一种拉氧头孢钠的纯化方法与流程

1.本发明属于药物加工技术领域，具体涉及一种拉氧头孢钠的纯化方法。


背景技术：

2.拉氧头孢钠，别名拉氧头孢二钠盐、氧杂头霉素二钠等，分子式：c
20
h
18
n6na2o9s，化学名(6r，7r)
‑7‑
[2
‑
羧基
‑2‑
(4
‑
羟基苯基)乙酰氨基]
‑7‑
甲氧基
‑3‑
[(1
‑
甲基
‑
1h
‑
四氮唑
‑5‑
基)硫代甲基]
‑8‑
氧代
‑5‑
氧杂
‑1‑
氮杂双环[4.2.0]辛
‑2‑
稀
‑2‑
甲酸二钠盐，结构式为拉氧头孢钠为第三代头孢菌素类抗生素，用于敏感革兰阴性杆菌所致败血症、下呼吸系感染、腹腔胆系感染、复杂性尿路感染和严重皮肤软组织感染等。
[0003]
拉氧头孢钠性质不稳定，容易在合成或贮存过程中产生多种杂质，主要杂质包括脱羧基拉氧头孢、巯甲基四氮唑、拉氧头孢内酯、拉氧头孢甲酯、拉氧头孢聚合物等。杂质的存在直接影响着患者服用该药物的安全性，其中，聚合物杂质是患者在服用拉氧头孢钠时产生过敏反应的主要原因。因此，对拉氧头孢钠进行严格纯化处理是很有必要的。
[0004]
目前，少有关于拉氧头孢钠产品的纯化方法的相关报道，大部分是拉氧头孢钠的合成方法，而没有关于合成或贮藏过程中杂质数量和含量增加时如何进行进一步纯化的方法。专利文献cn105037394a公开了一种高纯度拉氧头孢钠的制备方法。该方法的步骤是：将化合物ⅰ在有机溶剂中经脱保护反应、水洗除杂、碱洗所的得拉氧头孢钠盐水溶液再经过降解除杂、调酸制得拉氧头孢单钠盐水溶液粗品，再萃取除杂得到拉氧头孢单钠盐水溶液精品；将上述单钠盐水溶液精品经酸化、有机溶剂萃取、有机层除水、蒸馏回收溶剂、析晶得到精制固体拉氧头孢酸；将精制固体拉氧头孢酸调碱成钠盐水溶液，再脱色、冻干得到高纯度拉氧头孢钠。该方法是在合成过程中控制产品纯度，且主要是通过有机溶剂萃取及析晶等方法降低杂质含量，而未针对在合成和贮藏过程中已经产生质量变化的拉氧头孢钠产品进行纯化处理。
[0005]
综上，本技术提出一种针对含有多种杂质，特别是含有聚合物杂质的拉氧头孢钠样品进行进一步纯化的方法具有重要意义，既能补充相关的技术空白，又能有效提高产品的安全性。


技术实现要素：

[0006]
鉴于现有技术的不足，本发明提供一种拉氧头孢钠的纯化方法。
[0007]
本发明技术方案主要包括以下内容：
[0008]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0009]
(1)拉氧头孢钠与乙醇混合，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶混合装柱，采用ph7.0～8.0的碳酸钠水溶液洗脱，得洗脱液；首先使用乙醇去除部分杂质，再通过碳酸钠及其ph控制各成分在凝胶中的吸附效果，实现初步纯化；ph可以通过乙酸或氢氧化钠调节。
[0010]
(2)洗脱液干燥后与大孔吸附树脂混合装柱，先用乙酸乙酯洗脱，再用ph5.0～6.0的甲醇溶液洗脱，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠纯品；所述树脂选自s
‑
8、nka
‑
9、asd
‑
17、ab
‑
8中的至少一种。试验发现不同型号树脂对产品的纯化效果不一致，试验筛选获知以上树脂类型能够得到最优的纯化效果。
[0011]
优选的，干燥后的沉淀物与葡聚糖凝胶的混合质量比为1：10～20。
[0012]
优选的，所述葡聚糖凝胶为sephadex g
‑
25。
[0013]
优选的，步骤(1)中，每g拉氧头孢钠至少与10ml乙醇混合。
[0014]
优选的，步骤(2)中，干燥后的洗脱液与大孔吸附树脂的混合质量比为1：10～20。
[0015]
优选的，步骤(2)中，乙酸乙酯的体积为大孔吸附树脂的至少10倍，甲醇溶液的体积为大孔吸附树脂的至少10倍。
[0016]
优选的，步骤(2)中，碳酸钠水溶液浓度为0.01～0.05m。
[0017]
优选的，步骤(2)中，甲醇溶液的质量浓度为10～90％。
[0018]
优选的，步骤(1)中，拉氧头孢钠与乙醇的混合时间是至少30min。可静置也可搅拌混合，搅拌条件下约30min即可，静置条件下可适当延长时间；
[0019]
优选的，所述大孔吸附树脂为s
‑
8和nka
‑
9的等体积混合物。
[0020]
本发明所取得的效果：
[0021]
目前，现有技术主要是在合成过程中控制杂质的含量，且对于聚合物杂质的控制未见报道。本方案能够有效去除拉氧头孢钠产品中的主要杂质，对产品的纯化效果极好，杂质含量明显降低，特别是对聚合物杂质实现了有效控制，提高了产品的安全性，同时弥补了本领域在聚合物杂质研究方面的技术空白。
[0022]
本方案综合采用乙醇浸泡、葡聚糖凝胶与大孔树脂洗脱等方式，对在合成及贮藏过程中产生的多种杂质实现有效去除，杂质含量降低至少70％以上。
具体实施方式
[0023]
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
[0024]
实施例1
[0025]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0026]
(1)按料液比1g/10ml将拉氧头孢钠与乙醇50rpm搅拌混合30min，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶sephadex g
‑
25混合装柱(质量比1：10)，采用ph7.0的0.01m碳酸钠水溶液洗脱，得洗脱液；
[0027]
(2)洗脱液干燥后与s
‑
8型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：10)，先用乙酸乙酯洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，再用ph5.0的90％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠纯品(含水量小于5％)。
[0028]
实施例2
[0029]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0030]
(1)按料液比1g/10ml将拉氧头孢钠与乙醇50rpm搅拌混合30min，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶sephadex g
‑
25混合装柱(质量比1：20)，采用ph7.0的0.01m碳酸钠水溶液洗脱，得洗脱液；
[0031]
(2)洗脱液干燥后与s
‑
8型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：20)，先用乙酸乙酯洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，再用ph5.0的90％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠纯品(含水量小于5％)。
[0032]
实施例3
[0033]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0034]
(1)按料液比1g/10ml将拉氧头孢钠与乙醇50rpm搅拌混合30min，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶sephadex g
‑
25混合装柱(质量比1：10)，采用ph7.0的0.01m碳酸钠水溶液洗脱，得洗脱液；
[0035]
(2)洗脱液干燥后与nka
‑
9型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：10)，先用乙酸乙酯洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，再用ph5.0的90％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠纯品(含水量小于5％)。
[0036]
实施例4
[0037]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0038]
(1)按料液比1g/10ml将拉氧头孢钠与乙醇50rpm搅拌混合30min，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶sephadex g
‑
25混合装柱(质量比1：10)，采用ph8.0的0.01m碳酸钠水溶液洗脱，得洗脱液；
[0039]
(2)洗脱液干燥后与s
‑
8型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：10)，先用乙酸乙酯洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，再用ph6.0的90％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠纯品(含水量小于5％)。
[0040]
实施例5
[0041]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0042]
(1)按料液比1g/10ml将拉氧头孢钠与乙醇50rpm搅拌混合30min，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶sephadex g
‑
25混合装柱(质量比1：10)，采用ph7.0的0.01m碳酸钠水溶液洗脱，得洗脱液；
[0043]
(2)洗脱液干燥后与s
‑
8型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：10)，先用乙酸乙酯洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，再用ph5.0的10％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠纯品(含水量小于5％)。
[0044]
实施例6
[0045]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0046]
(1)按料液比1g/10ml将拉氧头孢钠与乙醇50rpm搅拌混合30min，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶sephadex g
‑
25混合装柱(质量比1：10)，采用ph7.0的0.05m碳
酸钠水溶液洗脱，得洗脱液；
[0047]
(2)洗脱液干燥后与s
‑
8型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：10)，先用乙酸乙酯洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，再用ph5.0的90％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠纯品(含水量小于5％)。
[0048]
实施例7
[0049]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0050]
(1)按料液比1g/10ml将拉氧头孢钠与乙醇50rpm搅拌混合30min，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶sephadex g
‑
25混合装柱(质量比1：10)，采用ph7.0的0.1m碳酸钠水溶液洗脱，得洗脱液；
[0051]
(2)洗脱液干燥后与s
‑
8型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：10)，先用乙酸乙酯洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，再用ph5.0的90％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠纯品(含水量小于5％)。
[0052]
实施例8
[0053]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0054]
(1)按料液比1g/10ml将拉氧头孢钠与乙醇50rpm搅拌混合30min，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶sephadex g
‑
25混合装柱(质量比1：10)，采用ph7.0的0.01m碳酸钠水溶液洗脱，得洗脱液；
[0055]
(2)洗脱液干燥后与s
‑
8、nka
‑
9等比组合型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：10)，先用乙酸乙酯洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，再用ph5.0的90％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠纯品(含水量小于5％)。
[0056]
对比例1
[0057]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0058]
(1)按料液比1g/10ml将拉氧头孢钠与乙醇50rpm搅拌混合30min，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶sephadex g
‑
25混合装柱(质量比1：10)，采用ph5.0的0.01m碳酸钠水溶液洗脱，得洗脱液；
[0059]
(2)洗脱液干燥后与s
‑
8型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：10)，先用乙酸乙酯洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，再用ph7.0的90％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠(含水量小于5％)。
[0060]
对比例2
[0061]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0062]
(1)按料液比1g/10ml将拉氧头孢钠与乙醇50rpm搅拌混合30min，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶sephadex g
‑
25混合装柱(质量比1：10)，采用ph7.0的水洗脱，得洗脱液；
[0063]
(2)洗脱液干燥后与s
‑
8型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：10)，先用乙酸乙酯洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，再用ph5.0的90％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大
孔吸附树脂的10倍)，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠(含水量小于5％)。
[0064]
对比例3
[0065]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0066]
(1)按料液比1g/10ml将拉氧头孢钠与乙醇50rpm搅拌混合30min，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶sephadex g
‑
25混合装柱(质量比1：10)，采用ph7.0的碳酸钠水溶液洗脱，得洗脱液；
[0067]
(2)洗脱液干燥后与d101型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：10)，先用乙酸乙酯洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，再用ph5.0的90％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠(含水量小于5％)。
[0068]
对比例4
[0069]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0070]
拉氧头孢钠与s
‑
8型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：10)，先用乙酸乙酯洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，再用ph5.0的90％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，收集以甲醇溶液为洗脱剂所得的洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠(含水量小于5％)。
[0071]
对比例5
[0072]
一种拉氧头孢钠的纯化方法，包括以下步骤：
[0073]
(1)按料液比1g/10ml将拉氧头孢钠与乙醇50rpm搅拌混合30min，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后与葡聚糖凝胶sephadex g
‑
25混合装柱(质量比1：10)，采用ph7.0的0.01m碳酸钠水溶液洗脱，得洗脱液；
[0074]
(2)洗脱液干燥后与s
‑
8型大孔吸附树脂混合装柱(质量比1：10)，用ph5.0的90％甲醇溶液洗脱(洗脱液体积为大孔吸附树脂的10倍)，收集洗脱液，将洗脱液浓缩，干燥，得到拉氧头孢钠(含水量小于5％)。
[0075]
汇总实施例与对比例各条件，结果如下：
[0076]
表1
[0077]
[0078]
实验例：杂质检测
[0079]
采用高效液相进行杂质检测。
[0080][0081]
色谱条件：
[0082]
色谱柱：agilent zorbax sb
‑
cn色谱柱(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0083]
流动相a：0.01mol/l醋酸铵溶液(ph6.2)
‑
甲醇(60：40，v/v)；
[0084]
流动相b：0.025mol/l醋酸铵溶液
‑
乙腈(90：10，v/v)；
[0085]
样品浓度：1.0mg/ml
[0086]
流速：0.6ml/min；
[0087]
检测波长：254nm。
[0088]
进样量：10ul。
[0089]
注温：30℃。
[0090]
洗脱方式：梯度洗脱；
[0091]
洗脱程序：
[0092]
表2
[0093]
时间/min流动相a：流动相b078:221055:451630:702030:702545:553078:22
[0094]
二聚体杂质的检测参考刘晓瑜《高效分子排阻色谱法分析拉氧头孢钠中的聚合物等杂质》的色谱条件进行。
[0095]
[0096]
表3
[0097][0098]
注：按外标法计算，n＝3。
[0099]
结果显示：
[0100]
实施例中各杂质含量均明显低于纯化前和对比例样品。与实施例1相比，实施例8采用组合型的大孔树脂能够有效降低脱羧基拉氧头孢含量。对比实施例1和对比例1结果发现，通过对步骤(1)和步骤(2)中洗脱液ph的调控有效降低脱羧基拉氧头孢、巯甲基四氮唑和拉氧头孢二聚体的含量。对比实施例1与对比例2的结果发现，洗脱液中添加碳酸钠有利于控制脱羧基拉氧头孢和拉氧头孢二聚体含量。对比实施例1和对比例3的结果发现，使用s
‑
8型树脂的效果优于d101。对比实施例1和对比例4的结果发现，步骤(1)进行乙醇浸泡和葡聚糖凝胶洗脱有利于控制各杂质含量。对比例实施例1和对比例5的结果发现，在步骤(2)中，甲醇水洗脱前先采用乙酸乙酯洗脱是很有必要的。
[0101]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。