基于宏病毒组学的土壤病毒检测技术的制作方法

文档序号:26394829发布日期:2021-08-24 16:04阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于宏病毒组学的土壤病毒检测技术,其特征在于,使用特定的标签引物组合物进行扩增;所述的标签引物包括引物部分和标签部分;所述的标签部分选自seqidno.1-12;所述的引物部分选自seqidno.13-14。

2.根据权利要求1所述的土壤病毒检测技术,其特征在于,所述的土壤病毒的检测技术包括以下步骤:

(1)土壤样品的前处理;

(2)切向流过滤系统过滤;

(3)超滤柱浓缩后再经无菌过滤器过滤;

(4)游离胞外dna的去除;

(5)病毒dna的提取;

(6)利用权利要求1所述的标签引物组合物进行扩增;

(7)电泳检测;

(8)上机检测。

3.根据权利要求1所述的土壤病毒检测技术,其特征在于,所述的引物部分为正向引物,序列为seqidno.13,标签部分选自seqidno.1-6;所述的引物部分为反向引物,序列为seqidno.14,标签部分选自seqidno.7-12。

4.根据权利要求2所述的土壤病毒检测技术,其特征在于,所述的土壤样品的前处理方法为:土壤样品过筛后按比例与柠檬酸钾混合均匀后振荡,离心。

5.根据权利要求2所述的土壤病毒检测技术,其特征在于,所述的步骤(2)中的过滤条件为连续过滤,依次通过1mm,0.45μm和0.22μm的滤柱;所述的步骤(3)中超滤柱为30kda的超滤柱,无菌过滤器规格为0.22μm。

6.根据权利要求4所述的土壤病毒检测技术,其特征在于,所述的柠檬酸钾的浓度为1%,浓度为重量体积比;所述的土壤样品与柠檬酸钾的比例为1kg/6.6l。

7.一种标签引物组合物,其特征在于,所述的标签引物包括引物部分和标签部分;所述的标签部分选自seqidno.1-12;所述的引物部分选自seqidno.1-2。

8.权利要求7所述的标签引物组合物在制备用于土壤中病毒检测的试剂和/或试剂盒中的应用。

9.权利要求1-6任一项所述的土壤病毒检测技术在制备用于土壤中病毒检测的试剂和/或试剂盒中的应用。

10.一种基于宏病毒组学的土壤病毒检测试剂盒,其特征在于,所述的土壤病毒检测试剂盒中包括权利要求7所述的标签引物组合物。


技术总结
本发明提供了一种基于宏病毒组学的土壤病毒检测技术,使用特定的标签引物组合物进行扩增;所述的标签引物包括引物部分和标签部分;所述的标签部分选自SEQ ID NO.1‑12;所述的引物部分选自SEQ ID NO.13‑14。该标签引物组合物具有通量高、速度快、读长长的优点。且本发明的前处理技术建立了精准、专性、高效的病毒基因组提取方法,污染少。

技术研发人员:鲁闽;王汐月;曹鹏;曲志勇;王绪敏;胡巧茹;张鸿伟;王志宏
受保护的技术使用者:烟台海关技术中心
技术研发日:2021.07.16
技术公布日:2021.08.24
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