一种定性检测硒元素的生物学方法

文档序号:27248054发布日期:2021-11-03 20:08阅读:322来源:国知局

1.本发明涉及微量元素分析技术领域,具体涉及一种定性检测硒元素的生物学方法。


背景技术:

2.大量的研究证明硒元素在有机体生命活动中具有重要的生物学意义。1957年提出动物体内缺硒与蛋白质不良症密切相关,硒作为必需微量元素才被人们关注。在生物体内很多酶和蛋白的活性中心,对机体机能的正常运行起到非常重要的作用。例如以硒作为活性中心的谷胱甘肽过氧化物酶在机体内的作用主要是分解过氧化物,清除过多的氧化自由基,使其转变为无毒的羟基化合物,进而保护细胞膜的结构功能完整和发挥抗氧化作用。硒蛋白是脱碘酶家族的重要组成成分,脱碘酶家族能够调节机体蛋白质的合成,促进机体生长。调查发现癌症高发区居民的血硒水平普遍偏低,同时发现癌症组织中硒蛋白p的含量较正常组织低,间接证明了硒元素在机体抗癌中生物活性。另外在机体内,硒存在于胸腺、骨髓、脾、淋巴结等多种免疫器官中以及淋巴细胞、单核/巨噬细胞、粒细胞等多种免疫细胞中。机体缺硒会导致t细胞数目减少,并致使免疫反应减弱,硒元素可以显著提高igg,iga,igm水平,反映了硒元素在机体免疫过程中重要地位。
3.硒元素含量测定方法。硒的分析测定是多种微量元素中难度较大的一种,人们在环境、食品和临床医学等方面对硒的分析研究十分重视,研究者开发了多种分析检测方法对硒元素进行检测。目前主要有荧光法、滴定法、化学比色法、气相色谱法、原子吸收光谱法、质谱法、电感耦合等离子体发射光谱法、分光光度法、电化学分析法等等。这些方法,虽然可以较为准确地对硒元素含量进行检测,但样品处理过程和操作程序比较复杂,耗时较长,检测成本高,主要应用于科研和特殊精准的需求中。
4.硒元素定性检测方法的意义,随着硒元素活性和生理功能的发现,出现了许多天然富硒和人工富硒食品等生活必需品,如富硒稻谷、富硒蔬果、富硒茶、含硒保健品和富硒益生菌等,这些物品中到底含硒情况如何,就需要进行检测。在实际生产中,往往遇到不需要硒含量精准数据而只需要了解检测物中是否含有硒元素的情况,为此我们需要一种定性检测而非定量测定硒的方法,来解决实际问题。


技术实现要素:

5.本发明提供了一种定性检测硒元素的生物学方法,该方法所需仪器设备简单,操作方法及实施过程简便,成本低,为硒元素及其含量测定的初步探索性科学研究,起到对被检测物初步筛选和为进一步定量检测提供可靠检测源的作用,从而避免不必要的物力、财力和时间的浪费。
6.为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
7.一种定性检测硒元素的生物学方法,其特征在于,包括如下步骤:
8.步骤(1):酵母菌的制备,在无菌条件下,将具有对数生长能力的酵母菌液,接种于
含硒元素的培养基中,培养数小时,用蒸馏水洗涤数次,分离酵母菌,在不含硒元素的培养基中继续培养,传代1次,收集酵母菌液,计数含菌浓度在106‑
108个/毫升即可,无菌密封,4℃保存,备用;
9.步骤(2):待检测样品的制备,按照所提供的样品的类型,将材料制成溶液或混悬液,高压灭菌,密封,4℃保存,备用;
10.步骤(3):无菌条件下,在培养基中,按照占总体积15%,10%,5%,加入步骤(2)得到的待检测检测样品,制成三个不同浓度梯度培养液;在制备的不同浓度的培养液中加入步骤(1)得到的酵母菌液3ml,使培养液总体积为100ml;
11.步骤(4):菌种培养,将步骤(3)中含不同浓度样品的三个培养瓶放置于摇床中,28℃,进行培养36

48小时;同时设不含硒元素的酵母菌培养液,在同等条件下进行培养,做空白对照;
12.步骤(5):结果判定,培养结束后,取出培养瓶,眼观培养液的颜色变化,与空白对照相比较,以培养液颜色为判定依据,出现颜色深浅程度不同砖红色者,该样品判定为含有硒元素。
13.优选的,在步骤(1)中,培养时长为36

48小时。
14.优选的,在步骤(1)中,用蒸馏水洗涤3次。
15.优选的,在步骤(1)中,所述酵母菌源自啤酒酵母菌。
16.优选的,在步骤(2)中,所提供的样品类型有液体,固体,植物叶、种子,水果,生物制品,土壤等;所述样品的性质类别有可溶性样品,微溶性样品的和不溶性样品。
17.优选的,在步骤(4)中,培养时长为36

48小时。
18.优选的,在步骤(4)中,摇床的摇动频率为200次/分钟。
19.本发明具有以下有益效果:本发明“一种定性检测硒元素的生物学方法”,所需仪器设备简单,操作方法及实施过程简便,成本低,为硒元素及其含量测定的初步探索性科学研究,起到对被检测物初步筛选和为进一步定量检测提供可靠检测源的作用,从而避免不必要的物力、财力和时间的浪费。
具体实施方式
20.以下的实施例便于更好地理解本发明,但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为市售。
21.实施例1
22.1、材料需求
23.材料:供测样品,酵母菌
24.设备:离心机,摇床,超净工作台,高压锅,天平,移液器
25.试剂:琼脂,麦芽糖汁,尿素,亚硒酸钠,蒸馏水
26.其它:玻璃珠,烧杯,研磨器,纱布,瓶塞,棉线绳,三角瓶,2、实施方法
27.(1)酵母菌的制备。在无菌条件下,将具有对数生长能力的酵母菌液,接种于含硒元素的培养基中,培养36

48小时,用蒸馏水洗涤3次,分离酵母菌,在不含硒元素的培养基中继续培养,传代1次,收集酵母菌液,计数含菌浓度在106‑
108个/毫升即可,无菌密封,4℃
保存,备用。
28.(2)待检测样品的制备。按照所提供的样品的类型,将材料制成溶液或混悬液,高压灭菌,密封,4℃保存,备用。
29.(3)无菌条件下,在培养基中,按照占总体积15%,10%,5%,加入备用检测样品,制成三个不同浓度梯度培养液;在制备的不同浓度的培养液中加入酵母菌液3ml。使培养液总体积为100ml。
30.(4)菌种培养。将上述含不同浓度样品的三个培养瓶放置于摇床中,28℃,摇动频率200次/分钟,进行培养36

48小时。同时设不含硒元素的酵母菌培养液,在同等条件下进行培养,做空白对照。
31.(5)结果判定。培养结束后,取出培养瓶,眼观培养液的颜色变化。与空白对照相比较,以培养液颜色为判定依据。出现颜色深浅程度不同砖红色者,该样品判定为含有硒元素。
32.3、适应范围
33.(1)被检测物在制成溶液或混悬液加入不含酵母菌的培养液中呈无色或呈现的颜色不会干扰最后结果的判定。
34.(2)广泛适用于符合(1)中被检测物硒元素的定性检测或定量检测前的预检测试验。
35.本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
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