边搅拌使充分溶解；s2：对s1中配置的溶液添加三种不同毫升的亚硒酸钠，分别为200mg、300mg、400mg，并搅拌均匀使充分接触，置于恒温水箱反应，反应温度为50℃，反应时间分别为6h、8h、10h反应结束后冷却至室温，得到3种硒化大蒜多糖，分别为sgps1、sgps2、sgps3，称重，计算硒化大蒜多糖得率，分别为30.33%、31.33%、26.28%；s3：取s2中配置的sgps1、sgps2、sgps3,采用苯酚
‑
硫酸法，测定多糖的含量，分别为44.2%、45.9%、54.8%s4：取s2中sgps1、sgps2、sgps3各100mg，并用超纯水稀释至2mg/ml，精确吸取0.5ml装于250ml带塞三角瓶中，加高氯酸
‑
硝酸混合酸10ml，迅速盖上橡胶塞，然后放置于4℃冰箱冷消化12h，同时做空白试验。次日置于通风橱内，磁力搅拌器加热，密切观察并及时补加混合酸，当溶液变得清亮无色且伴有白烟时，再继续加热至溶液体积2ml左右，即刻停
止加热。冷却至室温后，转移至25ml容量瓶中超纯水定容至20ml，用电感耦合等离子质谱仪测定样品溶液中硒的含量，得出硒含量分别为18.93mg
·
g
‑
1、15.87mg
·
g
‑
1、10.53mg
·
g
‑
1。
17.实施例2：参照图1，一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法，包括以下步骤：s1：取500mg大蒜多糖置入250ml三角杯中，缓慢滴加0.5%hno350ml，边加边搅拌使充分溶解；s2：对s1中配置的溶液添加三种不同毫升的亚硒酸钠，分别为200mg、300mg、400mg，并搅拌均匀使充分接触，置于恒温水箱反应，反应温度为70℃，反应时间分别为8h、10h、6h反应结束后冷却至室温，得到3种硒化大蒜多糖，分别为sgps4、sgps5、sgps6，称重，计算硒化大蒜多糖得率，分别为28.80%、27.22%、30.56%；s3：取s2中配置的sgps4、sgps5、sgps6,采用苯酚
‑
硫酸法，测定多糖的含量，分别为41.9%、47.0%、43.4%s4：取s2中sgps4、sgps5、sgps6各100mg，并用超纯水稀释至2mg/ml，精确吸取0.5ml装于250ml带塞三角瓶中，加高氯酸
‑
硝酸混合酸10ml，迅速盖上橡胶塞，然后放置于4℃冰箱冷消化12h，同时做空白试验。次日置于通风橱内，磁力搅拌器加热，密切观察并及时补加混合酸，当溶液变得清亮无色且伴有白烟时，再继续加热至溶液体积2ml左右，即刻停止加热。冷却至室温后，转移至25ml容量瓶中超纯水定容至20ml，用电感耦合等离子质谱仪测定样品溶液中硒的含量，得出硒含量分别为18.94mg
·
g
‑
1、30.40mg
·
g
‑
1、38.27mg
·
g
‑
1。
18.实施例3：参照图1，一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法，包括以下步骤：s1：取500mg大蒜多糖置入250ml三角杯中，缓慢滴加0.5%hno350ml，边加边搅拌使充分溶解；s2：对s1中配置的溶液添加三种不同毫升的亚硒酸钠，分别为200mg、300mg、400mg，并搅拌均匀使充分接触，置于恒温水箱反应，反应温度为90℃，反应时间分别为10h、6h、8h反应结束后冷却至室温，得到3种硒化大蒜多糖，分别为sgps7、sgps8、sgps9，称重，计算硒化大蒜多糖得率，分别为15.30%、22.36%、16.86%；s3：取s2中配置的sgps7、sgps8、sgps9,采用苯酚
‑
硫酸法，测定多糖的含量，分别为31.0%、32.9%、32.5%s4：取s2中sgps7、sgps8、sgps9各100mg，并用超纯水稀释至2mg/ml，精确吸取0.5ml装于250ml带塞三角瓶中，加高氯酸
‑
硝酸混合酸10ml，迅速盖上橡胶塞，然后放置于4℃冰箱冷消化12h，同时做空白试验。次日置于通风橱内，磁力搅拌器加热，密切观察并及时补加混合酸，当溶液变得清亮无色且伴有白烟时，再继续加热至溶液体积2ml左右，即刻停止加热。冷却至室温后，转移至25ml容量瓶中超纯水定容至20ml，用电感耦合等离子质谱仪测定样品溶液中硒的含量，得出硒含量分别为22.8mg
·
g
‑
1、23.73mg
·
g
‑
1、34.13mg
·
g
‑
1。
19.根据以上配比形成的具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖，对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响试验，其结果如下：1方法
1.1动物分组与处理1日龄非免疫雌性绿壳蛋鸡，购自江苏省家禽科学研究所。预饲养至14d时，测得母源抗体为2.5log2，选择180只健康鸡随机分成6组，分别为空白对照组（con）、免疫对照组（vac）、3个硒化大蒜多糖（sgps）和1个大蒜多糖组（gps），每组30只鸡。除空白对照组（con）外，其余各组均用鸡新城疫lasota疫苗进行免疫，28d进行二免。疫苗接种的同时，四个多糖组分别灌服0.5mlsgps（4mg/kg、8mg/kg、16mg/kg）和gps（16mg/kg），vac和con组灌服等量的0.9%氯化钠溶液，连续给药5d。
20.1.2生长性能的测定试验期间每天观察鸡的精神、采食、饮水等状况，在试验的第14、28、35、42d的早上10点对所有鸡只进行称重，分别计算各组鸡在第3周龄（14~28d）、第5周龄（29~42d）的平均日增重（adg）。
21.1.3血清抗体效价的测定采集21、28、35、42d绿壳蛋鸡颈静脉血，每组随机抽取6只鸡，分离血清，血凝（ha）试验测定血清新城疫抗体效价。v形96孔板1~12孔分别加入25
µ
l的pbs，再在第1孔加入25
µ
l血清并两倍稀释至第10孔，随之在1~11孔中加25
µ
l4单位抗原，37℃孵育10min后取出，接着在1~12孔中加入25
µ
l1%鸡红细胞悬液，37℃孵育10min后测定血清抗体效价。
22.1.4空肠、气管洗液siga、tnf
‑
γ、il
‑
2含量的测定鸡只剖杀后，迅速采集空肠、气管各3cm于无菌培养皿中，用无菌手术剪纵向剪开，加入0.5ml含1%bsa的预冷pbs溶液并用干净载玻片刮取黏膜3次，再加入1ml含1%bsa的pbs溶液冲洗空肠或气管黏膜，收集洗涤液于离心管中，4℃，5000r/min离心10min，收集上清液，
‑
20℃保存备用。采用酶联免疫吸附法（elisa）测定空肠与气管洗液中siga、tnf
‑
γ、il
‑
2含量。
23.1.5数据统计分析所得数据采用spss19.0统计软件进行单因素方差分析，判断差异是否显著。
24.2结果2.1sgps对鸡生长性能的影响sgps对绿壳蛋鸡adg的影响见表1、图2。试验的14~28d，vac+sgps
‑
8组与vac+sgps
‑
16组的adg显著高于其余各组（p＜0.05），但这两组的adg相比差异不显著（p＞0.05）。试验的29~42d，vac+sgps
‑
8与vac+sgps
‑
16组的adg显著高于con和vac组（p＜0.05），并且vac+sgps
‑
16组的adg显著高于其他各组（p＜0.05）。由此可见，adg的变化与sgps呈剂量依赖性，表明sgps有促进蛋鸡增重的潜力。
25.表1sgps对绿壳蛋鸡adg的影响(n=6)组别groups14~28d29~42dcon9.92
±
0.62
b
11.70
±
0.62
c
vac9.37
±
0.38
c
11.40
±
0.47
c
vac+sgps
‑
410.03
±
0.32
b
12.02
±
0.78
bc
vac+sgps
‑
810.63
±
0.44
a
12.58
±
0.64
b
vac+sgps
‑
1611.10
±
0.49
a
13.43
±
0.62
a
vac+gps
‑
169.94
±
0.37
b
11.96
±
0.48
bc
2.2sgps对鸡新城疫血清抗体效价的影响sgps对鸡新城疫血清抗体效价的影响见表2、图3。鸡免疫新城疫疫苗后，鸡血清抗体效价呈先上升后下降的变化趋势，并在35d达峰值。在42d的试验期内，sgps各剂量组、gps组鸡的血清抗体水平均高于vac组，其中，sgps
‑
4和gps
‑
16组鸡的血清抗体水平与vac组相比差异不显著（p＞0.05），sgps
‑
8与sgps
‑
16组鸡的抗体水平与vac组、gps
‑
16组相比差异显著（p＜0.05），且又以sgps
‑
16组的血清抗体效价最高。综上可得，sgps具有提高鸡新城疫血清抗体水平的作用，且呈现一定的剂量依赖性。
26.表2sgps对绿壳蛋鸡血清抗体效价的影响(n=6)组别groups21d28d35d42dcon2.33
±
0.52
d
2.50
±
0.54
d
2.50
±
0.55
d
2.16
±
0.41
d
vac3.00
±
0.63
cd
4.17
±
0.75
c
5.00
±
0.63
c
4.33
±
0.52
c
vac+sgps
‑
43.67
±
0.52
abc
5.50
±
0.55
b
6.67
±
0.52
a
6.33
±
0.82
a
vac+sgps
‑
84.00
±
0.89
ab
6.50
±
0.55
a
7.00
±
0.63
a
6.67
±
0.82
a
vac+sgps
‑
164.33
±
0.52
a
6.83
±
0.75
a
7.33
±
0.82
a
6.83
±
0.75
a
vac+gps
‑
163.50
±
0.55
bc
5.17
±
0.75
b
5.83
±
0.75
b
5.50
±
0.55
b
2.3sgps对鸡siga分泌的影响sgps对鸡siga分泌的影响见表3、表4和图4。在21d与35d时，sgps各剂量组空肠siga含量显著高于con和vac组（p＜0.05）；在28d和35d时，sgps
‑
8组、sgps
‑
16组空肠siga含量显著高于con组、vac组和gps
‑
16组（p＜0.05）；在28d和42d时，sgps
‑
8组、sgps
‑
16组空肠siga含量显著高于con和vac组（p＜0.05）。在42d的试验期内，sgps
‑
16组气管siga含量皆显著高于con、vac组与gps
‑
16组（p＜0.05）；在28d到42d，sgps各剂量组气管siga含量均显著高于con和vac组（p＜0.05）。以上结果表明，口服sgps可促进空肠及气管siga的分泌。
27.表3sgps对绿壳蛋鸡空肠siga分泌的影响(n=6)
组别groups21d28d35d42dcon412.30
±
20.13
b
376.30
±
43.36
c
399.60
±
32.07
c
364.20
±
41.58
b
vac444.30
±
38.70
b
396.60
±
38.68
bc
411.10
±
47.74
c
419.60
±
47.61
b
vac+sgps
‑
4546.90
±
47.76
a
461.70
±
49.77
ab
506.30
±
52.56
ab
455.4
±
54.15
ab
vac+sgps
‑
8573.90
±
27.22
a
531.40
±
32.03
a
528.10
±
45.01
a
544.50
±
36.40
a
vac+sgps
‑
16552.60
±
51.76
a
524.50
±
47.92
a
578.40
±
44.00
a
555.70
±
66.69
a
vac+gps
‑
16521.40
±
33.36
a
439.60
±
22.31
bc
443.80
±
39.32
bc
458.70
±
64.34
ab
表4sgps对绿壳蛋鸡气管siga分泌的影响(n=6)
组别groups21d28d35d42dcon221.50
±
20.41
d
230.20
±
13.54
c
214.40
±
15.77
d
210.20
±
16.36
d
vac229.50
±
23.90
cd
240.20
±
26.92
c
230.00
±
29.37
cd
232.80
±
20.07
cd
vac+sgps
‑
4261.70
±
24.11
bc
296.60
±
21.21
b
286.80
±
15.12
ab
295.60
±
28.74
ab
vac+sgps
‑
8288.20
±
10.86
ab
345.40
±
24.36
a
323.70
±
31.26
a
316.10
±
22.96
a
vac+sgps
‑
16312.60
±
23.42
a
338.70
±
15.49
a
328.40
±
28.80
a
314.70
±
16.49
a
vac+gps
‑
16267.30
±
12.41
b
288.80
±
12.19
b
272.80
±
19.16
bc
254.60
±
32.78
bc
2.4sgps对鸡细胞因子分泌的影响sgps对鸡细胞因子分泌的影响见表5、表6、表7、表8和图5。在21d时，sgps
‑
8组与
sgps
‑
16组空肠ifn
‑
γ含量显著高于con和vac组（p＜0.05），sgps
‑
16组空肠ifn
‑
γ含量显著高于gps
‑
16组（p＜0.05）；在28d、35d和42d时，sgps各剂量组空肠ifn
‑
γ含量显著高于con和vac组（p＜0.05），sgps
‑
8与sgps
‑
16组空肠ifn
‑
γ含量显著高于gps
‑
16组（p＜0.05）。在21d和28d时，sgps
‑
8组与sgps
‑
16组空肠il
‑
2含量显著高于con和vac组（p＜0.05）；35d时，sgps
‑
8组与sgps
‑
16组空肠il
‑
2含量显著高于con、vac和gps
‑
16组（p＜0.05）；42d时，sgps各剂量组空肠il
‑
2含量均显著高于con和vac组（p＜0.05）。从21d到42d，sgps
‑
8组与sgps
‑
16组气管ifn
‑
γ和il
‑
2含量均显著高于con、vac和gps
‑
16组（p＜0.05）。此外，从21d到42d，sgps
‑
8与sgps
‑
16组各时间点空肠、气管ifn
‑
γ与il
‑
2含量皆无显著性差异（p＞0.05）。
28.表5sgps对绿壳蛋鸡空肠ifn
‑
γ分泌的影响(n=6)组别groups21d28d35d42dcon4.07
±
0.59
d
5.29
±
0.92
c
3.95
±
0.45
e
3.93
±
0.29
c
vac5.10
±
0.37
cd
6.51
±
0.86
c
5.19
±
0.51
d
4.38
±
0.45
c
vac+sgps
‑
46.02
±
0.67
bc
8.98
±
0.71
ab
7.14
±
0.55
bc
6.38
±
0.90
ab
vac+sgps
‑
87.40
±
0.53
a
9.85
±
0.49
a
8.26
±
0.67
a
7.36
±
0.49
a
vac+sgps
‑
167.02
±
0.75
ab
9.84
±
0.86
a
8.02
±
0.74
ab
7.15
±
0.62
a
vac+gps
‑
165.99
±
0.88
bc
8.00
±
0.81
b
6.81
±
0.55
c
5.80
±
0.85
b
表6sgps对绿壳蛋鸡气管ifn
‑
γ分泌的影响(n=6)组别groups21d28d35d42dcon13.56
±
1.42
d
13.70
±
0.62
d
14.04
±
0.38
c
13.19
±
0.50
c
vac14.61
±
0.97
cd
14.69
±
0.92
cd
14.35
±
0.98
c
13.91
±
0.84
c
vac+sgps
‑
416.72
±
0.63
ab
17.13
±
0.81
ab
16.26
±
0.64
b
17.09
±
1.11
ab
vac+sgps
‑
817.70
±
0.44
a
17.86
±
0.76
a
17.57
±
0.80
a
18.02
±
0.64
a
vac+sgps
‑
1617.94
±
0.89
a
18.47
±
0.72
a
18.19
±
0.53
a
17.81
±
0.62
a
vac+gps
‑
1615.69
±
0.56
bc
15.82
±
0.74
bc
16.21
±
0.53
b
15.99
±
0.53
b
表7sgps对绿壳蛋鸡空肠il
‑
2分泌的影响(n=6)组别groups21d28d35d42dcon19.87
±
2.40
b
17.89
±
1.55
c
14.30
±
1.96
c
18.31
±
1.91
b
vac21.44
±
2.69
b
20.47
±
3.60
bc
19.39
±
3.00
bc
20.80
±
2.67
b
vac+sgps
‑
424.07
±
1.31
ab
24.66
±
3.67
ab
23.27
±
2.48
ab
26.66
±
2.31
a
vac+sgps
‑
828.01
±
2.68
a
30.07
±
3.78
a
28.55
±
1.36
a
30.40
±
3.39
a
vac+sgps
‑
1627.80
±
2.44
a
28.42
±
1.67
a
28.13
±
4.88
a
28.75
±
1.70
a
vac+gps
‑
1624.12
±
1.53
ab
25.12
±
1.44
ab
21.19
±
2.90
b
26.46
±
1.94
a
表8sgps对绿壳蛋鸡气管il
‑
2分泌的影响(n=6)组别groups21d28d35d42dcon60.63
±
4.28
c
60.14
±
2.19
d
60.75
±
2.32
d
57.83
±
1.94
d
vac66.31
±
2.68
b
61.12
±
3.83
d
64.73
±
2.25
cd
60.08
±
3.43
cd
vac+sgps
‑
468.12
±
2.76
b
69.03
±
2.27
bc
70.64
±
2.91
bc
69.52
±
2.14
ab
vac+sgps
‑
874.04
±
3.57
a
76.75
±
1.95
a
75.42
±
6.39
ab
74.29
±
5.33
a
vac+sgps
‑
1677.09
±
2.50
a
73.98
±
4.30
ab
78.25
±
3.99
a
76.37
±
6.05
a
vac+gps
‑
1667.67
±
1.83
b
67.58
±
1.87
c
68.49
±
2.67
c
66.27
±
5.01
bc
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。